不同温度条件下副溶血性弧菌tdh基因表达及其代谢组响应
一株副溶血弧菌噬菌体生物学特性、全基因组特征及其在食品中的应用
张俊鹏，刘文婷，石甜，等. 一株副溶血弧菌噬菌体生物学特性、全基因组特征及其在食品中的应用[J]. 食品工业科技，2024，45（1）：137−144. doi: 10.13386/j.issn1002-0306.2023020018ZHANG Junpeng, LIU Wenting, SHI Tian, et al. Biological Characteristics, Genome-wide Characteristics of A Bacteriophage of Vibrio parahaemolyticus and Its Application in Food[J]. Science and Technology of Food Industry, 2024, 45(1): 137−144. (in Chinese with English abstract). doi: 10.13386/j.issn1002-0306.2023020018· 生物工程 ·一株副溶血弧菌噬菌体生物学特性、全基因组特征及其在食品中的应用张俊鹏1，刘文婷1，石 甜1，王华娟1，王宏勋2，周 敏1, *（1.武汉轻工大学食品科学与工程学院，湖北武汉 430000；2.武汉轻工大学生命科学与技术学院，湖北武汉 430000）摘 要：目的：分析1株副溶血性弧菌噬菌体474x1的生物学特性、全基因组及在食品中的抑菌效果。
方法：以副溶血性弧菌474菌株为宿主菌，从海鲜市场基围虾分离噬菌体474x1，利用透射电镜观察其形态，并绘制一步生长曲线，分析474x1对温度及pH 的敏感性。
分析474x1全基因组序列，根据474x1末端酶大亚基构建系统进化树。
通过测定菌落总数评价噬菌体对虾肉中副溶血弧菌的抑制效果。
结果：分离到１株新型的副溶血弧菌噬菌体，命名为474x1，该噬菌体能够裂解23株副溶血弧菌中的19株（19/23=82.61%）。
副溶血性弧菌的快速检测技术
3、多重PCR
结果显示，所有的V.p都扩增出tl基因，tl 基因是V.p特异的；54％的V.p扩增出tdh基因； 只有38.73％的V.p扩增出trh基因;该法灵敏度 38.73 V.p trh ; 高，能把10g牡蛎培养肉汤里10～100个V.p 检测出来。与其他常规生化方法相比，多重 PCR更快速，仅8h就能完成检测，结果更为准 确、可靠，而且还可改进成定量竞争PCR，对 标本中靶序列进行定量。
3、多重PCR
由于不是全部副溶血性弧菌都含有tdh基因 或trh基因，所以只针对tdh或trh的单一PCR， 有时会漏检。多重PCR(multiplex-PCR)能全 PCR(multiplex-PCR) 方位高效率地检测V.p。 Bej白等针对tl、tdh、trh设计不同的引物 对，在同一PCR反应体系内同时扩增tl、tdh、 trh。
总结
与传统方法相比较，PCR法更加快速、 灵敏，基本满足了快速检测的要求，但是其 技术含量较高，试剂费用都比较高，而且一 般检测时间也还是要6-8小时左右，离即时 检测的要求还有一定距离，随着分子生物学 和科技水平的不断提高，更加准确、可靠、 方便、快速、经济、安全的检测方法将是食 品安全检测的发展方向。
参考文献
• [1] 张凡非. 副溶血性弧菌及其引起的食物中毒研究进展. 中国 卫生监督杂志, 2003, 10 (1) : 8 -10. • [2] 中华人民共和国卫生部, 中国国家标准化管理委员会. GB/T4789.7—2008. 食品卫生微生物学检验副溶血性弧菌检验. 北京: 中国标准出版社, 2008. • [3] 刘秀梅, 陈艳, 王晓英, 等. 1992-2001年食源性疾病爆发资料 分析-国家食源性疾病监测网. 卫生研究, 2004, 33 ( 6) : 725 727. • [4] 朱雪兰,陈艳. 副溶血性弧菌溶血素基因及其检测的研究进 展. 国外医学卫生学分册, 2007, 34 (4) :233-237. • [5] 程苏云,张俊彦,王赞信, 等. 海水产品副溶血性弧菌污染定 量检测分析. 中国卫生检验杂志, 2007, 17 (2) :336-338.
