副溶血性弧菌检验标准操作程序
副溶血性弧菌标准的检验方法
副溶血性弧菌（Vibrio parahaemolyticus）是广泛分布于海水、海底泥沙、浮游生物和鱼贝类中的海洋性细菌，为海产食品引起急性胃肠炎的重要病原菌之一，尤其是在夏秋季节的沿海地区，经常由于食用带有大量副溶血性弧菌的海产食品，引起爆发性食物中毒。
在非沿海地区，因食用此菌污染的食品而引起中毒者亦时有发生。
为保障食品卫生质量和食用安全，根据副溶血性弧菌的特性，进行下列检验，以便鉴别诊断。
第一节副溶血性弧菌标准的检验方法一、检验方法（一）操作步骤1. 分离培养：首先称取样品25g，加225mL3.5％灭菌盐水，用均质器打碎或用乳钵磨碎，接种氯化钠琼脂平板和嗜盐性琼脂平板各一个，同时取10mL加入100mL增菌液中，放37℃8~16h培养后，涂上述平板进行分离，37℃培养18~24h取出观察，挑取可疑菌落，转种3.5％氯化钠三糖铁斜面，37℃、24h观察结果。
2. 涂片镜检：将三糖铁培养基上反应可疑者即底层变黄（葡萄糖产酸不产气）、上层斜面不变（乳糖、蔗糖不分解）、有动力、不产生硫化氢，进行革兰氏染色镜检形态。
3. 嗜盐性试验：将上述可疑培养物分别接种不同含量的盐胨水（0％，3％，7％，10％）于37℃24h培养后观察生长情况，在无盐和10％盐的胨水中不生长，在3％和7％盐的胨水中生长良好者，继续进行下列有关试验。
4. 生化试验：分别接种下列各类生化培养基，葡萄糖、乳糖、蔗糖、甘露醇、甲基红、靛基质、V-P，赖氨酸、鸟氨酸、精氨酸、硫化氢及溶血性试验，放37℃培养，除V-P、靛基质和甲基红试验培养48h后加试剂观察外，其他均在24h观察结果。
5. 动物试验：将上述符合各类反应的副溶血性弧菌，接种3.5％氯化钠胨水，经37℃、16~18h培养后，小鼠腹腔注射0.3mL，观察2~3d，将死亡小鼠进行解剖作分离培养。
（二）检验程序图6-1 副溶血性弧菌检验程序二、结果分析判定及注意事项（一）样品处理采样时应注意首选准备好灭菌用具及容器，以无菌手续取有代表性的样品，样品必须尽快送检，不宜存放时间过长，副溶血性弧菌在适宜温度下繁殖较快，但不适于低温生存，在寒冷的情况下容易死亡，防止待检材料冷冻，以免影响检验结果。
副溶血弧菌检验标准方法免疫荧光法
`B66食品中副溶血性弧菌免疫荧光镜检快速筛查法连云港市产品质量监督检验所 发布DB32/TDB32/T -2010前言本标准适用于食品中嗜盐性海洋弧菌---副溶血性弧菌的免疫荧光镜检快速筛查法。
本标准编制按GB/T 1《标准化工作导则》和GB/T 20001《标准编写规则》进行。
本标准由连云港市产品质量监督检验所提出。
本标准由连云港市产品质量监督检验所负责起草。
本标准主要起草人：周翔本标准于2010年8月首次发布。
食品中副溶血性弧菌免疫荧光镜检快速筛查法1 范围本标准规定了食品中嗜盐性副溶血性弧菌的免疫荧光快速筛查检验方法。
本标准适用于海洋水产品和淡水水产品及加工的含盐其它食品。
本标准检出限为 10 CFU/g2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。
凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
GB/T 20001.4-2001 标准编写规定实验原理荧光抗体染色是荧光显微镜标本上的抗原—抗体反应和荧光结合第二抗体反应。
必须制成镜检标本。
作为检测抗原目的标本片，细菌检样作成单层。
夹心法，即用未标记的特异性抗原加在玻片上先与菌体中之相应抗体结合，再用该抗原之荧光抗体重叠结合其上，而在荧光激发下间接地显示出菌体中抗体的存在。
3 设备3.1 拍打式均质器。
3.2 电动试管振荡器。
3.3 低温高速冷冻离心机（25000r/min）3.4 全自动加液器（10~1000μl）3.5 天平（0.1g）3.6 直落式荧光显微镜3.7 水套式培养箱3.8 冰箱（0~8℃）3.9 湿盒3.10 20ml一次性注射器3.11 无荧光盖玻片3.12 无荧光载玻片3.13 洗片缸3.14 标本缸（存放实验片待灭菌）3.15 高压灭菌器4 试剂4.1 副溶血型弧菌羊抗血清4.2 兔抗羊荧光抗血清4.3 甲醇4.4 无荧光丙三醇（甘油）4.5 PBS缓冲液4.6 无菌高纯蒸馏水（无荧光）4.7 次氯酸钠消毒液4.8 封片甘油：无荧光甘油9份，pH7.2 PBS 1份5 样品制备5.1 冷冻样品应在45℃以下不超过15min或在2～5℃不超过18 h解冻。
