结核菌快速测定
执业护士考试基础护理：结核菌素试验（OT试验）
结核菌素试验（OT试验）是利⽤结核菌体蛋⽩来测定机体有⽆过敏反应，以确定是否受过结核菌感染，对诊断结核感染具有特异性，判断是否需要接种卡介苗或接种卡介苗是否成功。
受过结核菌感染者，此试验呈阳性反应，但不表明有活动性结核病灶。
未受感染或曾受感染但时间已久，反应消失者，试验呈阴性反应。
⼀般婴幼⼉⼤都未受过结核菌感染，多呈阴性反应。
若呈阳性反应，则表⽰有活动性结核灶，应做进⼀步检查。
在卡介苗预防接种前，应先做结核菌素试验，以确定接种对象。
只有未感染过结核，结核菌素试验阴性者，⽅可接种卡介苗。
凡结核菌素试验阳性者，表⽰已受过结核菌素感染，对结核菌具有免疫⼒，故不必再接种卡介苗。
⼀、试验液的配制 ⽤旧结核菌素原液（每ml原液含10万结核菌素单位），以⽣理盐⽔稀释成1：100、1：1000、1：10000三种不同浓度的溶液分别装于密封消毒瓶内保存在冰箱中备⽤。
在冰箱内放置6－8周仍有效。
但在常温下保存不超过⼀周。
试验液浓度由医⽣根据病情、年龄决定。
稀释⽅法。
1.取旧结核菌素0.1ml加⽣理盐⽔⾄10ml，为1：100稀释液。
2.取1：100稀释液0.1ml加⽣理盐⽔⾄1ml，为1：1000稀释液。
3.取1：1000稀释液0.1ml加⽣理盐⽔⾄1ml，为1：10000稀释液。
4.眼科应⽤时，可按上法继续稀释⾄所需浓度。
⼆、试验⽅法 （⼀）原则先从低浓度⽪试液开始，若第⼀次试验结果为阴性，则可提⾼浓度再做第⼆次或第三次试验。
（⼆）⽅法⽪内注射0.1ml试验液。
开始宜⽤1：10000或1：2000溶液（可疑结核者⽤1：10000溶液，以免反应过强），注射后分别于24、48、72⼩时观察反应⼀次（以72⼩时的结果为准）。
如为阴性，则⽤⾼⼀级浓度再做试验，⾄1：100溶液为⽌。
如均为阴性，⽅能确定为阴性。
三、试验结果判断 （⼀）阴性反应局部⽆反应，或只红⽽⽆硬结。
（⼆）阳性反应 1.局部稍红肿，硬结直径⼩于0.5cm者，为可疑阳性。
结核分枝杆菌快速检测中的新技术
结核分枝杆菌快速检测中的新技术
江苏省盐城市卫生防疫站 厦门大学肿瘤和细胞工程国家专业实验室 汤 权 夏宁邵 综述 审校
摘要
结撮分枝杆 茵体外培养生长缓慢的特性和耐多药性给传统的实验室检测和薛物教瘩试验带来很
多麻烦， 从而培结撮病的诊 断和治疗增加 困 。随着现代实验技术的发展 ， 难 分子生物 学技术、 色谱技术 以及 计算机等技 术在谊茵中的研究和应用已显示出极大的优势， 不仅能够快速鍪定到算种和株 的水平， 还能够提 供快速的药教试验的结果和考棱抗结棱治疗的效果 ， 并可进行耐药基 因的分析及分子流行病学调查， 为人类 最终控制并战胜 培柱病提供 了有效的手段 。 结核病是一古老的传染性疾病 。据统计 ， 结核 病在过去 ２０ 中致使 ｌ 亿人死亡。据世界卫生 ０年 Ｏ 用， 包括插人 序列 Ｉ Ｉ 、 Ｓ １ 直接重复序列 Ｄ 富古 ￣０ Ｋ、 Ｇ 的多态性重复序列 、 Ｃ 主要多态性前后排列的重复 性序列以及（ 】 Ｇ ） 与寡核苷酸序列… ， 分子分型技
的水平【 ； ２ 另外一种被广泛应用的方法是采用高教 液相色谱 （ Ｐ Ｃ 测定分枝杆 菌细胞壁 中具有种特 ＨＬ） 异性的分枝菌酸 ， 根据峰高和峰相对保 留时 间鉴定
不 同的种 。
（ ）Ｎ － Ｄ Ａ指纹 技术
ＤＡ Ｎ 指纹技术是用来描述细菌基 因组 的一 个
或多个独特性 的技术。仅在结核杆菌染 色体 Ｄ Ａ Ｎ 中发现插人序列 Ｉ ６１０ 以此为基础 ， Ｓ ， ０ 根据插人序
（ ） Ｌ － ｍ＇Ｃ
读数， Ｂ Ｃ￣Ｃ 与 Ａ Ｉ 系统的符合率达 ９％【 ９ 。 Ｌ ｏｉ ｉ ｚ 等将一段 来源 于非 常保 守 的 １．ｒＮ ｇｚ ６ Ａ ＳＲ 基因区经惨饰过 Ｄ Ａ片段与野生型 Ｄ Ａ进行协同 Ｎ Ｎ 扩增 ， 扩增 后 的产物通过 凝胶 电泳分析 ， 光密度 计 用
