真菌药敏试验方法比较
真菌药敏试验方法比较[荟萃精制]
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培养基： Mueller-Hinton琼脂
补充 2％
Glucose
0.5ug/ml Methylene blue dye
PH7.2-7.4
优点：有较好的重复性和稳定性
操作简便，价廉
缺点：目前只限氟康唑
行业培训
15
NCCLS纸片扩散法
0.5麦氏比浊标准（约为1~5×106CFU/ml）。
200ul菌悬液 200ulRPMI汤
10
酵母菌的NCCLS M27-A各药物折点
粘膜及系统性感染： 氟康唑（除克柔念珠菌）
粘膜感染： 伊曲康唑
粘膜及系统性感染： 5-氟嘧啶
敏感：
中介： 耐药：
敏感：
中介： 耐药：
敏感：
中介： 耐药：
≤ 8µg/ml
－ ≥64µg/ml
≤0.125µg/ml
行业培训
9
微量肉汤法
氟康唑的稀释方法同常量法，但起始浓度为2×常量法的 浓度（即128µg/ml ），终浓度为0.25µg/ml 。
氟康唑：1-10孔分别为 100ul 菌悬液：1-10孔分别为 100ul
。37℃。37℃
64 32 16 8 4 2 1 .5 .25 .125 ＋ －
35 ℃
其新余型菌隐株球4菌8小72时小读时取行，M业I培C训结果
先将氟康唑粉末溶于蒸馏水，然后用配制好的RPMI1640液倍比稀释， 使其起始浓度为640µg/ml, 终末浓度为1.25µg/ml，分装无菌洁净的 12mm×75mm试管：
64 32 16 8
4
2 1 0.5 .25 .125 ＋
－
前10管： 0.2ml氟康唑＋1.8ml菌液
抗真菌药物敏感试验指导
琼脂扩散法
培养基制备
基本培养基为MH琼脂，其中加入2%葡萄糖和亚甲基兰 （0.5μg/mL）。调整pH值至7.2～7.4（室温下）。高压灭菌后分装入 平皿，室温下冷却凝固后，37℃温箱中干燥10～30min，以去除平皿 表面水蒸气。 培养基平皿可在2～8 ℃冰箱保存一周。如采用塑料袋包裹可适 当延长。 使用前，应抽取同一批次平皿置于30～35℃孵箱中24小时，以确
4％琼脂：
40g 琼脂，溶于1000mL蒸馏水中，高压灭菌15min，备用。
琼脂稀释法
菌液的制备
受试菌在SDA中35℃ 培养24小时（念珠菌属）或48小时 （新生隐球菌）
取直径约5mm菌落，混悬于5mL灭菌的生理盐水中，涡
旋混匀15秒，采用分光光度计在530nm处，调整菌悬液至0.5 个麦氏单位浊度，相当于1×106～5×106/mL，作为菌液的 工作液。
试管液基稀释法
实验步骤：
(NCCLS-M27A)
取无菌的15mm×100mm试管进行实验 在试管中依次加入0.1mL倍比稀释的不同浓度药物工作液。 依次在试管中加入0.9mL菌工作液，混匀。注意整个过程需在 15min内完成。 实验过程中，设置空白对照和生长对照。同时进行质控菌株平行试 验，进行质量控制。 将试管置于35 ℃培养46～50h观察结果。对于新生隐球菌，培养时 间应延长至70～74h。
3. 将培养板置于35 ℃孵育48小时(新生隐球菌为72小时）后读取结果。
微量液体稀释法
结果判读
观察前，可轻轻震摇药敏板，使终点判读更容易。如果出现菌膜沉 淀，须进行吹打、涡旋或其他方法混匀后，在进行结果判读。
结果判读以生长对照孔作为标准，将生长情况进行评分：
