细菌分离培养及药敏试验方法及步骤(内容充实)
药敏试验操作方法
药敏试验操作方法
药敏试验操作方法一般包括以下步骤：
1. 菌株选取：选择适当的病原菌株进行测试，一般使用已知药敏性的参比菌株作为对照。
2. 菌液的制备：将菌株接种到培养基上培养，培养至菌量合适后，采用生理盐水调制成适宜浓度的菌悬液。
3. 菌液的稀释：取一定数量的菌悬液，根据草浆法或直接法进行适当稀释，使菌量达到目标细菌的浓度，一般为0.5-2×10^8个CFU/mL。
4. 抗生素的制备：按照制备好的抗生素试纸或试剂盒的说明，将抗生素溶液或药片溶解成合适浓度的抗生素溶液。
5. 稀释菌液的扩散：将已制备好的菌液均匀涂布在含有良好的抗生素稀释浓度梯度的培养基上。
6. 培养基的培养：将涂布了菌液的培养基在合适的温度（通常为35-37）下培养约16-20小时。
7. 结果的解读：通过观察培养基上微生物的生长情况，判断细菌对抗生素的敏
感性。
一般，对抗生素敏感细菌培养后，会在培养基上形成清晰的抑菌圈，直径会随着对菌体敏感程度的增加而扩大。
8. 数据记录和分析：记录抗生素的名称、浓度、菌株信息、抗菌圈直径等数据，并进行统计和分析。
需要注意的是，药敏试验的具体操作方法可能会因实验目的、试验样本、试剂等因素而有所不同，因此在进行药敏试验前应详细阅读试剂盒或试纸的使用说明，并按照说明书操作。
大肠杆菌分离鉴定及药敏实验方案
鸡致病性大肠杆菌的分离培养及药敏实验实验基本步骤：样品→肝、脾触片革兰氏染色镜检→普通琼脂平板、麦康凯琼脂平板分离培养→革兰氏染色镜检、生化实验鉴定→普通肉汤培养基增殖培养→药敏实验。
1 病料采集1.1 准备材料：试管、载玻片、手术刀、手术剪、结扎绳、记号笔、冰块、泡沫箱、口罩、手套（该灭菌的都进行高压蒸汽灭菌）、冰箱。
1.2 取材部位：血液、肝脏、脾脏、肠内容物，若有鸡胚感染则去鸡胚及卵黄物。
1.3 操作方法：将病死鸡浸泡在消毒剂溶液中，打开腹腔，无菌采集肝脏、脾脏放于事先准备好的灭菌试管内，将带有肠内容物的肠管两端结扎放于灭菌是试管内。
将有明显病变的脏器入肝、脾进行触片，做好标记。
都贴上标签，标示采集样品，来源地，采集时间，采集人。
将装有病料的试管放在放有冰袋的泡沫箱中，及时返回实验室，置于4℃冰箱待检。
2 菌的分离培养及鉴定2.1 准备材料：光学显微镜、革兰氏染色液、载玻片、手术刀、接种环、平皿、恒温箱、高压锅、摇床、酒精灯、葡萄糖、甘露醇、乳糖、蔗糖等微量生化发酵管，蛋白胨水（蛋白胨(或胰蛋白胨)20g、氯化钠5g、蒸馏水1000mL pH7.4），葡萄糖蛋白胨水溶液（每100 mL蛋白胨水中加入葡萄糖1g）、甲基红试剂、吲哚试剂、乙醚、VP指示剂、超净台。
培养基：A. 普通琼脂培养基（牛肉粉 3g、蛋白胨 10g、氯化钠 5g、琼脂 20g、蒸馏水1000ml，ph7.3±0.1），B. 麦康凯琼脂培养基（蛋白胨20g、牛胆盐5g、氯化钠5g、琼脂15g，乳糖10g、结晶紫0.001g、中性红0.025g，ph7.2±0.2。
），C. 营养肉汤培养基（牛肉粉 3g、蛋白胨 10g、氯化钠 5g、蒸馏水1000ml，ph7.2±0.2）。
2．2 样品触片镜检涂片镜检：取触片,进行革兰氏染色镜检。
2.2.1在玻片上滴加草酸铵结晶紫染色液，作用1min，水洗。
2.2.2 加革兰氏碘液于玻片上媒染，作用1min，水洗。
分枝杆菌分离培养和药敏试验
分枝杆菌分离培养和药敏试验引言分枝杆菌（Branchiobdella）是一类无脊椎动物寄生虫，常见于淡水环境中。
它们具有扁平的身体和分枝状的触手，因此得名。
分枝杆菌对环境条件非常敏感，因此分离培养和药敏试验对其研究具有重要意义。
