东北林蛙皮肤抗菌肽基因在毕赤酵母中表达条件的优化

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抗菌肽MET在毕赤酵母中的表达及其与抗生素的体外联合抑菌作用

抗菌肽MET在毕赤酵母中的表达及其与抗生素的体外联合抑菌作用抗菌肽MET在毕赤酵母中的表达及其与抗生素的体外联合抑菌作用概述：抗菌肽（Antimicrobial Peptide，AMP）是由真核生物和原核生物产生的一类广谱抗菌活性肽。

抗菌肽MET是一种新型的AMP，对多种细菌、真菌和寄生虫展示了显著的抑菌活性。

近年来，越来越多的研究关注抗菌肽MET在微生物学领域的应用。

本文旨在探讨抗菌肽MET在毕赤酵母中的表达及其与抗生素的体外联合抑菌作用。

一、抗菌肽MET的特性抗菌肽MET是一类具有亲水性的小分子多肽，通常由20个左右的氨基酸残基组成。

其具有多种特性，如低分子量、对广谱微生物具有高度抗菌活性、快速杀菌等。

此外，抗菌肽MET在生物体内短暂存在，并且对抗生物耐药性展示出较低的概率。

二、抗菌肽MET在毕赤酵母中的表达毕赤酵母（Saccharomyces cerevisiae）是一种常见的真菌，在生命科学和食品工业中具有重要的应用价值。

研究表明，抗菌肽MET能够在毕赤酵母中实现表达，且其表达量与MET基因的启动子的选择和表达强度密切相关。

通过适当的基因工程技术，可在毕赤酵母中构建MET基因表达系统，从而实现高效表达抗菌肽MET。

三、抗菌肽MET与抗生素的体外联合抑菌作用近年来，多重耐药微生物的出现使得传统抗生素治疗失去了效果。

因此，探索新型抗菌药物和联合治疗策略变得尤为重要。

抗菌肽MET与抗生素的联合使用已成为一种备受关注的策略。

实验证明，抗菌肽MET与常用抗生素如青霉素、庆大霉素等能够呈现协同抑菌作用，使得微生物对抗生素的耐药性得到抑制。

此外，抗菌肽MET还能增加细菌膜对抗生素的渗透性，提高抗生素内部靶位的浓度，并通过干扰细菌的生物膜、破坏细菌的DNA和RNA合成等机制增强抗生素的抗菌效果。

四、抗菌肽MET的应用前景抗菌肽MET作为一种新型抗菌药物，具有广泛的应用前景。

其作为微生物学领域的抗菌剂，不仅能够杀灭常见的细菌和真菌，还能有效对抗抗生物耐药菌株。

抗菌肽FAPs在毕赤酵母中的重组表达研究

抗菌肽FAPs在毕赤酵母中的重组表达研究冯兴军;李静;宋雪莹;许文杉;邢丽维;柳迪【期刊名称】《东北农业大学学报》【年(卷),期】2013(044)009【摘要】将4种抗菌肽Fowlicidin-2、Cecropin B、Cecropin A(1-8)-Melittin(1-18)和Thanatin串联,并在每种抗菌肽N-末端加上Kex2蛋白酶裂解位点,根据毕赤酵母密码子偏爱性,化学合成四种抗菌肽(Fusion Antimicrobial Peptides,FAPs)编码基因,连接到pPICZαC载体中,构建分泌型重组表达载体并转化毕赤酵母.经甲醇诱导后,Tricine-SDS-PAGE分析获得与目蛋白大小一致特异表达蛋白条带,每升发酵液上清含量达到32 mg.初步鉴定FAPs对大肠杆菌(E.coli) ATCC25922、金黄色葡萄球菌(S.aureus) ATCC25923、鼠伤寒沙门氏菌(S.syphimurium C77-31和绿脓杆菌(P.aeruginosa)ATCC27853均有抑菌活性,且对S.aureus ATCC25923活性最强,最小抑菌浓度MIC为8.0 μg·mL-1.【总页数】5页(P68-72)【作者】冯兴军;李静;宋雪莹;许文杉;邢丽维;柳迪【作者单位】东北农业大学动物科学技术学院,哈尔滨150030;东北农业大学动物科学技术学院,哈尔滨150030;东北农业大学动物科学技术学院,哈尔滨150030;东北农业大学动物科学技术学院,哈尔滨150030;东北农业大学动物科学技术学院,哈尔滨150030;东北农业大学动物科学技术学院,哈尔滨150030【正文语种】中文【中图分类】R96;Q953【相关文献】1.重组抗菌肽 Cecropin P1在毕赤酵母 X-33中的表达以及纯化后的生物活性分析[J], 唐丽云;郭春和;郑红玉;项林盛;刘德辉;黄毓茂;焦茂兴2.重组猪源抗菌肽Cecropin P1在毕赤酵母中的分泌表达与活性研究 [J], 陈婉娴;翟李鹏;叶江;张惠展3.毕赤酵母重组表达抗菌肽Fowlicidins的研究进展 [J], 许文杉;冯兴军4.一种新型抗菌肽Hydramacin-1在毕赤酵母中的重组表达、纯化及其抗菌活性[J], 孟德梅; 石林玥; 李文娟; 孙雪晴; 郭雅君; 贾雪霞; 樊振川5.重组毕赤酵母产青蛤Mytimacin抗菌肽的表达研究 [J], 赵震; 王莎莎; 吕星星; 陶妍; 谢晶; 钱韻芳因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

