磁珠纯化原理

  1. 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
  2. 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
  3. 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。

磁珠法纯化D N A原理磁珠法核酸纯化技术采用了纳米级磁珠微珠,这种磁珠微珠的表面标记了一种官能团,能同核酸

发生吸附反应。硅磁(Magnetic Silica Particle)就是指磁珠微珠表面包裹一层硅材料,来吸附核酸,其纯化原理类型于玻璃奶的纯化方式

AMPure bead :NaCl,7% PEG8000

标准的AMPure xp是用来筛选掉100bp的DNA片段,通过改变PEG8000的含量可改变至(MAX 300bp,MIN 50bp),PEG8000的浓度越高越能筛选出片段小的DNA Streptavidin magnetic bead (链霉亲和素磁珠):

Streptavidin(SA)链霉亲和素,magnetic磁性的,亲和素能与生物素之间存在强度最高的非共价作用(称作BAS系统)二者结合形成复合物的解离常数很小,呈不可逆反应性;而且酸、碱、

变性剂、蛋白溶解酶以及有机溶剂均不影响其结合。

玻璃奶:

是一种白色硅颗粒,能到50kb大小的DNA(双链,单链,线状,超螺旋),结合原理:在高盐状态下,玻璃奶周围的负电荷被打破,并允许DNA磷酸负电荷与玻璃奶特异性结合,在低盐时

(H20或1X TE)溶解分离

DNA<100bp时,高盐状态下结合率高;DNA>100bp时,低盐状态下结合率高;pH<时,结合

率高。

氧化硅羟基磁珠:此种微球具有核壳结构,即超顺磁性核心以及无机氧化硅外壳,硅烷醇集团(羟基)在chaotropic(盐酸胍、异硫酸氰胍等)存在条件下,能够与溶液中的核酸通过疏水作用、氢键作用和静电作用等发生特异性结合,而不与蛋白质和其它杂质结合

氧化硅羧基磁珠:该磁珠表面修饰有羧基官能团,能够在特殊试剂(如EDC)作用下将蛋白、寡聚核苷酸等生物配体共价偶联到磁珠表面,可应用在蛋白纯化,核酸纯化,亲和层析等领域。

相关文档
最新文档