分枝杆菌分离培养的方法1.样品采集：在淡水环境中选择活跃的分枝杆菌寄生体作为样品。
2.样品处理：将样品置于理化条件适宜的培养基中，如R2A培养基等。
以适宜的温度和光照条件下培养。
3.分离纯培养：利用无菌技术将分枝杆菌从其他微生物分离出来。
常用方法包括稀释涂布法、均匀涂布法等。
4.单菌种培养：将分离得到的单个分枝杆菌菌落接种到新的培养基上进行单菌种培养。
5.培养基优化：根据菌株特性，优化培养基组成、温度、光照和其他环境条件。
通过观察菌落形态、生长速度等指标，选择适宜的培养条件。
分枝杆菌药敏试验的方法1.制备药敏试验板：选择适宜的培养基，如Mueller-Hinton琼脂、肉汤琼脂等。
将药物分别加入琼脂中，并制备成不同浓度的试验板。
2.培养分枝杆菌：将分枝杆菌菌液均匀涂布在药敏试验板上，培养在适宜的温度下。
3.药敏试验观察：观察菌落的生长情况和抑菌效果。
记录最小抑菌浓度（MIC）。
4.药敏结果解读：根据国际标准或相关研究的参考值，判断分枝杆菌对药物的敏感性和抗药性。
可以根据MIC值进行药物分类，如敏感、中度敏感和耐药。
5.药敏结果分析：根据实验结果，分析分枝杆菌的药物抗性特征，为临床治疗提供参考。
结论分枝杆菌分离培养和药敏试验是研究该虫寄生虫的重要手段。
合理的分离培养方法可以得到纯种菌落，为后续研究和药敏试验提供可靠的基础。
药敏试验能够判断分枝杆菌对药物的敏感性，为临床治疗提供重要参考。
参考文献： 1. Johnston, D.J. (2000). A new family of Branchiobdellidan (Annelida: Clitellata) ectosymbiontic on freshwater crayfishes: The Evansobdellidae. Proceedings of the Biological Society of Washington, 113(3): 842-850. 2. Erséus, C. (2001). Chapter 25 PhylumAnnelida: Clitellata, Branchiobdellida. In: Animal biodiversity: an outline of higher-level classification and survey of taxonomic richness (ed. by Z.Q. Zhang). pp. 281-282. 3. Erséus, C. (2005). Order Branchiobdellida. In: Annelida: Polychaeta, Myzostomida, Branchiura and Vestimentifera (ed. by J. B. Hutchings, S. P. Nimis, and C. Reish). pp. 97-100.。
临床细菌药物敏感试验的标准操作程序
临床细菌药物敏感试验的标准操作程序临床细菌药物敏感试验是用于确定细菌对特定药物的敏感性和耐药性的方法。
以下是一般的标准操作程序：1. 收集细菌样品：从患者体液样品（如血液、尿液、痰液等）或培养基中收集细菌样品。
2. 细菌培养：将细菌样品转移至含有适当培养基的培养皿中，并在恰当的温度和湿度条件下培养。
确保培养基的pH值和营养成分适宜。
3. 细菌纯化：如果细菌样品混有其他细菌，需要进行细菌纯化步骤，以确保测试结果准确。
4. 制备药物溶液：按照药物说明书中的要求，制备不同浓度的药物溶液。
通常会准备一系列两倍稀释的浓度，以便进行扩散法或微量稀释法。
