细胞迁移和侵袭实验
细胞迁移侵袭实验操作步骤(Transwell)
迁移实验（cell migration assay）实验介绍细胞迁移与侵袭实验将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔，将研究的细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。
实验步骤：1材料准备：可拍照显微镜，Transwell小室，孔径8μm，没包被胶的(Coster和Corning公司的也较常用)，Transwell迁移实验的细胞培养板24孔板。
细胞培养板应当与购买的Transwell小室相配套，BD公司的Matrigel，无血清DMEM，(1%胎牛血清)DMEM和1640培养基，DMEM 完全培养基，1640完全培养基（也可加到20%血清），无菌PBS，棉签，胰酶，4%多聚甲醛固定液或者甲醇，结晶紫染液（0.1%（g/ml）PBS结晶紫）2步骤和流程2.1基质胶铺板：用BD公司的Matrigel 1：8（根据细胞产生mmp的量来决定）稀释，包被Transwell小室底部膜的上室面，置37℃30min使Matrigel聚合成凝胶。
使用前进行基底膜水化。
2.2制备细胞悬液①制备细胞悬液前可先让细胞撤血清饥饿12－24h，进一步去除血清的影响。
但这一步并不是必须的。
②消化细胞，终止消化后离心弃去培养液，（用PBS洗1－2遍），用含BSA的无血清培养基重悬。
调整细胞密度至5×105/ml。
2.3接种细胞①取细胞悬液100µl加入Transwell小室。
②24孔板下室一般加入600µl含20%FBS的培养基，特别注意的是，下层培养液和小室间常会有气泡产生，一旦产生气泡，下层培养液的趋化作用就减弱甚至消失了，在种板的时候要特别留心，一旦出现气泡，要将小室提起，去除气泡，再将小室放进培养板。
细胞划痕实验实验报告
实验目的：细胞划痕实验是一种常用的细胞迁移和侵袭能力检测方法。
本实验旨在通过细胞划痕实验评估细胞在不同条件下的迁移能力，为进一步研究细胞迁移的分子机制提供实验依据。
实验材料：1. 细胞：待测细胞系（如A549细胞）2. 培养基：DMEM培养基3. 细胞培养试剂：胎牛血清、青霉素、链霉素4. 划痕工具：一次性无菌划针5. 镜头：倒置显微镜6. 显微摄影设备：数码相机7. 数据分析软件：ImageJ实验方法：1. 细胞培养：将待测细胞系接种于6孔板，在37℃、5%CO2的条件下培养至对数生长期。
2. 细胞划痕：将细胞用胰酶消化后，用含胎牛血清的DMEM培养基重悬，接种于6孔板，使细胞密度达到70-80%。
用无菌划针在细胞层上划一条直线，用吸水纸吸去划痕周围的细胞。
3. 划痕修复实验：将细胞分为实验组和对照组。
实验组加入不同浓度的药物或处理因素，对照组加入等体积的DMEM培养基。
在37℃、5%CO2的条件下培养24小时。
4. 观察与拍照：用倒置显微镜观察划痕愈合情况，并用数码相机拍照记录。
5. 数据分析：使用ImageJ软件对划痕愈合区域的面积进行测量，计算划痕愈合率。
实验结果：1. 实验组与对照组的划痕愈合率存在显著差异（P<0.05）。
2. 随着药物浓度的增加，划痕愈合率逐渐升高。
3. 不同处理因素对划痕愈合率的影响存在差异。
实验讨论：细胞划痕实验是一种简单、快速、灵敏的细胞迁移和侵袭能力检测方法。
本实验结果表明，药物或处理因素对细胞迁移能力具有显著影响。
以下是对实验结果的讨论：1. 划痕愈合率与细胞迁移能力密切相关。
本实验中，划痕愈合率越高，表明细胞迁移能力越强。
2. 药物或处理因素对细胞迁移能力的影响可能与细胞骨架重组、细胞黏附、细胞外基质降解等因素有关。