结核菌素试验的方法
结核菌素试验的方法结核菌素试验又称PPD试验，是指通过对人接种旧结核菌素或接种纯结核杆菌蛋白衍生物来测定其对结核菌素有无迟发型变态反应的一种试验。
结核菌素试验主要有皮肤接种法和皮内注射法，其结果有以下几种情况：1.阴性（﹣）：局部无硬结或硬结平均直径<5mm。
2.阳性（﹢）：局部硬结平均直径为5～9mm。
3.中度阳性（﹢﹢）：局部硬结平均直径为10～19mm。
4.强阳性（﹢﹢﹢）：局部硬结平均直径为≧20mm，或硬结平均直径<20mm但局部出现水泡、破溃及淋巴管炎。
结核菌素试验也称为PPD试验，是用来辅助诊断结核病的检查项目之一。
结核菌素试验是需要先在皮内注射结核菌素纯蛋白衍生物，然后在48~72小时后观察注射部位皮肤是否出现硬结以及出现的硬结大小，来协助判断机体是否感染结核分枝杆菌的一种检验方法。
通过测量皮试处皮肤硬结直径大小、观察周围皮肤红晕等情况来进行结果判读，可分为以下几种情况。
阴性（-）：硬结直径＜5mm。
阳性（+）：硬结直径为5~9 mm。
中度阳性（++）：硬结直径为10~19mm。
强阳性（+++）：硬结直径≥20mm或虽不足20mm但局部皮肤出现双圈、水疱、坏死及淋巴管炎。
异常情况指标阳性提示机体可能既往感染过结核分枝杆菌或目前存在活动性结核病。
指标阴性多提示机体未感染过结核分枝杆菌。
但对于处于结核感染早期的患者，PPD试验也表现为阴性，有时需要结合其他检查进一步明确。
注意事项检查结果可能会受到患者病情、精神状态、检查操作等因素的影响。
检查期间应注意以下几方面。
检查前检查前注意保持前臂内侧皮肤的清洁，不要涂抹化妆品。
检查前不需要空腹。
如有任何已知的过敏症状（尤其对蛋白质），受过结核疫苗接种，或者曾经被诊断为结核病，都应该及时告诉医生。
检查中医生会在前臂内侧皮肤进行注射，注射时会有轻微的痛感，通常可以忍受。
晕针患者需要有家属陪同，并应提前告知医护人员。
检查后保持注射部位皮肤干燥，切勿挤压或刮擦试验部位。
YBS102结核分枝杆菌快速鉴定和药敏检测试剂盒(培养法)说明书
结核分枝杆菌快速鉴定和药敏检测试剂盒（培养法）说明书【产品名称】通用名称：结核分枝杆菌快速鉴定和药敏检测试剂盒（培养法）商品名称：结核分枝杆菌快速鉴定和药敏检测试剂盒（培养法）英文名称：Kit of identification and drug sensitiveity of Mycobacterium tuberculosis【包装规格】10人份/盒【预期用途】结核分枝杆菌鉴定和药敏测定。
【检验原理】采用24孔微孔板（本公司专用），分枝杆菌快速变色液体培养基营养丰富，含有多种促进分枝杆菌生长的营养素能促进分枝杆菌生长，抑制剂能抑制其他细菌和真菌生长的抗生素，但不影响分枝杆菌生长生长，当鉴定试剂或药物能抑制结核分枝杆菌生长时，变色剂不发生氧化还原反应，不发生颜色变化；反之，当鉴定试剂或药物不能抑制结核分枝杆菌生长时，变色剂发生氧化还原反应，产生颜色变化。
【主要组成成份】链霉素(Streptomyin,SM))、异烟肼(Isoniazid,INH)、利福平(Rifampicin,RFP)、乙胺丁醇(Ethambutol,EB)、氧氟沙星(Ofloxacin,OFL)等。
【储存条件及有效期】包装后结核分枝杆菌快速鉴定和药敏检测试剂盒应贮存在环境温度2℃-8℃,干燥处。
试剂盒有效期为12个月。
【样本要求】用接种环刮取3-4周生长于罗-琼培养基（或其他培养基）上的菌落，置无菌磨菌瓶（含1-2滴10%吐温80）中。
旋紧瓶盖后旋涡混匀），用试剂A调其浊度为MacFarland No1一致（相当于1mg/ml）。
【检验方法】对照孔（1A、7A号孔）加试剂A198μl和菌液2μl，再加入试剂B 1μl，试剂C 50μl，鉴定孔（1B、7B号孔）加入试剂D5μl，菌悬液200μl，再加入试剂C50μl。