副溶血性弧菌致病性和检测方法研究
doi :10.3969/j.issn.1002-7386.2022.22.034·综述与讲座·副溶血性弧菌致病性和检测方法研究进展陈媛媛 王亚男 刘士朋项目来源:河北省医学研究重点课题(编号:20211149)作者单位:100029 北京市,中日友好医院(陈媛媛);河北省宁晋县医院(王亚男);河北医科大学公共卫生学院环境与人群健康重点实验室(刘士朋)通讯作者:刘士朋 E⁃mail:17100880@ 【摘要】 本文对副溶血性弧菌的生物学性状、致病性特点、污染食品规律、食物中毒事件、检测标准等进行综述,重点介绍了溶血毒素和检测方法,提出预防副溶血性弧菌食物中毒5要点和关键措施,以期更好地预防副溶血性弧菌食物中毒的发生。
【关键词】 副溶血性弧菌;食物中毒;耐热性溶血毒素;耐热性溶血毒素相关溶血毒素;检测标准【中图分类号】 R 378.3 【文献标识码】 A 【文章编号】 1002-7386(2022)22-3491-05Study on pathogenicity and detection method of Vibrio parahaemolyticus CHEN Yuanyuan ∗,WANG Yanan ,LIU Shipeng.∗China⁃Japan Friendship Hospital ,Beijing 100029,China【Abstract 】 This article systematically reviews related aspects in Vibrio parahaemolyticus (VP ),including biological characteristics ,pathogenic characteristics ,contaminated food conditions ,food Posisoning incidents detection standard ,etc.,focusing on hemolytic toxins and detection methods.Five key points for preventing VP⁃related food poisoning and treatment measures are proposed aiming to to better prevent the occurrence.【Key words 】 vibrio parahaemolyticus ;food poisoning ;thermostable direct hemolysin ;thermostable related hemolysin ;testing standards 副溶血性弧菌(vibrio parahaemolyticus)是一种常见的病原菌,主要栖息在海水中,存在于近海海水、海产品及盐渍食品中。
副溶血性弧菌
确定鉴定:
➢生化试验：分别接种各类生化培养基，培养后观察结果。 或API 20E 生化鉴定试剂盒或VITEK全自动微生物检测系统鉴定。 生化性状符合下表要求时，为副溶血性弧菌 。
表 副溶血性弧菌的生化性状
项目 革兰氏染色镜检
氧化酶 动力 蔗糖
葡萄糖 甘露醇 分解葡萄糖产气
结果 阴性，无芽孢
第 七节、副溶血性弧菌检验
一、生物学特性 1、形态与染色
革兰氏阴性无芽胞多形态杆菌或 稍弯曲弧菌 ，有时呈棒状、甚至球状、 丝状等。一般两极浓染。单端鞭毛， 长度约为菌体的2倍，运动活泼。无芽 胞、无荚膜。
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2、培养特性
➢本菌对营养要求不高，在普通的琼脂或蛋白胨水中均可 生长 ➢需氧特别强，在厌氧条件下生长非常缓慢 ➢嗜盐，在2~３%NaCL培养基中生长最好，无盐或食盐 >10%不能生长。 ➢最适温度36℃，pH7.5~7.8 ➢在肉汤、蛋白胨水等培养基中呈现浑浊，表面形成菌膜 ➢在固体培养基上菌落呈圆形凸起，混浊不透明，表面光 滑，较湿润，边缘不整齐。 ➢在血平板上可见溶血环。
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项目 乳糖 硫化氢 赖氨酸脱梭酶 V-P ONPG
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结果 － － ＋ － －
报告： 定性检测：报告25g（ml）样品中是否检出副溶血性弧菌。 定量检测：根据证实为副溶血性弧菌阳性的试管管数，查 MPN检索表，报告每克（毫升）副溶血性弧菌的MPN值。
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二、致病性
1、致病因素 ★侵袭力：活菌(105~107/g)，可使人致病 . ★产生溶血毒素：内毒素，成分是脂多糖，100℃30min不 被破坏。 2、媒介食品
应用PCR法检测副溶血性弧菌
文章编号:1006-3110(2005)03-0476-03【论 著】应用PCR法检测副溶血性弧菌詹 铭,陈 纯,沈小明,张勇琪,李 婷,丁 明 摘要: 目的 研究副溶血性弧菌的PCR检测方法。
方法 引物选择副溶血性弧菌耐热溶血素(TDH)上的基因,应用PCR法,检测副溶血性弧菌。
结果 PCR能检测经选择性增菌液培养的副溶血性弧菌,扩增片段在430bp。
结论 应用PCR检测副溶血性弧菌,具有快速、特异、灵敏和简便的特点。