真菌药敏试验方法比较
真菌药敏试验方法比较1.环形扩散法：环形扩散法是目前最常用的真菌药敏试验方法之一、该方法将抗真菌药物以不同浓度滴入含有标准化真菌菌悬液的琼脂平板上，然后培养一段时间后观察菌落的生长。
通过测量最小抑菌浓度（MIC），可以判断真菌对抗真菌药物的敏感性。
环形扩散法具有操作简便、结果比较准确的优点，但需要较长的培养时间。
2.E测试法：E测试法是一种可定量测定真菌对抗真菌药物敏感性的方法。
该方法使用一种含有不同浓度抗真菌药物的梯度试纸条，将试纸贴附在含有真菌菌悬液的琼脂平板上，然后培养一段时间。
抗真菌药物的最小抑菌浓度可以通过读取试纸上的抑菌浓度值来测定。
E测试法具有快速、准确、可定量的优点。
3.微量平板法：微量平板法是一种适用于真菌药敏试验的高通量筛选方法。
该方法在微孔控制出菌的琼脂平板上，以液体方式将不同浓度的抗真菌药物加入孔中，并装入真菌菌悬液。
随后，通过观察孔内菌落的生长情况，可以确定真菌对抗真菌药物的敏感性。
微量平板法适用于大规模组织后续处理的真菌药敏试验，具有扩增快、操作简便的特点。
4.流式细胞仪法：流式细胞仪法是一种新兴的真菌药敏试验方法。
该方法利用流式细胞仪对真菌菌株进行染色，然后利用多色激光激发荧光信号。
通过检测细胞死亡、增殖和产生细胞壁变化等生物学特性，可以评估真菌对抗真菌药物的反应。
流式细胞仪法具有高通量、高灵敏度和定量分析的优点。
总的来说，环形扩散法是目前应用最广泛的真菌药敏试验方法，但需要较长的培养时间。
近年来，随着技术的进步，E测试法、微量平板法和流式细胞仪法等新方法的应用逐渐增多，可以更准确、快速地评估真菌菌株对抗真菌药物的敏感性。
真菌药敏试验方法的选择应根据实验目的、研究对象和实验条件等因素来确定。
需要进一步的研究来评估这些方法在临床实践中的可行性和可靠性。
纸片真菌药敏法与浓度梯度法检测 氟康唑对 种酵母样真菌 …
中华医院感染学杂志 2004 年第 14 卷第 10 期
·1101 ·
计算 。
112 菌株鉴定 将不同标本直接划种沙保弱琼脂 (自制) ,35 ℃培养 ,用全自动细菌鉴定系统 VITEK2 CC4 的 YBC 鉴定卡 (法国生物梅里埃公司) 进行鉴 定 ,鉴定概率值 > 90 % ,作为本次实验菌株 。 113 Etest 方法 氟康唑 Etest 试条由 AB BioDisc 生 产 ,MIC 检测范围 01125～256mg/ L ,按操作说明进 行 ,酵母菌配制成 015 麦氏浊度 ,35 ℃培养 24～48 h 后观测结果 ;隐球菌属配制成 1 个麦氏浊度 ,35 ℃培 养 48～72 h 观测结果 。质控标准 :近平滑假丝酵母 菌 ATCC 22019 ,2～16 ;克柔假丝酵母菌 ATCC 6258 , ≥256 ;白色假丝酵母菌 ATCC 90028 ,01125～1 。氟 康唑的判断标准 : (1997NCCLS 推荐) MIC ≤8mg/ L 为 敏感 ( S) ; MIC16 ～ 32mg/ L 为 剂 量 依 赖 性 敏 感 (SDD) ;MIC ≥64mg/ L 为耐药 (R) 3 。 114 纸片法真菌药敏 (丹麦 Rosco 公司) 4 氟康 唑纸片的含量为 15μg/ 片 。将改良 Shadomy 琼脂平 皿置 35 ℃干 燥 20 ～ 25 min , 吸 110ml 待 检 菌 液
