Sephadex G
sephadex g-25名词解释
sephadex g-25名词解释
SephadexG-25是一种具有广泛应用前景的粒子交换凝胶，它是由基础技术和使用
技术发展而来的新型凝胶。
它由葡萄糖纤维组成，并具有优越的交换功能，通常用于硅吸附、浓缩、纯化等过程。
SephadexG-25凝胶具有无毒、安全、稳定、可重复使用等优点。
特别是它的
摩擦特性，便于操作，大大简化了精制、稀释、温度调节、搅拌等技术操作步骤。
它还具有高吸附性、高功效等特点，可在不损害治疗药物本身特性的情况下完成有效的提取和分离。
SephadexG-25在高等教育领域有着广泛的应用。
例如在生物学、微生物学等
学科中，它可以用来分离、纯化、浓缩特定的溶液成分，提取具有特殊分子量的蛋白质；在药物研究中可以用于生物吸附，提取有效成分并保持其稳定性；在食品科学中，它可以用于细胞细胞膜分离、除去污染物质，也可以用于定性分析等多种作用。
由此可见，SephadexG-25凝胶对于高等教育领域，特别是生物学、药物学、
食品科学等专业，具有非常重要的意义。
它可以帮助高校教师完成成果的制备，并助力学生运用理论知识解决实际问题，同时也能帮助大学研究机构解决实用性问题，为新药品、新型食品、新产品的研发提供有力的技术支持。
sephadex知识剖析
【操作步骤】
（1）A-50经酸碱处理，平衡至中性后，浸泡于0.1mol/L， pH7.4 PB中，置4℃冰箱储存备用。 （2）装柱：同DE52。 （3）平衡：松开出水口螺旋夹，以PB平衡，控制流速为 15滴/min，• 待洗脱液与流出液之pH值达到一致时，停止 平衡。 （4）加样、洗脱、收集与浓缩：基本上同DE52，以 0.1mol/L PB洗脱。 用过的DEAE-Sephadex A-50可用0.5mol/L Na2HPO4洗 脱回收。洗至流出液中无蛋白（OD280nm<0.04）后再用 蒸馏水洗至中性，加入0.02％叠氮钠于4℃保存备用。
Sephadex系统知识
葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶系列是当今生物大 分子分离、提取、纯化的重要分离材料， 按性能分包括 凝胶过滤、 离子交换、 疏水层析、 亲和层析，
主要用于蛋白质、核酸、多肽、多糖、酶的脱盐 与分离纯化中。 葡聚糖凝胶为葡聚糖和环氧氯丙烷交联而成的 珠状产品，化学性能稳定，在潮湿、中型ph、高 压120度，灭菌30min情况下，不影响色谱性能， 适用于柱色谱操作。用于蛋白质脱盐及不同分子 量蛋白在凝胶分离范围内的分离纯化，可在酶、 多糖、核酸和其它生物大分子的纯化中广泛应用。
葡聚糖凝胶LH
用途：分离水不溶物质。 葡聚糖凝胶LH-20/Sephadex LH-20 分离中 等大小生物分子，球蛋白分离范围100～ 4000 葡聚糖凝胶LH-60/Sephadex LH-60 分离 100～20000
葡聚糖凝胶C阳离子交换剂，吸附碱 性蛋白：
羧甲基葡聚糖凝胶C-25/CM葡聚糖凝胶C-25/CM Sephades C-25 应用：MW＞20000；载量4-5mmol/g 羧甲基葡聚凝胶C-50/CM葡聚糖凝胶C-50/CM Sephades C-50 应用：中等大小生物分子（30－200KD）；载量45mmol/g SP葡聚糖凝胶C-25/SP Sephades C-25 应用：MW>200 KD；载量：2.0-2.6mmol/g SP葡聚糖凝胶C-50/SP Sephades C-50 应用：中等大小 生物分子（30－200KD）；载量：2.0-2.6mmol/g
