抗菌药物敏感试验+细菌耐药性检测
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18
4.用无菌棉签浸入细菌悬 液中，将拭子在试管上壁 轻轻挤压以挤去过多的菌 液。棉签在三个方向均匀 抹琼脂表面（每次转60℃） 使菌液均匀分布，最后沿 平板内缘涂抹一周。
19
5.盖上平板的盖子，放置培养箱内孵育，放置 3~10分钟后贴上标准抗生素纸片。
20
6.用无菌镊子或纸片分配器将抗菌纸片粘贴于M-H琼 脂的表面，一旦纸片贴上，不能移动；各抗菌纸片中
系列1
5
10
15
20
Diameter（mm）
13
纸片法药敏试验抑菌圈直径与结果解释的标准
抗菌药物与细菌 纸片含量 抑菌圈直径：mm 相应MIC μg/ml 耐药 中介度 敏感 耐药 敏感
丁胺卡那霉素 氨苄青霉素
测肠杆菌 测葡萄球菌 测嗜血杆菌 测肠球菌
30μg ≤14 15-16 ≥ 17 ≥32 ≤16
点的刻度浓度即为抗菌药物抑制细菌的MIC。
依照CLSI标准判断其敏感、耐药、中介。
26
有菌生长区 无菌生长区
27
椭圆形细菌 生长抑制区
256 128
8
判读抑菌浓度
（MIC ug/ml)
016
28
E test 法特点
优点 连续浓度梯度，与琼脂稀释法相关性好 （相关系数为0.9）.可测MIC。 操作简单，影响因素少，稳定性高。
心距离应大于24mm，纸片距平板内缘应大于15mm。
21
百度文库
7.经过35℃16～24h孵育。 8.取抑菌环直径， 根据CLSI标准，报告细菌对 该抗生素敏感、耐药、中介。
22
纸片扩散法质量控制
抑菌圈直径？
培养基：M-H平板厚度，4 mm
↗↘
细菌悬液：0.5麦氏标准的细菌浓度 ↗ ↘
药敏纸片的质量
32
两种药物的联合使用的效果
增强作用：两种抗生素联用的效果大于它们单
独使用时的效果之和； 20％～25％
相加作用：它们联用时的效果等于单用两种抗
生素效果之和； 60％～70％
无关作用：两种抗生素联用的效果，仅相当于 其中一种具有较强作用的抗生素的效果；
拮抗作用：两种抗生素联用时的效果反而小于
10μg 10μg 10μg 10μg
≤11 12-13 ≤ 28 — ≤19 — ≤16 —
≥ 14 ≥ 29 ≥ 20
≥32
≥4 ≥16
≤8
≤0.25 ≤2
14
操作方法 ： 1. 制备M-H琼脂平板，厚度4mm。 2 .制备0.5麦氏比浊管浊度的菌液 （培养16～24h，4~5个菌落）。 3. 菌液均匀涂布于平板。（15分钟接种完毕） 4. 无菌贴标准抗生素纸片于M-H琼脂表面， 5. 经过35℃16～24h孵育。 6. 量取抑菌环直径， 根据CLSI标准，
5
6
CLSI标准 治疗浓度的上限 即表中的 R
治疗浓度
治疗浓度的下限 即表中的 S
耐药
中介耐药 敏感
MIC
7
第一节、抗菌药物敏感性试验方法
需氧和兼性厌氧菌
8
需氧和兼性厌氧菌药敏试验的方法
稀释法 • 肉汤稀释法（试管稀释法） • 琼脂稀释法（平板稀释法）
纸片扩散法（纸片法） E-试验 联合药物敏感试验
报告细菌对该抗生素敏感、 耐药、中介。
15
操作方法 ：
1. 将在约56℃恒温的无菌M-H琼脂倾注直径为90mm 的平板，其厚度 4mm。
16
2.无菌挑取孵育16～24h的血平板上4~5个菌落。
17
3. 将菌置于无菌生理盐水中，校正其浊度于 0.5麦氏比浊管浊度的菌液。
1.5×108CFU /ml
药物敏感细菌在纸片周围一定距离内的生长受到 抑制，形成抑菌圈。
抑菌圈的大小反映测试菌 对药物的敏感程度。 二者呈正相关。
11
抑菌圈边缘的药物浓度 与 MIC
12
抑菌圈的大小与MIC： 二者呈负相关，即抑菌圈愈大，MIC愈小。
lgMIC
50 40 30 20 10
0 0
氨苄青霉素对肠杆菌科的抑菌试验
第四章 抗菌药物敏感试验
临床微生物学教研室 杨维青
1
主要内容
抗菌药物敏感性概述 抗菌药物敏感性试验方法 全国“细菌耐药监测网”简介
2
敏感和耐药的概念
从本质上讲：细菌对某种抗菌药物是敏感还是耐 药，常以该抗菌药物的治疗浓度与MIC的关系而 定。 常用剂量的抗菌药物通过常 用途径所能达到的血药浓度