5. 选择适当的试验方法：常见的药敏试验方法包括扩散法（如Kirby-Bauer方法）和微量稀释法（如MIC法）。
根据实验要求和实验室设备的可用性选择合适的方法。
6. 施加药物：将制备好的药物溶液施加在培养皿上，通常是使用无菌的药物敏感试验纸片或药片，或者使用微量稀释法将不同浓度的药物加入孔洞中。
7. 培养：将加药物的培养皿放置在适当的环境条件下培养一定时间，以允许细菌生长和观察。
8. 观察和记录：观察细菌在各个药物浓度下的生长情况，通常根据生长抑制圈直径或最低抑制浓度（MIC）来评估细菌对药物的敏感性。
9. 分析结果：根据观察和记录的数据，判断细菌对药物的敏感性或耐药性。
通常会参考临床实验室标准或已公开发布的敏感性解释表来进行分析。
10. 报告结果：将药敏试验结果报告给医生或临床实验室主管，以协助制定合适的治疗方案。
以上是一般的临床细菌药物敏感试验的标准操作程序，具体操作步骤可能会根据实验室的具体要求和实验目的而有所不同。
在进行任何实验之前，请确保严格遵守实验室的安全操作规程和规定。
药敏试验操作方法
药敏试验操作方法药敏试验是一种常用的实验方法，用于确定某种药物对细菌的敏感性或抗性。
下面是药敏试验的一般操作方法：1. 菌株的培养与准备：首先，选择要测试的细菌株。
常用的菌株包括大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等。
将菌株从冻存状态中转移到琼脂平板上进行培养，然后选取单个菌落进行继续培养。
2. 制备药物浓度梯度：为了测试细菌对不同浓度药物的敏感性，需要制备一系列药物浓度梯度。
可以选择常用的抗生素，如青霉素、利福平等。
根据药物的最小抑菌浓度（MIC）确定所需药物的最高浓度。
3. 制备洗涤液：制备1倍洗涤液，一般使用生理盐水或缓冲液。
如要进行中药药敏试验，可根据实验需求选择适当的提取液。
4. 制备菌悬液：从培养得到的菌落中选择单个菌落，接种到含有洗涤液的试管或培养皿中。
使用比例约为1:100（菌悬液：洗涤液），均匀混合。
5. 药物与细菌接触：将制备好的菌悬液均匀涂布在琼脂平板上，然后使用定量器将一定量的药物滴在琼脂平板上。
确定滴药量时应根据具体药物的MIC进行调整。
6. 培养与观察结果：将涂有菌悬液和药物的琼脂平板进行孵育，时间和温度可以根据具体的实验目的和菌株要求进行调整。
观察培养后的平板上是否出现菌落生长，以及菌落的数量和形态特征。
7. 结果解读与分析：根据观察到的结果，分析不同浓度药物对细菌的抑菌效果，评估细菌对药物的敏感性。
可以根据菌落的出现与否、数量的多少和生长的形态特征来判断细菌是否对药物敏感。
总结：药敏试验是一种重要的实验方法，可以评估细菌对药物的敏感性或抗性。
操作时需要注意菌株的选择和培养方法、药物浓度的制备、菌悬液的制备和药物与细菌的接触方法，以及培养和观察结果等。
通过药敏试验的结果，可以帮助医生选择适当的药物治疗感染病情。
细菌的分离、培养及细菌对抗生素的敏感性试验
3、常用的接种方法
① 划线接种 ② 液体接种: ③ 穿刺接种 ④ 涂布接种 ⑤ 三点接种 ⑥ 浇混接种 ⑦ 注射接种
从固体培养基上挑取细菌，接种到 液体培养基中；或者从液体培养物中将 菌液接至液体培养基中，称为液体接种。
3、常用的接种方法
① 划线接种 ② 液体接种 ③ 穿刺接种： ④ 涂布接种 ⑤ 三点接种 ⑥ 浇混接种 ⑦ 注射接种
四、实验内容
1. 平板划线的练习
每人取普通平板1个: ① 练习如何打开平板； ② 练习接种棒的火焰灭菌； ③ 练习挑取单个菌落； ④ 练习分区平板划线。 再取普通平板1个, 4区划线后, 37℃培养, 作为考查内容.
