微生物安全国家标准
食品微生物检验-GB4789.1-2010总则
2.人员 (1) 检验人员应具有相应的教育、微生物专业培训经历，具备 相应的资质，能够理解并正确实施检验。 (2) 检验人员应掌握实验室生物检验安全操作知识和消毒知识。 (3) 检验人员应在检验过程中保持个人整洁与卫生，防止人为 污染样品。 (4) 检验人员应在检验过程中遵守相关预防措施的规定，保证 自身安全。 (5) 有颜色视觉障碍的人员不能执行涉及到辨色的实验。 3. 设备 (1) 实验设备应满足检验工作的需要。 (2) 实验设备应放置于适宜的环境条件下，便于维护、清洁、 消毒与校准，并保持整洁与良好的工作状态。 (3) 实验设备应定期进行检查、检定（加贴标识）、维护和保 养，以确保工作性能和操作安全。 (4) 实验设备应有日常性监控记录和使用记录。
4. 采集样品的标记 应对采集的样品进行及时、准确的记录和标记， 采样人应清晰填写采样单（包括采样人、采样 地点、时间、样品名称、来源、批号、数量、 保存条件等信息）。 5. 采集样品的贮存和运输 采样后，应将样品在接近原有贮存温度条件下 尽快送往实验室检验。运输时应保持样品完整。 如不能及时运送，应在接近原有贮存温度条件 下贮存。
2. 采样方案 (1) 类型 采样方案分为二级和三级采样方案。二级采样方案设有 n、c和m值，三级采样方案设有n、c、m和M值。 n：同一批次产品应采集的样品件数； c：最大可允许超出m值的样品数； m：微生物指标可接受水平的限量值； M： 微生物指标的最高安全限量值。 注1： 按照二级采样方案设定的指标，在n个样品中， 允许有c个样品其相应微生物指标检验值大于m值。 注2： 按照三级采样方案设定的指标，在n个样品中， 允许全部样品中相应微生物指标检验值小于或等于m值； 允许有c个样品其相应微生物指标检验值在m值和M值 之间；不允许有样品相应微生物指标检验值大于M值。
微生物安全国家标准
引言概述：微生物安全是确保微生物和微生物制品在各个环境和行业中使用或操纵时不会对人类、动植物和环境造成危害的重要因素。
为了保障公众的健康和安全，各国都制定了微生物安全国家标准来规范微生物的使用、处理和运输等方面的安全要求。
本文将对微生物安全国家标准的内容进行详细阐述。
正文内容：一、标准的立项意义1. 提升微生物安全管理水平：微生物安全国家标准的制定可以推动微生物安全管理水平的提升，促进相关行业的发展与规范化。
2. 保障公众健康安全：标准的制定可以确保微生物产品的质量和安全性，避免因微生物产生的疾病和其他危害对公众健康造成威胁。
3. 促进国际贸易发展：标准的制定与国际接轨，可以促进微生物产品的跨国贸易，增加经济效益。
二、标准的适用范围1. 微生物产品的生产、加工和销售环节；2. 微生物实验室的建设与管理；3. 微生物遗传工程技术的研究与应用；4. 微生物药物的研发、生产和使用等。
三、标准的主要内容1. 微生物安全管理要求：包括微生物实验室的管理、生物安全措施的要求、微生物存储与运输的安全规定等。
2. 微生物产品质量标准：对微生物产品的纯度、含量、活性等进行了明确的规定，以确保产品的质量稳定性和安全性。
3. 微生物实验室安全管理：包括实验室环境的要求、实验人员的培训与资质要求、实验室设备与仪器的管理等。
4. 微生物遗传工程技术安全：对微生物遗传工程技术的研究和应用进行了规范，防止可能产生的风险和危害。
5. 微生物药物研发与生产规范：明确了微生物药物研发和生产的各项规范要求，包括原料的选择与检验、生产工艺的控制与验证等。
四、标准的执行和监督机制1. 机构责任：明确了微生物安全国家标准的制定、修订和发布的机构责任，确保标准的实施与推广。
2. 监督检查：建立了微生物安全管理的监督检查机制，对相关行业和企业进行定期检查和评估，防范微生物安全风险。
3. 处罚措施：对微生物安全违规行为给予一定的处罚措施，以维护微生物安全的严肃性和公平性。
国家食品微生物限量标准
国家食品微生物限量标准
国家食品微生物限量标准是指在食品中允许存在的微生物的数量限制，以确保食品的质量和安全。
不同国家和地区的食品微生物限量标准可能有所不同，根据当地法律法规、卫生标准和食品安全要求制定。
常见的食品微生物限量标准包括以下几个方面：
1. 总菌落计数限量：表示食品中允许存在的总细菌数量的上限。
总菌落计数是指通过培养方法将食品中的细菌培育出来并计数。
2. 沙门氏菌限量：食品中不允许检出沙门氏菌，因为沙门氏菌是一种致病菌，可以引起食物中毒。
3. 大肠菌群限量：大肠菌群包括致病性大肠杆菌等菌种，其存在可能表示食品受到粪便污染，因此食品中允许存在的大肠菌群数量有一定限制。
4. 霉菌限量：食品中存在的霉菌数量也有一定限制。