缺点：E试条较昂贵; 不适用于生长缓慢的苛养菌。
31
四、联合药物敏感试验
联合药物意义
用于病原菌尚未确定的急、重症感染的经验治 疗,以扩大病原治疗的覆盖面
治疗多种细菌所引起的混合感染 对于某些耐药菌可取得协同抗菌作用 减少或推迟治疗过程中细菌耐药性的产生 避免药物达到毒性剂量。
9
稀释法的特点
定量的药敏试验，测定MIC、MBC。 方法比较繁琐，手工操作一般不作为常规试验，
常用于调查罕见耐药。 自动微生物鉴定药敏分析系统采用微量稀释法
检测MIC。
10
二、纸片扩散法（disc diffusion test) 原理（：Kirby-Bauer法）
将浸有抗菌药物的纸片贴在涂有测试菌的琼脂平 板上。抗菌药物向琼脂四周扩散形成递减的梯度 浓度。
256
原理：
128
E试条是一条5mm×50mm无孔试剂载体，一面固定有 一系列预先制备的浓度呈连续指数增长的抗菌药物，
8
另一面有判别的刻度。抗菌药物的梯度可覆盖有15-20个对倍稀释浓度的宽度范围。
016
将E试条放在细菌接种过的琼脂平板上，经孵育，围
绕试条明显可见椭圆形抑菌圈，圈的边缘与试条交
3
血药浓度与MIC之间的关系
上限 下限
耐药 中介耐药
敏感
4
敏感和耐药的概念
抗菌药物的治疗浓度与MIC的关系：
若MIC小于治疗浓度， 则为“敏感”（Sensitive , S ），推荐使用。
若MIC大于治疗浓度， 则为“耐药”（ Resistant , R ）；
若MIC介于治疗浓度的上下限之间， 则为“中度耐药”（ Intermediate , I ）或中度敏 感
各抗菌纸片中心距离应大于24mm， 纸片距平板内缘应大于15mm。↘ ↗ 9cm的平板贴6个
培养时间 ↗ 质控菌株
23
24
纸片扩散法的特点
根据抑菌圈的直径，依照CLSI标准，作出敏感、 耐药、和中介的判断。为‘‘ 定性”结果。
CLSI推荐的最简单的药敏试验。
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三、E试验法（浓度梯度法）
4.用无菌棉签浸入细菌悬 液中，将拭子在试管上壁 轻轻挤压以挤去过多的菌 液。棉签在三个方向均匀 抹琼脂表面（每次转60℃） 使菌液均匀分布，最后沿 平板内缘涂抹一周。
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5.盖上平板的盖子，放置培养箱内孵育，放置 3~10分钟后贴上标准抗生素纸片。
20
6.用无菌镊子或纸片分配器将抗菌纸片粘贴于M-H琼 脂的表面，一旦纸片贴上，不能移动；各抗菌纸片中
系列1
5
10
15
20
Diameter（mm）
13
纸片法药敏试验抑菌圈直径与结果解释的标准
抗菌药物与细菌 纸片含量 抑菌圈直径：mm 相应MIC μg/ml 耐药 中介度 敏感 耐药 敏感
丁胺卡那霉素 氨苄青霉素
测肠杆菌 测葡萄球菌 测嗜血杆菌 测肠球菌
30μg ≤14 15-16 ≥ 17 ≥32 ≤16
点的刻度浓度即为抗菌药物抑制细菌的MIC。
依照CLSI标准判断其敏感、耐药、中介。
26
有菌生长区 无菌生长区
27
椭圆形细菌 生长抑制区
256 128
8
判读抑菌浓度
（MIC ug/ml)
016
28
E test 法特点
优点 连续浓度梯度，与琼脂稀释法相关性好 （相关系数为0.9）.可测MIC。 操作简单，影响因素少，稳定性高。
心距离应大于24mm，纸片距平板内缘应大于15mm。
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百度文库
7.经过35℃16～24h孵育。 8.取抑菌环直径， 根据CLSI标准，报告细菌对 该抗生素敏感、耐药、中介。
22
纸片扩散法质量控制
抑菌圈直径？
培养基：M-H平板厚度，4 mm
↗↘
细菌悬液：0.5麦氏标准的细菌浓度 ↗ ↘
药敏纸片的质量
32
两种药物的联合使用的效果
增强作用：两种抗生素联用的效果大于它们单
独使用时的效果之和； 20％～25％
相加作用：它们联用时的效果等于单用两种抗
生素效果之和； 60％～70％
无关作用：两种抗生素联用的效果，仅相当于 其中一种具有较强作用的抗生素的效果；
