国内外E-test法万古霉素药敏条临床研究
解读万古霉素临床应用研究

解读万古霉素临床应用研究万古霉素,一种广谱抗生素,自20世纪80年代问世以来,在临床治疗中发挥着举足轻重的作用。
其作用机理主要是通过抑制细菌细胞壁的合成,从而达到杀菌的目的。
万古霉素对多种革兰氏阳性菌具有强大的杀菌作用,特别是对甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(MRSA)和甲氧西林耐药表皮葡萄球菌(MRSE)等难以治疗的细菌感染,具有显著疗效。
在临床应用研究中,万古霉素主要用于治疗严重感染,如皮肤和软组织感染、呼吸道感染、泌尿系统感染、消化系统感染等。
近年来,随着万古霉素的研究不断深入,其临床应用范围也在不断扩大。
例如,万古霉素可用于心内膜炎的治疗,降低感染性心内膜炎的复发率;在烧伤感染的治疗中,万古霉素能有效控制感染,降低死亡率;万古霉素还被用于治疗耐药革兰氏阴性菌感染,如肠杆菌属、克雷白菌属等。
然而,随着万古霉素的广泛应用,其耐药问题日益凸显。
研究发现,万古霉素的耐药机制主要包括细菌产生万古霉素灭活酶、改变药物靶标、降低药物进入细胞等。
因此,合理使用万古霉素,避免不必要的过度使用,是延缓耐药问题的重要措施。
在临床使用过程中,万古霉素的安全性也受到广泛关注。
尽管万古霉素总体安全性较高,但仍有部分患者可能出现不良反应,如过敏反应、肝功能异常、肾功能损害等。
因此,在使用万古霉素时,需注意监测患者的安全性指标,特别是对药物过敏史、肝肾功能异常的患者应谨慎使用。
万古霉素作为一种重要的抗生素,在临床应用研究中展现出广泛的疗效。
然而,面对耐药问题的挑战,我们需要不断深入研究,寻找新的解决策略,以确保万古霉素在临床治疗中的有效性和安全性。
同时,合理使用抗生素,遵循抗生素使用指南,是每一位临床医生和药师的责任。
在未来的临床应用研究中,我们期待万古霉素在治疗更多感染疾病方面发挥更大的作用。
在临床应用研究中,万古霉素主要用于治疗严重感染,如皮肤和软组织感染、呼吸道感染、泌尿系统感染、消化系统感染等。
近年来,随着万古霉素的研究不断深入,其临床应用范围也在不断扩大。
万古霉素临床应用中国专家共识2011

万古霉素临床应用中国专家共识(2011版)万古霉素(vancomycin)已问世半个多世纪了,随着其临床应用的日益广泛,人们对该药的认识也日益加深。
近年来在医院感染中,革兰阳性菌的比例呈上升趋势,特别是耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)的感染更加引人瞩目,其治疗也颇为棘手。
众所周知,万古霉素至今依然是治疗MRS的首选药物。
但是如何规范合理地应用万古霉素,如何用新近获得的临床微生物学、临床药理学及相关的循证医学证据来指导治疗,依然存在较多的问题。
为此,由《中国新药与临床杂志》发起,组织国内临床微生物学、临床药学和各临床相关学科的专家共同起草和制定《万古霉素临床应用中国专家共识》,以供临床医师、药师在临床工作中参考。
本共识共包括药学、抗菌作用与药敏检测及临床应用三大部分。
药学部分主要阐述了本品药学特点、注射用溶液配制、配制各溶液稳定性、药物PK/PD、肾功能不全剂量调整以及药物相互作用;抗菌作用与药敏检测部分介绍了本品抗菌作用机制、药敏检测及其临床意义、折点改变及其影响以及当前细菌敏感检测状况;临床应用部分包括在呼吸、血液、中枢神经系统,骨关节感染,心内膜炎,皮肤软组织感染以及在新生儿耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)感染及儿童患者在以上各系统感染中应用方法与经验。
药学药学特点美国礼来公司1956年天然产品筛选计划从印度尼西亚婆罗州土壤中发现了一种新放线菌“东方链霉菌”产生的活性成分,其杀菌活性强,几乎可杀灭所有葡萄球菌,且基本不诱导耐药。
该活性成分最初命名为化合物05865,后定名为万古霉素。
1958年美国FDA批准了其临床使用。
1 化学结构万古霉素为三环糖肽类抗生素,结构复杂,含有一个七肽核心分子式为C66N75C12N9024,分子质量为148 5.74。
现临床应用为高效液相层析技术纯化产品——盐酸万古霉素,在pH3~5酸性环境中本品稳定,其万古霉素B含量不低于95%,发酵中其他杂质<4%,为乳白色冻干粉针,溶解后为透明溶液。
临床金黄色葡萄球菌感染的分布及耐药性分析