抗菌肽CecropinD在毕赤酵母中的表达_纯化及活性鉴定

基金项目:云南省自然科学基金资助项目(No:2004C0029Q).作者单位:中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所分子生物室(昆明650118).通讯作者:孙茂盛,E mail:yinna988@中国图书分类号 R392.11 Q 786 文献标识码 A 文章编号 1004 5503(2008)03 0185 05基础研究抗菌肽Cecropin D 在毕赤酵母中的表达、纯化及活性鉴定尹娜李鸿钧彭梅谢天宏张光明施锐孙茂盛摘要目的在毕赤酵母GS115中表达抗菌肽Cecropin D,并检测其抗菌活性。

方法根据毕赤酵母密码子的偏爱性,人工合成6条寡聚核苷酸片段,经磷酸化、退火、连接并克隆入酵母表达载体pPIC9K 。

重组表达质粒pPIC9K D 转化至毕赤酵母菌GS115,经G418筛选,阳性高拷贝克隆用0 5%的甲醇诱导表达,表达产物经CM Sepharose 层析柱纯化,Tricine SDS PAGE 分析,琼脂糖扩散法和比浊法测定其抗菌活性。

结果经Tricine SDS PAGE 检测,在相对分子质量3900左右处可见目的蛋白表达条带,纯化后的目的蛋白纯度达90%以上,获得的抗菌肽Cecropin D 对一些革兰阳性菌和革兰阴性菌均有抑菌活性。

结论抗菌肽Cecropin D 成功地在毕赤酵母中分泌表达,为以后深入研究抗菌肽奠定了基础。

关键词抗菌肽;Cecropin D;毕赤酵母;分泌表达;抗菌活性Expression of Antibacterial Peptide Cecropin D in Pichia pastoris and Purificationand Activity of Expressed ProductYIN Na,LI Hong jun,PE NG Mei,et al(Instiute o f Medical Biolo gy ,Peking Union Medical College,Chinese Academ y o f Medical Sciences,Kunming 650118,China )Abstract Objective To express antibacterial peptide cecropin D in Pich ia p astoris and determine the activi ty of expressed product.Methods Six oligonucleotide fragments were synthesized according to the codon bias of Pichia pastoris ,then phosphorylated,annealed,linked and cloned to expression vector pPIC9K.The constructed recombinant plasmid pPIC9K D was transformed to Pichia p astoris GS115,and posi ti ve clones were screened with G418for expression under induction of 0.5%methanol.T he expressed product was puri fied by C M Sepharose chromatography,idntified by Tricine SDS PAGE,and determined for antibacterial activi ty by agarose diffusion test and turbidimetry.Results Cecropin D wi th a relative molecular mass of about 3900was expressed and reached a puri ty of more than 90%after purificati on.It showed antibacterial activi ty to both Gram positive and negative bacteria.C onclusion Cecropin D was successfully expressed in Pichia p astoris ,which laid a foundation of further study on antibacterial peptide.Key w ords Antibacterial peptide;Cecropi n D;Pichia pastoris ;Secretory expression;Antibacterial activity1975年瑞典科学家B oman 等人从惜古比天蚕蛹中诱导分离得到一种抗菌肽,并将其命名为Ce cropin 。