葡聚糖凝胶G-25的使用方法
葡聚糖凝胶柱的使用方法：(1) 预处理称取Sephadex G-25（50－100目）约5g，加入蒸馏水100ml，置室温下3h进行溶胀。
(2) 装柱凝胶层析柱的直径与柱长之比一般为1:15。
柱的底部用装有细玻璃管的橡皮塞塞紧，用洗净的玻璃丝（约200目尼龙布）垫底或购买类似规格的商品柱。
然后将柱垂直安装好，先加入1/3柱体积蒸馏水，接着将溶胀好的凝胶边搅匀边连续装入，使它们在柱内自然沉降。
同时大开下口慢速流出蒸馏水。
装柱后的凝胶必须均匀，不能有气泡或明显条纹。
否则，必须到出重装，装好后，用蒸馏水平衡2－3h即可加样品分离。
(3) 加样加样前，首先把柱内凝胶上面多余的蒸馏水放出，直到柱内液面与凝胶表面相齐（或留一极薄液层）为止。
然后，由柱的上端加水解液2ml，注意不要让溶液把凝胶冲松浮起，加完样品后，打开下口缓慢放出液体至液面与凝胶面相齐，再用少量蒸馏水冲洗原来盛样品的容器2－3次，待全部进入层析柱后，即可进行洗脱。
(4) 洗脱与收集洗脱时，用蒸馏水作洗脱剂，并且要连续不断地进行，使凝胶柱上端保持一定的液层，防止凝胶柱表面的液体流干。
本实验洗脱液流出的速度应控制在0.8－1.0ml/min。
洗脱液的收集采用分管连续顺序收集，每管收集3ml，共收集10管。
据经验，4或5号管核苷酸浓度最大，可作为层析鉴定的样品液。
但因层析柱长度的差异，管号会有变化，必要时可用紫外检测A260nm，找出浓度最大的管号。
(5) 凝胶的再生和回收凝胶柱使用一次后，必须反冲疏松一次，平衡后再使用。
若使用数次，就需要再生处理。
用0.1mol/L NaOH-0.5mol/L NaCl溶液浸泡，然后用蒸馏水洗至中性备用。
若实验完毕，将再生后的凝胶在布氏漏斗上用蒸馏水洗涤抽干，再用95%乙醇洗两次，在60℃烘箱中烘干，回收保存。
实验五. 葡聚糖凝胶层析【实验目的】1.掌握葡聚糖凝胶的特性及凝胶层析的原理。
2．学习葡聚糖凝胶层析的基本操作技术。
sephadexg100柱层析原理
sephadexg100柱层析原理
Sephadex G-100柱层析是一种凝胶过滤柱层析方法，用于分离和纯化生物分子，例如蛋白质、核酸和多肽等。
基于凝胶过滤原理，Sephadex G-100是由纤维素经化学修饰得到的高分子化合物，具有高度多孔的三维网状结构。
其孔径大小可根据需要进行调整，常用的G-100型号指的是其平均孔
径大小为100 Å。
在Sephadex G-100柱层析中，样品溶液首先被添加至柱层析
填料中，然后以缓冲液进行洗脱。
由于Sephadex G-100的高
度多孔结构，较大分子无法进入凝胶内部而被排除在外，较小分子则能够进入凝胶内部并逐渐渗透到凝胶颗粒深处。
因此，分离的结果是根据生物分子的大小而实现的，较大分子在柱顶部洗脱，较小分子则需要更长的时间才能出现在柱底部。
通过Sephadex G-100柱层析，可以实现蛋白质的初步纯化和
分子量测定，以及核酸和多肽的分离纯化。
此外，Sephadex
G-100柱层析方法简单、操作方便，并且具有较高的分离效率，因此在生物学和生物化学实验中得到广泛应用。
Sephadex G
Sephadex G-50 分离核黄素和丙种球蛋白一、简介Sephadex是由葡聚糖通过环氧氯丙烷交联形成的三维网状凝胶颗粒。
Sephadex凝胶按交联度不同，用Sephadex G加一个数字来区别型号，数字越小，表示介质交联度越大，分级范围越小，反之亦然。
Sephadex G 葡聚糖凝胶特点：1、经典的葡聚糖和环氧丙烷偶联介质，拥有极高的流速2、多种不同的分离范围，提供了广泛的选择性。