接种环的火焰灭菌
平板分区划线示意图
把接种环上的材料涂在培养基的一侧，一般作3-5 次划线。
5、影响细菌生长的因素
① 营养 ② 水分、pH、渗透压 ③ 温度： ④ 气体环境 ⑤ 培养时间 • 只有处于最适生长温度时，生 长速度才最快，代时最短。 • 病原微生物通常为37℃。
5、影响细菌生长的因素
① 营养 ② 水分、pH、渗透压 ③ 温度 ④ 气体环境： ⑤ 培养时间 有的细菌还需要一定浓度的CO2 • 需氧菌 • 兼性需氧菌 • 厌氧菌 化学去氧 生物去氧 隔绝阻氧 替代驱氧
1、四个概念
① 分离培养： ② 接种 ③ 菌落 ④ 菌苔
就是把病料中的病原微生物分离培 养出来，并获得分离物的单一生长材料, 以进行诊断及有关研究工作。
1、四个概念
① 分离培养 ② 接种: ③ 菌落 ④ 菌苔
将微生物接到适合于它生长繁殖的 人工培养基上或活的生物体内的过程叫 做接种。
1、四个概念
2 1 3 4
2. 琼脂斜面的接种
每人取琼脂斜面1支: ① 练习打开斜面； ② 练习斜面到斜面的接种。
细菌药敏试验报告
细菌药敏试验报告试验目的：本次试验旨在了解不同细菌对不同抗生素的敏感性情况，为制定治疗方案提供参考。
试验原理：通过对不同品种的细菌进行耐药性测试，可以确定其对各类抗生素的敏感性情况。
常用的药敏试验方法包括扩散法、碟扩散法、荧光染色法等。
本次试验采用了碟扩散法，将抗生素置于小型圆形纸片上，贴于培养基表面，观察形成的菌落周围的抑制圆来判断细菌对该抗生素的敏感性情况。
试验过程：1.准备工作：制备不同浓度的抗生素和培养基。
2.取样：将不同类型的细菌分别提取复制，并用增殖培养基培养。
3.打药敏试验：将抗生素置于小型圆形纸片上，贴于培养基表面。
4.观察结果：观察形成的菌落周围的抑制圆来判断该细菌对该抗生素的敏感性。
试验结果：根据本次试验结果，不同类型的细菌对不同抗生素的敏感性情况如下：菌种青霉素红霉素头孢菌素氯霉素大环内酯金黄色葡萄球菌敏感中度敏感抗性抗性中度敏感肺炎链球菌敏感中度敏感中度敏感抗性中度敏感大肠杆菌中度敏感抗性抗性敏感中度敏感沙门氏菌中度敏感抗性抗性敏感中度敏感结论：根据上述结果，我们可以得出以下结论：1.在治疗金黄色葡萄球菌时，不推荐使用头孢菌素或氯霉素，应优先考虑青霉素或红霉素。
2.肺炎链球菌对头孢菌素和氯霉素的反应不如青霉素，建议优先使用青霉素。
3.大肠杆菌和沙门氏菌对许多常见抗生素耐药，建议在治疗时注意综合考虑，选择适当的治疗方案。
提示：为保证试验结果准确可靠，建议在试验过程中注意以下事项：1.使用无菌器皿和工具，以免污染培养基和细菌样本。
2.制备完善、严格控制抗生素的浓度，避免因药效差致使结果不准确。
3.在选择抗生素和制定治疗方案时，应根据不同的病原菌和临床情况综合考虑。
药敏试验的实验步骤及结果判定方法
药敏试验的实验步骤及结果判定方法一、实验准备在进行药敏试验之前，需要准备以下物品：1. 抗菌药物纸片。
2. 药敏试验培养基（如MH琼脂）。
3. 待测菌株。
4. 无菌棉签。
5. 吸管或微量加样器。
6. 手套、口罩和实验服。
7. 药敏试验记录表。
二、菌株接种1. 使用无菌棉签蘸取待测菌株，轻轻涂布在MH琼脂表面，确保菌株分布均匀。
2. 将涂布好的培养基放在37℃恒温箱中培养18-24小时。
三、药物稀释1. 根据抗菌药物的说明书，配置好所需浓度的药物溶液。
2. 使用吸管或微量加样器，将药物溶液按比例稀释。
四、药敏片制备1. 准备抗菌药物纸片，根据说明书要求进行剪裁。
2. 将抗菌药物纸片放在无菌平皿中，每片纸片标记对应的药物名称。
五、药敏试验1. 在培养基上标记好菌株的名称和实验日期。
2. 使用无菌棉签或吸管，将菌株涂布在药敏试验培养基上，确保菌株分布均匀。
3. 用无菌镊子取抗菌药物纸片，轻轻贴在培养基表面，每个药物纸片间隔15-20mm。
4. 将培养基放在37℃恒温箱中培养18-24小时。
六、结果判定1. 在规定时间内观察并记录每个抗菌药物纸片周围的抑菌圈大小。
