副溶血性弧菌2
副溶血性弧菌
概述
•副溶血性弧菌是一种嗜盐性细菌。
副溶血性弧菌食物中毒，是进食含有该菌的食物所致，主要来自海产品，如墨鱼、海鱼、海虾、海蟹、海蜇，以及含盐分较高的腌制食品，如咸菜、腌肉等。
•临床上以急性起病、腹痛、呕吐、腹泻及水样便为主要症状。
本病多在夏秋季发生于沿海地区，常造成集体发病。
病原学特征
•副溶血弧菌系弧菌科弧菌属，革兰染色阴性，兼性厌氧菌，为多形态杆菌或稍弯曲弧菌。
•本菌嗜盐畏酸，对酸较敏感，当pH6以下即不能生长，在普通食醋中l一3min即死亡。
•在3%一3．5%含盐水中繁殖迅速，每8～9min为一周期。
对高温抵抗力小，50℃20 min；65℃
5 min 或80℃1 min 即可被杀死。
本菌对常用消毒剂抵抗力很弱，可被低浓度的酚和煤酚皂溶液杀灭。
致病机制
•吞服10万个以上活菌即可发病，个别可呈败血症表现。
该菌有侵袭作用，其产生的TDH和TRH的抗原性和免疫性相似，皆有溶血活性和肠毒素作用，可引致肠袢肿胀、充血和肠液潴留，引起腹泻。
TDH对心脏有特异性心脏毒，可引起心房纤维性颤动、期前收缩或心肌损害。
治疗措施
•及时对脱水患者输入生理盐水及葡萄盐水，或口服补液盐，以纠正失水。
血压下降者，除被补充知容量，纠正酸中毒等外，可酌用血管活性药。
•抗菌药物轻者患者可不用抗菌药物，较重者可给复方新诺明或庆大霉素、阿米卡星和诺氟沙星等喹诺酮类抗菌药物。
•发生中毒后要立即停止食用可疑中毒食品，并到医院医治。
副溶血性弧菌对氯霉素敏感。
呕吐、腹泻严重者要补充水和盐。
副溶血性弧菌
返回
嗜盐性试验培养基
成分
蛋白胨 氯化钠 蒸馏水
2g
按不同量加
100mL
供碳氮源、维生素和生长因子 控制弧菌生长情况（7%生长最旺盛）
pH7.7
制法 配制2%蛋白胨水，校正pH， 共配制3瓶，每瓶100mL。 每瓶分别加入不同量的氯化钠： (1)3g；(2)7g；(3)10g。 待溶解后分装试管。 121℃高压灭菌15min。
2. 本菌嗜盐畏酸，若盐浓度低于0.5%则不生长，pH值为 8.0—8.5。
3. 本菌对酸较敏感，当pH6以下即不能生长，在普通食醋中
4. l一3min即死亡。
5. 分解葡萄糖，产酸不产气，不分解乳糖、蔗糖。
6. 在固体培养基上菌落常隆起，圆形，表面光滑，湿润。在 3％一3．5％含盐水中繁殖迅速，每8～9min为一周期。 对高温抵抗力小，50℃ 20 min；65℃ 5 min 或80℃ 1 min 即可被杀死。本菌对常用消毒剂抵抗力很弱，可被低浓度 的酚和煤酚皂溶液杀灭。
凝固剂
返回
3%氯化钠三糖铁琼脂
供碳氮源、维生素和矿物质
可发酵糖类，其产酸时通过酚红指示剂测出， 酸性呈黄色，碱性呈红色
较高含量可维持均衡的渗透压 硫代硫酸钠可被某些细菌还原为硫化氢，
与硫酸亚铁中的铁盐生成黑色硫化铁
凝固剂
此 斜菌 面的 颜反 色应 不为 变底 或层 红变 色黄 加不 深变 ，黑 有， 动无 力气 。泡
组员： 李铭艳（食品国标） 黄敏慧（进出口食品） 刘伟 （PCR定量检测） 刘建焕（ELISA快速检测）
概述
1. 副溶血性弧菌属弧菌科，是一种嗜盐性细菌。是 一种生活在近海的海洋微生物，深海一般未发现， 尤其是在洗浴者和海产加工工人的伤口中。
一起副溶血性弧菌引起的大学生食物中毒案例分析
一起副溶血性弧菌引起的大学生食物中毒案例分析2010年9月3日，大连市疾病预防控制中心接到报告，某高等专科学校部分学生出现腹痛、腹泻、呕吐、头痛症状。
为了解本次暴发疫情的流行病学特征，明确可能的传染源和传播途径，有关专业人员到达现场对本次疫情展开深入调查。
现将结果报道如下。
1 对象与方法1.1 病例定义⑴可能病例：9月1日以来，该高等专科学校师生中出现腹泻（≥3次/24h）、腹痛、恶心、呕吐、发热等症状两项及以上者；⑵确诊病例：可能病例中粪便、呕吐物、肛拭子标本培养出副溶血性弧菌者。