副溶血性弧菌检验-检验操作程序及要点-微课件
副溶血性弧菌检验 ——检验操作程序及要点
目录页
CONTENTS PAGE
检验操作程序及要点
— 2—
副溶血性弧菌检验—检验程序及操作要点
检验程序及操作要点-1
• • • • 流程图 增菌 分离 纯培养
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检验程序及操作要点
微生物学检验
依据GB 4789.7-2013《食品安全国家标
试述副溶血性弧菌在TCBS琼脂平板上的典型菌落特征
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智慧职教 /portal/
校本资源库 / 参考网站： /
分离 纯培养
初步鉴定
结果与报告
确定鉴定
定性 定量
— 5—
副溶血性弧菌检验—检验操作程序及要点
检验程序及操作要点流程图源自副溶血性弧菌检验—检验操作程序及要点
— 6—
检验程序及操作要点
增菌
无菌操作 称量或量取 均质
液态样品，不需均质，振荡混匀即可；
鱼类和头足类动物取表面组织、肠或鳃；
副溶血性弧菌检验—检验操作程序及要点
— 8—
检验程序及操作要点
纯培养
挑取 3 个或以上可疑菌落
副溶血性弧菌检验—检验操作程序及要点
— 9—
检验程序及操作要点
初步生化鉴定
确定生化鉴定
革兰氏染色试验 氧化酶试验 动力试验
三糖铁（TSI）试验 嗜盐性试验
副溶血性弧菌检验—检验操作程序及要点
— 10 —
贝类取全部内容物，包括贝肉和体液； 甲壳类取整个动物，或者动物的中心部 分，包括肠和鳃。
选择性增菌液
及时检验 副溶血性弧菌检验—检验操作程序及要点
— 7—
新版副溶血性弧菌的测定作业指导书
作业指导书O P E R A T I N G I N S T R U C T I O N S副溶血性弧菌的测定编号：XZJY070-00-2019版本：第一版第0次修改编制：审核：批准：实施日期：2019.06.23一、编制目的为规范单位对副溶血性弧菌检测的操作，编制本作业指导书。
二、适用范围本指导书适用于食品中副溶血性弧菌的测定。
三、编制依据GB 4789.7-2013 《食品安全国家标准食品微生物学检验副溶血性弧菌检验》。
四、检验4.l 设备和材料4.1.1 冰箱：2℃～5℃；4.1.2 恒温培养箱：36℃±1℃，42℃±1℃；4.1.3均质器；4.1.4振荡器；4.1.5 电子天平：感量0.1g；4.1.6 无菌锥形瓶：容量500ml，250ml；4.1.7无菌吸管：1ml（具0.01ml刻度）、10ml（具0.1ml刻度）或微量移液器及吸头；4.1.8无菌培养皿：直径90mm；4.1.9 无菌试管：3mm×50mm、10mm×75mm；4.1.10 无菌毛细管；4.1.11 pH计或pH比色管或精密pH试纸；4.1.12全自动微生物生化鉴定系统。
4.2 培养基和试剂4.2.1 3%氯化钠碱性蛋白胨水；4.2.2 TCBS琼脂；4.2.3 3%氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂；4.2.4 3%氯化钠三糖铁琼脂；4.2.5 弧菌显色培养基；4.2.6 3%氯化钠溶液；4.2.7我妻氏血琼脂；4.2.8氧化酶试剂；4.2.9革兰氏染色液；4.2.10 ONPG试剂；4.2.11 V-P试剂；4.2.12生化鉴定试剂盒。
4.3检验程序检样4.4操作步骤4.4.1样品制备称取25g（ml）样品放入盛有225ml3%氯化钠碱性蛋白胨水的无菌均质杯中，以8000r/min～10000 r/min均质1 min～2min；或置于盛有225ml3%氯化钠碱性蛋白胨水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2min，若样品为液态，不需要均质，振荡混匀。
KJ01副溶血性弧菌检验.