2. 根据抑菌圈大小，参照抗菌药物的敏感度判定标准，判断菌株对药物的敏感度（如敏感、中介或耐药）。
3. 综合不同抗菌药物的敏感度结果，给出最终的药敏试验报告。
七、结果记录将实验步骤和结果详细记录在药敏试验记录表中，以便后续分析和报告编写。
记录内容包括：菌株名称、实验日期、药物名称、药物浓度、抑菌圈大小、敏感度判断和实验员等信息。
八、结果解读根据药敏试验结果，临床医生可以了解菌株对不同抗菌药物的敏感性和耐药性，从而选择合适的药物进行治疗。
药敏试验结果也是抗菌药物合理使用的重要依据，有助于减少耐药性的产生和抗生素的滥用。
同时，实验室可以通过药敏试验结果的统计分析，了解地区或医院内常见病原菌的耐药情况，为抗菌药物的研发和使用提供科学依据。
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细菌分离培养方法及操作步骤
无菌取血液或脏器、淋巴结划线接种于鲜血琼脂平板或血清琼脂平面培养基、普通肉汤培养基，37℃恒温培养24 h，观察其生长特性。
目前细菌分离培养的常用方法有平板划线分离法、加热分离法和实验动物分离法。
平板划线接种法
这是目前临床上最常用的分离接种方法。
它可以从被检病料中通过划线可使细菌分离、分散生长而形成单个菌落（有利于从含有多种细菌的标本中分离出目的菌），以便挑选可疑菌落作纯培养加以鉴定。
具体操作：
1、右手持接种环，在酒精灯上火焰灭菌；
图1 病料采集图2 接种环灭菌
2、待接种环冷却后，挑取被检料少许，左手持琼脂平板，以食指为支点，用拇指和无名指将平皿揭开一空隙。
大约20℃时，迅速
地将接种环轻轻地涂布在培养基的边缘。
3、在涂布处来回移动作曲线形划线接种。
（注意：划线时，以腕力使接种环在琼脂平板表面划动，尽量不要划破培养基，划的线条要密，但不能重复旧线，以免培养物形成菌苔。
）
图3 平板划线接种法
4、划线完毕，合上平皿盖，将琼脂平板倒置，放入37℃温箱内培养18－24小时。
注意：分离培养用的平板培养基应表面干燥，可于临用前置37℃孵育箱内30分钟，这样表面即干燥有利于分离培养，又使培养基预温，对培养某些较娇弱的细菌有利。
细菌药敏试验方法操作步骤
药敏试验是抗菌药使用以前必不可少的一个基本环节，一个正确的药敏结果能够科学的指导养殖户用药，减少抗菌素使用的盲目性，从而减少养殖户损失。
在临床实际生产中具备重要意义。
1、在“超净台”中，用经（酒精灯）火焰灭菌的接种环挑取适量细菌培养物，以划线方式将细菌涂布到平皿培养基上。
具体方式；用灭菌接种环取适量细菌分别在平皿边缘相对四点涂菌，以每点开始划线涂菌至平皿的1/2。
然后，找到第二点划线至平皿的1/2，依次划线，直至细菌均匀密布于平皿。
图4 接种环划线
2、以无菌操作将灭菌的不锈钢小管（外径为4毫米、孔径与孔距均为3毫米，管的两端要光滑，也可用玻璃管、瓷管），放置在培
养基上打孔，将孔中的培养基用针头挑出，并以火焰封底，使培养基能充分的与平皿融合（以防药液渗漏，影响结果）。
3、添加药物：按不同药液加样，样品加至满而不溢为止。
将平皿培养基置于37℃温箱中培养24小时后，观察效果。
图5 添加药物
药敏试验结果：
影响药敏结果的因素：
1、培养基:应根据试验菌的营养需要进行配制。
倾注平板时,厚度合适，约56mm，不可太薄,一般90mm直径的培养皿,倾注培养基1820m为宜。
培养基内应尽量避免有抗菌药物的拮抗物质,如钙、镁离子能减低氨基糖苷类的抗菌活性,胞腺密啶核苷和对氨苯甲酸(PABA)能拮抗磷胺药和TMP的活性
2、细菌接种量:细菌接种量应恒定,如太多,抑菌圈变小,能产酶的菌株更可破坏药物的抗菌活性。
3、药物浓度:药物的浓度和总量直接影响抑菌试验的结果,需精硫配制。
商品药应严格按照其推荐治疗量配制。
4、培养时间:一般培养温度和时间为37℃8-18小时,有些抗菌药扩散慢如多粘菌素,可将已放好抗菌药的平板培养基,先置4℃泳箱内2-4小时,使抗菌药预扩散,然后再放37℃温箱中培养,可以推迟细菌的生长,而得到较大的抑菌圈。
温培养箱中培养18-24h后备用。