测试孔（2-6、8-12号孔）每孔加入200μl菌悬液，再加入试剂C50μl ，37℃培养，每天观察结果1次，当对照孔变色后，加入试剂B 1μl 于鉴定孔和各测试孔底部，37℃培养3小时，观察结果。
结核菌快速检测技术进展
1.前言从目前来看，结核病的发病率在最近几年内呈现出较为明显的上升趋势。
据世界卫生组织的统计数据来看，全球有超过20亿人不同程度感染了结核，并且每年还会出现890万新发结核菌病例，还有160万结核菌患者死亡[1]。
我国也是结核病高发国，发病人数居于全球第二，仅次于印度，每年会出现145万新发结核菌病例，还有20万结核菌患者死亡[2]。
通常而言，结核菌都是利用传统涂片镜检方法来予以检测，存在着较大的问题：培养时间需要60~90d ，且检出率不到35%[3]，给结核菌的诊断与治疗带来了较大的困难。
国外内医学界已经越来越重视结核菌快速检测技术，希望能够通过结核菌快速检测技术来提高结核菌的诊断率，以此达到尽快治疗的效果。
本文就结核菌快速检测技术进行进展。
2.液体培养技术在液体培养基中，结核杆菌的生长速度较快，且液体培养仅需要简单的操作设备即可，方法原理简单，世界卫生组织大量鼓励全球中低收入国家采用液体培养方法。
（1）分枝杆菌快速手工培养技术将荧光指示器镶嵌在肉汤培养基试管底部，若指示器发出橙色荧光，那么就说明存在着结核菌，通过对比含抗结核药管与生长对照管的荧光情况就可获得细菌药敏情况与生长情况。
分枝杆菌快速手工培养技术检测精确（检出率高于90%），方法有效、简单，只需7~14d 就可得到检测结果[4]。
（2）The BACTEC MGIT960自动培养技术The BACTEC MGIT960自动培养技术的检测原理与分枝杆菌快速手工培养技术相似，但需要由仪器来自动控制荧光信号的读取，但是其最大的问题在于：一次性设备投入较大，应用面较窄[5]。
（3）The Bac T/Alert 3D 系统技术The Bac T/Alert 3D 系统技术采用改良7H9 Middlebrook 肉汤培养基，将比色传感器镶嵌在试管底部，试管对二氧化碳（由细菌代谢产生）的检测灵敏度较高，试管颜色的变化可通过The Bac T/Alert 3D 系统技术来予以24h 实时持续检测，待试管的颜色变为黄色之后，那么说明确实存在着结核菌。
结核菌素(PPD)试验验
定义：
• 中文名称： 结核菌素试验 • 英文名称： tuberculin test • 定义： 用于诊断结核菌感染所致IV型超敏反 应的皮肤试验。对诊断活动性结核病和 测定机体细胞免疫功能有参考意义。 • 应用学科： 免疫学（一级学科）； 应用免疫（二级学科）；免疫学检测和 诊断（二级学科）
阴性：
• 结素试验阴性反应除提示没有结核菌 感染外，还见于以下情况：结核菌感 染后需4－8周有变态反应充分建立； 在这变态反应前期，结素试验可为阴 性。在应用糖皮质激素等免疫抑制剂 者，或营养不良及麻疹、百日咳等病 人，结素反应也可暂时消失。严重结 核病和各种危重病人对结素无反应， 或仅为弱阳性，这都是由于人体免疫 力连同变态反应暂时受到抑制的结果；
结果分类：
③15 mm或更大：
1、无危险的结核杆菌接触者
2、结核菌素测试转换：指在2年 期间增加了10毫米或以上（不论其年 龄） 3、卡介苗免疫接种后，PPD试验 呈阳性，一般硬结大小：>5mm， <15mm。
试验目的：
（1）为接种卡介苗提供依据，如结核 菌素试验阳性时，表明体内已感染过结 核菌，无需再接种卡介苗。阴性者是卡 介苗的接种对象。 （2）为测定免疫效果提供依据：一般 在接种卡介苗3个月以后，应做结核菌 素试验，了解机体对卡介苗是否产生免 疫力。假如结核菌素阳性，表示卡介苗 接种成功，反之需重新再进行卡介苗接 种。 （3）用于诊断与鉴别诊断：结核菌素