临床金黄色葡萄球菌感染的分布及耐药性分析发表时间:2014-03-06T16:37:57.467Z 来源:《医药前沿》2013年第35期供稿作者:甘连乐[导读] 金黄色葡萄球菌可产生多种外毒素及侵袭性酶,是医院及社区获得性感染的主要致病菌之一,可引起各系统严重的感染。
甘连乐(广西宁明县人民医院检验科广西宁明 532500)【摘要】目的:了解本院近5年临床金黄色葡萄球菌感染的分布和耐药性情况,为临床合理选用抗菌药物提供依据。
方法:采用常规方法进行微生物鉴定及K-B法和Etest法进行药物敏感性试验。
药敏结果使用WHONET5.6软件进行统计分析。
结果:近5年共收集到316株金黄色葡萄球菌,住院患者占287株(88.6%),来自门诊患者占29株(11.4%)。
其中MRSA占192株(60.8%)。
住院分离菌株主要来源科室为ICU占32.3%(102/316),其次是神经外科、骨外科和呼吸内科,分别占26.9%(85/316)、18.4%(58/316)和10.1%(32/316)。
主要标本来源为呼吸道标本(痰、灌洗液)占48.1%(152/316),伤口、脓液等各类分泌物占36.7%(116/316)。
MRSA多重耐药性严重,对多数所测药物的耐药率高于70%,MSSA对多数药物的耐药率低于40%。
本次调未发现利奈唑胺耐药和万古霉素不敏感金黄色葡萄球菌。
结论:利奈唑胺和万古霉素对金黄色葡萄球菌具有很强的抗菌活性;应重视微生物标本的送检和MRSA的主动监测,临床应加强抗菌药物使用管理。
【关键词】金黄色葡萄球菌抗菌药物分布耐药性【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752(2013)35-0222-02金黄色葡萄球菌可产生多种外毒素及侵袭性酶,是医院及社区获得性感染的主要致病菌之一,可引起各系统严重的感染。
随着临床各类抗生素的广泛应用,多重耐药菌株特别是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的检出率越来越高,是临床抗感染治疗需面临最为棘手的问题之一。
耐万古霉素肠球菌耐药表型检测和基因型分析

耐万古霉素肠球菌耐药表型检测和基因型分析张侠家;沈继录;贾伟华【摘要】Objective To research the resistant characteristics, genotype and prevalence of vancomycin-resistant Enterococci( VRE) . Methods K-B disc diffusion method was used to determine the susceptibility, minimum inhibi-tory concentration ( MIC) for vancomycin of VRE was detected by E-test method;VRE was then subjected to PCR for resistance related genes;6 strains sequencing results of PCR product were contrastively analyzed the amino acid sequence by BLAST. Results 6 VREFm strains were found from 193 strains enterococci;6 VREFm strains were completely resistant to high unit gentamicin, ampicillin, ciprofloxacin, teicoplanin,but were sensitive to linezolid and macrodantin,MIC for vancomycin was more than 256mg/L;Genotypes were vanA;Amino acids in vanA gene have changed with Asn83→Asp( AAC→GAC) . Conclusion VRE in our hospital is mostly multi-drug resistant , which bringS difficulty in clinical treatment for its infection. So the hospital should strengthen the prevention and monitoring, to prevent the spread of VRE strains in the hospital and popular.%目的研究某院耐万古霉素肠球菌( VRE)的耐药特性、基因型及流行情况。