3. 本实验结果表明，不同药物或处理因素对细胞迁移能力的影响存在差异，可能与药物或处理因素的分子靶点、作用机制等因素有关。
实验结论：本实验通过细胞划痕实验评估了药物或处理因素对细胞迁移能力的影响。
细胞迁移侵袭实验操作步骤(Transwell)
迁移实验(ｃell ｍｉgratiｏn ａssay)实验介绍ﻫ细胞迁移与侵袭实验将Traｎswell小室放入培养板中,小室内称上室,培养板内称下室,上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔,将研究得细胞种在上室内,由于聚碳酸酯膜有通透性,下层培养液中得成分可以影响到上室内得细胞,应用不同孔径与经过不同处理得聚碳酸酯膜,就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面得研究。
1材料准备:ﻫ可拍照显微镜,Transwell小室,孔径8μm,没包被胶得(Ｃoｓter与实验步骤:ﻫCorning公司得也较常用),Ｔrａnswelｌ迁移实验得细胞培养板24孔板。
细胞培养板应当与购买得Trａnｓwｅｌl小室相配套,BD公司得Matrigel,无血清ＤMＥM,(1%胎牛血清)ＤMEM与1640培养基,ＤMEM完全培养基,１6４0完全培养基(也可加到20%血清),无菌P ＢＳ,棉签,胰酶,４％多聚甲醛固定液或者甲醇,结晶紫染液(0、1％(g/ml)PBS结晶紫)ﻫ2步骤与流程ﻫ2。
1基质胶铺板:用BＤ公司得Mａｔｒigel1:8(根据细胞产生mmp得量来决定)稀释,包被Ｔraｎswell小室底部膜得上室面,置3７℃30min使Ｍaｔrigeｌ聚合成凝胶、使用前进行基底膜水化。
ﻫ２、2制备细胞悬液ﻫ①制备细胞悬液前可先让细胞撤血清饥饿12—24h,进一步去除血清得影响。
但这一步并不就是必须得、②消化细胞,终止消化后离心弃去培养液,(用ＰBS洗1－2遍),用含ＢSA得无血清培养基重悬、调整细胞密度至5×10５/ml。
ﻫ２。
3接种细胞①取细胞悬液１00µl加入Trａnｓwelｌ小室、ﻫ②24孔板下室一般加入600µl含20％ＦBS 得培养基,特别注意得就是,下层培养液与小室间常会有气泡产生,一旦产生气泡,下层培养液得趋化作用就减弱甚至消失了,在种板得时候要特别留心,一旦出现气泡,要将小室提起,去除气泡,再将小室放进培养板。
Transwell实验原理与操作步骤
Transwell实验原理与操作步骤Transwell实验，也被称为细胞侵袭实验，是一种研究细胞迁移和侵袭能力的实验方法。
其基本原理是将小室放入培养板中，小室内称为上室，培养板内称为下室，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。
上室内添加上层培养液，下室内添加下层培养液，并将研究的细胞种在上室内。
由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞生长、运动等。
在进行不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜的实验时，可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。
在肿瘤细胞侵袭实验中，需在聚碳酸酯膜上侧铺一层基质胶，用以模仿细胞外基质。
肿瘤细胞必须分泌基质金属蛋白酶（MMPs）将基质消化了才能进入下室（这与体内情况较为相似）。
最后通过计算进入下室的细胞量即可反应细胞的侵袭能力。
有侵袭能力的细胞才可用于Transwell侵袭实验。
建议实验前先用明胶酶谱法检测MMPs的表达，特别是MMP-2的表达。
Transwell实验的具体操作步骤如下：1.实验前的准备工作：需要提前一天将Matrigel胶（一种人工合成的细胞外基质）从冰箱中取出，放置在冰盒上融化。