霉菌的存在可能导致食品腐败、产生毒素等问题。
除了上述常见的微生物限量标准，不同食品可能还会有其他特定的微生物限量标准，比如嗜热菌、嗜盐菌、产气荚膜梭菌等。
这些限量标准的制定都旨在确保食品的质量和安全，保护消费者的健康。
微生物检测国家标准
微生物检测国家标准微生物检测是指对食品、饮用水、医药制品、环境等进行微生物数量和种类的检测，以评价产品的卫生质量。
微生物检测国家标准的制定对于保障公众健康、提高产品质量具有重要意义。
本文将就微生物检测国家标准的相关内容进行介绍和分析。
首先，微生物检测国家标准的制定是基于对公众健康的保护。
食品、饮用水、医药制品等产品如果受到微生物污染，就会对消费者的健康造成危害。
因此，制定微生物检测国家标准，可以规范产品的生产过程，减少微生物污染的可能，保障公众健康。
其次，微生物检测国家标准的制定是基于对产品质量的提高。
微生物的存在和数量会直接影响产品的质量和保质期。
通过严格的微生物检测国家标准，可以有效地控制产品的微生物污染，提高产品的质量和安全性，延长产品的保质期，从而提升产品的竞争力和市场份额。
微生物检测国家标准的制定需要考虑到不同产品的特点和用途。
不同产品在微生物检测方面的要求是不同的，比如食品和医药制品对微生物的容忍度是不一样的，因此在制定微生物检测国家标准时，需要根据不同产品的特点和用途，进行分类和细化，确保标准的科学性和实用性。
此外，微生物检测国家标准的制定需要考虑到检测方法的科学性和准确性。
随着科学技术的不断发展，微生物检测的方法也在不断更新和完善，因此在制定微生物检测国家标准时，需要考虑到最新的检测方法和技术，确保检测结果的准确性和可靠性。
总的来说，微生物检测国家标准的制定对于保障公众健康、提高产品质量具有重要意义。
在制定微生物检测国家标准时，需要充分考虑产品的特点和用途，科学性和实用性，确保标准的严谨性和准确性。
只有如此，才能有效地保障公众健康，提高产品质量，促进社会经济的健康发展。
食品微生物检验 GB4789.1-2010总则
2. 检验方法的选择 (1) 应选择现行有效的国家标准方法。 (2) 食品微生物检验方法标准中对同一 检验项目有两个及两个以上定性检验方 法时，应以常规培养方法为基准方法。 (3) 食品微生物检验方法标准中对同一 检验项目有两个及两个以上定量检验方 法时，应以平板计数法为基准方法。
四、生物安全与质量控制
三、样品检验
1. 样品处理 (1) 实验室接到送检样品后应认真核对登记, 确保样 品的相关信息完整并符合检验要求。 (2) 实验室应按要求尽快检验。若不能及时检验， 应采取必要的措施保持样品的原有状态，防止样品 中目标微生物因客观条件的干扰而发生变化。 (3) 冷冻食品应在 45 ℃以下不超过 15 min，或 2 ℃～5 ℃不超过 18 h 解冻后进行检验。
5. 培养基和试剂 (1) 培养基 培养基的制备和质量控制按照GB/T 4789.28的规定执行。 (2) 试剂 检验试剂的质量及配制应适用于相关检验。对检验结果有重 要影响的关键试剂应进行适用性验证。 6. 菌株 (1) 应使用微生物菌种保藏专门机构或同行认可机构保存的、 可溯源的标准或参考菌株。 (2) 应对从食品、环境或人体分离、纯化、鉴定的，未在微 生物菌种保藏专门机构登记注册的原始分离菌株（野生菌株） 进行系统、完整的菌株信息记录，包括分离时间、来源，表 型及分子鉴定的主要特征等。 (3) 实验室应保存能满足实验需要的标准或参考菌株，在购 入和传代保藏过程中，应进行验证试验，并进行文件化管理。
采样可分为大样的采集，中样的采集（200g或ml），小样的采集（25g或ml）
采样数量应能反映该食品的卫生质量和满足检验项目对试样量的 需要，一式三份，供检验、复验、备查或仲裁，一般散装样品每 份不少于0.5Kg。 鉴于采样的数量和规则各有不同，一般可按下述方法进行。 （1）液体、半流体饮食品。如植物油、鲜乳、酒或其它饮料，如 用大桶或大罐盛装者，应先行充分混匀后采样。样品应分别盛放 在三个干净的容器中，盛放样品的容器不得含有待测物质及干扰 物质。 （2）粮食及固体食品应自每批食品的上、中、下三层中的不同部 位分别采取部分样品混合后按四分法对角取样，再进行几次混合， 最后取有代表性样品。 （3）肉类、水产等食品应按分析项目要求分别采取不同部位的样 品或混合后采样。 （4）罐头、瓶装食品或其它小包装食品，应根据批号随机取样。 同一批号取样件数，250g以上的包装不得少于6个，250g以下的 包装不得少于10个。掺伪食品和食物中毒的样品采集，要具有典 型性。
WS 589-2018 病原微生物实验室生物安全标识标准WS 589—2018