二、实验目的1. 学习和掌握分子筛凝胶层析法的工作原理和基本操作技术。
2 学会使用SephadexG－50分离核黄素与丙种球蛋白三、实验原理凝胶过滤是以被分离物质的分子量差异为基础的一种层析方法。
此类层析的固相载体是具有分子筛性质的凝胶，此次实验使用葡聚糖凝胶过滤。
凝胶过滤的分离过程是在装有多孔物质填料的柱中进行的。
加入交联剂表氯醇交联聚合而成多糖链的三维结构，是多孔性网状结构，凝胶的孔径大小与交联剂的量有关，交联剂多则交联度大，网状结构紧密，孔径小，反之交联剂少则孔径大。
四、实验准备1、实验器材层析柱（玻璃柱）、铁架台2、实验材料样品液：0.05%核黄素(VitB2)与6%丙种球蛋白等量混合置4oC保存。
注意：核黄素需近期生产，并新鲜配制3、实验试剂：(1) 洗脱液(pH7.2 ;0.1mol/L磷酸盐缓冲液）:取0.1mol/L磷酸氢二钠720ml和0.1mol/L 磷酸二氢钠280ml,混匀。
(2)交联葡聚糖凝胶G-50 (Sephadex-G-50)：G后的数字为凝胶吸水值的10倍，G反映凝胶的交联程度、膨胀程度和分布范围五、实验过程1．取直径0.8—1.2cm，长度为25cm的层析柱，在上口箍橡皮筋，出口处装上乳胶管，柱内加注蒸馏水2—3ml，排出乳胶管内的气泡，抬高乳胶管防止柱内的蒸馏水排空。
自顶部缓缓加入经膨胀的葡聚糖G-50悬液。
待底部凝胶沉积2—3cm时将乳胶管放低，仍继续加入上述悬液至凝胶层积至18cm高度即可。
sephadexg200柱层析操作方法
sephadexg200柱层析操作方法摘要：一、Sephadex G200柱层析简介二、实验材料与仪器三、操作步骤1.准备样品2.平衡Sephadex G200 柱3.层析操作4.收集分离后的样品5.分析结果四、注意事项五、总结与展望正文：一、Sephadex G200柱层析简介Sephadex G200柱层析是一种常用的分子筛层析技术，基于分子大小和形状的差异来实现样品组分的分离。
Sephadex G200柱是一种葡聚糖凝胶柱，具有较好的分离效果和较高的分辨率。
本篇文章将详细介绍SephadexG200柱层析的操作方法。
二、实验材料与仪器1.实验材料：Sephadex G200柱、样品溶液、磷酸缓冲液、蒸馏水、移液器、试管等。
2.实验仪器：层析柱、层析泵、紫外检测器、移液器、试管架等。
三、操作步骤1.准备样品（1）制备样品溶液：将待分离样品溶解在适当的溶剂中，浓度可根据实验需求调整。
（2）稀释样品：将样品溶液适当稀释，以满足层析柱的进样要求。
2.平衡Sephadex G200柱（1）将Sephadex G200柱连接到层析泵上，加入磷酸缓冲液，进行预洗。
（2）调节层析泵流速，通常为1-2 mL/min。
3.层析操作（1）将稀释后的样品加载到Sephadex G200柱上，启动层析泵，开始进样。
（2）根据样品分离情况，适时调整磷酸缓冲液的流速和浓度。
（3）注意观察紫外检测器信号，了解层析进程。
4.收集分离后的样品（1）层析完成后，关闭层析泵，取出Sephadex G200柱。
（2）将分离后的样品依次收集到试管中，标记试管内容。
5.分析结果（1）对收集的样品进行紫外光谱分析，观察各组分的分离情况。
（2）如有需要，可对样品进行进一步纯化处理。
四、注意事项1.实验过程中要严格控制层析条件，如流速、缓冲液浓度等，以保证分离效果。
2.平衡Sephadex G200柱时，要充分清洗，避免残留杂质影响层析效果。
葡聚糖凝胶柱使用及注意事项(包含各种溶剂的溶胀系数)