鹑鸡肠球菌对万古霉素耐药性监测及耐药基因研究

Surveillance of vancomycin resistance and studies on resistance genes of Enterococcus gallinarum
XIE Hui, ZHOU Wan⁃qing, SHEN Han
μmol / L) 各 1 μL, ddH 2 O 6 μL。 PCR 反 应 条 件:
94 ℃ 5 min;94 ℃ 30 s,54 ℃ 30 s,72 ℃ 30 s,共 30
个循环;72 ℃ 7 min。 PCR 产物经 15 g / L 琼脂糖凝
依据。
胶电泳,阳性扩增产物经琼脂糖凝胶电泳后切胶回
2019 年 1-12 月南京大学医学院附属鼓楼医院临床分离 15 株鹑鸡肠球菌进行药敏试验,采用 E⁃test 法复核菌株对万古霉素最
低抑菌浓度( MIC) ;采用 PCR 及测序技术分析万古霉素耐药决定基因 vanA、vanB、vanC1 及 vanC2 / 3;采用 Illumina HiSeq 2000
测序技术对菌株基因组 DNA 进行双端测序( PE) ,利用生物信息学对菌株全基因组序列分析及耐药基因、毒力基因分析。
结果 15 株鹑鸡肠球菌对万古霉素的 MIC 值集中在 4 mg / L 和 8 mg / L,所占比例分别为 40%和 33 3%,检出 1 株( 6%) 万古
霉素高水平耐药株 EG17906( MIC 为 256 mg / L) ,该菌株除对万古霉素和替考拉宁耐药外,对其余常用抗生素均敏感;15 株菌
外药敏试验可呈现低水平耐药或敏感结果,但不建
议临床使用。 目前,已有对万古霉素高水平耐药鹑
耐万古霉素肠球菌的耐药与毒力基因检测

hyl.The
presence
of esp in vancomycin・resistant Entercoccus Drug resistance of Enterococeus was
a
faecium was significantly higher than that of the sensitive ones.Conclusion
132
塞旦匡堂苤查垫!垒生箜!Q鲞箜!塑
・检验与临床・
耐万古霉素肠球菌的耐药与毒力基因检测
杨靖娴
摘要
刘静邵冬华
王树琴孙娜
吴富炜
梁国威
目的:调查万古霉素耐药基因和5种毒力基因在临床分离肠球茵中的分布特点,探讨万古霉素
耐药与毒力因子之间的相关性。方法:E—test法检测122株肠球茵对万古霉素和替考拉宁的最低抑菌浓度 (MIC)。多重PCR法检测vanA、vanB及粪、屎肠球菌的菌种特异基因,同样采用多重PCR法检测常见毒力基 因esp,hyl、gelE、asal以及cylA在上述肠球菌中的分布。结果:共检出76株万古霉素耐药肠球菌(VRE)(屎 肠球菌69株,粪肠球菌7株)和46株万古霉素敏感肠球菌(VSE)(屎肠球茵28株,粪肠球菌18株);所有 VRE耐药表型与基因型一致,属vanA型:粪肠球菌毒力基因检出率明显高于屎肠球菌,并表现为多基因携 带;屎肠球菌仅esp和hvl阳性。屎肠球菌VRE的esp携带率显著高于其VSE。结论:我院肠球菌耐药问题严 重,esp基因分布最广泛,且与万古霉素耐药显著相关。加强肠球菌耐药与毒力基因的监测有利于为预防和 控制耐药茵的流行与传播提供重要的基础信息。 关键词肠球菌属: 万古霉素;毒力
均≥256 I.Lg/mL;对替考拉宁呈现不同水平耐药。
万古霉素耐药肠球菌的表型及基因型检测

万古霉素耐药肠球菌的表型及基因型检测胡素侠【摘要】目的了解我院耐万古霉素肠球菌(VRE)的耐药表型、基因型及流行情况.方法用K-B纸片扩散法检测临床分离肠球菌的药物敏感性,E-test法检测VRE对万古霉素的最低抑菌浓度(MIC);PCR检测vanA、vanB、vanC1和vanC2-3基因型;脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析VRE同源性.结果73株肠球菌中检出3株万古霉素耐药屎肠球菌,检出率为4.1%;3株屎肠球菌对万古霉素和替考拉宁均耐药,但对利奈唑胺敏感;基因型检测显示3株屎肠球菌均为vanA型,PFGE结果显示该3株VRE不属于同一型别.结论我院住院患者中已出现VRE,应加强医院感染控制,以阻止VRE菌株在院内的传播和流行.【期刊名称】《临床检验杂志》【年(卷),期】2014(032)008【总页数】3页(P624-625,631)【关键词】万古霉素;耐药;肠球菌;表型;基因型【作者】胡素侠【作者单位】淮南市第一人民医院检验科,安徽淮南232007【正文语种】中文【中图分类】R446.5肠球菌常引起泌尿系感染、菌血症、感染性心内膜炎、腹腔感染、胆道感染以及伤口感染。