WS 589-2018 病原微生物实验室生物安全标识标准WS 589—2018WS 589-2018 病原微生物实验室生物安全标识标准是中国国家标准化管理委员会于2018年发布的一项重要标准。
该标准为病原微生物实验室的管理提供了规范和指导，旨在确保实验室安全，并防止疾病传播和生物灾害的风险。
1. 范围本标准适用于进行病原微生物培养、检测和研究的实验室。
它适用于所有国家公共卫生和科研机构、医疗实验室以及相关生物科技企业。
2. 术语和定义本标准中使用了一些术语和定义，包括实验室级别、生物安全标识、病原微生物等。
这些定义有助于理解和应用本标准。
3. 实验室级别根据研究内容和实验室设施等因素，将实验室分为不同的级别。
本标准规定了四个级别，并针对不同级别的实验室提出了相应的安全要求和防护措施。
4. 生物安全标识生物安全标识是标识实验室级别和已实施的防护措施的标识符。
根据实验室所在地或运营机构的要求，生物安全标识应明确可见且容易理解。
本标准规定了五种生物安全标识的类型及其应用。
5. 实验室管理和操作要求本标准对实验室的管理和操作提出了一些重要要求，包括实验人员的培训和资质要求、环境监测和设施维护、实验室应急准备和事故处理等。
6. 病原微生物分类和处理根据不同的传染性和致病性，将病原微生物分为四个不同的风险组别。
本标准规定了不同风险组别病原微生物的处理要求，包括存储、运输和处理等。
7. 质量保证和监控为确保实验室工作的质量和安全，本标准强调质量保证和监控的重要性。
它指出了实验室应建立的质量管理体系、试剂和材料的质量要求，以及对实验室工作过程进行监控和评估的方法。
8. 相关法规和指南本标准对于实验室遵循的相关法规和指南进行了引用，并提供了相关资源参考。
结论通过对WS 589-2018 病原微生物实验室生物安全标识标准的理解和应用，实验室能够确保实验人员的安全和实验工作的质量。
它为实验室管理提供了规范和指导，并促进了病原微生物实验室的安全运营和管理。
食品微生物检测标准
食品微生物检测标准一、引言食品微生物检测是保障食品安全的重要手段，它通过对食品中的微生物进行检测和分析，以评估食品的卫生质量和潜在的安全风险。
为了规范和统一食品微生物检测工作，制定相应的标准是至关重要的。
本文将详细探讨食品微生物检测标准的相关内容，包括一般标准、各类食品的微生物检测标准、食品安全国家标准以及国际发展趋势等方面。
二、微生物检测一般标准微生物检测一般标准是针对食品中微生物的检测方法和程序进行规范的总称。
这些标准通常包括采样方案、检测方法、结果判定等方面的规定。
例如，在采样方案方面，需要规定采样的部位、数量、频率以及样品的保存和运输方式等；在检测方法方面，应遵循国际公认的检测方法和程序，以确保检测结果的准确性和可靠性；在结果判定方面，应根据微生物的种类和数量制定相应的安全限值，并依据限值进行结果判定。
三、各类食品的微生物检测标准由于不同种类的食品具有不同的特性，其微生物检测标准也会有所不同。
以下是一些常见食品种类的微生物检测标准：1.肉类食品：肉类食品的微生物检测重点在于沙门氏菌、弯曲菌属等病原菌的检测，以及菌落总数、大肠菌群等卫生指标的监控。
对于生肉和熟肉制品，需要制定不同的检测标准。
2.乳制品：乳制品的微生物检测主要包括乳酸菌、大肠菌群、沙门氏菌等指标的检测。
对于发酵乳制品和灭菌乳制品等不同种类，其微生物检测标准也有所不同。
3.水果和蔬菜：水果和蔬菜的微生物检测主要关注大肠菌群、霉菌、酵母等指标的检测。
为了确保食品安全，需要对果蔬表面和内部进行取样检测。
4.谷物及其制品：谷物及其制品的微生物检测重点在于黄曲霉毒素、霉菌等指标的检测。
同时，还需要监控谷物中的沙门氏菌和大肠菌群等卫生指标。
5.食用油：食用油的微生物检测主要针对霉菌、黄曲霉毒素等指标的检测。
此外，还需要对食用油中的细菌进行监控，以确保食用油的质量安全。
四、食品安全国家标准食品安全国家标准是针对食品中微生物和其他危害物的限量标准，是保障食品安全的重要法规。
国家食品微生物标准
国家食品微生物标准一、菌种分类与命名1.1 规定食品中微生物的分类系统，明确各类微生物的归属和命名规则。
1.2 发布各类微生物的详细描述和鉴定方法，以确保食品微生物标准的准确性和可操作性。
二、微生物检验方法与标准2.1 建立针对不同食品中微生物的检验方法，包括样品采集、处理、检验和结果报告等环节。
2.2 制定食品中微生物的限量标准，明确各类食品中微生物的数量和种类限制。
三、食品中微生物限量3.1 制定不同种类食品中的微生物限量标准，包括细菌、真菌、病毒等微生物的数量和种类限制。
3.2 根据食品类型和微生物特点，不断更新和优化微生物限量标准。
四、食品加工环节微生物控制4.1 规定食品加工过程中的卫生要求和微生物控制措施，包括原料采购、生产加工、储存运输等环节。