同时，将24孔板、枪头、离心管等实验器材也放置在冰盒中预冷。
2.基质胶铺板：将融化好的Matrigel胶与无血清培养基按照1:8的比例混合，然后用预冷的枪头将混合液均匀铺设在Transwell小室的上室底部，注意要避免产生气泡。
铺好后将小室放入37℃的培养箱中孵育30分钟，使Matrigel胶凝固。
3.细胞处理：将需要研究的细胞进行传代或复苏，并用无血清培养基洗涤两次，然后用胰酶消化并计数。
4.接种细胞：将计数好的细胞用无血清培养基重悬，然后取适量细胞悬液加入到Transwell小室的上室中，注意要保证每个小室的细胞数量一致。
5.添加培养液：在上室和下室中分别添加适量的含血清培养基，上室的培养基中可以含有研究药物或其他处理因素。
6.培养细胞：将Transwell小室放入37℃的培养箱中培养24-48小时，具体时间可以根据研究目的和细胞类型进行调整。
细胞迁移和侵袭实验的区别
细胞迁移是细胞在化学信号（如：趋化因子）的驱使下沿着浓度梯度从一个区域转移到另一区域的运动。
细胞侵袭与细胞迁移比较类似，但是“侵袭”需要细胞穿过胞外基质层（ECM）或基底膜基质层（BME），在这个过程中细胞先酶解去除ECM/BME的阻碍，从而在趋化因子浓度梯度驱使下完成从一处到另一处的移动。
从名字来看，这两种行为既有联系又有区别——迁移是在没有阻力的情况下的细胞移动，但侵袭则需要裂解“阻力”后才能实现移动能力。
简单总结就是，细胞侵袭是一种特殊的细胞迁移，侵袭细胞具有迁移能力，但并非所有的迁移细胞都具有侵袭性。
一、细胞迁移细胞迁移(cell migration)也称为细胞爬行、细胞移动或细胞运动，是指细胞在接收到迁移信号或感受到某些物质的梯度后而产生的移动。
细胞迁移为细胞头部伪足的延伸、新的黏附建立、细胞体尾部收缩在时空上的交替过程。
细胞迁移是正常细胞的基本功能之一，是机体正常生长发育的生理过程，也是活细胞普遍存在的一种运动形式。
胚胎发育、血管生成、伤口愈合、免疫反应、炎症反应、动脉粥样硬化、癌症转移等过程中都涉及细胞迁移。
细胞迁移的过程大致可以分为4步：①细胞前端伸出片状伪足；②细胞前端伪足和细胞外基质形成新的细胞黏附；③细胞体收缩；④细胞尾端和周围基质黏着解离，细胞向前运动。
细胞迁移需要胞外、胞内信号分子调控细胞骨架动力装置所给予的驱动力与肌动蛋白细胞骨架介导的黏附所提供的锚定力之间的协调运作。
目前，细胞迁移基本在细胞培养物中进行，主流的方法有：Boyden小室（跨膜法）、间隙封闭分析等；其中，Boyden小室可用于分析贴壁或不贴壁细胞，并可检测趋化梯度下的迁移，但这种方法不适用实时动态迁移；间隙封闭分析则可以对细胞迁移进行实时监测，甚至可有实现三维细胞的迁移分析，其缺点是不能分析不贴壁细胞和趋化梯度下的迁移。
因此，可以根据实际情况进行实验方案的设定。
同时，细胞划痕也可以测定细胞迁移运动与修复能力的方法，类似体外伤口愈合模型。
细胞生物学中的细胞迁移和侵袭检测技术
细胞生物学中的细胞迁移和侵袭检测技术细胞迁移和侵袭是细胞生物学中两个重要的生理过程，也与一些疾病的发展和转移相关。
为了更好地理解和研究这些生理过程，科学家们开发了各种细胞迁移和侵袭检测技术。
本文将介绍一些常见的细胞迁移和侵袭检测技术，以及它们在细胞生物学研究领域中的应用。
一、划痕实验法划痕实验法是一种简单有效的细胞迁移检测技术。
在该方法中，细胞被种植在培养皿中，并留下一道划痕。
随着时间的推移，观察细胞是否填补划痕。
如果细胞填补了划痕，则说明细胞进行了迁移。
这种方法的优点是操作简单，无需复杂的设备或试剂。
然而，它也存在一些局限性，例如无法提供关于细胞侵袭性的信息，只能提供关于细胞迁移的信息。