典型的副溶血性弧菌在TCBSL呈圆形、半透明、 表而光滑的绿色菌落，用接种环轻触，有类似 口香糖的质感，直径2mm--3 mm 。
纯培养
挑取三个或以上可疑菌落，划线3 ％氯化钠 胰蛋白胨大豆琼脂平板，36 ℃ 土l ℃ 培养 18h--24h.
初步鉴定
氧化酶试验 挑选纯培养的单个菌落进行氧化酶试验，副溶血性弧菌为氧化酶 阳性。 涂片镜检 将可疑菌落涂片，进行革兰氏染色．镜检观察形态。副溶血性弧 菌为革兰氏阴性，呈棒状、弧状、卵圆状等多形态，无芽胞，有 鞭毛. 3﹪氯化钠三糖铁琼脂 挑取纯培养的单个可疑菌落，接种3 ％氯化钠三糖铁凉脂斜面并 穿刺底层，35 ℃ 士1 ℃ 培养24h 观察结果。
副溶血性弧菌致病性
致病因子： 1、耐热直接溶血素TDH，肠毒素 2、耐热相关溶血素TRH，与TDH 相似。
二、生物学特性
（一）形态与染色
1、革兰氏阴性无芽胞多形态杆菌， 无芽孢单端鞭毛、两端浓染。杆状、棒状、甚
至球状、丝状等
革兰染色阴性兼性厌氧菌,无芽孢， 有鞭毛
菌体为多形态杆菌 或 稍弯曲弧菌
3 ％氯化钠三糖铁琼脂中的反应为底层变 黄不变黑，无气泡，斜面颜色不变或红色 加深，有动力。
嗜盐性试验
挑取纯培养的单个可疑菌落．分别接种于不 同氯化钠浓度的胰胨水，36 ℃ 士1 ℃ 培养 24h 观察液体混浊清况。 副溶血性弧菌在无氯化钠和10％氯化钠的胰 胨水中不生长或微弱生长，在7 ％氯化钠的胰 胨水中生长旺盛.
检 查
副溶血性弧菌
一.副溶血性弧菌的概述
副溶血性弧菌（Bibrio Parahemolyticus）， 进食含有该菌的食物致可食物中毒，也称嗜盐 菌食物中毒，主要翻版海产品。临床上以急性 起病、腹痛、呕吐、腹泻及水样便为主要症状。 本病多在夏秋季发生于沿海地区，常造成集体 发病。近年来由于海鲜空运，内地城市病例也 渐增多。此菌对酸敏感，在普通食醋中5分钟即 可杀死；对热的抵抗力也较弱。
副溶血性弧菌
确定鉴定:
➢生化试验：分别接种各类生化培养基，培养后观察结果。 或API 20E 生化鉴定试剂盒或VITEK全自动微生物检测系统鉴定。 生化性状符合下表要求时，为副溶血性弧菌 。
表 副溶血性弧菌的生化性状
项目 革兰氏染色镜检
氧化酶 动力 蔗糖
葡萄糖 甘露醇 分解葡萄糖产气
结果 阴性，无芽孢
第 七节、副溶血性弧菌检验
一、生物学特性 1、形态与染色
革兰氏阴性无芽胞多形态杆菌或 稍弯曲弧菌 ，有时呈棒状、甚至球状、 丝状等。一般两极浓染。单端鞭毛， 长度约为菌体的2倍，运动活泼。无芽 胞、无荚膜。
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2、培养特性
➢本菌对营养要求不高，在普通的琼脂或蛋白胨水中均可 生长 ➢需氧特别强，在厌氧条件下生长非常缓慢 ➢嗜盐，在2~３%NaCL培养基中生长最好，无盐或食盐 >10%不能生长。 ➢最适温度36℃，pH7.5~7.8 ➢在肉汤、蛋白胨水等培养基中呈现浑浊，表面形成菌膜 ➢在固体培养基上菌落呈圆形凸起，混浊不透明，表面光 滑，较湿润，边缘不整齐。 ➢在血平板上可见溶血环。
＋ ＋ － ＋ ＋ －
项目 乳糖 硫化氢 赖氨酸脱梭酶 V-P ONPG