rosco纸片法真菌药敏其操作简单相对比中华医院感染学杂志2004年第14卷第10etest方法成本低与nccls认可的肉汤稀释法有良好符合率本次结果也显示与etest方法有较高符合率9215同时结果判读清晰已被多个国家使用来监测真菌的耐药性26但该纸片法在本次实验中对于检测处于临界值mic的菌株有一定的误差对于区分sdd株存在不足与国外报道基本一致因此对从严重的系统感染患者分离到的酵母菌应遵循更为严格的判断标准有条件的实验室应用etest方法检测其mic值有利于临床准确使用抗真菌药物
真菌的鉴定及药敏试验分析
真菌的鉴定及药敏试验分析真菌对人类健康的危害包括由病原性真菌、条件致病真菌所致的深部真菌病和浅部真菌病；由气传真菌所致的变态反应真菌症即过敏；由污染真菌产毒所致的真菌中毒症。
随着医学的发展，特别是抗生素的广泛使用，大量治疗手段的开展，免疫障碍疾病的大量发生，使真菌感染的情况日益增加，医院感染中的真菌感染也不断增加，因而，掌握真菌检验的方法就成为检验工作中的一个重要组成部分。
1 材料与方法1.1 真菌来源收集临床送检标本所分离出的真菌120例，男性84例，女性36例，其中痰液96株，粪便11例，咽拭子12例、尿液5例、血液4例，分泌物3例。
1.2 采集及处理根据真菌侵犯组织和器官的不同而采集不同的标本，而采集最合适的标本是决定能否找到病原性真菌的关键，要尽量用消毒方法采集标本以免污染。
深部真菌病的标本如血液、脑脊液、脓液、尿、痰等应及时收集检查，一般不超过1～2h，以免变质污染，标本采取前，应忌用药。
为避免污染杂菌，在收集标本时，应严格无菌操作，必要时在培养基内加入抗生素类。
1.3 检验方法1.3.1 酵母样菌的检验直接涂片法各类标本，除脑脊液、尿、胸水、腹水等需离心沉淀后取沉淀物作涂片外，其他均可用生理盐水或10％～40％KOH作涂片后直接镜检或用革兰、墨汁、0.1％甲苯胺蓝染色后镜检。
分离酵母样菌所选用的培养基为沙保弱固体或液体培养基，在培养基中可加入各种抗生素抑制细菌的生长、有利于真菌生长含抑制剂的霉菌琼脂。
将备类标本直接接种上述培养基，除新型隐球菌需同时接种两支培养基；一支孵育于37℃，另一支孵育于22～28℃，其他酵母菌均孵育于22～28℃。
每日观察生长情况。
根据酵母菌在培养基上的菌落特征及在玉米粉吐温80培养基上生长物在显微镜下生长情况可作初步鉴定。
1.3.2 丝状真菌的检验某些丝状真菌如孢子丝菌或荚膜组织胞浆菌的直接涂片，必须染色后检查。
真菌的形态和结构通过染色更为清楚，不染色涂片不易保存，染色涂片可长期保存。
真菌药敏试验简介
真菌体外药物敏感试验简介刘根焰，赵旺胜南京医科大学第一附属医院医学检验科/南京医科大学检验系, 南京 210029 随着移植、肿瘤和免疫缺陷患者的增多，侵袭性真菌感染（Invasive fungal infections ，IFI）病例也明显增加；随着临床真菌耐药性的出现，经验性抗真菌治疗越来越困难；随着新的抗真菌药物不断投入临床，传统的抗真菌药物敏感试验标准已难以覆盖。
诸多因素都要求临床微生物室真菌药物敏感试验能够与时俱进。
然而，当前国内临床微生物室真菌药物敏感试验开展的情况却不容乐观，首先表现在开展这项临床服务的实验室少，多局限于少数教学医院；其次，各个实验室采用的方法参差不齐，相互之间的结果可比性差。
为此，本文将介绍临床真菌药物敏感试验的标准参考方法和市场上关于真菌药物敏感试验的仪器和试剂，希望有助于各级医院临床真菌药物敏感试验的规范化开展。