二、Transwell迁移实验法Transwell迁移实验法是一种常见的细胞迁移和侵袭检测技术。
在该方法中，细胞被种植在Transwell孔的上室，并在下室中加入诱导迁移的物质。
细胞通过Transwell孔进行迁移，最终到达下室。
通过计算孔底部细胞数量或染色，可以评估细胞的迁移程度。
Transwell迁移实验法具有较高的准确性和可重复性。
它还可以通过更换Transwell上室或添加支持层来评估细胞的侵袭能力。
然而，该方法需要特定的设备和试剂，操作过程较为繁琐。
三、倒置显微镜法倒置显微镜法是一种常用的细胞迁移和侵袭检测技术。
在该方法中，细胞被种植在培养皿的底部，并通过倒置显微镜观察细胞的迁移和侵袭过程。
倒置显微镜可以提供高清晰度的图像，并可以连续观察细胞的动态变化。
倒置显微镜法适用于观察单个细胞或细胞群的迁移和侵袭过程。
它可以提供详细的细胞形态和细胞行为信息。
然而，该方法需要倒置显微镜等专业设备，并且观察时间可能较长。
四、细胞侵入试验法细胞侵入试验法是一种常见的细胞侵袭检测技术。
在该方法中，细胞被种植在含有基底膜模拟物的Transwell孔上室。
通过加入诱导细胞侵袭的化学物质，细胞可以穿过基底膜模拟物并进入下室。
细胞迁移侵袭实验操作步骤(Transwell)
迁移实验（cell migration assay）实验介绍细胞迁移与侵袭实验将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔，将研究的细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。
实验步骤：1材料准备：可拍照显微镜，Transwell小室，孔径8μm，没包被胶的(Coster和Corning公司的也较常用)，Transwell迁移实验的细胞培养板24孔板。
细胞培养板应当与购买的Transwell小室相配套，BD公司的Matrigel，无血清DMEM，(1%胎牛血清)DMEM和1640培养基，DMEM 完全培养基，1640完全培养基（也可加到20%血清），无菌PBS，棉签，胰酶，4%多聚甲醛固定液或者甲醇，结晶紫染液（0.1%（g/ml）PBS结晶紫）2步骤和流程2.1基质胶铺板：用BD公司的Matrigel 1：8（根据细胞产生mmp的量来决定）稀释，包被Transwell小室底部膜的上室面，置37℃30min使Matrigel聚合成凝胶。
使用前进行基底膜水化。
2.2制备细胞悬液①制备细胞悬液前可先让细胞撤血清饥饿12－24h，进一步去除血清的影响。
但这一步并不是必须的。
②消化细胞，终止消化后离心弃去培养液，（用PBS洗1－2遍），用含BSA的无血清培养基重悬。
调整细胞密度至5×105/ml。
2.3接种细胞①取细胞悬液100µl加入Transwell小室。
②24孔板下室一般加入600µl含20%FBS的培养基，特别注意的是，下层培养液和小室间常会有气泡产生，一旦产生气泡，下层培养液的趋化作用就减弱甚至消失了，在种板的时候要特别留心，一旦出现气泡，要将小室提起，去除气泡，再将小室放进培养板。
细胞迁移侵袭实验操作步骤(Transwell)(汇编)
迁移实验（cell migration assay）实验介绍细胞迁移与侵袭实验将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔，将研究的细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。
实验步骤：1材料准备：可拍照显微镜，Transwell小室，孔径8μm，没包被胶的(Coster和Corning公司的也较常用)，Transwell迁移实验的细胞培养板24孔板。
