细菌形态观察和染色实验2009.10.19
试验三细菌的形态观察与革兰氏染色
实验三细菌的形态观察与革兰氏染色
•一、实验目的
•1．掌握革兰氏染色的原理和操作技术。
•2．掌握油镜的使用方法。
•3．了解细菌的个体形态和菌落培养特征。
•二实验原理
•1．革兰氏染色的原理
•细胞壁类脂质、肽聚糖含量不同。
•2．革兰氏染色的操作步骤和关键环节
•涂片固定染色（草酸铵结晶紫，1min）媒染（路哥氏碘液，1min）脱色（95%乙醇，30s）水洗、吸干复染（0.5%的番红，10—30秒）干燥
油镜镜检观察
3．细菌菌落特征的描述
大小、形状、表面状态、隆起形状、边缘状况、表面光泽、质地、颜色、透明度
•三、实验材料
•菌种：大肠杆菌(E.col i)，枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，八叠球菌(Sarcina sp.)
•试剂：结晶紫、碘液、95%乙醇、蕃红等
•工具：显微镜、酒精灯等
•四实验内容
•(1) 菌落形态：观察比较四种菌在平板划线中的单菌落，•并列表说明。
•(2) 穿刺培养观察：观察每种菌延穿刺线生长的特征，•并列表说明
•(3) 液体培养特征：菌环、或菌膜、或菌岛等，培养液底部
•是否有沉淀，培养液的颜色，培养液是否均匀浑浊等。
•比较四种菌的差异，并列表说明。
•本次教学总结：
•革兰氏染色有非常重要的三个步骤: 固定技术及染色时间的掌握
•思考题：
•细菌群体形态与细菌结构之间的对应关系。
细菌形态观察实验报告
细菌形态观察实验报告细菌是微生物世界中的重要组成部分，也是一种常见的微生物。
在本次实验中，我们选择了几种常见的细菌进行形态观察，并通过显微镜观察它们的形态特征和结构。
实验过程中，我们使用了一台光学显微镜。
首先，我们准备了好培养基和适宜的环境条件，养殖了细菌。
在实验时，我们从培养皿中的细菌群落中选取一小部分细菌样本。
为了观察细菌的形态特征，我们进行了涂片制备。
将一个玻璃载玻片放于烧杯中，加入一滴无菌的生理盐水。
然后，用无菌链取适量的细菌样本，均匀地涂抹于载玻片上。
接下来，我们使用热固定法固定了细菌样本。
将涂片置于一个耐热玻璃棒或镊子的两个小夹具之间，将其浸入热水中，烧热片上半部分。
注意不要使玻片变色或裂开。
热解的时间一般约为几秒至数十秒，直到载玻片表面无液滴残留。
固定后，我们使用乔治-吉姆萨染色法染色。
将涂片上半部分烧热的玻片置于染色剂中，使玻片平整且染色液接触整个涂片表面，保持片面湿润。
染色时间控制在1-2分钟即可。
染色完成后，我们将染色的载玻片放在显微镜架的玻璃片上，调整好显微镜的倍率和焦距。
逐个观察每个细菌样本，并在显微镜的视野内找到合适的观察位置。
在观察细菌形态时，我们注意到细菌的形态多样。
有些呈球形，称之为球菌；有些呈棒状，称之为杆菌；还有一些呈弯曲形状，称之为弯曲菌。
除了这些常见的形态外，我们还观察到了其他的特殊形态，如链状、丝状等形状。
在细菌形态中，我们还注意到了一些细菌的结构特征。
例如，许多细菌具有细胞壁，它们可以保护细菌免受外界环境的影响。
另外，一些细菌还有着尾鞭毛或鞭毛，它们可以帮助细菌在液体中移动。
此外，细菌还具有胞内器官，如核糖体和细胞质，这些器官起着重要的生物学功能。
通过这次细菌形态观察实验，我们对细菌的形态特征和结构有了更深入的了解。
通过显微镜的观察，我们不仅可以看到细菌的形态，还可以观察到它们的微观结构。