1.真菌体外药物敏感试验的基本概念1.1 常见抗真菌药物介绍开展真菌药物敏感试验前提是了解抗真菌药物的基本知识，包括分类、作用机制及抗真菌特性，见表1[1]。
对于不能从上述特性中推断出药物敏感性结果的部分进行体外药物敏感试验。
表1 常见抗真菌药物简介分类代表药物作用机制抗真菌作用多烯类两性霉素B 直接和细胞膜上的麦角固醇结合，导致细胞膜对单价和二价阳离子的通透性增加而导致细胞死亡。
对念珠菌、隐球菌、球孢子菌、孢子丝菌、芽生菌、毛霉菌和大部分曲霉敏感，对土曲霉、构巢曲霉、Aspergillus fumigateaffinis 和Aspergillus lentulus天然耐药。
三唑类酮康唑氟康唑伊曲康唑伏立康唑通过抑制真菌细胞色素P450 依赖的-羊毛甾醇14α-去甲基化酶作用，导致麦角固醇合成受阻氟康唑抗菌谱窄,对大多数念珠菌、隐球菌有效，对曲霉无抑制活性,对克柔念珠菌天然耐药；伊曲康唑较氟康唑抗菌谱宽,并对曲1泊沙康唑舍他康唑霉有抑制作用；伏立康唑较氟康唑抗菌谱宽,并对曲霉、镰刀菌和其它透明丝孢霉有抑制作用；泊沙康唑抗菌谱最宽,对念珠菌,曲霉、镰刀菌、接合菌和其它透明丝孢有效；舍他康唑主要对皮肤癣菌和念珠菌抗菌活性较强烯丙胺类特比萘芬萘替芬抑制角鲨烯环氧化酶而干扰麦角固醇的生物合成。
真菌药敏试验简介
真菌体外药物敏感试验简介刘根焰，赵旺胜南京医科大学第一附属医院医学检验科/南京医科大学检验系, 南京 210029 随着移植、肿瘤和免疫缺陷患者的增多，侵袭性真菌感染（Invasive fungal infections ，IFI）病例也明显增加；随着临床真菌耐药性的出现，经验性抗真菌治疗越来越困难；随着新的抗真菌药物不断投入临床，传统的抗真菌药物敏感试验标准已难以覆盖。
诸多因素都要求临床微生物室真菌药物敏感试验能够与时俱进。
然而，当前国内临床微生物室真菌药物敏感试验开展的情况却不容乐观，首先表现在开展这项临床服务的实验室少，多局限于少数教学医院；其次，各个实验室采用的方法参差不齐，相互之间的结果可比性差。
为此，本文将介绍临床真菌药物敏感试验的标准参考方法和市场上关于真菌药物敏感试验的仪器和试剂，希望有助于各级医院临床真菌药物敏感试验的规范化开展。
1.真菌体外药物敏感试验的基本概念1.1 常见抗真菌药物介绍开展真菌药物敏感试验前提是了解抗真菌药物的基本知识，包括分类、作用机制及抗真菌特性，见表1[1]。
对于不能从上述特性中推断出药物敏感性结果的部分进行体外药物敏感试验。
表1 常见抗真菌药物简介分类代表药物作用机制抗真菌作用多烯类两性霉素B 直接和细胞膜上的麦角固醇结合，导致细胞膜对单价和二价阳离子的通透性增加而导致细胞死亡。
对念珠菌、隐球菌、球孢子菌、孢子丝菌、芽生菌、毛霉菌和大部分曲霉敏感，对土曲霉、构巢曲霉、Aspergillus fumigateaffinis 和Aspergillus lentulus天然耐药。
三唑类酮康唑氟康唑伊曲康唑伏立康唑通过抑制真菌细胞色素P450 依赖的-羊毛甾醇14α-去甲基化酶作用，导致麦角固醇合成受阻氟康唑抗菌谱窄,对大多数念珠菌、隐球菌有效，对曲霉无抑制活性,对克柔念珠菌天然耐药；伊曲康唑较氟康唑抗菌谱宽,并对曲1泊沙康唑舍他康唑霉有抑制作用；伏立康唑较氟康唑抗菌谱宽,并对曲霉、镰刀菌和其它透明丝孢霉有抑制作用；泊沙康唑抗菌谱最宽,对念珠菌,曲霉、镰刀菌、接合菌和其它透明丝孢有效；舍他康唑主要对皮肤癣菌和念珠菌抗菌活性较强烯丙胺类特比萘芬萘替芬抑制角鲨烯环氧化酶而干扰麦角固醇的生物合成。