随着抗菌药物的广泛应用,肠球菌对常用抗菌药物的耐药性不断上升[1]。
自1988年欧洲报道了耐万古霉素肠球菌(vancomycin-resistant enterococci, VRE)后,各地不断有VRE感染的报道,给临床抗感染治疗带来了极大挑战[2]。
为了解我院VRE的发生率和流行情况,本研究对我院2012年1月至2014年3月间分离的肠球菌进行了耐药表型和基因型检测以及同源性分析,结果报道如下。
1.1 材料万古霉素、替考拉宁、利奈唑胺、氨苄西林、庆大霉素(每片120 μg)、利福平、环丙沙星、磷霉素、红霉素、呋喃妥因药物纸片及M-H琼脂培养基均购自英国Oxoid公司;E-test试条购自瑞典AB Biodisk公司。
DNA琼脂糖胶回收试剂盒购自广州捷倍斯公司;PCR检测试剂Taq酶、缓冲液及dNTP均购自TaKaRa公司;SmaⅠ限制性内切酶、蛋白酶K、溶菌酶及DNA标准DL 2000、CHEF-MAPP. ER型PFGE仪由美国Bio-Rad公司提供。
卫生部临床检验中心全国临床细菌学室间质量评价(EQA)结

卫生部临床检验中心全国临床细菌学室间质量评价(EQA)结果报告单
Chinese External Quality Assessment Program in Clinical Microbiology
实验室编号:医院名称:
第二次测定日期:2003年月日完成日期: 2003年月日
0309号药敏试验结果(S :敏感I: 中介度R: 耐药※计分项目)
评论或结果解释:
药敏方法:
○纸片扩散法(KB)○MIC法
药敏纸片来源: 自动、半自动系统:
药敏培养基编码: 肉汤微量稀释板来源:
药敏培养基来源: E-test :
0310号药敏试验结果
评论或结果解释:
(此次活动药敏试验满分35分)
药敏方法:
○纸片扩散法(KB)○MIC法
药敏纸片来源: 自动、半自动系统:
药敏培养基编码: 肉汤微量稀释板来源:
药敏培养基来源: E-test :
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实验操作者:
实验室负责人:
联系电话:(注明地区号)
E-mail 地址:。
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110生物技术世界 BIOTECHWORLD由于抗菌药物的滥用,临床耐药菌株的比例逐渐增高,2012年卫生部发布了《抗菌药物临床应用管理办法》,以加强医疗机构抗菌药物临床应用管理,规范抗菌药物临床应用行为,控制细菌耐药。
当前临床微生物敏感性检测的方法有纸片法,微量稀释法,自动化仪器,E-test法,由于微量肉汤法操作繁琐,仅用于研究而很难用于临床,纸片法和自动化仪器是当前临床药敏检测的主要手段,但纸片法在临床使用中受诸多因素影响表现出一定的局限性[1],此外CLSI 中某些抗生素如万古霉素对葡萄球菌属仅有微量稀释法折点MIC 而无纸片法参考折点,这限制了纸片法在临床的广泛使用,自动化仪器使用方便但需要特殊设备、药物选择不灵活、测定MIC值少、特殊菌不能用等问题[1],限制了临床的使用。
E-test法由于操作方便,结果准确、稳定,受到临床认同[1]。
当前,出现了国产的E-test法药敏试剂,本研究收集了河南省人民医院的109株葡萄球菌,就其MIC检测验证,以考察国产E-test药敏条在临床使用效果。
1 材料与方法1.1 菌株来源选择2014年06月—2014年09月间在河南省人民医院临床分离的109株葡萄球菌属菌株,剔除同一患者相同部位的重复分离株。
将菌株接种于非选择性培养基琼脂平板上培养18~24小时,挑取数个单菌落用于药敏检测。
1.2 仪器试剂法国生物梅里埃公司的DensiCHEK plus比浊仪和E-test药敏条(万古霉素,批号:1000902430)(简称进口试剂)。
郑州安图生物工程股份有限公司的万古霉素定量药敏条(E-test法)(批号:20140620)作者简介:侯金丽(1980—),女,讲师,硕士,研究方向:微生物研究。
国内外E-test 法万古霉素药敏条临床研究侯金丽(河南工业贸易职业学院粮食工程系 河南郑州 451191)摘要:目的 比较国内外生产的E-test药敏条对葡萄球菌最低抑菌浓度的符合情况,评价国产E-test法药敏条的临床性能。