牛气管抗菌肽在毕赤酵母中的表达及条件优化

牛气管抗菌肽在毕赤酵母中的表达及条件优化朱善元;王安平;王永娟;成大荣;吴双;左伟勇;洪伟鸣【期刊名称】《扬州大学学报：农业与生命科学版》【年(卷),期】2011(32)3【摘要】根据已发表的牛气管抗菌肽(bTAP)序列和酵母密码子偏爱性设计并合成一段bTAP DNA序列,将其与毕赤酵母pPIC9K质粒连接后构建了分泌表达载体pPIC9K-bTAP。

获得重组质粒经SalⅠ酶切线性化后电转化毕赤酵母GS115,通过G418抗性筛选获得了阳性转化重组菌。

通过对重组菌培养条件的进一步优化,揭示了重组蛋白bTAP可在含2%酸水解酪蛋白的BMMY培养基中经0.5%甲醇在28℃诱导表达72h后获得最优表达。

抑菌试验表明bTAP对金黄色葡萄球菌具有良好的抑菌效果。

【总页数】5页(P19-23)【关键词】牛气管抗菌肽;毕赤酵母;表达;优化;抑菌活性【作者】朱善元;王安平;王永娟;成大荣;吴双;左伟勇;洪伟鸣【作者单位】江苏畜牧兽医职业技术学院江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室;扬州大学兽医学院【正文语种】中文【中图分类】S823;Q78【相关文献】1.杂合抗菌肽MgJ基因在毕赤酵母中表达条件的优化 [J], 尹佳2.抗菌肽DCD-1L在毕赤酵母中的表达及其条件优化 [J], 张丽琼;廖世奇;王鸣刚;曾家豫;王黎;袁红霞;郑群;张宁3.抗菌肽基因在毕赤酵母中分泌表达及其条件优化 [J], 储卫华;李大力;汪信4.东北林蛙皮肤抗菌肽基因在毕赤酵母中表达条件的优化 [J], 崔绍鹏;周旋;朱熬;肖向红;张晶钰5.新型抗菌肽Temporin-SHf在毕赤酵母中的表达及诱导条件优化 [J], 王莲哲;江宏浩;唐宜飞;洪军因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

昆虫抗菌肽的合成及在毕赤酵母中的表达的开题报告

昆虫抗菌肽的合成及在毕赤酵母中的表达的开题报告题目：昆虫抗菌肽的合成及在毕赤酵母中的表达引言：自然界中存在着许多昆虫抗菌肽，具有广谱抗菌作用，对许多病原微生物有一定的杀灭效果。

