福氏志贺菌临床分离株毒力基因的研究

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微生物检测之志贺氏菌检测

志贺氏菌的检验（国标法）一、增菌称取检样25g，加入装有225mLGN增菌液的500mL广口瓶内，固体食品用均质器以8000-10000r/min打碎1min，或用乳钵加灭菌砂磨碎，粉状食品用金属匙或玻璃棒研磨使其乳化，于36℃培养6~8h。

培养时间视细菌生长情况而定，当培养液出现轻微混浊时即应中止培养。

二、分离和初步生化试验取增菌液1环，划线接种于HE琼脂平板或SS琼脂平板1个；另取1环划线接种于麦康凯琼脂平板和伊红美蓝琼脂平板各1个，于36℃培养18~24h。

志贺氏菌在这些培养基上呈现无色透明不发酵乳糖的菌落。

挑取平板上的可疑菌落，接种三糖铁琼脂和葡萄糖半固体各1管。

一般应多挑几个菌落，以防遗漏，经36℃培养18~24h，分别观察结果。

下述培养物可以弃去：a. 在三糖铁琼脂斜面上呈蔓延生长的培养物；b. 在18~24h内发酵乳糖、蔗糖的培养物；c. 不分解葡萄糖和只生长在半固体表面的培养物；d. 产气的培养物；e. 有动力的培养物；f. 产生硫化氢的培养物。

凡是乳糖、蔗糖不发酵，葡萄糖产酸不产气(福氏志贺氏菌6型可产生少量气体)，无动力的菌株，可做血清学分型和进一步的生化试验。

三、血清学分型挑取三糖铁琼脂上的培养物，做玻片凝集试验。

先用4种志贺氏菌多价血清检查，如果由于K抗原的存在而不出现凝集，应将菌液煮沸后再检查；如果呈现凝集，则用A1、A2、B群多价和D群血清分别试验。

如系B群福氏志贺氏菌，则用群和型因子血清分别检查。

福氏志贺氏菌各型和亚型的型和群抗原见表1。

可先用群因子血清检查，再根据群因子血清出现凝集的结果，依次选用型因子血清检查。

4种志贺氏菌多价血清不凝集的菌株，可用鲍氏多价1、2、3分别检查，并进一步用1~15各型因子血清检查。

如果鲍氏多价血清不凝集，可用痢疾志贺氏菌3~12型多价血清及各型因子血清检查。

四、进一步的生化试验在做血清学分型的同时，应做进一步的生化试验，即：葡萄糖铵西蒙氏柠檬酸盐赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶pH7.2尿素KCN生长水杨苷和七叶苷的分解除宋内氏菌和鲍氏13型为乌氨酸阳性外，志贺氏菌属的培养物均为阴性结果。

178株福氏志贺菌的药敏试验结果及临床应用分析

谱稳定。
【键词】生化反应；血清学凝集试验；药敏试验关中图分类号：３８２；９Ｒ７．５Ｒ６文献标志码：Ｂ文章编号：６２９５（０９０ — ５２０１７４５２０）７０３ — １续表１福氏志贺菌对１８种药物敏感试验结果［（）］
・
５３・２
丝堕垦堂皇】２０年４堕０９月第６卷第７期Ｌｂｄｌ，ｐｉ２０，ｏ．，ｏ７ａｉＡｒ０９Ｖ１Ｎ．ＭｅＣｎｌ６
１８株福氏志贺菌的药试验结果及临床应用分析７敏
２结果
５阳性，本文结果显示，氏忠贺菌靛质试验术榆ｆ｛Ｏ而福ｊ性，全国范围内，氏志贺菌占忐贺菌属（１个种）病半的福共发７，本地区却没有检出其他３种志贺菌， Ⅱ 能和地Ｏ而这丁异性有关［。３３２从表１可以看出，．头孢哌酮、孢唑林的敏感性较高，头由
１材料与方法
１１菌株来源１８株福氏志贺菌来自本院门诊、房及本．７病区其他医院送检的标本。１２培养基及药敏纸片．
后勤部卫生防疫检验所。
ＳＳ琼脂、ＭＨ琼脂、糖琼脂、敏双药
（３８）第４季度６４．２，９株（８７）７３．７。１８株福氏志贺菌对