方法 收集河南省人民医院109株葡萄球菌属菌株,同时用国产和进口E-test法万古霉素药敏条进行临床比对,并用统计学方法分析。
结果 针对109株葡萄球菌的对比中,有2株菌株测定结果超过±1个二倍稀释,整体符合率为98.17%,经卡方检验,P<0.05,无显著性差异。
结论 国内外E-test法万古霉素药敏条临床性能无显著差异,说明国产E-test药敏条可用于临床微生物药敏的体外检测。
关键词:葡萄球菌 折点 E-test 万古霉素中图分类号:R917文献标识码:A 文章编号:1674-2060(2015)05-0110-02Clinical Study on Domestic and Foreign Drug Sensitivity Strip of Vancomycin by E-test MethodHou JinliDepartment of Food Engineering, Henan Industry and Trade Vocational College, Zhengzhou, Henan province, 451191Abstract:Objective: Compare with the conformity status of the minimum inhibitory concentration onto staphylococcus for E-test drug sensitivity strips made in China and abroad, and evaluate clinical performances of drug sensitivity strips made in China by the E-test method. Method: Collect 109 bacterial strains of staphylococcus in Henan Provincial People’s Hospital, carry out clinical comparison by utilizing domestic and imported E-test drug sensitivity strips of vancomycin at the same time, and adopt the statistical method to carry out analysis. Result: In comparison aiming to 109 staphylococcus strains, there are two strains with a determination result exceeding ±1 times of double-dilution, and the overall conformity rate is 98.17%. After the chi-square test, P<0.05, there is no significant difference. Conclusion: There is no significant difference on clinical performance between domestic and foreign vancomycin drug sensitivity strips by E-test method, and it indicates that the domestic E-test drug sensitivity strips can be applied to in-vitro detection for drug sensitivity of clinical microorganism.Key Words: Staphylococcus; Break point; E-test; Vancomycin国产试剂MIC 值/进口试剂MIC 值结果统计 完全一致75 相差±0.5个二倍稀释 30 相差±1个二倍稀释 2 超过±1个二倍稀释 2 合计109样本编号 国产试 剂(μg/ml) 国外试 剂(μg/ml) 微量肉汤试验 结果(μg/ml) 菌株1 0.25 1 0.25 菌株20.50.1250.25表1 国产试剂MIC 值/进口试剂MIC 值结果统计表表2 微量肉汤试验结果111BIOTECHWORLD 生物技术世界(简称国产试剂)和MH琼脂平板;英国Oxoid公司生产的微量肉汤稀释(批号:1178727);中国生物制品所的万古霉素标准品。