关键词: 副溶血性弧菌;PCR;检测中图分类号:R37813 文献标识码:ADetection of Vibrio P arahemolyticus by Polymerase Chain R eaction ZHAN Ming,CHEN Chun,S HEN Xiao-Ming,et al.(Shanghai Pudong New Area Center f or Disease Control and Prevention,Shanghai200135)Abstract: Objective T o study the method for detection of Vibrio parahemolyticus by polymerase chain reaction (PCR). Method Based on unique sequence characteristic of thermostable direct hemolysin(TDH),TDH was amplified by polymerase chain reaction. R esults TDH primers targeted a430bp region of TDH gene specific to Vibrio parahemolyticus. Conclusion PCR based on unique sequence characteristic of TDH is a method of high specificity,good reproducibility and high sensitivity.I t’s a practical method for Vibrio parahemolyticus detection.K ey w ords: Vibrio parahemolyticus;PCR;Detection 副溶血性弧菌是广泛分布于沿海地区的海洋性细菌,为海产食品引起急性胃肠炎的重要病原菌之一,尤其是在夏秋季节,经常由于食用带有大量副溶血性弧菌的海产食品或被此菌污染的食品,引起爆发性食物中毒。
副溶血性弧菌检测微生物国标检测流程
副溶血性弧菌检测微生物国标检测流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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副溶血弧菌TDH蛋白高效表达、免疫原性分析及初步应用
副溶血弧菌TDH蛋白高效表达、免疫原性分析及初步应用李欣彤;陈永军;刘迎春;白雪瑞;王少辉;韩先干;刘永杰;王权;蒋蔚【摘要】副溶血弧菌是引起细菌性食物中毒的主要食源性致病菌,耐热直接溶血毒素(theromostable direct hemolysin,TDH)是其公认的主要致病因子.本研究根据已发表基因序列(GenBank登录号:M10069)设计引物,以副溶血弧茵SHJLA株基因组DNA为模板,扩增编码TDH蛋白的基因,克隆至表达质粒pET28a(+)中,重组质粒经限制性酶切鉴定后测序,结果表明插入片段长度为576 bp.重组原核表达质粒pET28a-tdh转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,经诱导可表达分子量约为27 kDa 的融合蛋白,主要以包涵体形式表达.对包涵体进行复性,Western blot分析表明经过复性后的重组蛋白能够被感染副溶血弧菌SHJLA株的小鼠血清识别.重组蛋白免疫家兔,ELISA检测多抗血清效价在1:256 000以上.将该多抗初步应用于斑点-ELISA(Dot-ELISA)方法的建立,TDH阳性的致病性副溶血弧菌检测到阳性斑点,而TDH阴性的副溶血弧菌及其他细菌未检测到特异性斑点.本研究可为深入研究TDH 的蛋白功能,建立致病性副溶血弧菌免疫学快速诊断方法以及保护性疫苗的研制提供研究基础.【期刊名称】《中国动物传染病学报》【年(卷),期】2015(023)006【总页数】7页(P56-62)【关键词】副溶血弧菌;直接溶血素;蛋白表达;斑点-ELISA【作者】李欣彤;陈永军;刘迎春;白雪瑞;王少辉;韩先干;刘永杰;王权;蒋蔚【作者单位】中国农业科学院上海兽医研究所,上海200241;南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室,南京210095;中国农业科学院上海兽医研究所,上海200241;中国农业科学院上海兽医研究所,上海200241;中国农业科学院上海兽医研究所,上海200241;南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室,南京210095;中国农业科学院上海兽医研究所,上海200241;中国农业科学院上海兽医研究所,上海200241;南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室,南京210095;中国农业科学院上海兽医研究所,上海200241;中国农业科学院上海兽医研究所,上海200241【正文语种】中文【中图分类】S852.616副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）是一种革兰氏阴性嗜盐菌，普遍存在于河口、海洋和沿海环境，夏季和春季是该菌引起食物中毒的高发季节，可引起人严重的急性胃肠炎、败血症和伤口感染[1-3]。
副溶血性弧菌亚致死损伤状态的研究
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上海海洋大学硕士学位论文
上海海洋大学硕士学位论文 答辩委员会成员名单
姓名 李保国 张继伦
工作单位 上海理工大学 上海出入境检验检
职称 教授 副硕
备注 主席 委员 委员 委员 委员 委员 委员
I
上海海洋大学硕士学位论文