结素：
• 1、旧结素（old tuberculin，OT）是从生长过结核菌的液体培养 基中提炼出来的结核菌代谢产物，主要含有结核蛋白。在人群中作 普查时，可用1：2000的OT稀释液0.1ml（5IU），在左前臂屈侧作 皮内注射，经48－72h测量皮肤硬结直径，如小于5mm为阴性，5－ 9mm为弱阳性（提示结核菌感染或非结核性分支杆菌感染），10－ 19mm为阳性反应，20mm以上或局部发生水泡与坏死者为强阳性反应。 • 2、结素的纯蛋白衍化物（purified protein derivative，PPD） 为纯结素，不产生非特异性反应。PPD-RT23是由丹麦制造供应世界 许多国家使用，已经取代OT。我国从人型结核菌制成PPD（PPD-C）， 又从卡介苗制成BCG-PPD，0.1ml为5IU，用于临床诊断，硬结平均 直径≥5mm为阳性反应。 • 3、结素试验除引起局部皮肤反应外，还可引起原有结核病灶和全 身反应。临床诊断一般使用5IU，如无反应，可在一周后再用5IU皮 试（产生结素增强效应），若仍为阴性，大多可除外结核感染。
肺结核应该做哪些检查
肺结核应该做哪些检查?一、结核菌检查是确诊肺结核最特异性的方法,痰中找到结核菌是确诊肺结核的主要依据。
涂片抗酸染色镜检快速简便,在我国非典型分枝杆菌尚属少见,故抗酸杆菌阳性,肺结核诊断基本即可成立。
直接厚涂片阳性率优于薄涂片,为目前普遍采用。
荧光显微镜检查适合于大量标本快速检查。
无痰或儿童不会咳嗽,可采用清晨的胃洗液找结核菌,成人亦可通过纤支镜检查,或从其涮洗液中查找结核菌。
痰菌阳性表明其病灶是开放性的,,具有传染性。
若排菌量多(每毫升10万个以上),直接涂片易呈阳性,为社会传染源。
痰菌量较少(每毫升1万个以下),可用集菌法。
培养法更为精确,除能了解结核菌有无生长繁殖能力外,且可作药物敏感试验与菌型鉴定。
结核菌生长缓慢,使用改良罗氏培养基,通常需4~8周才能报告。
培养虽较费时,但精确可靠,特异性高,若涂片阴性或诊断有疑问时,培养尤其重要,培养菌株进一步作药物敏感性测定,可为治疗特别是复治时提供参考。
将标本在体外用聚合酶链反应(PCR)法,使所含微量结核菌DNA得到扩增,用电泳法检出。
1个结核菌约含1fgDNA,40个结核菌即可有阳性结果。
该法不必体外预培养,特异性强,2天即可出报告,快速、简便,并可鉴定菌型,不足之处是可能出现假阳性或假阴性。
血清学检查近年来已开展酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测结核抗体,用PCR 法检测分枝杆菌。
二、影像学检查胸部X线检查可以发现肺内病变的部位、范围、有无空洞或空洞大小、洞壁厚薄等。
X线对各类结核病变的透过度不同,通过X线检查大致能估计结核病灶的病理性质,并能早期发现肺结核,以及判断病情发展及治疗效果,有助于决定治疗方案。
必须指出,不同病因引起的肺内病变,可能呈现相似的X线影像,故亦不能仅凭X线检查轻易确定肺结核的诊断。
X线摄片结合透视有助于提高诊断的准确性,可发现肋骨、纵隔、膈肌或被心脏遮盖的细小病灶,并能观察心、肺、膈肌的动态。
肺结核的常见X线表现包括:纤维钙化的硬结病灶,表现为密度较高、边缘清晰的斑点、条索或结节;浸润性病灶,表现为密度较淡,边缘模糊的云雾状阴影;干酪样病灶,表现为密度较高、浓淡不一,有环形边界透光区的空洞等。
结核分枝杆菌的微生物学检查程序
结核分枝杆菌的微生物学检查程序结核分枝杆菌是一种引起结核病的病原菌，它具有潜伏感染和活动性感染两种状态。
为了准确诊断结核病，需要进行微生物学检查。
以下将详细介绍结核分枝杆菌的微生物学检查程序。
第一步：标本采集结核分枝杆菌的标本可以采集自患者的呼吸道、淋巴结、组织等部位。
常见的标本包括痰、胸腔积液、脑脊液等。
标本采集应严格遵循无菌操作原则，避免污染和细菌的死亡。