葡聚糖凝胶柱使用及注意事项1 Sephadex G型葡聚糖凝胶只适合在水中使用，Sephadex G-25羟丙化后就是Sephadex LH-20。
其既有分子筛作用，在由极性及非极性溶剂组成的溶剂中还有反相层析效果。
虽然价位很高，但由于性能颇佳，可再生利用，所以倍受亲睐。
此外上柱样品损失很少，对处理小样品较好，这也是我们实验室常用的原因之一。
2 Sephadex LH20 的原理。
Sephadex LH20的分离原理主要有两方面：以凝胶过滤作用为主，兼具反相分配的作用（在反相溶剂中）。
因为凝胶过滤作用，所以大分子的化合物保留弱，先被洗脱下来，小分子的化合物保留强，最后出柱。
如果使用反相溶剂洗脱， Sephadex LH20对化合物还起反相分配的作用，所以极性大的化合物保留弱，先被洗脱下来，极性小的化合物保留强，后出柱。
如果使用正相溶剂洗脱，这主要靠凝胶过滤作用来分离。
3 Sephadex LH20 洗脱溶剂。
看完第2点后，就应该清楚Sephadex LH20 洗脱溶剂因分为两类：反相和正相两种。
用得最多的是反相溶剂洗脱，以甲醇－－水系统最为常见，先用水，逐渐增加甲醇比例，最后用100％甲醇冲柱。
正相系统以氯仿－－甲醇最为常见，先用50％氯仿－－甲醇，逐渐增加甲醇比例，最后用100％甲醇冲柱。
4 Sephadex LH20 样品的处理和洗脱溶剂的选择。
如果样品极性大，这选用反相溶剂洗脱（甲醇－－水），样品用最少体积的甲醇－－水（尽可能甲醇少一些）溶解，过滤后，湿法上样（一定要滤喔！要是把Sephadex LH20 堵啦，就得将Sephadex LH20 的柱头部分弃去，很心痛呀）。
如果样品极性小，这选用正相溶剂洗脱（氯仿－－甲醇），样品用最少体积的氯仿－－甲醇溶解，过滤后，湿法上样。
5 Sephadex LH-20的步骤。
(1) 选择条件：梯度洗脱在Sephadex使用中并不象在正相柱层析中那么重要。
凝胶的种类及性质
凝胶的种类及性质（一）交联葡聚糖凝胶（Sephadex）⑴Sephadex G交联葡聚糖的商品名为Sephndex，不同规格型号的葡聚糖用英文字母G表示，G后面的阿拉伯数为凝胶得水值的10倍。
例如，G-25为每克凝胶膨胀时吸水2.5克，同样G-200克每克千胶吸水20克。
交联葡聚糖凝胶的种类有G-10，G-15，G-25，G-50，G-75，G-100，G-150，和G-200。
因此，“G”反映，凝胶的交联程度，膨胀程度及分部范围。
⑵Sephadex LH-20，是─Sephadex G-25的羧丙基衍生物，能溶于水及亲脂溶剂，用于分离不溶于水的物质。
（二）琼脂糖凝胶：商品名很多，常见的有，Sepharose（瑞典，pharmacia ），Bio-Gel-A（美国Bio-Rad）等。
琼脂糖凝胶是依靠糖链之间的次级链如氢键来维持网状结构，网状结构的疏密依靠琼脂糖的浓度。
一般情况下，它的结构是稳定的，可以在许多条件下使用（如水，pH4-9范围内的盐溶液）。
琼脂糖凝胶在40℃以上开始融化，也不能高压消毒，可用化学灭菌活处理。
（三）聚丙烯酰胺凝胶：是一种人工合成凝胶，是以丙烯酰胺为单位，由甲叉双丙烯酰胺交联成的，经干燥粉碎或加工成形制成粒状，控制交联剂的用量可制成各种型号的凝胶。
交联剂越多，孔隙越小。
聚丙烯酰胺凝胶的商品为生物胶－P （Bio-Gel P），由美国Bio-Rod厂生产，型号很多，从P-2至P-300共10种，P 后面的数字再乘1000就相当于该凝胶的排阻限度。
（四）聚苯乙烯凝胶商品为Styrogel ，具有大网孔结构，可用于分离分子量1600到40，000，000的生物大分子，适用于有机多聚物，分子量测定和脂溶性天然物的分级，凝胶机械强度好，洗脱剂可用甲基亚砜。