昆虫抗菌肽通常由20-50个氨基酸残基组成，具有低分子量、稳定性和高效性的特点，因此具有成为天然抗菌剂的潜力。

毕赤酵母是一种广泛应用于生物学实验中的单细胞真核生物。

它具有许多优良的特性，如容易培养、对环境适应性强、遗传修饰容易等。

同时，毕赤酵母也被广泛用于蛋白质表达、分泌以及研究中。

本研究旨在通过化学合成或基因工程技术，合成出具有抗菌活性的昆虫抗菌肽，并将其转化到毕赤酵母中进行表达，以期在工业或医药领域发挥其广泛的应用价值。

研究内容及方法：1. 昆虫抗菌肽的合成从天然界中筛选出具备广谱抗菌活性的昆虫抗菌肽，并且在其基础上进一步对其进行化学合成。

合成昆虫抗菌肽的方法通常有两种，一种是基于固相合成技术，另一种是基于溶液相合成技术。

固相合成技术是在小球上连续合成昆虫抗菌肽，连续反复洗涤。

溶液相合成技术是在溶液中合成昆虫抗菌肽。

2. 在毕赤酵母中的表达用基因工程技术将昆虫抗菌肽基因插入到毕赤酵母的表达载体中，并将其转化到毕赤酵母中进行表达。

首先进行真核细胞基因的克隆和表达载体的构建。

并采用PCR 扩增、酶切、连接等技术，将昆虫抗菌肽基因与可表达载体进行连接。

常用的表达载体有pYES2、pPICZ、pGAP等。

选择合适的载体将其转化到毕赤酵母中，然后进行酵母细胞的培养、分离、表达、纯化以及抗菌活性分析等工作。

预期结果：通过本研究，可以制备出具备较高抗菌活性的昆虫抗菌肽，并且成功将其转化到毕赤酵母中进行表达。

通过对毕赤酵母中表达的昆虫抗菌肽的特性分析，将有助于深入了解昆虫抗菌肽在不同系统中的表达及其抗菌机制，为其广泛应用于工业和医药领域提供支持。

林蛙皮抗菌肽研究进展

林蛙皮抗菌肽研究进展张凤春;费英敏【期刊名称】《中国林副特产》【年(卷),期】2017(0)3【摘要】Recently, The invasion of exogenous pathogens is increasing, and it is urgent to search for new antibiotics with antibiotics from various organisms.At present, it has been found that the ecological types of amphibians are diverse and complex, Structure, function of special antimicrobial peptides, this material is good heat resistance, broad spectrum antibacterial activity, can provide important research information for screening antibiotics.In this paper, the biological activity, antibacterial mechanism, application status and research value of antimicrobial peptides in skin exudates of Rana chensinensis were reviewed, which provided important theoretical basis for in-depth study of antimicrobial peptides.%近年来外源性病原体的侵袭日益加重,急切需要从多种生物体中搜寻新的具有抗菌活性的药物,目前研究发现两栖类的生态类型多种多样且复杂多变,能够分泌出大量具有特殊结构、功能特殊的抗菌肽类物质,这种物质耐热性好、广谱抗菌活性强,能够为筛选抗菌药物提供重要研究信息.通过林蛙皮肤分泌物中的抗菌肽生物活性、抑菌机制、应用现状和研究价值等进行综述,为抗菌肽的深入研究提供重要的理论依据.【总页数】4页(P66-69)【作者】张凤春;费英敏【作者单位】铁力市四宝生物科技有限公司,黑龙江铁力152500;黑龙江民族职业学院,哈尔滨150066【正文语种】中文【中图分类】S966.3+5;R284.2【相关文献】1.中国林蛙皮抗菌肽的提取纯化及抑菌活性检测 [J], 王战勇;李宁;苏婷婷2.中国林蛙皮抗菌肽提取条件的优化研究 [J], 金莉莉;丁忠福;王秋雨3.天然食品保鲜防腐剂-林蛙皮抗菌肽 [J], 邱芳萍;周杰;李向晖;李青山;王彦忠4.中国林蛙皮抗菌肽用响应面法优化提取条件 [J], 李玉环;安金双;张超;刘帅;孟庆繁5.中国林蛙(Rana chensinensis)蛙皮抗菌肽的制备及抗菌作用研究 [J], 刘红玉;崔洪斌因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

东北林蛙皮抗菌肽及其生物学特性的开题报告

东北林蛙皮抗菌肽及其生物学特性的开题报告开题报告论文题目：东北林蛙皮抗菌肽及其生物学特性研究研究背景随着抗生素在临床应用中的广泛使用，细菌的耐药性日益增加，给治疗带来了很大的挑战。

同时，天然抗菌肽在生物体内发挥重要的防御作用，具有广泛的抗菌、抗病毒、抗真菌等生物活性。

因此，寻找新型天然抗菌肽具有重要意义。

东北林蛙(Glandirana emeljanovi)分布于中国东北和俄罗斯远东地区，其皮肤分泌物中含有多种抗菌肽。

其中，抗菌肽CRAMP(Chinese ribbed newt antimicrobial peptide)在体外展现了强大的抗菌活性，然而其抗菌机制和生物学特性还未完全清楚。

研究目的本研究旨在分离、纯化CRAMP，并分析其抗菌机制和生物学特性，为开发天然抗菌肽类新药提供理论前提及实验依据。

研究内容(1) 东北林蛙皮肤分泌物的提取与分离纯化(2) CRAMP的生物活性及质谱分析(3) CRAMP对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的抗菌活性研究(4) CRAMP的抗菌机制研究研究方法本研究将采用以下方法进行：(1) 东北林蛙皮肤分泌物提取：采用切片法和乙醇提取法(2) CRAMP的分离纯化：利用离子交换层析、分子筛层析等技术进行分离纯化，结合质谱分析确认其质量。