这对于我们研究细菌生物学特性以及疾病治疗等方面具有重要的意义。
细菌是微生物界中不可忽视的一部分，它们在自然界和人类生活中起着重要的作用。
细菌的形态结构观察实验报告
细菌的形态结构观察实验报告实验五微生物菌落形态观察实验五微生物菌落形态观察1、本次实验的目的和要求（1）观察细菌、酵母菌、霉菌三大类微生物具体菌落的形态特征。
（2）总结三类微生物菌落的一般特征并能识别。
（特征描述：形状、大小、颜色、边缘、隆起、光泽、质地等。
）2、实验内容或原理菌落：单个菌体在固体平面培养基上生长繁殖形成的肉眼可见的群体。
区分和识别各类微生物可从菌落形态（群体形态）和细胞形态（个体形态）两方面进行，菌落形态是无数细胞形态的集中反映，因此每一大类微生物都有其一定的菌落特征，可通过这些特征差异区分和识别。
特征描述：形状、大小、颜色、边缘、隆起、光泽、质地等。
细菌菌落特征：凝胶状、表面较光滑、湿润、与培养基结合不紧密，易挑取，正反颜色一致。
酵母菌菌落特征（与细菌相似) ：比细菌大而厚，不透明，表面光滑、湿润、粘稠，易用针挑起。
多呈乳白色，少数呈红色。
霉菌的菌落特征：比细菌菌落大，由菌丝组成疏松的绒毛状、絮状或蜘蛛网状，有的无固定大小，延至整个培养基中，产色素，使菌落显色。
3、需用的仪器和试剂（1）培养基：PDA培养基、牛肉膏蛋白胨培养基、YEPD 培养基（2）菌落观察：（a）霉菌：黑曲霉、黑根霉、青霉、犁头霉、毛霉（b）酵母菌：酿酒酵母菌（c）细菌：大肠杆菌4、实验步骤1.细菌菌落形态观察包括：菌落大小、颜色、形状（圆形、不规则、假根形）、边缘（整齐光滑、叶状、波浪状、锯齿状、丝状）、隆起（扁平、低凸起、高凸起）、透明度（透明、半透明、不透明）、光泽（金属光泽、油脂性光泽）、质地（油脂状、膜状、粘稠状）、表面状态（光滑、褶皱、颗粒状、龟裂状）等。
2.大多数酵母菌的菌落与细菌相似，呈圆形，湿润有粘性，不透明，表面光滑，有油脂光泽。
多数为白色或乳白色，少数为红色，培养时间长了，颜色会变暗。
与培养基结合不紧，易被挑起。
质地粘稠，边缘皱褶状。
3.霉菌由分枝状菌丝组成，菌丝粗而长，形成菌落疏松，菌丝有绒毛状、棉絮状、蜘蛛网状，菌落很大是细菌的几十倍，表面蔓延，有多种颜色，菌落正反面颜色多有不同。
实验二细菌的形态观察（简单染色法和革兰氏染色法）
实验二细菌的形态观察（简单染色法和革兰氏染色法）实验二细菌的形态观察（简单染色法和革兰氏染色法）一目的要求1．了解简单染色法和革兰氏染色法的基本原理，熟练掌握细菌的涂片与革兰氏染色技术。
2．初步学习细菌细胞特殊结构的染色方法，并观察细菌的特殊结构。
3．观察细菌的菌落平板，学会识别大肠杆菌、枯草杆菌和金黄色葡萄球菌的菌落特征，学会初步鉴别微生物的种类的方法。
二实验内容与原理1．简单染色法原理简单染色法是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法，一般用于观察个体形态与细菌排列。
由于细菌在中性、碱性或弱酸性环境中带负电荷，所以通常采用一种碱性染料如美蓝、碱性复红、结晶紫对细菌进行染色。
美蓝是美蓝的盐酸盐，可解离为带正电荷的美蓝，很容易与细菌结合使菌体着色。
染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比，在显微镜下更易于识别。
简单染色过程：涂片→固定→染色→水洗→干燥→镜检涂片→ 固定→ 干燥→ 水洗、吸干→镜检→染色 1mim2．革兰氏染色法原理革兰氏染色法是由丹麦医生 Hans Christian Gram于 1884 年创立。