1.2 病例搜索⑴查阅该学校卫生所、大连市中心医院门诊日志；⑵在该学校开展宣传教育，要求出现腹泻症状的师生主动到医疗机构就诊；⑶通过询问就诊病例，获得其它出现腹泻等不适症状尚未就诊人员的信息，进行入户或电话调查核实。
1.3 现场卫生学调查⑴通过现场观察了解聚该校食堂卫生状况；⑵访谈病例和非病例了解就餐情况；⑶访谈厨师了解菜品制作过程；⑷访谈食堂采购人员了解原料来源。
1.4 病例对照研究⑴病例组：全部可能病例。
⑵对照组：可能病例同宿舍或相邻宿舍学生。
⑶调查内容：9月1日以来就餐情况，包括就餐时间、就餐地点、食物名称及食用量。
1.5 标本采集及检测共采集了10份样本，其中现患病例2人肛拭子；加工用具标本5份（菜刀2份，砧板2份，操作台1份）；食物原料标本3份。
检测项目均为副溶血性弧菌、沙门氏菌、志贺氏菌、变形杆菌、致泻性大肠埃希氏菌。
实验室检测按照《食品卫生微生物学检验》方法进行检测[1]。
2 结果2.1 发病情况截至9月3日16时，共出现病例12例，罹患率6.0％（20/200）其中可能病例11例，确诊病例1例。
2.2 临床表现12例病例，腹泻100.0%，腹痛91.7％，恶心75.0%，呕吐66.7％，发热50.0%，血样便8.3%。
2.3 流行病学分布2.3.1 人群分布⑴性别分布：12例病例中，男性8例，占67%，女性4例，占33%。
副溶血性弧菌标准的检验方法
副溶血性弧菌（Vibrio parahaemolyticus）是广泛分布于海水、海底泥沙、浮游生物和鱼贝类中的海洋性细菌，为海产食品引起急性胃肠炎的重要病原菌之一，尤其是在夏秋季节的沿海地区，经常由于食用带有大量副溶血性弧菌的海产食品，引起爆发性食物中毒。
在非沿海地区，因食用此菌污染的食品而引起中毒者亦时有发生。
为保障食品卫生质量和食用安全，根据副溶血性弧菌的特性，进行下列检验，以便鉴别诊断。
第一节副溶血性弧菌标准的检验方法一、检验方法（一）操作步骤1. 分离培养：首先称取样品25g，加225mL3.5％灭菌盐水，用均质器打碎或用乳钵磨碎，接种氯化钠琼脂平板和嗜盐性琼脂平板各一个，同时取10mL加入100mL增菌液中，放37℃8~16h培养后，涂上述平板进行分离，37℃培养18~24h取出观察，挑取可疑菌落，转种3.5％氯化钠三糖铁斜面，37℃、24h观察结果。
2. 涂片镜检：将三糖铁培养基上反应可疑者即底层变黄（葡萄糖产酸不产气）、上层斜面不变（乳糖、蔗糖不分解）、有动力、不产生硫化氢，进行革兰氏染色镜检形态。
3. 嗜盐性试验：将上述可疑培养物分别接种不同含量的盐胨水（0％，3％，7％，10％）于37℃24h培养后观察生长情况，在无盐和10％盐的胨水中不生长，在3％和7％盐的胨水中生长良好者，继续进行下列有关试验。
4. 生化试验：分别接种下列各类生化培养基，葡萄糖、乳糖、蔗糖、甘露醇、甲基红、靛基质、V-P，赖氨酸、鸟氨酸、精氨酸、硫化氢及溶血性试验，放37℃培养，除V-P、靛基质和甲基红试验培养48h后加试剂观察外，其他均在24h观察结果。
5. 动物试验：将上述符合各类反应的副溶血性弧菌，接种3.5％氯化钠胨水，经37℃、16~18h培养后，小鼠腹腔注射0.3mL，观察2~3d，将死亡小鼠进行解剖作分离培养。
（二）检验程序图6-1 副溶血性弧菌检验程序二、结果分析判定及注意事项（一）样品处理采样时应注意首选准备好灭菌用具及容器，以无菌手续取有代表性的样品，样品必须尽快送检，不宜存放时间过长，副溶血性弧菌在适宜温度下繁殖较快，但不适于低温生存，在寒冷的情况下容易死亡，防止待检材料冷冻，以免影响检验结果。
弧菌
弧菌科种类
弧菌属 气单胞菌属 邻单胞菌属
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三个菌属的鉴别
试验
肌醇 粘丝试验 鸟氨酸 精氨酸
150 μgO/129
弧菌属
－ ＋/(－) ＋/－ ＋/－ S ＋ ＋/－
气单胞菌属 邻单胞菌属
－ － － ＋/－ R － － ＋ － ＋ ＋ S － －