药敏实验的方法有哪些
药敏实验的方法有哪些
药敏实验是研究不同细菌对抗生素的敏感性和耐药性的方法，常用的药敏实验方法包括：
1. 纸片扩散法：将含有不同抗生素的消毒纸片施加在含菌培养基表面，观察菌落周围的抑菌圈直径大小，判断细菌对抗生素的敏感程度。
2. 微量稀释法：在含有不同浓度抗生素的液体培养基中接种细菌，观察最小抑菌浓度，即该抗生素能够抑制该菌株的最低有效浓度。
3. 气溶胶化验法：将含有不同抗生素的气溶胶喷洒在含菌培养基中，观察菌落周围的抑菌圈直径大小，判断细菌对抗生素的敏感程度。
4. 坦能法：将不同抗生素与抑菌剂混合，制成坦能板后进行药敏实验，以检测革兰氏阴性细菌对抗生素的敏感性和耐药性。
5. 自动化微生物分析系统：采用自动化设备对不同细菌的抗生素敏感性进行测试，具有高效、精确、快速等优点。
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敏感（S)
剂量依赖性敏感 （SDD) 耐药（R)
>=19
15-18
<=8
16-32
<=14
>=64
S＝Susceptible SDD=Susceptible－Dose Dependent R=Resistant
酵母菌纸片扩散法敏感试验 NCCLS M44-P. 2003
氟康唑对标准菌株 24h抑菌环直径（mm)的质控允许范围
4.建议目前用Rosco纸片
5.寄希望将来推行Etest 法
标准菌株
氟康唑25ug
沃尔康唑1ug
31-42 28-37 － 16-25
白念珠菌 ATCC90028 近平滑念珠菌 ATCC22019 热带念珠菌 ATCC750 克柔念珠菌 ATCC6258
28-39
22-33 26-37 －
ROSCO纸片扩散法
ROSCO纸片扩散法： 1. 克柔念珠菌： 0.5麦氏浊度，生理盐水1：10稀释 菌液为5×105CFU/ml 2. 隐球菌属： 1 麦氏浊度 3. 其它酵母菌： 0.5麦氏浊度，生理盐水1：1稀释 菌液为2.5×106CFU/ml 将稀释好的菌液涂布在改良的SHADOMY（ PH7.0）培
养基上
其它操作同细菌。
Rosco纸片扩散法药敏结果判定
读取抑菌环直径近似到mm 在大约80%抑制区为测量边界 在抑菌环内个别细小或中等大小的菌落， <15可 忽略不计
两种纸片扩散法的比较
Rosco纸片扩散法 检测菌种 念珠菌属，隐球菌属 培养基 改良SHADOMY琼脂，PH7.0
缺点：1.价格太高
每片40-50元
2. 吡咯类MIC终点不好确定
酵母菌纸片扩散法敏感试验 NCCLS M44-P. 2003
培养基： Mueller-Hinton琼脂 补充 2％ Glucose 0.5ug/ml Methylene blue dye PH7.2-7.4
优点：有较好的重复性和稳定性 操作简便，价廉 缺点：目前只限氟康唑
35 ℃
新型隐球菌72小时 ， 其余菌株 48小时读取MIC结果
200ul菌悬液
酵母菌的NCCLS M27-A各药物折点
粘膜及系统性感染： 氟康唑（除克柔念珠菌）
敏感： 中介： 耐药： 敏感： 中介： 耐药：
≤ 8µg/ml － ≥64µg/ml ≤0.125µg/ml － ≥1µg/ml