它是细菌学中很重要的鉴别染色法，因为通过此法染色，可将细菌鉴别为革兰氏阳性菌（G + ）和革兰氏阴性菌（G －）两大类。
革兰氏染色过程：涂片→固定→结晶紫初染（1min）→碘液媒染（1min）→乙醇脱色（95% 酒精,30s）→番红复染（30 秒）→干燥→镜检阳性菌：紫色阴性菌：红色革兰氏染色要点：（1）初染：用结晶紫，染色 1 分钟，水洗。
（2）媒染：加碘液覆盖 1 分钟后水洗。
（3）脱色：连续滴加 95％乙醇，约 30 秒，直到滴下的乙醇无色为止，水洗。
（4）复染：加番红染色 1 分钟，水洗。
（5）干燥。
（6）镜检：先低倍镜，后油镜观察。
注意：涂片要薄而均匀，脱色程度要控制得当。
学生做大肠杆菌，金黄色葡萄球菌，枯草杆菌的革兰氏染色。
观察细菌个体形态与排列，绘图。
3．芽孢染色原理细菌的芽孢壁比营养细胞壁厚，致密，透性差，着色和脱色都比营养细胞困难，故一般采用一种碱性染料并在微火上加热，或延长染色时间，使菌体和芽孢都染上颜色以后水洗或稀酸冲去菌体的染料，芽孢仍保留颜色，再用另一种对比鲜明的染料使菌体着色，如此可明显区分芽孢和营养体结构。
实验三 细菌的简单染色与形态观察
实验三细菌的简单染色与形态观察实验三细菌的简单染色与形态观察实验三细菌的简单染色和形态学观察一、目的要求：1.了解并掌握简单细菌染色的机理和技术；2.学会用油镜观察细菌细胞的形态。
2、实验材料：1株：枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌aureus等培养好的细菌斜面；2.染料：结晶紫3.其他：显微镜、玻片、接种环、酒精灯、无菌水、雪松油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸。
3、基本原则：染色是细菌学上一个重要而基本的操作技术。
因细菌细胞小而且透明，当把细菌悬浮于水滴内，用光学显微镜时，由于菌体和背景没有显著的明暗差，因而难以看清它们的形态，更不易识别其结构，所以，用普通光学显微镜观察细菌时，往往要先将细菌进行染色，借助于颜色的反衬作用，可以更清楚地观察到细菌的形状及其细胞结构。
用于微生物染色的染料是苯环上带有显色基团和辅助基团的有机化合物。
显色基团决定了化合物的颜色特征，助色基团决定了化合物的成盐性。
染料通常是盐，分为酸性染料和碱性染料。
在微生物染色中，碱性染料更常用，如亚甲基蓝、结晶紫、碱性红、砂黄、孔雀绿等。
简单染色是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法。
此法操作简便，适于菌体一般形状和细菌排列的观察。
常用碱性染料进行简单染色，这是因为：在中性、碱性和弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，而碱性染料电离后带有正电荷，很容易与菌体结合使细菌着色。
通过本实验，我们可以学习和掌握细菌染色技术，了解细菌细胞的形态，巩固课堂知识，增加感性知识。
四、方法与步骤：（一）制片1.涂片：在洁净无脂的载玻片中央滴一小滴蒸馏水，用接种环以无菌操作从枯草芽孢杆菌从斜面上取少量真菌苔藓，放入水滴中，搅拌均匀，涂膜，涂膜面积约1~1.5cm2。
2.干燥：室温下自然干燥3.固定：手执载玻片一端，使涂菌一面向上，通过火焰2~3次。