细胞培养板应当与购买的Transwell小室相配套，BD公司的Matrigel，无血清DMEM，(1%胎牛血清)DMEM和1640培养基，DMEM 完全培养基，1640完全培养基（也可加到20%血清），无菌PBS，棉签，胰酶，4%多聚甲醛固定液或者甲醇，结晶紫染液（0.1%（g/ml）PBS结晶紫）2步骤和流程2.1基质胶铺板：用BD公司的Matrigel 1：8（根据细胞产生mmp的量来决定）稀释，包被Transwell小室底部膜的上室面，置37℃30min使Matrigel聚合成凝胶。
使用前进行基底膜水化。
2.2制备细胞悬液①制备细胞悬液前可先让细胞撤血清饥饿12－24h，进一步去除血清的影响。
但这一步并不是必须的。
②消化细胞，终止消化后离心弃去培养液，（用PBS洗1－2遍），用含BSA的无血清培养基重悬。
调整细胞密度至5×105/ml。
2.3接种细胞①取细胞悬液100µl加入Transwell小室。
②24孔板下室一般加入600µl含20%FBS的培养基，特别注意的是，下层培养液和小室间常会有气泡产生，一旦产生气泡，下层培养液的趋化作用就减弱甚至消失了，在种板的时候要特别留心，一旦出现气泡，要将小室提起，去除气泡，再将小室放进培养板。
Transwell用于迁移实验和侵袭实验的方法
Transwell用于迁移实验和侵袭实验的方法Transwell用于细胞迁移实验和侵袭实验的不同:对于肿瘤细胞而言，迁移看的是肿瘤细胞迁移的快慢和程度。
而肿瘤细胞侵袭是肿瘤细胞进行迁移它就必须分泌金属蛋白MMP9，而基质胶的作用相当于模拟人体类的基质。
方法：1 Transwell实验检测新鱼腥草素钠对食管癌细胞迁移的影响（1）取对数生长期的Kyse-450、Eca-109和TE1细胞，消化、离心、重悬并进行细胞计数，调整细胞浓度为1×105/mL；（2）100μL细胞悬液接种于transwell上室。
（注意上室的细胞悬液中不含血清）；（3）添加600μL FBS含量为20%的完全培养基于下室；（4）设置对照组及实验组，实验组药物加于transwell上室中，Kyse-450细胞系药物终浓度为0、100、200、300μg/mL，培养24h；Eca-109、TE1两种细胞系药物终浓度为0、50、100、200μg/mL；（5）24h后，将上室和下室的液体吸出，PBS清洗上室两遍。
使用松软的棉花去除小室内细胞，即未穿透过小室的细胞；（6）4%甲醛固定上室穿透过的细胞，固定15min；（7）固定过后，风干上室10min，用0.5%结晶紫染色20min；（8）PBS清洗3遍，从边缘吸干水分，拍照记录，每个小室随机拍摄5个位置，每个实验重复3次。
2Transwell检测细胞侵袭2.1 Matrigel胶分装处理（1）将Matrigel基质胶放于冰盒，再同冰盒一起放在4℃冰箱的里面，过夜融化，随时观看瓶中的基质胶状态，确认基质胶完全融化；（2）根据实验需求计算出一次的价值叫用量进行分装，在分装时与Matrigel胶接触的全部用品均需预冷，所有操作过程在冰上低温无菌操作，分装放置在－80℃冰箱，保留货号，不能重复冻融使用；（3）当胶浓度＜3mg/mL时，不会成胶；（4）融化后的Matrigel胶为澄清液体。
培育技术中的细胞迁移和侵袭研究方法简介
培育技术中的细胞迁移和侵袭研究方法简介培育技术中的细胞迁移和侵袭是现代生物医学领域中重要的研究方向之一。
细胞迁移和侵袭能力是癌症发展和转移的关键步骤，因此了解和掌握这些研究方法对于深入研究癌症等疾病的发生和发展机制至关重要。
本文将对几种常见的培育技术中的细胞迁移和侵袭研究方法进行简介。
首先，细胞迁移和侵袭实验中最常用的方法是Transwell实验。