NCCLS纸片扩散法 检测菌种 念珠菌属，隐球菌属 培养基 Mueller-Hinton 琼脂中补充2% 的 葡萄糖和0.5μg/ml的美蓝 试验药品及剂量 FLA 25µg 接种的菌量 1 ～5×106/mL 隐球菌 1.0麦氏浊度
Rosco纸片扩散法各药物折点
粘膜酵母菌感染
氟康唑 ，克霉唑，酮康唑，氟胞嘧啶1ug ，特比奈吩，咪 康唑等 敏感：≥20mm 中介 ：12~19mm 耐药：≤11mm 两性霉素B， 制霉菌素 伊曲康唑 敏感：≥15mm 中介：10~14mm 耐药：无抑菌环 氟胞嘧啶10ug 敏感： ≥30mm 用于黑曲霉 中介：23~29mm 耐药：≤22mm 灰黄霉素 敏感：≥10mm 中介：－ 耐药：无抑菌环
1.8ml1640
念珠菌属 35 ℃孵育48小时 新型隐球菌 72小时 读取MIC结果
常量稀释法
药敏结果判定
氟康唑，伊曲康唑，两性霉素为100%抑制 其他唑类药物为80%抑制
（取0.2ml的生长对照菌液加入0.8mlRPMI液体培养基的菌液浓度）
质控株
克柔念珠菌ATCC 6258 近平滑念珠菌ATCC 22019 白念珠菌ATCC 90028 白念珠菌ATCC 24433
真菌体外药敏用培养基
常量肉汤和微量肉汤法RPMI1640液制备：
RPMI 10.4g MOPS（三氮吗啡啉丙磺酸） 34.53 g 蒸馏水900ml溶解后，用1M NaOH调节PH至7.0（25℃）， 用蒸馏水溶至 1000ml， 高压灭菌后，冷却至50 ℃ 加入RPMI1640用0.22µm滤膜抽滤除菌，4℃保存。
菌悬液均匀涂布于药敏板上
35 ℃培养24小时读取结果 光滑念珠菌 新型隐球菌 等生长较慢的菌种需适当延长培养时间。
E-test法评价
准确性高,且操作简便 E-test法得到的MIC值在某些菌种中要低于NCCLS
推荐的常量肉汤稀释法测得的MIC 20%浓度CO2的环境中，可使此方法的结果更真实 反映药物对致病菌的敏感性
微量肉汤法
氟康唑的稀释方法同常量法，但起始浓度为2×常量法的
浓度（即128µg/ml ），终浓度为0.25µg/ml 。
氟康唑：1-10孔分别为 100ul 菌悬液：1-10孔分别为 100ul
。37℃ 。37℃ 64 32 16 8 4 2 1 .5 .25 .125 ＋ － 200ulRPMI汤
Rosco纸片扩散法各药物折点
系统性酵母菌感染
氟康唑15ug
18-24h
≤4 8-16 ≥32
敏感：≥30mm 中介：29~23mm 耐药：≤22mm
伊曲康唑 8ug
18-24h
≤0.06 0.125 ≥0.25
敏感：≥20mm
中介：19~12mm 耐药：≤11mm
这个MIC标准为纸片法的相应值
氟胞嘧啶1ug
敏感：≥20mm 中介：12-19 耐药： ≤ 11mm
氟胞嘧啶10ug
用于黑曲霉
敏感：≥30mm 中介：23-29 耐药： ≤ 22mm
氟康唑氟孢嘧啶 两性霉素B
制霉菌素
克霉唑-
伊曲康唑
特比奈酚
结论
1.常量稀释法难以推广
2.微量板浪费 3.NCCLS纸片法只做氟康唑
真菌常用的体外药敏试验 方法比较
真菌药敏试验临床难以开展的原因
1.按照NCCLS推荐的稀释法,操作繁琐 2.有些药只能用于某种菌的抗菌活性测定 3.纸片法试验未得到NCCLS 认可 4.E试验价钱太贵 5.药敏孵育时间因菌种而不同
体外敏感试验与临床治疗相关性
真菌体外药敏试验结果与口咽部真菌感染结果相关
粘膜感染： 伊曲康唑