VITEK MS质谱仪错误鉴定福氏志贺菌1例

VITEK MS质谱仪错误鉴定福氏志贺菌1例韦柳华;罗国兰;李梦薇;黄冠大【摘要】目的了解VITEK MS对1株从血培养分离的福氏志贺菌的鉴定能力.方法采用VITEK MS、Vitek 2 Compact全自动细菌鉴定仪、血清凝集试验及16S rRNA基因测序进行鉴定;采用VITEK MS分别对福氏志贺菌临床株、福氏志贺菌CMCC51572、大肠埃希菌ATCC8739进行质谱鉴定及蛋白质谱图比较分析.结果VITEK MS鉴定为大肠埃希菌,可信度为99.9％;Vitek 2 Compact鉴定为志贺菌属,可信度为89.0％;血清学结果为福氏志贺菌3a型;16S rRNA基因测序为志贺菌、福氏志贺菌1a、福氏志贺菌2a、大肠埃希菌,序列同源性达97％以上;福氏志贺菌临床株、福氏志贺菌CMCC51572、大肠埃希菌ATCC8739的蛋白质谱图相似.结论志贺菌和大肠埃希菌在基因角度上符合同一个种,VITEK MS不能区分志贺菌和大肠埃希菌,需要附加生化反应、科玛嘉尿道定位显色培养及血清学试验进行志贺菌的排除.【期刊名称】《临床检验杂志》【年(卷),期】2016(034)004【总页数】3页(P315-316,320)【关键词】福氏志贺菌;大肠埃希菌;鉴定;基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱【作者】韦柳华;罗国兰;李梦薇;黄冠大【作者单位】广西医科大学第四附属医院检验科,广西柳州545005;广西医科大学第四附属医院检验科,广西柳州545005;广西医科大学第四附属医院检验科,广西柳州545005;广西医科大学第四附属医院检验科,广西柳州545005【正文语种】中文【中图分类】R446.5基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ ionization time of flight mass spectrometry，MALDI-TOF MS)是近年发展起来的一种新型软电离质谱技术，具有快速、准确、操作简便、高通量、低成本等优势而被一些实验室用于微生物的鉴定。

福氏志贺菌临床分离株CTX-M9及TEM基因的检测

４２５００６；２．永州职业技术学院附属医院，湖南永州
４２５００６
【摘要】目的探讨湖南永州地区福氏志贺菌临床分离株中Ｂ一内酰胺酶耐药基因ＣＴＸ — Ｍ９及ＴＥＭ的检出情况。方法采用分离培养以及生化和血清学鉴定临床分离株。Ｋ — Ｂ纸片扩散法分析其对抗菌药物的敏感性，同时针对ＣＴＸ — Ｍ９及ＴＥＭ基因设计特异性引物，采用ＰＣＲ方法对齐进行扩增。结果永州市区医院分离的５５株福氏志贺菌，其中对氨卞西林的耐药率为８７．３％．复方磺胺甲嗯唑耐药率为８３．６％，头孢曲松耐药率为１５．３％。耐药基因ＴＥＭ的２０１１年１月一２０１２年１１月检出率为３２．７％。ＣＴＸ — Ｍ基因占所有阳性分离株的７９．６％，其中同时携带ＴＥＭ和ＣＴＸ — Ｍ基因的占１９．５％。结论永州地区福氏志贺菌对氨卞西林、头孢曲松等抗生素耐药率较好，可能与ＣＴＸ — Ｍ９及ＴＥＭ基因的高表达有关。
者的粪便标本，通过ｓｓ平板接种等方法筛出可疑菌落，并采用全自动细菌鉴定仪（法国梅里埃）鉴定细菌的种和群。
１．２细菌药敏试验的测定
采用Ｋ — Ｂ纸片扩散法检测福氏志贺菌的耐药性，并按ＮＣ —
氨苄西林、复方磺胺甲恶唑耐药率明显高于其他药物，分别
酶Ｋ７．５）于４２％下裂解细菌。随后加入等体积饱和酚充分混匀，再用氯仿抽提，获取上清并加人０．１体积３ＭＮａＡｃ，随后用２