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结果 － － ＋ － －
报告： 定性检测：报告25g（ml）样品中是否检出副溶血性弧菌。 定量检测：根据证实为副溶血性弧菌阳性的试管管数，查 MPN检索表，报告每克（毫升）副溶血性弧菌的MPN值。
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二、致病性
1、致病因素 ★侵袭力：活菌(105~107/g)，可使人致病 . ★产生溶血毒素：内毒素，成分是脂多糖，100℃30min不 被破坏。 2、媒介食品
副溶血性弧菌检验标准操作程序
样品制备
甲壳类取整个动物，或者动物的中 心部分，包括肠和鳃。
样品制备
如为带壳贝类或 甲壳类，则应先在 符合生活饮用水卫 生标准的流水中洗 刷外壳并甩干表面 水分，然后以无菌 操作打开外壳，按 上述要求取相应部 分。
样品制备
以无菌操作取检样25 g（mL），加入 3％氯化钠碱性蛋白胨水225 mL，用旋转 刀片式均质器以8 000 r/min均质1 min， 或拍击式均质器拍击2 min，制备成1:10 的均匀稀释液。如无均质器，则将样品放入 无菌乳钵中磨碎，然后放在500 mL的灭菌 容器内，加225 mL 3％氯化钠碱性蛋白 胨水，并充分振荡。
TCBS琼脂上面的副溶血性弧菌
四种显色培养基
纯培养
挑取3个或 以上的可疑 菌落，划线 3％氯化钠 胰蛋白胨大 豆琼脂平板， 36 ℃±1 ℃ 培养18 h～ 24 h。
初步鉴定
氧化酶试验：挑选纯培养的单个菌落进行氧化酶试 验，副溶血性弧菌为氧化酶阳性。
初步鉴定
涂片镜检：将可疑菌落涂片，进行革兰氏染色，镜检观察形态。副 溶血性弧菌为革兰氏阴性，呈棒状、弧状、卵圆状等多形态，无芽 胞，有鞭毛。
范 围
本标准规定了食品中副溶血性弧菌 （Vibrio parahaemolyticus）的检验 方法。 本标准适用于水产品及食物中毒样品中副溶 血性弧菌的检验，其他食品可参照使用。
食品种类
动物性水产品： 鲜冻水产品（定性检测）：新鲜水产品和冷 冻水产品； 生食水产品（定性、定量检测）：新鲜的、 冷藏、冷冻的海水或淡水鱼类、甲壳类、贝 壳类和软体动物等，未经腌制、加热，可以 直接食用的。
初步鉴定
挑取纯培养的单个可疑菌落，转种3％氯化钠三糖铁琼脂斜面并穿刺底 层，36℃±1℃培养24h观察结果。副溶血性弧菌在3％氯化钠三糖铁 琼脂中的反应为底层变黄不变黑，无气泡，斜面颜色不变或红色加深， 有动力。
副溶血性弧菌
精品课件
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六、检验实验
目前副溶血性弧菌的检验采用国标法（GB/T 4789.7—2013 ）
设备和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：
a) 恒温培养箱：36 ℃±1 ℃；
b) 冰箱：2 ℃～5 ℃、7 ℃～10 ℃；
c) 恒温水浴箱：36 ℃±1 ℃；
d) 均质器或无菌乳钵；
4.纯培养
挑取三个或以上可疑菌落，划线3 ％氯化钠 胰蛋白胨大豆琼脂平板，36 ℃ 土l ℃ 培养 18h--24h.