1.3 操作及判读选择进行药物敏感性测试的标准菌株或临床菌株,将菌株接种于非选择性培养基琼脂平板上培养18~24小时,挑取数个单菌落用比浊仪制备成0.5麦氏标准菌液,涂布于MH平板上,平行贴国产药敏条和进口药敏条。
放置35℃培养16-18小时判读MIC值。
MIC值符合程度统计时参照相关文献,MIC相差±1个二倍稀释均判为一致,当MIC值超过±1个二倍稀释时,对该菌株采用微量肉汤方法测定其MIC值[2]。
1.4 统计学分析采用SPSS 14.0统计软件,计数资料采用χ2检验,检验水准α=0.05。
2 结果与分析2.1 国产试剂与进口试剂测定结果临床109株葡萄球菌属菌株进行结果见表1,有107份国产试剂与进口试剂检测结果差异均在±1个二倍稀释内,有2份菌株超过±1个二倍稀释,国产试剂与进口试剂总符合率为98.17%,经卡方检验P>0.05,两种的检测结果无显著差异。
2.2 微量肉汤试验针对2株菌株用国内外试剂测定结果超过±1个二倍稀释的采用微量肉汤试验进行检测,结果见表2。
3 结论E-test法即是指浓度梯度琼脂扩散试验,综合了稀释法和扩散法的原理和特点,同时又弥补了二者的一些不足,可像稀释法一样直接定量测出抗菌药物对受试菌的MIC。
可用于各种常见菌、微需氧菌、分枝杆菌、厌氧菌和真菌等的药敏试验。
但是E-test法产品均为进口产品,由于价格昂贵很难在临床使用广泛使用[3]。
本研究就新出现的国产的E-test法万古霉素定量药敏条进行临床对比研究,临床分离的109株葡萄球菌属菌株与法国梅里埃产品对比中,有2份菌株超过±1个二倍稀释,二者的总符合率为98.17%,经卡方检验,两种试剂的检测结果无显著差异,说明国产试剂与进口试剂有较高的一致性,可以用于临床微生物的体外药敏检测。
进口试剂需多重运输,成本增加明显,而国产试剂价格使用,且性能与进口试剂基本一致,值得在各级医院大力推广。
参考文献[1]谭瑶,赵清,舒为群,等. K-B 纸片扩散法药敏试验[J].检验医学与临床,2010,7(20):2290-2291.[2]伊茂礼,臧琴波,李少君,等.VITEK-2 Compact 检测鲍曼不动杆菌菌对阿米卡星药敏结果准确性的探讨[J ].中华医院感染学杂志,2013,23(3):707-709.[3]卓超,肖永红,等.E-TEST 监护病房中400株革兰阴性杆菌的耐药性[J].中国抗生素志,2003,28(5):276.酚在应用中具有较强的循环抑制性,能够对患者神经的兴奋度起到较佳的抑制作用[6-7]。
TCI方式能够对麻醉剂的浓度科学控制,帮助患者在术后平稳苏醒,维持其血流动力学的平稳化[8]。
在本次研究中还能够发现,丙泊酚组患者的意识消失、插管时间均明显少于七氟醚组,由此能够充分表明TCI麻醉方式的诱导性更强,能够在较短的时间内达到极佳的麻醉效果,确保患者术后平稳苏醒,保障其生命安全。
通过研究能够发现,在腹腔镜手术的实施中,运用丙泊酚TCI麻醉方式的镇痛效果优良,患者术后出现的不良反应较少,整体麻醉效果要明显优于七氟醚吸入麻醉方式,值得在临床上进一步的推广应用。
参考文献[1]王建伟,刘晓飞.比较丙泊酚与七氟醚麻醉对梗阻性黄疸患者苏醒和术后恶心呕吐的影响[J].临床麻醉学杂志,2011(04):394-395.[2]欧晓峰,郑宏,叶建荣等.七氟醚和丙泊酚对老年冠心病患者麻醉诱导期心率变异性的影响[J].临床麻醉学杂志,2011(06):538-540.[3]向波,颜娅.瑞芬太尼复合丙泊酚靶控输注在老年妇科腹腔镜手术麻醉中的应用[J].中国老年学杂志,2014(19):5471-5472.[4]刘光跃,徐仲煌,李敏等.腔镜手术不同麻醉方法费效的比较:前瞻性、多中心、随机、双盲临床研究[J ].中华麻醉学杂志,2013(07):876-879.[5]李成龙,李有武,戴转云等.丙泊酚靶控输注麻醉诱导时瑞芬太尼用于喉罩置入的半数有效浓度的测定[J].南昌大学学报(医学版),2014(07):61-64.[6]杨琦琳,柴静,王坚伟等.靶控输注舒芬太尼或瑞芬太尼用于妇科腹腔镜手术麻醉的临床研究[J].重庆医科大学学报,2012(03):267-269.[7]孙璐,邵忠新,王鹭蓉等.依托咪酯靶控输注复合瑞芬太尼用于妇科腹腔镜手术病人麻醉的效果[J].中华麻醉学杂志,2013(04):462-465.[8]马珏,张光燕,陈怡静等.Narcotrend 监测下靶控输注丙泊酚TIVA 与静吸复合麻醉的对比观察[J].实用医学杂志,2013(24):4095-4097.······上接第109页。