粘膜及系统性感染： 5-氟嘧啶
敏感：
中介： 耐药：
≤4µg/ml
8~16µg/ml ≥32µg/ml
酵母菌E-test法
瑞典AB Biodisk MIC 优点：有较好的重复性和稳定性
E-test法
0.5麦氏比浊液 （约为1~5×106CFU/ml）。
Rosco纸片扩散法各药物折点
系统性酵母菌感染
酮康唑 15ug
敏感：≥30mm 中介：23-29 耐药： ≤ 22mm
纸片和培养基广州乐通公司可供应
≤0.12 0.25 ≥ 0.5
两性霉素 10ug
敏感：≥15mm 中介：14-10 耐药： ≤ 9mm
≤1 2 ≥4 ≤4 8-16 ≥ 32 ≤4 8-16 ≥ 32
菌液制备
将受试菌在沙保罗培养基上转种，以保证其纯度和活性。用0.85%的盐 水制成酵母菌悬液，调整其浊度达到0.5麦氏比浊标准（约为 1~5×106CFU/ml）。 常量稀释法：用RPMI1640液体稀释2000倍 接种浓度约为0.5~2.5×103CFU/ml 微量稀释法：用RPMI1640液体稀释1000倍 接种浓度约为1～5×103CFU/ml E-test法和NCCLS纸片扩散法：用菌液浊度为0.5麦氏单位。 Rosco纸片扩散法： 1. 念珠菌： 0.5麦氏浊度，生理盐水1：10稀(1~5×105CFU/ml) 2. 隐球菌属： 1.0麦氏浊度 3. 其它酵母菌： 0.5麦氏浊度，生理盐水1：1稀释
试验药品及剂量 AMB 10µg，IT 8µg， FLA 15µg，FC 1，10µg， FC 10µg ，KET15µg 等 接种的菌量： 5×105CFU/ml （克柔念珠菌先制成 0.5麦氏浊度，再用生理盐水1：10 。 隐球菌属配 1.0麦氏不稀释）其它菌种配0.5麦氏浊度， 1：1 稀释 培养条件 35 ℃孵育18～24小时 培养条件 念珠菌属35℃培养18~24小时， 新型隐球菌培养42~48小时 新型隐球菌30℃培养42~48小时 结果判读 FC及AMB100%被抑制， 结果判读 FC及AMB100%被抑制 唑类药物80%抑制 质控株 白念珠菌ATCC90028 唑类药物80%抑制 近平滑念珠菌ATCC22019 质控株 光滑念珠菌2238NL 白念珠菌ATCC64548 白念珠菌ATCC64550
真菌体外药敏用培养基
E-test法 ：
在RPMI液体培养基中补充葡萄糖，使其终浓度为2%。
NCCLS纸片扩散法 ： Mueller-Hinton 琼脂 补充2%葡萄糖和0.5μg/ml美蓝 丹麦ROSCO纸片扩散法 ： 改良的SHADOMY（ PH7.0）培养基 主要成分：酵母粉，葡萄糖，天冬氨酸，磷酸缓冲液等。
性好 对于深部的真菌感染，抗真菌药物敏感性试验同临 床治疗的相关性还有待进一步证实 体外敏感试验没有考虑到真菌对抗真菌药物在体内 的动力学和复杂的生物学作用
真菌体外药物敏感试验方法
NCCLSM27-A：常量肉汤稀释法，微量肉汤稀释法 E-test法 NCCLS M44-P纸片扩散法 (仅限氟康唑) 丹麦Rosco纸片扩散法(NCCLS未认可)
NCCLS纸片扩散法
0.5麦氏比浊标准（约为1~5×106CFU/ml）。
菌悬液均匀涂布于药敏板上 步骤同细菌敏感试验操作一致， 35～37℃孵育18～24小时， 对于生长缓慢的菌株如新型隐球菌，菌液需 调至 1麦氏单位，孵育48小时， 光滑念珠菌也需孵育48小时读取抑菌环直径。