三、实验技术（一）层析柱层析柱是凝胶层析技术中的主体，一般用玻璃管或有机玻璃管。
层析柱的直径大小不影响分离度，样品用量大，可加大柱的直径，一般制备用凝胶柱，直径大于2厘米，但在加样时应将样品均匀分布于凝胶柱床面上。
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Sephadex G-50 分离核黄素和丙种球蛋白
一、简介
Sephadex是由葡聚糖通过环氧氯丙烷交联形成的三维网状凝胶颗粒。
Sephadex凝胶按交联度不同，用Sephadex G加一个数字来区别型号，数字越小，表示介质交联度越大，分级范围越小，反之亦然。
Sephadex G 葡聚糖凝胶特点：
1、经典的葡聚糖和环氧丙烷偶联介质，拥有极高的流速
2、多种不同的分离范围，提供了广泛的选择性。
二、实验目的
1. 学习和掌握分子筛凝胶层析法的工作原理和基本操作技术。
2 学会使用SephadexG－50分离核黄素与丙种球蛋白
三、实验原理
凝胶过滤是以被分离物质的分子量差异为基础的一种层析方法。
此类层析的固相载体是具有分子筛性质的凝胶，此次实验使用葡聚糖凝胶过滤。
凝胶过滤的分离过程是在装有多孔物质填料的柱中进行的。
加入交联剂表氯醇交联聚合而成多糖链的三维结构，是多孔性网状结构，凝胶的孔径大小与交联剂的量有关，交联剂多则交联度大，网状结构紧密，孔径小，反之交联剂少则孔径大。
四、实验准备
1、实验器材
层析柱（玻璃柱）、铁架台
2、实验材料
样品液：0.05%核黄素(VitB2)与6%丙种球蛋白等量混合置4oC保存。
注意：核黄素需近期生产，并新鲜配制
3、实验试剂：
(1) 洗脱液(pH7.2 ;0.1mol/L磷酸盐缓冲液）:取0.1mol/L磷酸氢二钠720ml和0.1mol/L 磷酸二氢钠280ml,混匀。
(2)交联葡聚糖凝胶G-50 (Sephadex-G-50)：G后的数字为凝胶吸水值的10倍，G反映凝胶的交联程度、膨胀程度和分布范围
五、实验过程
1．取直径0.8—1.2cm，长度为25cm的层析柱，在上口箍橡皮筋，出口处装上乳胶管，柱内加注蒸馏水2—3ml，排出乳胶管内的气泡，抬高乳胶管防止柱内的蒸馏水排空。
自顶部缓缓加入经膨胀的葡聚糖G-50悬液。
待底部凝胶沉积2—3cm时将乳胶管放低，仍继续加入上述悬液至凝胶层积至18cm高度即可。
操作过程中，应防止气泡与分层现象的发生。
让凝胶自然下沉，使表层平整。
待凝胶柱层稳定后，以洗脱液(蒸馏水)洗柱5分钟，调节流速至4滴每分钟。
2. 待蒸馏水流至柱面平时，(注意，不可使柱面干掉)，马上沿层析柱内壁小心加4滴样品于柱床面，注意尽量不使床面搅动，马上加入1—2倍于样晶体积的蒸馏水，反复两次后，可加大量蒸馏水连续洗脱，这样可以使样品稀释最小。
3．样品一旦加入后马上用量筒或刻度离心管收集流出液，柱床上不断加蒸馏水，待红色(血红蛋白)流出一半时记录毫升数，此为血红蛋白Ve也为Vo。
继续收集流出液，待黄色(核黄素)流出一半时记录体积，此为核黄素Ve。
4．测出柱床体积(Vt)，外水体积(Vo)内水体积(Vi)，及核黄素的洗脱体积(Ve)。
并计算出Hb 及鱼精蛋的分配系数(Kd)。
5．用蒸馏水反复加在柱床上面，洗柱10分钟然后将柱内凝胶回收入凝胶瓶内。
六、注意事项
1．在收集过程中，要保持流出液的流速稳
定，洗脱速度控制在4滴/min。
2．加样时，保持凝胶上平面不被搅动。
3．液面要始终高于凝胶上平面，否则会导致干柱
4．装柱避免出现断层、气泡。