4.2 针对不同食品加工环节，提出有效的微生物控制方法和管理措施。
五、微生物危害分析与关键控制点5.1 对食品生产过程中的微生物危害进行分析，确定关键控制点和关键限值。
5.2 制定针对关键控制点的监控计划和纠正措施，以确保食品安全和质量。
六、微生物风险评估与风险管理6.1 建立食品微生物风险评估模型和方法，对不同食品中的微生物风险进行评估。
6.2 制定针对高风险食品的预防措施和风险管理计划，降低食品安全风险。
七、进出口食品微生物检验检疫7.1 规定进出口食品的微生物检验检疫程序和要求，确保进出口食品安全和质量。
7.2 对进出口食品中的典型微生物进行监测和分析，及时发现和通报食品安全问题。
八、微生物检测方法与仪器设备8.1 发布食品中微生物的检测方法指南，包括传统培养法、快速检测法和分子生物学方法等。
8.2 推广新型微生物检测仪器设备和技术手段，提高食品中微生物检测的准确性和效率。
九、微生物实验室建设与认可9.1 规范食品微生物实验室的建设和认可程序，确保实验室具备开展相关检测和研究的资质和能力。
9.2 对食品微生物实验室进行定期评估和审核，确保其检测结果的可信度和准确性。
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食品微生物学检验菌落总数测定1 范围本标准规定了食品中菌落总数（Aerobic plate count）的测定方法。
本标准适用于食品中菌落总数的测定。
2 术语和定义2.1 菌落总数:食品检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每g （mL）检样中形成的微生物菌落总数。
3 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：3.1 恒温培养箱：36 ℃±1 ℃，30 ℃±1 ℃。
3.2 冰箱：2 ℃～5 ℃。
3.3 恒温水浴箱：46 ℃±1 ℃。
3.4 天平：感量为0.1 g。
3.5 均质器。
3.6 振荡器。
3.7 无菌吸管：1 mL（具0.01 mL 刻度）、10 mL （具0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸头。
3.8 无菌锥形瓶：容量250 mL、500 mL。
3.9 无菌培养皿：直径90 mm。
3.10 pH 计或pH 比色管或精密pH 试纸。
3.11 放大镜或/和菌落计数器。
4 培养基和试剂4.1 平板计数琼脂培养基：见附录A 中A.1。
4.2 磷酸盐缓冲液：见附录A 中A.2。
4.3 无菌生理盐水：见附录A 中A.3。
5 检验程序检样25 g(mL)样品+225 mL 稀释液，均质→10 倍系列稀释→选择2 个～3 个适宜稀释度的样品匀液，各取1 mL 分别加入无菌培养皿内→每皿中加入15 mL～20 mL 平板计数琼脂培养基，混匀→培养→计数各平板菌落数→计算菌落总数→报告6 操作步骤6.1 样品的稀释6.1.1 固体和半固体样品：称取25 g 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内， 8000 r/min～10000 r/min 均质1 min～2 min，或放入盛有225 mL 稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min，制成1:10 的样品匀液。
6.1.2 液体样品：以无菌吸管吸取25 mL 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10 的样品匀液。
6.1.3 用1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取1:10 样品匀液1 mL，沿管壁缓慢注于盛有9 mL 稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1 支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100 的样品匀液。
6.1.4 按6.1.3 操作程序，制备10 倍系列稀释样品匀液。
每递增稀释一次，换用1 次1 mL 无菌吸管或吸头。
6.1.5 根据对样品污染状况的估计，选择2 个～3 个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10 倍递增稀释时，吸取1 mL 样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。