第二步：标本处理采集到的标本需要进行适当的处理，以提高分枝杆菌的检出率。
对于痰标本，应先进行离心，将上清液（上清液中含有较高浓度的分枝杆菌）分装入多个收集器中。
对于其他标本，如胸腔积液、脑脊液等，可以进行直接涂片或离心浓缩处理。
第三步：分枝杆菌培养分枝杆菌培养是诊断结核病的关键步骤。
常用的培养基有Lowenstein-Jensen（LJ）固体培养基、麦康奈尔（Middlebrook）液体培养基等。
将经过标本处理的标本接种到培养基上，并在适宜的温度（通常为35-37摄氏度）下培养2-8周。
培养期间需要定期观察菌落的形态，并进行常规的结核分枝杆菌鉴定。
第四步：分枝杆菌鉴定通过观察分枝杆菌的形态特征，如形状、颜色等，可以初步鉴定分枝杆菌。
进一步的鉴定需要进行生化试验，如尼氏染色、热酸洗脱法、硝酸盐还原试验等。
这些试验可以确定菌株是否为结核分枝杆菌。
第五步：药敏试验药敏试验用于检测结核分枝杆菌对抗结核药物的敏感性。
常用的药敏试验包括比值法（MIC测定）、比例法、临界浓度法等。
通过药敏试验可以确定分枝杆菌对抗结核药物的敏感性，以指导临床治疗。
第六步：核酸检测核酸检测是近年来发展起来的一种快速、准确的检测方法。
常用的核酸检测技术有PCR（聚合酶链反应）、LAMP（环介导等温扩增法）等。
通过检测结核分枝杆菌特定的基因序列，可以快速准确地诊断结核病。
综上所述，结核分枝杆菌的微生物学检查程序包括标本采集、标本处理、分枝杆菌培养、分枝杆菌鉴定、药敏试验和核酸检测。
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TwinCubator® （可做12个条）
杂交仪（自动,20条）
GT-Blot® 20
杂交仪（自动,48条）
GT-Blot® 48
结果判断
野生型：有杂交带显色为“+”，表示未发生突变 耐药突变位点：有杂交带显色为“+”，表示发生 突变
60°C
AE
探针
杂交体
选择
AE
AE
选择性试剂
AE AE AE
60°C
AE
AE
AE
结果测定
注射 1
注射 2
显示
打印机
PMT
Photo multiplicator
CPU
微机处理器
化学发光读数仪 / 原理
键盘
ATA TRAINING / TP / Nov 97
19
MTD结核分枝杆菌的直接检测意义
TB与其他分枝杆菌区分
结核菌快速测定
Genprob Leader-50i
方法
方法名称：
HPV（Hybridization Protection Assay）-杂交保护分 析法为Gen-probe公司专利
检测设备：
LEADER 50i
不同方法结核菌检测报告时间
罗氏（LJ）培养: 2-8 周 HPA-MTD: 2.5h 报告
A T A T
A T
C
RNA 聚合酶
C G T A
G C
T A
A T C G T A G C G C A T AT
A T G C G C T A
G C
DNA 10 000 套 r-RNA (eg : E.coli)
样本前处理
细胞溶解 样本
目标 r-RNA释放
杂交
rRNA
AEBiblioteka AE15分钟AE
AE AE AE AE
结核分枝杆菌（TB）分子生物学检测
结核分枝杆菌
结核分枝杆菌(M.tuberculosis)， 俗称结核杆菌，是引起结核病 的病原菌。可侵犯全身各器官，但 以肺结核为最多见。 结核病至今仍为重要的传染病。 估计世界人口中1/3感染结核分枝 杆菌。据WHO报道，每年约有800 万新病例发生，至少有300万人死 于该病。 我国建国前死亡率达200-300 人/10万，居各种疾病死亡原因之 首，建国后人民生活水平提高，卫 生状态改善，特别是开展了群防群 治，儿童普遍接种卡介苗，结核病 的发病率和死亡率大为降低。但应 注意，世界上有些地区因艾滋病、 吸毒、免疫抑制剂的应用、酗酒和 贫困等原因，发病率又有上升趋势。