宁夏地区福氏4c志贺菌毒力基因及分子分型研究

ｓｒｉｏ１ｉｓｏｆａｔｂｉｉｒｇｒａｒｅｕｔｂｙＫｉｂ．ｕｅｘｅｉｅｔ．ｃｒｉｏｔｅｅｐｅｍｅｔｌｔａｎｓｔｋｎｄｎｉｏｔｃｄ０ｕｓｗｅｅｃｒｉｄｏｒｖＢａｒｅｐｒｍｎｓＡｃｏｄｎｇｔｈｘｒｉｎａ
ｃ菌株分为９个带型，其中Ｎ０１ｌ株，为宁Ｘ００型１Ｆｃ４具有很强的毒性作
夏省的优势带型，占３．％，其次是ＮＸ００、ＮＸ００型，分别为８２．３￣７２．％）。结论２３５０５０３株（３％）１（０５株５９
关键词：Ｆｃ志贺菌；脉冲场凝胶电泳（Ｆ）４型ＰＧＥ；毒力基因；耐药性
（宁夏疾病预防控制中心，银川７００；２中国疾病预防控制中心传染病预防控制所，北京１２０１５０４０２６）摘要：目的掌握宁夏地区福氏４志贺菌（．４）力基因的流行模式、分子分型特点及耐药性情况，为本地区ＳＦｃｃｓＦｃ毒４志贺
中氨苄西林（ＡＭＰ、四环素（Ｅ、奈啶酸（Ａ）阿莫西林（）Ｔ）Ｎ、ＡＭＬ的耐药率最高，达到１０）０％，其次是复方新诺明（ｘＴ，耐药率Ｓ）
为９．％，对庆大霉素（Ｎ）０６２Ｃ、头孢噻肟（Ｔ）ＣＸ、利福平（Ｄ）Ｒ完全敏感；３株４
菌防控提供资料。方法应用ＰＲＣ方法对３株Ｆｃ４４志贺菌的侵袭性质粒抗原Ｈ冈（、志贺肠毒素２基咖口基因（ｎ、志贺肠毒素ｓ）ｅ１因（ｔＡ以及侵袭相关位点基因（ｖｓｏｓｏｉｔｄｌＣＳａ）基ｓｌ）ｅｉａｉｎａｓｃａｅＵ，ｉ／ｎＯ进行检测；采用ＫｒｙＢｕｒｉ — ａｅ法检测其对１种常用抗生素的ｂ０敏感性；参考美国Ｃ的ＰｌＮｅＤＣｕｓｔｅ实验方法，对分离菌株进行ＰＧ分型，使用Ｂｉｍｅｉ４０ＦＥｏＮｕｒｓ．ｃ软件进行聚类分析。结果３株４Ｆｃ４型志贺菌ｉａｐＨ、ｓｎｅｌ￣ｉｌ因的携带率分别为１０ｅ、ｓｔＡＨａ基０％、９．１４１％、９．１４１％、８．４８％；所有菌株均存在多重耐药现象，其２

志贺菌耐药和毒力

Genotype
ESBL group CTX-M-1 CTX-M-15 CTX-M-28 CTX-M-57 CTX-M-22 CTX-M-9 TEM OXA CTX-M-1+CTX-M-9+OXA CTX-M-1+ OXA+TEM CTX-M-14 TEM-1 OXA-30 CTX-M-15+CTX-M-14+OXA-30 CTX-M-22+OXA-30+TEM-1 CTX-M-57+ OXA-30 +TEM-1 CTX-M-1+ TEM CTX-M-1+ OXA CTX-M-57+ TEM-1 CTX-M-57+ OXA-30 CTX-M-15+ OXA-30 CTX-M-9+ OXA+TEM CTX-M-9+ OXA CTX-M-9+ TEM CTX-M-9+CIT CTX-M-1+DHA+OXA CTX-M-14+ OXA-30+ TEM-1 CTX-M-14+ OXA-30 CTX-M-14+ TEM-1 CTX-M-14+CMY-2 CTX-M-15+OXA-30+DHA-1 ESBL gene
1、三代头孢耐药志贺菌ESBLs基因型以CTX-M-14型为主，主要介导头孢噻肟（CTX）耐药，部分菌株携带两种及两种以上β 内酰胺酶基因；三代头孢耐药表型与 CTX-M基因型别高度相关 2、质粒接合试验结果表明其耐药性可以通过接合方式发生水平转移。
Antibioti c
Total (n=356 ) 348 (97.8) 298 (83.7) 136 (38.2) 1 (0.3) 59 (16.6) 66 (18.5) 8 (2.2) 0(0.0) 304 (85.4) 86 (24.2) 57 (16.0)