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TCBS生长 耐盐（7％）
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霍乱流行病学特点（2）
霍乱发病季节在夏秋季，本市主要在5-10月份， 7-9月为发病高峰 人群普遍易感，在同源感染因素下易造成爆发和 流行
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霍乱预后及危害
霍乱能引起机体剧烈吐泻、失水、电介质紊乱以 致死亡
病死率高低与病情轻重以及医疗条件、抢救的时 效性有关。病情重、医疗条件差、抢救不及时病 死率可高达20%-50%
霍乱流行病学特点（1）
霍乱（O139与O1群霍乱），具有传染性强、传播 迅速、易出现暴发和流行特征；世界卫生组织将 其纳入霍乱范畴，我国将它列入法定报告的甲类 烈性传染病 霍乱弧菌主要通过水、食物、日常生活接触和苍 蝇传播，以食物传播为主，常可借助食用被霍乱 弧菌污染的食物而致病
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全国霍乱O139流行情况（1）
1992年在印度、孟加拉首次发现霍乱O139后， 短期内在这两个国家造成流行，发病人数高 达10多万例，并在几年间已传入亚洲、欧洲、 美洲等20多个国家 1993年传入我国后，即在新疆南部柯坪县发 生霍乱O139引起的暴发，报告病例数202例， 死亡4例
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弧菌科及检验
弧菌科共同特征
革兰阴性菌，短小弯曲弧状,无芽胞， 多数有鞭毛、有菌毛。 需氧兼性厌氧 具有一端单一鞭毛、运动迅速 氧化酶＋ 发酵葡萄糖产酸不产气,许多菌株生长 需要2%~3%氯化钠 弧菌科细菌广泛分布于自然界，以水中 最为多见。其中有一些种对人类致病。
副溶血性弧菌增菌培养方法
下列质控菌株接种后于36℃±1℃培养18～24h结果如下：
菌 名 菌 号 生长状况 培养特征
副溶血性弧菌 ATCC17802 良好 肉汤浑浊
大肠埃希氏菌 ห้องสมุดไป่ตู้TCC25922 部分抑制 ----
贮 存：贮存于避光、阴凉干燥处，用后立即旋紧瓶盖。贮存期三年。
规 格：250g
实验图：
培养基配方(每升)：
蛋白胨10
氯化钠60
最终pH 7.2±0.2
使用方法
1、称取本培养基70g，加入蒸馏水或去离子水1L，分装试管，每管10ml，121℃高压灭菌15min，备用。
2、选择3个连续适宜的稀释度，各吸取1mL稀释液，加入10mL培养基中，每一稀释度接种3管，于36℃±1℃培养18～24h。
名称：氯化钠蛋白胨水(60g/L)
用 途：用于副溶血性弧菌增菌培养。
副溶血性弧菌，进食含有该菌的食物致可食物中毒，也称嗜盐菌食物中毒。临床上以急性起病、腹痛、呕吐、腹泻及水样便为主要症状。副溶血性弧菌是一种海洋细菌，主要来源于鱼、虾、蟹、贝类和海藻等海产品。
原 理：蛋白胨和提供碳源、氮源、维生素、生长因子;高氯化钠含量可以抑制非弧菌类细菌生长。
副溶血性弧菌 标准
副溶血性弧菌标准
副溶血性弧菌是一种常见的细菌，主要存在于海水和淡水中，也可以在一些动
物体内生长繁殖。
这种细菌在水产养殖业中被广泛关注，因为它可以对养殖动物和人类健康造成严重威胁。
副溶血性弧菌属于革兰氏阴性菌，其形态为短小的弧形杆菌。
它具有一定的耐
盐性和耐热性，能够在不同的环境中存活和繁殖。
在水产养殖业中，副溶血性弧菌常常引起养殖动物的疾病，如虾、蟹等。
同时，人类如果摄入感染了副溶血性弧菌的海产品，也会引起食物中毒和感染。
为了有效防控副溶血性弧菌的危害，制定了一系列的标准措施。
首先，对于水
产养殖业来说，要严格控制水质，避免水体富营养化和污染，减少细菌的滋生环境。