此操作也称热固定，其目其主要目的是使细胞质凝固，以固定细胞形状，并使其牢固地附着在载玻片上。
4.染色：将涂片放在水平位置，滴下结晶紫染色液（最好只覆盖涂片），染色1分钟左右。
细菌的形态检查实验报告
细菌的形态检查实验报告
《细菌的形态检查实验报告》
在生物学实验室中，细菌的形态检查是一项重要的实验，它可以帮助科学家们
更好地了解细菌的结构和特征，从而为疾病的预防和治疗提供重要的参考依据。
在这个实验中，我们对不同类型的细菌进行了形态检查，并取得了一些有趣的
发现。
首先，我们从不同的环境样本中分离出了一些细菌，并在琼脂平板上进行了培养。
经过一段时间的培养，我们观察到了不同形态的细菌，有的呈现出球状，
有的呈现出杆状，还有的呈现出螺旋状。
这些不同形态的细菌为我们提供了很
多有价值的信息。
接下来，我们对这些细菌进行了染色处理，使用了革兰氏染色和折射染色两种
方法。
通过这些染色方法，我们可以更清晰地观察到细菌的细胞壁结构和形态
特征。
我们发现，一些细菌在革兰氏染色后呈现出紫色或蓝色，而在折射染色
后呈现出粉红色或红色。
这些染色结果为我们提供了更多的信息，帮助我们进
一步了解细菌的特性。
最后，我们利用显微镜对这些细菌进行了观察。
通过放大镜头，我们可以清晰
地看到细菌的形态特征，包括细胞壁、细胞质和细胞核等。
我们发现，不同形
态的细菌在显微镜下呈现出不同的特征，这些特征有助于我们对细菌进行分类
和鉴定。
通过这次形态检查实验，我们对细菌的形态特征有了更深入的了解。
这些了解
为我们进一步研究细菌的生物学特性和病原机制提供了重要的基础，也为我们
今后的科研工作提供了宝贵的参考。
希望通过我们的努力，能够为人类健康和
医学科研做出更大的贡献。
细菌形态观察实验报告
一、实验目的1. 掌握显微镜油镜的使用方法。
2. 观察细菌的基本形态结构，如细胞壁、细胞膜、细胞质、核质体等。
3. 了解细菌的特殊结构，如鞭毛、荚膜、芽孢等。
4. 培养对细菌形态结构的识别能力。
二、实验原理细菌是单细胞微生物，具有多种形态结构。
通过显微镜观察，可以了解细菌的基本形态和特殊结构，为细菌的分类、鉴定和致病性研究提供依据。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：细菌样本、革兰氏染色液、芽孢染色液、水浸片、盖玻片、载玻片等。
2. 仪器：光学显微镜、酒精灯、载物台、切片刀、镊子等。
四、实验步骤1. 观察细菌样本（1）将细菌样本滴在载玻片上，用盖玻片封口。
（2）在显微镜下观察细菌的基本形态结构，如细胞壁、细胞膜、细胞质、核质体等。
2. 革兰氏染色（1）将革兰氏染色液滴在细菌样本上，用酒精灯加热。
（2）观察染色后的细菌，判断其革兰氏分类。
3. 芽孢染色（1）将芽孢染色液滴在细菌样本上，用酒精灯加热。
（2）观察染色后的细菌，判断其芽孢存在与否。
4. 观察细菌特殊结构（1）观察细菌是否有鞭毛、荚膜等特殊结构。
（2）通过水浸片观察细菌的运动。
五、实验结果与分析1. 细菌样本的基本形态结构（1）观察到的细菌具有细胞壁、细胞膜、细胞质、核质体等基本结构。
（2）部分细菌具有鞭毛、荚膜等特殊结构。
2. 革兰氏染色结果（1）部分细菌呈现革兰氏阳性，细胞壁较厚，不易着色。
（2）部分细菌呈现革兰氏阴性，细胞壁较薄，易着色。
3. 芽孢染色结果（1）部分细菌存在芽孢，呈圆形或椭圆形。
（2）部分细菌无芽孢。