严格的实验室防污染技术：整个实验过程所有试剂和样本 全部在同一个反应管内进行，杜绝交叉污染。
GenoType® MTBDRplus 结核菌药敏试验
基本原理
采用线性探针技术（Line-Probe或称DNA-Strip） 检测结核分枝杆菌复合群利福平(rpoB)和异烟 肼(katG和inhA)等结核治疗药物的耐药基因来 判断TB体内耐药性
TB形态
全球感染情况
实验诊断检测方法
常规检测方法 分子生物学检测方法
常规检测方法
一个月
二个月
三个月
分子生物学检测（PCR）方法
回顾RNA与DNA
RNA Vs DNA
RNA-核糖核酸 – 只存在於活细胞 – 非常脆弱，环境中存在水解酶（RNase） – 单链结构������ ������ ������ ������ DNA-脱氧核糖核酸 – 非常稳定，在死亡生物内也可存在 – 双链结构
药物 异烟肼 基因 katG inhA 利福平 吡嗪酰胺 链霉素 乙胺丁醇 rpoB pncA rpsL rrs embB 功能 Catalase-Peroxidase Enoyl-ACP-Reduktase ß-Subunit of RNAPolymerase Pyrazinamidase ribosomal Protein S12 16S rRNA Arabinosyl-Transferase DNA-Gyrase A 耐药百分比 40 - 100 % appr. 25 % appr. 10 % > 90 % appr. 95 % appr. 60 % appr. 20 % appr. 60 % appr.80-90%
采用分子技术快速鉴定（2.5小时）结核分枝杆菌复合群；
标本可以是涂片阴性或者阳性的痰标本；也可以是培养物。
唯一获得FDA推荐的凃阴样本快速检测技术 检测RNA，RNA只能来源于活的细菌，可鉴定活动性结核病 人）
采用TMA恒温扩增，不使用PCR仪器，无需专业的PCR实 验室认证 HPA杂交保护分析技术：灵敏、特异
PCR扩增
不同标本,扩增参数不同
培养菌种：扩增20个循环
涂阳标本：扩增30个循环
扩增产物：
扩增过程标记生物素
(Bio-11-dUTP、Bio-7-dATP、Bio-11-dCTP ?)
杂交
采用反向杂交方法
•PCR扩增产物→变性
（DNA成单链）→与探
针杂交→洗涤→显色→ 判断结果
杂交试剂
杂交仪（手工,12条）
直接从标本中检测结核菌
HPA-Accuprobe: <1h 报告
用菌落或自动培养系统的菌液
HPA-MTD方法检测TB
优势（一）靶分子选取
核糖体RNA- RIBOSOMAL RNA
rRNA作为靶分子好处：
–
–
生物扩增提高灵敏度
靶位独特的核酸次序保证检测特异性
靶分子 : rRNA
优势（二）敏 感 度
ahpC-Promoter Alkyl-Hydroxid-Peroxidase
Chinolone 氟喹诺酮 gyrA
检测过程
DNA提取 PCR扩增 探针杂交
结果判断
DNA提取
1.
标本
固体或液体培养基培养的菌 种 抗酸染色涂片阳性标本
2.
1. 2.
方法
超声波裂解： GenoLyse试剂盒：
GenoType® MTBDRplus检测举例 异烟肼：katG和inhA基因 katG基因：编码触酶-过氧化物酶 40-100%异烟肼耐药是由该基因突变引起且 为高水平耐药 inhA基因：编码NADH烯酰基ACP还原酶 25%异烟肼耐药是由该基因突变引起且为低水 平耐药
分枝杆菌复合群中的耐药基因
AIDS患者鸟分枝杆菌小肠黏膜感染 龟分枝杆菌引起严重院内感染（南方某医院）
TB耐药基因
发现并监测耐药菌株，为医生提供有效治疗TB复燃方案
提高TB检出率
CSF、胸腹水等
疑似患者
长期低热、ESR持续增快，排除肿瘤和免疫性疾病患者，做血、 痰TB菌PCR
Gen-Probe结核分枝杆菌检测分析仪特点