其次，需要加强对养殖动物的管理和监测，及时发现和隔离感染动物，防止疾病传播。
此外，对于加工和销售海产品的环节，也需要进行严格的卫生监管，确保产品的安全性和卫生质量。
除了在养殖业中的防控措施，对于消费者来说，也应该注意一些食品安全的常识。
在购买和食用海产品时，应选择正规渠道和有品牌保障的产品，避免购买来源不明或质量存疑的海产品。
在食用海产品时，要保证烹饪熟透，避免生吃或半生食，以免感染副溶血性弧菌和其他细菌。
总的来说，副溶血性弧菌的危害是不可忽视的，对于水产养殖业和消费者来说
都需要引起足够的重视。
只有通过严格的管理和监测，以及消费者的自我保护意识，才能有效预防和控制副溶血性弧菌的危害，确保水产品的安全和卫生。
希望相关部门和个人都能加强对这一问题的关注，共同维护水产品的质量和消费者的健康。
副溶血性弧菌拮抗菌的筛选及其拮抗条件
副溶血性弧菌拮抗菌的筛选及其拮抗条件杨胜远;韦锦【摘要】对分别分离自菜园土壤、大蒜植株、大豆植株、蔓花生植株、淡水湖淤泥、仙人掌植株、芹菜植株、细菌型豆豉和日本纳豆的可产抗大肠杆菌活性物质的42株细菌进行筛选，获得1株对副溶血性弧菌具有较强拮抗作用的菌株JNT02，其发酵液对副溶血性弧菌的抑菌圈直径为（20．87±0．83） mm ；经16S rDNA序列分析和系统发育分析，菌株JNT02与枯草芽孢杆菌位于同一簇群，同源性达100％，初步鉴定为枯草芽孢杆菌；枯草芽孢杆菌JNT02在改良兰迪培养基中24 h可完全杀灭共培养的副溶血性弧菌，并且种子液带入的抗菌物质对其拮抗作用有累积效应，在氯化钠碱性蛋白胨水培养基中枯草芽孢杆菌JNT02对副溶血性弧菌却只有一定抑制作用，在人工海水中没有拮抗作用；改良兰迪培养基有利于枯草芽孢杆菌JNT02产抗菌物质。
结果表明，枯草芽孢杆菌JNT02对副溶血性弧菌的拮抗作用主要依赖于其代谢产生的抗菌活性物质，取决于环境条件是否有利于其产生抗菌活性物质，而并非是否有利于其生长。
%The strain JNT02 ,which showed significantly inhibitory effects on the growth of Vibrio parah‐aemolyticus with (20 .87 ± 0 .83) mm diameter of antibiotic circle fermented broth for antimicrobial activity assay ,was screened from 42 bacterial strains isolated from vegetable garden soils ,garlicplants ,soybean plants ,vine peanut plants ,freshwater lake silts ,cactus plants ,celery plants ,bacterial soybean lobster sauce and Japanese natto especially producing antibiotic substances against Escherichia coli .The strain JNT02 was classified into Bacillus subtilis base on 16S rDNA sequence and phylogenic analysis .In the im‐proved Landymedia ,B .subtilis JNT02 completely killed the co‐culturedV .parahaemolyticus in 24 h , and the enhancement of antagonistic effects of the antimicrobial substances brought from the B .subtilis JNT02 seed broth were also