溶血性弧菌 VpBJ1.1997 细胞的亚致死热损伤的复苏情况进行了检测，并运用扫描电 镜技术观察不同复苏时间副溶血性弧菌的形态特征。同时运用相同的方法，也测定了 不同盐度条件和 pH 值条件下的副溶血性弧菌复苏生长曲线，解析总结了副溶血性弧 菌的最适宜的盐度和 pH 值范围。这些研究为进一步的副溶血性弧菌亚致死损伤的机 理研究和检测方法改进奠定了坚实的基础。 3. 副溶血性弧菌亚致死热损伤状态复苏特性的初步研究
关键词：副溶血性弧菌，亚致死损伤，复苏条件，特性
II
上海海洋大学硕士学位论文
Study on the sublethal injured states of Vibrio parahaemolyticus ABSTRACT
In recent years, more than 80% foodborne dieases in the coastline area have been caused by the pathogenic bacteria. Vibrio parahaemolyticus, which is Gram-negative halophilic, is a foodborne pathogen. It exist widely in many Asian countries seafood, and is recognized as the seafood gastroenteritis pathogen. However, the monitoring on pathogenicity of the pathogen are all in the state of viable bacteria. At present, the research on the sublethal injury statement of pathogens becomes the hottest, but the most difficult. Vibrio parahaemolyticus is so sensitive to a variety of environment conditions that it easily get sublethal injured. Therefore, it’s very important to research on the sublethal injury of Vibrio parahaemolyticus. In this article, we had explored the optimum sublethal injury and resuscitate conditions of Vibrio parahaemolyticus. Then we researched on the characteristics of resuscitative strains and the potential hazard of Vibrio parahaemolyticus on sublethal injury statement. This research has done as the following aspects: 1. The study on the sublethal injury conditions of Vibrio parahaemolyticus To study the sublethal injury states of Vibrio parahaemolyticus, the optimum conditions of the sublethal injured strains were examined, including temperature, salinity and the concentration of Lysozyme. Firstly, we detected the sublethal injury rates of Vibrio parahaemolyticus BJ1.1997 at different temperatures by using the traditional solid agar methods. Then the morphological characteristics of the sublethal injured strains were observed by using SEM and the optimum conditions of sublethal injury conditions of VpBJ1.1997 were determined. These data of sublethal injury conditions can provided a basis on the mechanism study, as well as the detection of sublethal injury Vp. 2. Research on the resuscitative conditions of sublethal injury Vibrio parahaemolyticus The optimum resuscitative conditions of the sublethal injured Vibrio parahaemolyticus BJ1.1997 and the growth characteristics of resuscitative strains were examined. Firstly, by using liquid cultivate method to make the resuscitative growth curses