同时，分别吸取1 mL 空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。
6.1.6 及时将15 mL～20 mL 冷却至46 ℃的平板计数琼脂培养基（可放置于46 ℃±1 ℃恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。
6.2 培养6.2.1 待琼脂凝固后，将平板翻转，36 ℃±1 ℃培养48 h±2 h。
水产品30 ℃±1 ℃培养72 h±3 h。
6.2.2 如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4 mL），凝固后翻转平板，按6.2.1 条件进行培养。
6.3 菌落计数可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。
菌落计数以菌落形成单位（colony-forming units，CFU）表示。
6.3.1 选取菌落数在30 CFU～300 CFU 之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。
低于30 CFU 的平板记录具体菌落数，大于300 CFU 的可记录为多不可计。
每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。
6.3.2 其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数6.3.3 当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。
7 结果与报告7.1 菌落总数的计算方法7.1.1 若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g（mL）样品中菌落总数结果。
7.1.2 若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按公式（1）计算：N=ΣC∕(n1+0.1n2)d (1)式中：N——样品中菌落数；ΣC——平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和； n1——第一稀释度（低稀释倍数）平板个数； n2——第二稀释度（高稀释倍数）平板个数； d——稀释因子（第一稀释度）。
(232+ 244 +33+ 35)∕[2 +(0.1 *2)]* 0.01=24727 上述数据按7.2.2数字修约后，表示为25000或2.5×104。
7.1.3 若所有稀释度的平板上菌落数均大于300 CFU，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。
7.1.4 若所有稀释度的平板菌落数均小于30 CFU，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
7.1.5 若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于1 乘以最低稀释倍数计算。
7.1.6 若所有稀释度的平板菌落数均不在30 CFU～300 CFU 之间，其中一部分小于30 CFU 或大于300CFU 时，则以最接近30 CFU 或300 CFU 的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
7.2 菌落总数的报告7.2.1 菌落数小于100 CFU 时，按“四舍五入”原则修约，以整数报告。
7.2.2 菌落数大于或等于100 CFU 时，第3 位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前2 位数字，后面用0 代替位数；也可用10 的指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。
7.2.3 若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。
7.2.4 若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。
7.2.5 称重取样以CFU/g 为单位报告，体积取样以CFU/mL 为单位报告。
食品微生物学检验大肠菌群计数1 范围本标准规定了食品中大肠菌群（Coliforms）计数的方法。
本标准适用于食品中大肠菌群的计数。
2 术语和定义2.1 大肠菌群coliforms在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。