demonstrated .However ,B .subtilis JNT02 showed weak inhibitory effects a‐gainst the growth of V . parahaemolyticus in alkaline‐pepto ne‐water media and no antagonistic effects in artificial seawater .The improved Landy media were propitious to the antimicrobial substance production of B .subtilis JNT02 .The findings indicated that the antagonistic action of B .subtilis JNT02 against V . parahaemolyticus was via the antimicrobial substance producing ,and depended on the conditions of the an‐timicrobial substance production ,in stead of the growth of B .subtilis JNT02 .【期刊名称】《水产科学》【年(卷),期】2014(000)012【总页数】7页(P807-813)【关键词】副溶血性弧菌;拮抗菌;拮抗条件;枯草芽孢杆菌【作者】杨胜远;韦锦【作者单位】韩山师范学院生物学系，广东潮州 521041;韩山师范学院图书馆，广东潮州 521041【正文语种】中文【中图分类】S917.1副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)为嗜盐性细菌，广泛存在于世界各国的沿海地区，隶属于弧菌科弧菌属，是食源性疾病的重要病原菌[1]，也是海洋生物的主要病原菌之一[2-3]。
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副溶血性弧菌
副溶血性弧菌是什么？
副溶血性弧菌是我国沿海地区最为常见的食源性病原菌，广泛存在于近岸海水、海底沉积物和鱼贝类等海产品中，主要引起食物中毒。
危害是什么？
副溶血性弧菌感染最常见的症状是急性胃肠炎，一般恢复较快，少数病人可发展至脱水、休克。
在我国的流行状况
副溶血性弧菌感染常见于沿海地区，随着国民经济的发展，交通运输便利，目前我国内陆省份各大城市也较常见，发病高峰期是夏秋季，主要集中在7－9月。
最常见的污染食品是什么？
副溶血性弧菌感染引起的食物中毒主要的污染食品是海产品，包括鱼类、软体动物(如生蚝、墨鱼、八爪鱼)和贝壳类动物(如龙虾、虾、蟹)；除了海产品外，其他食物(如烧肉、卤肉和凉拌菜)也可引起副溶血性弧菌感染，这主要是因为交叉污染所致。
我国不少地区还发现淡水鱼携带副溶血性弧菌。
最常见发生的地点是哪里？
副溶血性弧菌引起的食物中毒常发生在沿海地区，特别是旅游景点，高发于接待旅行团团餐的大排档。
典型症状是什么？
副溶血性弧菌感染平均潜伏期为15小时，最短1小时，最长4天。
国内报告9～20小时者占81％，10小时内者占70％。
副溶血性弧菌感染的典型症状是急性胃肠炎，如呕吐、腹痛、腹泻等。
剧烈腹痛、脐部阵发性绞痛为主要特点，腹泻多呈水样便。
病程常为2－3天，恢复较快，少数病人发展至脱水、休克。
是否有易感人群？
人群普遍易感，男女老幼均可患病，但副溶血性弧菌引起的暴发多以青壮年为主。
经常暴露于少量细菌者，感染后临床症状一般较轻，如渔民大多有生食或半生食某些海产品的习惯，暴露机会甚多，但发生食物中毒者并不多，即使发病，症状也较轻。
但内陆人员到沿海地区时，饮食稍有不慎，屡见发生病情较重的食物中毒。
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