精品课件
33
5.初步鉴定
氧化酶试验
挑选纯培养的单个菌落进行氧化酶试验，副溶血性弧菌 为氧化酶阳性。
涂片镜检
将可疑菌落涂片，进行革兰氏染色．镜检观察形态。副 溶血性弧菌为革兰氏阴性，呈棒状、弧状、卵圆状等多形 态，无芽胞，有鞭毛.
VP试验方法 ： 取一种细菌的24h纯培养
物，接种于葡萄糖蛋白胨水培养基中，置
37'C培养48～72h取出后在培养液中先加
VP试剂甲液0.6mL，再加乙液0.2mL，充
分混匀。静置在试管架上，15min后培养
液呈红色者为阳性，以“ ”表示；不变色
为阴性，以“—”表示。1h后可出现假阳
性。或者可以用等量的硫酸铜试剂于培养
1966年国际弧菌命名委员会正式命名为副溶血 性弧菌。
精品课件
4
中毒食品主要是海产品鱼、虾、蟹、贝类和海 藻等海产品，其次为咸菜、熟肉类、禽肉、禽蛋
类，约有半数中毒者为食用了腌制品后。中毒原 因主要是烹调时未烧熟煮透或熟制品被污染．
精品课件
5
副溶血性弧菌致病性
致病因子： 1、耐热直接溶血素TDH，肠毒素
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初步鉴定
挑取纯培养的单个可疑菌落，转种3％氯化钠三糖铁琼脂斜面并穿刺底 层，36℃±1℃培养24h观察结果。副溶血性弧菌在3％氯化钠三糖铁 琼脂中的反应为底层变黄不变黑，无气泡，斜面颜色不变或红色加深， 有动力。
TSA＋TTC可以方便观察副溶血性弧菌动力
初步鉴定
嗜盐性试验：挑取纯培 养的单个可疑菌落，分别 接种于不同氯化钠浓度的 胰胨水中，36℃±1℃培 养24h，观察液体混浊情 况。副溶血性弧菌在无氯 化钠和10％氯化钠的胰胨 水中不生长或微弱生长， 在7％氯化钠的胰胨水中 生长旺盛。
增菌
定性检测 将上述1:10稀释液于36 ℃±1 ℃培养8 h～18 h。
增菌
定量检测 用灭菌吸管吸取1:10稀释液1 mL，注入含有9 mL 3％氯化钠碱性蛋白胨水的试管内，振摇试管 混匀，制备1:100的稀释液。 另取1 mL灭菌吸管，按上条操作依次制备10倍 递增稀释液，每递增稀释一次，换用1支1mL灭菌 吸管。 根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计， 选择三个连续的适宜稀释度，每个稀释度接种3支 含有9 mL 3％氯化钠碱性蛋白胨水的试管，每管 接种1 mL。置36 ℃±1 ℃恒温箱内，培养8 h～18 h。
范 围
本标准规定了食品中副溶血性弧菌 （Vibrio parahaemolyticus）的检验 方法。 本标准适用于水产品及食物中毒样品中副溶 血性弧菌的检验，其他食品可参照使用。
食品种类
动物性水产品： 鲜冻水产品（定性检测）：新鲜水产品和冷 冻水产品； 生食水产品（定性、定量检测）：新鲜的、 冷藏、冷冻的海水或淡水鱼类、甲壳类、贝 壳类和软体动物等，未经腌制、加热，可以 直接食用的。
弧菌于1950年从日 本一次暴发性食物中毒中分离 发现。该菌存在于近海的海水、 海底沉积物和鱼类、贝壳等海 产品中。在37℃、pH7.7、含 氯化钠3～4%的环境中生长最 好。主要引起食物中毒，尤以 日本、东南亚、美国及我国台 北地区多见，也是我国大陆沿 海地区食物中毒中最常见的一 种病原菌。
生化特性
分解葡萄糖产酸不产气，不分解乳糖、蔗糖。 H2S﹙－﹚、V-P﹙－﹚、动力（＋）。 甘露醇（＋）、赖氨酸（＋）、ONPG（－）。
报 告
当检出的可疑菌落生化学性状符合表1要求 时，可以报告检出副溶血性弧菌。如果进行 定量检测，根据证实为副溶血性弧菌阳性的 试管管数，查MPN检索表，报告g（mL） 副溶血性弧菌的MPN值。