拮抗作用：两种抗生素联用时的效果反而小于
10μg 10μg 10μg 10μg
≤11 12-13 ≤ 28 — ≤19 — ≤16 —
≥ 14 ≥ 29 ≥ 20
≥32
≥4 ≥16
≤8
≤0.25 ≤2
14
操作方法 ： 1. 制备M-H琼脂平板，厚度4mm。 2 .制备0.5麦氏比浊管浊度的菌液 （培养16～24h，4~5个菌落）。 3. 菌液均匀涂布于平板。（15分钟接种完毕） 4. 无菌贴标准抗生素纸片于M-H琼脂表面， 5. 经过35℃16～24h孵育。 6. 量取抑菌环直径， 根据CLSI标准，
5
6
CLSI标准 治疗浓度的上限 即表中的 R
治疗浓度
治疗浓度的下限 即表中的 S
耐药
中介耐药 敏感
MIC
7
第一节、抗菌药物敏感性试验方法
需氧和兼性厌氧菌
8
需氧和兼性厌氧菌药敏试验的方法
稀释法 • 肉汤稀释法（试管稀释法） • 琼脂稀释法（平板稀释法）
纸片扩散法（纸片法） E-试验 联合药物敏感试验
报告细菌对该抗生素敏感、 耐药、中介。
15
操作方法 ：
1. 将在约56℃恒温的无菌M-H琼脂倾注直径为90mm 的平板，其厚度 4mm。
16
2.无菌挑取孵育16～24h的血平板上4~5个菌落。
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3. 将菌置于无菌生理盐水中，校正其浊度于 0.5麦氏比浊管浊度的菌液。
1.5×108CFU /ml
药物敏感细菌在纸片周围一定距离内的生长受到 抑制，形成抑菌圈。
抑菌圈的大小反映测试菌 对药物的敏感程度。 二者呈正相关。
11
抑菌圈边缘的药物浓度 与 MIC
12
抑菌圈的大小与MIC： 二者呈负相关，即抑菌圈愈大，MIC愈小。
lgMIC
50 40 30 20 10
0 0
氨苄青霉素对肠杆菌科的抑菌试验
第四章 抗菌药物敏感试验
临床微生物学教研室 杨维青
1
主要内容
抗菌药物敏感性概述 抗菌药物敏感性试验方法 全国“细菌耐药监测网”简介
2
敏感和耐药的概念
从本质上讲：细菌对某种抗菌药物是敏感还是耐 药，常以该抗菌药物的治疗浓度与MIC的关系而 定。 常用剂量的抗菌药物通过常 用途径所能达到的血药浓度
缺点：E试条较昂贵; 不适用于生长缓慢的苛养菌。
31
四、联合药物敏感试验
联合药物意义
用于病原菌尚未确定的急、重症感染的经验治 疗,以扩大病原治疗的覆盖面
治疗多种细菌所引起的混合感染 对于某些耐药菌可取得协同抗菌作用 减少或推迟治疗过程中细菌耐药性的产生 避免药物达到毒性剂量。
9
稀释法的特点
定量的药敏试验，测定MIC、MBC。 方法比较繁琐，手工操作一般不作为常规试验，
常用于调查罕见耐药。 自动微生物鉴定药敏分析系统采用微量稀释法
检测MIC。
10
二、纸片扩散法（disc diffusion test) 原理（：Kirby-Bauer法）
将浸有抗菌药物的纸片贴在涂有测试菌的琼脂平 板上。抗菌药物向琼脂四周扩散形成递减的梯度 浓度。
256
原理：
128
E试条是一条5mm×50mm无孔试剂载体，一面固定有 一系列预先制备的浓度呈连续指数增长的抗菌药物，
8
另一面有判别的刻度。抗菌药物的梯度可覆盖有15-20个对倍稀释浓度的宽度范围。
016
将E试条放在细菌接种过的琼脂平板上，经孵育，围
绕试条明显可见椭圆形抑菌圈，圈的边缘与试条交
3
血药浓度与MIC之间的关系
上限 下限
耐药 中介耐药
敏感
4
敏感和耐药的概念
抗菌药物的治疗浓度与MIC的关系：
若MIC小于治疗浓度， 则为“敏感”（Sensitive , S ），推荐使用。
若MIC大于治疗浓度， 则为“耐药”（ Resistant , R ）；
若MIC介于治疗浓度的上下限之间， 则为“中度耐药”（ Intermediate , I ）或中度敏 感
各抗菌纸片中心距离应大于24mm， 纸片距平板内缘应大于15mm。↘ ↗ 9cm的平板贴6个
培养时间 ↗ 质控菌株
23
24
纸片扩散法的特点
根据抑菌圈的直径，依照CLSI标准，作出敏感、 耐药、和中介的判断。为‘‘ 定性”结果。
CLSI推荐的最简单的药敏试验。
25
三、E试验法（浓度梯度法）