一株与鲍氏志贺氏菌发生血清交叉凝集的福氏志贺氏菌鉴定

一株与鲍氏志贺氏菌发生血清交叉凝集的福氏志贺氏菌鉴定刘艳【摘要】[目的]对未知的能够引起腹泻的病原菌进行分离与鉴定.[方法]挑取腹泻患者粪便标本中可疑部分直接接种在麦康凯及XLD琼脂琼脂平板培养基中,培养后将可疑菌株进行生化试验和血清学凝集试验.[结果]生化试验袁明,该菌株符合福氏志贺氏菌特性,但抗原与鲍氏志贺氏菌有交叉凝集反应,药敏结果表明试验菌对庆大霉素、四环素、链霉素、氯霉素呈高度敏感,对先霉素、红霉素、病特灵、青霉素、氨苄青霉素和新霉素均不敏感.[结论]考虑到细菌与诊断血清的交叉凝集现象,通过系统的生化试验和血清稀释凝集试验进行验证和判定,根据生化反应和血清学试验结果做出正确的判断,判定试验菌为志贺氏菌福氏2b血清型.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2014(000)030【总页数】2页(P10576-10577)【关键词】志贺氏菌;分离;鉴定;交叉凝集【作者】刘艳【作者单位】杭州市下城区中西医结合医院,浙江杭州310004【正文语种】中文【中图分类】S852.61;R186+.3贺氏菌属(Shigella)是一类革兰氏阴性杆菌，是人类细菌性痢疾最为常见的病原菌，通称痢疾杆菌，为兼性厌氧菌，能在普通培养基上生长，形成中等大小、半透明的光滑型菌落，在肠道杆菌选择性培养基上形成无色菌落。

根据生化特性，可分为4个群:A群(痢疾志贺氏菌，Sh.dysenteriae)、B群(福氏志贺氏菌，Sh.flexneri)、C 群(鲍氏志贺氏菌，Sh.boydii)和D群(宋内氏志贺氏菌，Sh.sonnei)。

由志贺氏菌属感染引起的细菌性痢疾目前仍然是临床上最为常见的感染性腹泻，近年来还发现志贺氏菌属能感染其他组织［1－2］，在环境卫生及卫生习惯不良的情况下易于流行［3］。

笔者通过对幼儿腹泻患者的粪便进行大量筛选，成功分离到1株与鲍氏志贺氏菌发生血清交叉凝集的福氏志贺氏菌，对该试验菌株进行一系列生化反应测定［4－6］，从而了解能引起腹泻的菌株，对相关的腹泻疾病的预防起到重要作用。

ebgR基因敲除重组志贺氏菌的制备及应用[发明专利]

专利名称：ebgR基因敲除重组志贺氏菌的制备及应用专利类型：发明专利
发明人：朱力,刘星明,潘超,王恒樑,刘先凯,王东澍,冯尔玲申请号：CN201810510367.6
申请日：20180524
公开号：CN108410790A
公开日：
20180817
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了ebgR基因敲除重组志贺氏菌的制备及应用。

本发明提供了构建重组菌的方法，为抑制或沉默福氏志贺氏菌基因组上的ebgR基因表达，得到重组菌。

本发明利用λRED同源重组的方法成功敲除了301中的ebgR基因，得到ebgR缺失株，并利用豚鼠角膜实验、III型分泌系统诱导分泌及小鼠肺竞争性侵袭三个毒力评价模型，初步断定其中ebgR基因缺失株的毒力有明显减弱，表明ebgR基因在志贺氏菌致病过程中有可能起到重要作用，得到的ebgR基因缺失株可以用作减毒疫苗的制备。