可 选
项
血清型分型：O抗原，K抗原 神奈川试验：是在我妻氏琼脂上测试是否存在特定溶血素。该
试验阳性结果与副溶血性弧菌分离株的致病性显著相关。
设备和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他 设备和材料如下： • 恒温培养箱：36 ℃±1℃。 • 冰箱：2 ℃～5 ℃。 • 均质器及无菌均质袋、均质杯或灭菌乳钵。 • 天平： 感量0.1 g。 • 无菌试管：18 mm×180mm、15 mm×100 mm。 • 无菌吸管：1 mL（具0.01 mL刻度）、10 mL（具0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸头。 • 无菌锥形瓶：500 mL、250 mL。 • 无菌培养皿：直径90mm。 • VITEK全自动微生物鉴定系统[1]。 • 灭菌手术剪、镊子。
分离
在所有显示生长的试管或增菌液中用接种环沾取一 环，于TCBS平板或科玛嘉弧菌显色培养基平板上 划线分离。一支试管划线一块平板。于36 ℃±1 ℃ 培养18 h～24 h。
使用TCBS琼脂划线不可密集
分离
典型的副溶血性弧菌在TCBS上呈现为圆的、 半透明的、表面光滑的绿色菌落，用接种环 轻触，有类似口香糖的质感，直径2 mm～ 3 mm。从培养箱取出TCBS平板后，应尽 快（不超过1 h）挑取菌落或标记要挑取的 菌落。典型的副溶血性弧菌在科玛嘉弧菌显 色培养基上呈现为圆的、半透明的、表面光 滑的粉紫色菌落，直径2 mm～3 mm。
样品制备
• 非冷冻样品采集后应立即置7℃～10℃冰箱 保存，尽可能及早检验； 冷冻样品应在45 ℃以下不超过15 min或在 2℃～5℃不超过18 h解冻； 如果样品需要冷冻贮存，应在样品中加等量 缓冲甘油-氯化钠溶液（液体样品应加双 料），推荐贮存温度为-70 ℃以下。
样品制备
鱼类和头足 类动物取表 面组织、肠 或鳃。贝类 取全部内容 物，包括贝 肉和体液；
TCBS琼脂上面的副溶血性弧菌
四种显色培养基
纯培养
挑取3个或 以上的可疑 菌落，划线 3％氯化钠 胰蛋白胨大 豆琼脂平板， 36 ℃±1 ℃ 培养18 h～ 24 h。
初步鉴定
氧化酶试验：挑选纯培养的单个菌落进行氧化酶试 验，副溶血性弧菌为氧化酶阳性。
初步鉴定
涂片镜检：将可疑菌落涂片，进行革兰氏染色，镜检观察形态。副 溶血性弧菌为革兰氏阴性，呈棒状、弧状、卵圆状等多形态，无芽 胞，有鞭毛。
样品制备
甲壳类取整个动物，或者动物的中 心部分，包括肠和鳃。
样品制备
如为带壳贝类或 甲壳类，则应先在 符合生活饮用水卫 生标准的流水中洗 刷外壳并甩干表面 水分，然后以无菌 操作打开外壳，按 上述要求取相应部 分。
样品制备
以无菌操作取检样25 g（mL），加入 3％氯化钠碱性蛋白胨水225 mL，用旋转 刀片式均质器以8 000 r/min均质1 min， 或拍击式均质器拍击2 min，制备成1:10 的均匀稀释液。如无均质器，则将样品放入 无菌乳钵中磨碎，然后放在500 mL的灭菌 容器内，加225 mL 3％氯化钠碱性蛋白 胨水，并充分振荡。
确定鉴定
生化试验：分别接种含3％氯化钠 的甘露醇、赖氨酸、MR-VP培养基， 36℃±1℃培养24h～48h后观察结 果。隔夜培养物进行ONPG试验。
MR-VP试验
ONPG试验
确定鉴定
API20E生化鉴定试剂盒或VITEK：刮取3％氯化钠胰蛋白胨大豆 琼脂平板上的单个菌落，用生理盐水制备成浊度适当的细胞悬浮液， 使用API20E生化鉴定试剂盒或VITEK鉴定。