4. 细菌特殊结构观察结果（1）部分细菌具有鞭毛，呈螺旋状。
（2）部分细菌具有荚膜，呈透明状。
六、实验总结1. 通过本次实验，掌握了显微镜油镜的使用方法。
2. 观察了细菌的基本形态结构和特殊结构，了解了细菌的生物学特性。
3. 培养了对细菌形态结构的识别能力，为今后的学习和研究奠定了基础。
七、注意事项1. 使用显微镜时，注意调节光圈和焦距，确保观察清晰。
实训四 细菌的染色和形态观察
实训四细菌的染色与形态观察一、实验目的1、学习细菌涂片技术和无菌操作技术；2、掌握细菌的简单染色法，初步认识细菌的形态特征；3、了解革兰氏染色的原理，学习并掌握革兰氏染色的方法；4、进一步熟练显微镜的使用。
二、实验原理细菌个体微小，无色且较透明，折射率低，在普通光学显微镜下不易识别，因此必须借助染色法使菌体着色，将其折射率增大，使其与背景形成明显的色差，在显微镜下用油镜观察，可清楚观察到细菌的一般形态结构及特殊结构。
根据细菌个体形态观察的不同要求，可用简单染色法或革兰氏染色法进行染色观察。
（一）简单染色法简单染色法是最基本的染色方法，是利用单一染料进行细菌染色的方法。
此法操作简便，适于菌体一般形状和细菌排列的观察，但不能辨别细胞的构造。
常用碱性染料进行简单染色，因为在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，而碱性染料在电离时，其分子的染色部分带正电荷（酸性染料电离时，其分子的染色部分带负电荷），因此碱性染料的染色部分很容易与细菌结合使其着色。
经染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比，在显微镜下易于识别。
常用的简单染色染料有草酸铵结晶紫染液、吕氏碱性美蓝（亚甲基蓝）、石炭酸复红染液等。
（二）革兰氏染色法革兰氏染色法是细菌学上最重要的鉴别染色法。
由于细菌细胞壁的化学组成和结构不同，经革兰氏染色后，呈现不同的染色反应，可将所有细菌区分为两大类：革兰氏阳性细菌（染色反应呈蓝紫色），用G+表示；革兰氏阴性细菌（染色反应呈红色），用G-表示。
革兰氏阳性细菌的细胞壁主要是由肽聚糖形成的网状结构组成的，脂类含量低。
在染色过程中，用乙醇处理时，由于脱水而引起网状结构中的孔径变小，通透性降低，使结晶紫-碘复合物被保留在细胞内而不易脱色，因此呈现蓝紫色。
革兰氏阴性细菌的细胞壁中肽聚糖含量低，而脂类物质含量高，脂溶剂乙醇溶解脂类物质，使得细胞壁的通透性增加，结晶紫-碘复合物易被乙醇抽出而脱色，然后又被染上了复染液（番红）的颜色，因此呈现红色。
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取菌，以免高温使菌体变形；
（3）必须等涂片干燥后加热固定，避免加热时间
过长，否则细胞会破裂或变形。
革兰氏染色步骤：
1、制片：取活跃生长期菌种按常规方法涂片
（不宜过厚）、干燥和固定；
2、初染：滴加草酸铵结晶紫染液覆盖涂菌部
位，染色1~2min后倾去染液，水洗至流出水 无色；（建议染液不要滴加过多，污染玻片， 不宜观察结果）
实验二
细菌形态观察和染色实验（革兰氏染色）
一、目的要求
学习微生物涂片、染色的基本技术。 初步认识细菌的形态特征。 巩固显微镜（油镜）的使用方法和无菌操 作技术。 学习并初步掌握革兰氏染色法。 了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类 鉴定中的重要性。