Transwell实验通过在一个具有孔洞的膜上涂覆细胞并将其置于培养皿中进行培养，通过孔洞上、下的培养液来观察细胞迁移和侵袭的情况。
该方法简单易行，可以模拟细胞穿过基底膜进入邻近组织的过程。
此外，也可将上下孔洞的培养液分别加入不同的试剂，以研究其对细胞迁移和侵袭能力的影响。
其次，划痕实验也是常用的细胞迁移实验方法之一。
该方法通过在细胞培养皿中划出一条明显的划痕，然后观察一定时间后细胞填充划痕的程度，来评估细胞的迁移能力。
划痕实验可以直观地观察到细胞的迁移情况，并且操作简单快捷。
然而，由于该方法不模拟细胞穿越基底膜的过程，所以不能全面评估细胞的侵袭能力。
除了以上两种方法，还有其他一些更加先进和精确的技术用于研究细胞迁移和侵袭。
例如，全息成像技术可以实时观察细胞的三维迁移和侵袭过程，提供更为全面的视角。
单细胞迁移技术可以追踪和记录单个细胞的迁移轨迹，揭示细胞迁移的空间和时间特征。
这些方法需要更加复杂的设备和技术条件，但可以提供更为准确和详细的研究结果。
在细胞迁移和侵袭研究中，细胞系的选择也是至关重要的。
常用的细胞系包括癌细胞和原代细胞。
癌细胞系具有较强的迁移和侵袭能力，是研究肿瘤转移的理想模型。
原代细胞系则来自于患者的组织，具有更高的生物学真实性。
不同细胞系的选择需要根据具体研究目的和实验要求进行。
细胞迁移和侵袭研究方法的发展为探索癌症转移的分子机制提供了重要工具和平台。
通过合理选择合适的实验方法和细胞系，研究者们可以逐步揭示细胞迁移和侵袭的调控机制，为深入理解癌症等疾病的发生和发展提供重要线索。
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细胞迁移和侵袭实验
实验准备：
细胞，24孔板，transwell小室（8µm，24孔板专用），ECM Gel，10%FBS+培养基，无血清培养基，10 µ、200 µL、1000 µL移液器及配套枪头，1.5 mL EP 管，冰盒
实验设计：
实验分组一般分为阴性组（上下层均没有趋化因素），实验组（按照实验需要，上层或者下层加入趋化因素），对照组（趋化因素与实验组中的相反）。
如果有特别需要，可以再加上阳性组（上下层都有趋化因素）。
实验操作（请细读注意事项）：
一、细胞侵袭实验
1.ECM Gel原液提前1 h放在4 ℃冰箱中解冻，实验前转移到冰盒中。
2.将1.5 mL EP、枪头盒、transwell放在24孔板里面后，置于冰上预冷。
3.根据自己的使用量，按照ECM Gel : 无血清培养基=1 : 7.5在冰上稀释成使
用液。
4.把枪头剪去一小段（约3 µm）后在冰上吸取40 µL/孔ECM Gel使用液轻轻
加入transwell上室中，加入时慢慢移动枪头，保证液体平铺在底部。
5.放在37 ℃孵箱15 min，让胶凝固。
6.消化、离心、计数细胞后，按照2.5x104 / mL用无血清培养基稀释细胞，
制成细胞悬液（如果细胞很多，这一步可以提前，在4、5之前做）。
7.按照每孔200 µL，将细胞悬液加入transwell上室，同时在transwell下室加
入10%FBS+培养基500 µL，放入37 ℃孵箱培养。
8.若干小时后取出，吸去transwell上室多余液体，用PBS清洗两次，用棉棒
在上室中轻轻转动，吸干水分并擦去膜内侧的细胞。
9.在上室中加入结晶紫染液，染色5 min，回收染液，用流水缓缓冲去染液，
再次用棉棒在上室中轻轻转动，吸干水分。
10.在正置显微镜上放置一块载玻片，将transwell小孔倒置放在上面，拍照。
11.在100倍视野下，对膜的上下左右及中间计数，做平均数。
12.清洗transwell，可以反复使用。
二、细胞侵袭实验
细胞迁移实验不需要ECM Gel包被，其余步骤一致。
实验原理：
多孔膜是聚碳酸酯膜