(3) CRAMP的生物活性评价：利用孔隙板法、微量平板法等评价其抑菌活性。

(4) CRAMP的抗菌机制研究：利用溶血实验、细胞膜蛋白抑制实验等方法探讨其抗菌机制。

研究意义本研究对于深入了解东北林蛙皮肤分泌物中含有的抗菌肽及其抗菌机制，为开发天然抗菌肽新药提供一定的科学依据。

同时，本研究揭示了抗菌肽CRAMP的抗菌活性及其生物学特性，为利用现代技术对其进行进一步的优化及应用提供了重要参考。

从东北林蛙皮肤中分离出的抗菌肽及其在抗菌药物中的应用[发明专利]

专利名称：从东北林蛙皮肤中分离出的抗菌肽及其在抗菌药物中的应用
专利类型：发明专利
发明人：王秋雨,金莉莉,宋树森,刘剑利
申请号：CN200810012534.0
申请日：20080729
公开号：CN101333247A
公开日：
20081231
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及从东北林蛙皮肤中分离出的抗菌肽及其在抗菌药物中的应用。

采用的技术方案是：两条抗菌肽为从两栖类动物东北林蛙皮肤分泌物中分离得到的序列特异性单链多肽，分子量分别为1459.9和2184.2，等电点分别为9.70和12.60，氨基酸全序列分别为SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2。

制备方法是收集东北林蛙皮肤分泌物，离心去除沉淀、冷冻干燥后，G50和G25分子筛层析、高压液相反相柱层析分离纯化后得到单一组分。

本发明可以在制备治疗微生物感染疾病药物中应用。

申请人：辽宁大学
地址：110036 辽宁省沈阳市皇姑区崇山中路66号辽宁大学
国籍：CN
代理机构：沈阳杰克知识产权代理有限公司
代理人：杨华
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ＯｐｔｉｍｉｚａｉｔｏｎｏｆＰｉｃｈｉａｐａｓｔｏｒｉｓＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＲａｎａｄｙｂｏｗｓｋｉｉＡｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌＰｅｐｔｉｄｅＧｅｎｅ
电泳条带灰度值为１１７，抑菌环直径为２８．１６ｍｍ，可为规模化的抗茵肽表达提供参考数据。
关键词：抗菌肽：毕赤酵母；表达条件
中图分类号：Ｑ７８
文献标识码：Ａ
文章编号：１０００— ０１２７（２０１３）０１— ０３２— ０５
Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＯｕｒｓｔｕｄｙｏｂｊｅｃｔｉｖｅｗａｓｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｔｈｅｏｐｔｉｍａｌｉｎｄｕｃｔｉｏｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｆｏｒＰｉｃｈｉａｐａｓｔｏｒｉｓｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｄｙｂｏｗｓｋｉｎ一
摘要：目的：确定毕赤酵母表达东北林蛙皮肤抗菌肽ｄｙｂｏｗｓｋｉｎ一１ＳＴ基因的最佳诱导表达条件。方法：本研究将ＰＣＲ合成的ｄｙｂｏｗｓｋｉｎ一１ＳＴ基因克隆到毕赤酵母表达载体ｐＰＩＣ９Ｋ中，构建ｐＰＩＣ９Ｋ—ｄｙｂｏｗｓｋｉｎ一１ＳＴ诱导型表达载
体。表达载体经线性化后转化巴斯德毕赤酵母ＧＳｌｌ５，应用ＢＭＭＹ培养基诱导表达。采用单一变量法及正交试验法，对甲醇诱导的浓度、时间和温度进行了优化，通过ＳＤＳ—ＰＡＧＥ电泳分析和体外抑茵试验检测目的肽表达丰度。
结果：最佳诱导条件：甲醇终浓度为０．５％、诱导时间为７２ｈ、诱导温度为２８ ℃ ，在此条件下表达产物ＳＤＳ— ＰＡＧＥ
野生动物ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＷｉｌｄｌｉｆｅ
，塑！）
二鱼
东北林蛙皮肤抗菌肽基因在毕赤酵母中表达条件的优化
崔绍鹏周旋朱熬肖向红晶钰
（东北林业大学野生动物资源学院，哈尔滨，１５００４０）