二、基本原理
革兰氏染色法的基本步骤是,先用初染剂结晶
革兰氏染色步骤：
3、媒染：先用卢戈氏碘液冲去残留水迹，再
用碘液覆盖1min，倾去碘液，水洗至流出水 无色；
4、脱色：将玻片上残留水用吸水纸吸去，在
白色背景下用滴管流加95%乙醇脱色（一般 20~30s），当流出液无色时立即用水洗去乙 醇；（关键）
革兰氏染色步骤：
5、复染：将玻片上残留水用吸水纸吸去，用
和组成不同决定的。实际上，当用结晶紫初
染后，像简单染色法一样，所有细菌都被染
成初染剂的蓝紫色。碘作为媒染剂，它能与
结晶紫结合成结晶紫—碘的复合物，从而增 强了染料与细菌的结合力。
当用脱色剂处理时，两类细菌的脱色效 果是不同的，革兰氏阳性细菌的细胞壁主要 由肽聚糖形成的网状结构组成，壁厚、类脂 质含量低，用乙醇（或丙酮）脱色时细胞壁 脱水、使肽聚糖层的网状结构孔径缩小，透 性降低，从而使结晶紫—碘的复合物不易被 洗脱而保留在细胞内，经脱色和复染后仍保 留初染剂的蓝紫色。
番红复染液染色2min，水洗，吸去残水晾干；
6、镜检；（注意：玻片放反则改变物镜聚焦
距离，造成观察不便）
7、混合涂片染色：在载玻片同一区域用大肠
杆菌和金黄色葡萄球菌混合涂片，其他步骤 同上。（建议每个同学制两个片）
革兰氏染色步骤：
革 兰 氏 染 色 2 革兰氏染色1
大肠杆菌
金黄色葡萄球菌 枯草芽孢杆菌
四、操作步骤
1、细菌制片（演示） （1）涂片 （2）干燥 （3）固定
注意： 取用接种环一定要在火焰上时取菌量要适宜要涂抹均匀，避免贪多
造成菌体堆积而难以看清细胞个体形态。同时也应 避免取菌量太少而难以在显微镜视野中找到细胞；
（2）无菌操作取菌时，一定要等接种环冷却后再
革 兰 氏 染 色 过 程
紫色进行染色，再用碘液媒染，然后用乙醇 （或丙酮）脱色，最后用复染剂（如番红） 复染。经此方法染色后，细胞保留初染剂蓝 紫色的细菌为革兰氏阳性菌；如果细胞中初 染剂被脱色剂洗脱而使细菌染上复染剂的颜 色（红色），该菌属于革兰氏阴性菌。
革兰氏染色法将细菌分为革兰氏阳性和
革兰氏阴性，是由这两类细菌细胞壁的结构
学习和掌握革兰氏染色的意义
G+和G-细菌的细胞壁结构和成分间的显著 差别不仅反映在染色反应上，更反映一系列形 态、构造、化学组分、生理生化和致病性等的 差别上（见理论教材P16 表1-3），从而对生命 科学的基础理论研究和实际应用产生了巨大的 影响。
三、实验器材
1、菌种：大肠杆菌16h牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培 养物，金黄色葡萄球菌16h牛肉膏蛋白胨琼脂斜 面培养物，枯草芽胞杆菌16h牛肉膏蛋白胨琼脂 斜面培养物； 2、溶液和试剂：革兰氏染液，草酸铵结晶紫染液， 卢戈氏（Lugol）碘液，95%乙醇，番红复染液 等。 3、仪器和其他用品：酒精灯，载玻片，显微镜， 双层瓶（内装香柏油和二甲苯），擦镜纸，接种 环，试管架，镊子，载玻片夹子，载玻片支架， 滤纸，滴管和无菌生理盐水等。
革兰氏阴性菌则不同，由于其细胞壁肽 聚糖层较薄、类脂含量高，所以当脱色处理 时，类脂质被乙醇（或丙酮）溶解，细胞壁 透性增大，使结晶紫—碘的复合物比较容易 洗脱出来，用复染剂复染后，细胞被染上复 染剂的红色。 革兰氏染色反应是细菌重要的鉴别特征，为 保证染色结果的重要性，采用规范的染色方 法是十分必要的。本实验将介绍被普遍采用 的Hucker氏改良的革兰氏染色法。