2.2 最可能数most probable number，MPN基于泊松分布的一种间接计数方法。
3 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：3.1 恒温培养箱：36 ℃±1 ℃。
3.2 冰箱：2 ℃～5 ℃。
3.3 恒温水浴箱：46 ℃±1 ℃。
3.4 天平：感量0.1 g。
3.5 均质器。
3.6 振荡器。
3.7 无菌吸管：1 mL（具0.01 mL 刻度）、10 mL （具0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸头。
3.8 无菌锥形瓶：容量500 mL。
3.9 无菌培养皿：直径90 mm。
3.10 pH 计或pH 比色管或精密pH 试纸。
3.11 菌落计数器。
4 培养基和试剂4.1 月桂基硫酸盐胰蛋白胨LST）肉汤： 4.2 煌绿乳糖胆盐BGLB）肉汤：4.3 结晶紫中性红胆盐琼：4.4 磷酸盐缓冲液：见附录A 中A.4。
4.5 无菌生理盐水：见附录A 中A.5。
4.6 无菌1 mol/L NaOH：见附录A 中A.6。
4.7 无菌1 mol/L HCl：见附录A 中A.7。
第一法大肠菌群MPN 计数法5 检验程序大肠菌群MPN↓10 倍系列稀释↓选择适宜 3 个连续稀释度的样品匀液，接种LST 肉汤管36℃±1℃∣48h±2h↓↓不产气产气↓BGLB 肉汤36℃±1℃∣48h±2h↓↓不产气产气大肠菌群阴性大肠菌群阳性查 MPN 表报告结果6 操作步骤6.1 样品的稀释6.1.1 固体和半固体样品：称取25 g 样品,放入盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内, 8000 r/min～10000 r/min 均质1 min～2 min,或放入盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min，制成1:10 的样品匀液。
6.1.2 液体样品：以无菌吸管吸取25 mL 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10 的样品匀液。
6.1.3 样品匀液的pH 值应在6.5～7.5 之间，必要时分别用1 mol/L NaOH 或1 mol/L HCl 调节。
6.1.4 用1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取1:10 样品匀液1 mL，沿管壁缓缓注入9 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1 支1 mL 无菌吸管反复吹打，使其混合均匀，制成1:100 的样品匀液。
6.1.5 根据对样品污染状况的估计，按上述操作，依次制成十倍递增系列稀释样品匀液。
每递增稀释1 次，换用1 支1 mL 无菌吸管或吸头。
从制备样品匀液至样品接种完毕，全过程不得超过15 min。
6.2 初发酵试验每个样品，选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液（液体样品可以选择原液），每个稀释度接种3管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管接种1mL（如接种量超过1 mL，则用双料LST肉汤），36℃±1 ℃培养24 h±2 h，观察倒管内是否有气泡产生，24 h±2 h产气者进行复发酵试验，如未产气则继续培养至48 h±2 h，产气者进行复发酵试验。
未产气者为大肠菌群阴性。
6.3 复发酵试验用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种于煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）管中，36 ℃±1℃培养48 h±2 h，观察产气情况。
产气者，计为大肠菌群阳性管。
6.4 大肠菌群最可能数（MPN）的报告按6.3确证的大肠菌群LST阳性管数，检索MPN表（见附录B），报告每g（mL）样品中大肠菌群的MPN值。
第二法大肠菌群平板计数法7大肠菌群平板计数法的检验程序8 操作步骤检样25 g(mL)样品+225 mL 稀释液，均质10 倍系列稀释选择2 个~3 个适宜稀释度的样品匀液，接种VRBA 平板36℃±1℃∣18h~24h计数典型和可疑菌落BGLB 肉汤36℃±1℃∣24h~48h报告结果8.1 样品的稀释(按6.1进行。