（polycarbonate membrane），膜带有
微孔，孔径大小有0.1－12.0 µm。
将Transwell小室放入对应的培养
板中，小室内称上室，培养板内称下室，上室内盛装上层培养液，下室内盛装下层培养液，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。
将细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。
细胞迁移和侵袭实验常用8.0µm膜，上室种肿瘤细胞，
下室加入FBS或某些特定的趋化因子，肿瘤细胞会向营养
成分高的下室运动，从而从多孔膜一侧穿过，贴壁于多孔
膜的另一侧，计数其细胞量可反映肿瘤细胞的迁移或者侵
袭能力（圆形透明小孔为微孔）。
（注：迁移和侵袭是两个概念，迁移是指细胞的运动能力，而侵袭是细胞在运动的同时会分泌出消化ECM的蛋白，清除运动障碍，这个实验更能模拟人体内环境）
注意事项
1.ECM Gel（货号：E1270）由Sigma公司生产，来源于大鼠肉瘤的细胞外基
质提取物，保存在-20℃，由于在室温中会快速凝固，不可逆，因此需要在冰上溶解和操作，同时一切要与ECM Gel接触的耗材也需要预冷，避免俩
者接触时温差较大引起ECM Gel凝固粘附，造成浪费。
2.本组常用的Transwell是Millipore公司生产
的8um悬挂式millicell（货号：Millipore
PIEP12R48 Millicell Hanging Cell Culture 24
well PET 8um）。
每次使用完后用0.25%胰酶
浸泡膜底10 min去除贴底细胞，清洗，棉
签温柔擦拭，75%乙醇浸泡24h，晾干，
使膜上粘附的细胞和染液完全洗脱，下次使用前紫外照射正反两面，各30 min，通常可以反复用3-5次
3.制作ECM Gel使用液时，先加入培养基，再加入ECM Gel；同时在使用量
的基础上多配置5-20 uL（使用量多就多配点），避免液体挂壁造成最后一次加样不够。
4.加胶时，胶的量以刚好把胶浸湿为最好（24孔的millicell需要35-40uL），
过厚细胞侵袭变慢，过少则失去侵袭实验的意义；完成后可轻轻地，均匀地拍打培养板四个侧面，让液体完全平铺，这样可以避免因为胶的厚薄不均而引起的误差。
5.凝固时间可以适当延长，但最好不要超过30min，防止液体挥发使gel凝
固得过硬。
6.通常先根据细胞的侵袭能力估计每孔小室加入的细胞数量，侵袭能力强的
细胞（如231，CAF）每孔加入5,000个，那最后的细胞悬液应该制备成2.5x104 / mL，而侵袭能力弱的细胞（如MCF-7）可以提高细胞数量，达到10,000个，那最后的细胞悬液应该制备成5x104 / mL。
上层加入细胞悬液后可轻轻地，均匀地拍打培养板四个侧面，让液体完全平铺，避免细胞分布不均而引起细胞计数时中间多两边少。
7.加入下室中的10%FBS是作为趋化因子诱导细胞运动，24孔板下室一般加
入500µl含FBS的培养基，不同的培养板加的量有不同要求，具体请参考说明书。
这里要特别注意的是，下层培养液和小室间常会有气泡产生，一旦产生气泡，气泡处的趋化作用就减弱甚至消失了，在种板的时候要特别留心，小室在放入时倾斜缓慢放入（注意小室中的液体不要流出），可以
避免气泡。
培养时间需要自己根据文献做预实验，寻找合适的时间点；时间点的选择除了要考虑到细胞细胞侵袭力外，细胞数及处理因素对细胞数目的影响也不可忽视，穿过的细胞数在100-200之间最好。
棉签清洗时一定要轻柔，防止戳破多孔膜。
8.结晶紫是细胞核染液，细胞大小不同，染色时间也有改变，染液放置的时
间和浓度也会对染色时间有影响，需要自己掌握；最优的染色状态是细胞核颜色深，胞浆色浅。