申请人：中国人民解放军军事科学院军事医学研究院
地址：100071 北京市丰台区东大街20号
国籍：CN
代理机构：北京纪凯知识产权代理有限公司
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Ｓ＾ｆｌｅｘｎｅｒｉｆｒｏｍｃｌｉｎｉｃａｌｉｓｏｌａｔｅｓｗｅｒｅｓｔｕｄｉｅｄｂｙｍｕｌｔｉｐｌｅｘＰＣＲｗｉｔｈ３ｐａｉｒｓｏｆｐｒｉｍｅｒｓｂａｓｅｄＯｎｔｈｅｇｅｎｅｓｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆｔｈｅｓｅ
检测到ｉｐａＨ基因，阳性率为ｉ００；４５株检测到ｉａｌ基因，阳性率为５２；６９株检测到ｓｅｔｌＢ基因，阳性率为８Ｏ。噬斑不同的菌株对Ｈｅｌａ细胞的感染能力存在明显差异。结论应用上述ｍＰＣＲ体系在检出福氏志贺菌的
同时能够对菌株的毒力进行初步判别，对于临床诊断及治疗具有重要意义。关键词：福氏志贺菌；ｍＰＣＲ；噬斑形成试验中图分类号：Ｒ３７８文献标识码：Ａ
ＶｉｒｕｌｅｎｃｅｇｅｎｅｓｏｆＳｈｉｇｅｌｌａｆｌｅｘｎｅｒｉｆｒｏｍｃｌｉｎｉｃａｌｉｓｏｌａｔｅｓ
ｗａｓｆｏｕｎｄｔｈａｔｔｈｅｉｐａＨｇｅｎｅｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｉｎａｌｌｔｈｅｓｅ８６ｓｔｒａｉｎｓｏｆＳｈｆｌｅｘｎｅｒｉｉｓｏｌａｔｅｓｗｉｔｈａ１００ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｒａｔｅ，ｗｈｉｌｅｔｈｅ
ｖｉｒｕｌｅｎｃｅｇｅｎｅｓ．Ｔｈｅｖｉｒｕｌｅｎｃｅｏｆａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｐｒｏｄｕｃｔｓｏｆ１２ｓｔｒａｉｎｓｔＯＨｅＬａｃｅｌｌｓｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙｐｌａｑｕｅｆｏｒｍａｔｉｏｎｔｅｓｔ．Ｉｔ
ＺＨＡＮＧＪｕｎ — ｑｉ，ＱＩＡＮＸｕｅ — ｑｉｎ。，ＬＩＸｕｅ — ｐｉｎｇ，ＱＩＡＮｌｉ－ｓｈｅｎｇ
（１．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙａｎｄＰａｒａｓｉｔｏｌｏｇｙ，ＳｈａｎｇｈａｉＭｅｄｉｃｉｎｅＣｏｌｌｅｇｅＦｕｄａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ２０００３２
２．ＳｈａｎｇｈａｉＰｕｂｌｉｃＨｅａｌｔｈＣｅｎｔｅｒ，Ｓｈａｎｇｈａｉ２０００８３，Ｃｈｉｎａ）
ＡＢＳＴＲＡＣＴ：ＴｏｄｅｖｅｌｏｐａｒａｐｉｄａｎｄｓｐｅｃｉｆｉｃｍｕｌｔｉｐｌｅｘＰＣＲａｓｓａｙｆｏｒｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＳｈｉｇｅｌｌａｆｌｅｘｎｅｒｉｆｒｏｍｃｌｉｎｉｃａｌｉｓｏ — ｌａｔｅｓ，ｔｈｒｅｅｖｉｒｕｌｅｎｃｅｇｅｎｅｓｏｆＳｈｆｌｅｘｎｅｒｉ，ｉｐａＨ，ｉａｌａｎｄｓｅｔｌＢｗｅｒｅｓｅｌｅｃｔｅｄｆｏｒｔｈｅｔａｒｇｅｔｓｏｆａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ．ａｎｄ８６ｓｔｒａｉｎｓｏｆ
维普资讯
２００７，２３（１２）
中国人兽共患病学报
ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＺｏｏｎｏｓｅｓＩ２４３
文章编号：１００２ —２６９４（２００７）１２ —１２４３ —０４
福氏志贺菌临床分离株毒力基因的研究＊
张俊琪，钱雪琴。，李雪萍，钱利生
摘要：目的研究在一种快速、特异的ｍＰＣＲ方法在检出福氏志贺菌的同时对其毒力进行监测。方法选取福氏志贺菌三种毒力基因ｉｐａＨ，ｉａｌ，ｓｅｔｌＢ作为扩增目标，在同一ｍＰＣＲ体系中对８６株福氏志贺菌临床分离株进行了检测，并选取１２株进行了噬斑形成试验，观察了扩增产物不同的福氏志贺菌对Ｈｅｌａ细胞的毒力作用。结果８６株福氏志贺菌临床分离株均