真菌培养基
微生物总数检测方法(真菌)
微生物总数检测方法（真菌）一、检测用培养基配方与培养条件1.培养基：马铃薯葡萄糖琼脂（PDA培养基）配制：以北京路桥PDA培养基为例，按说明上配制需称取培养基4克，加水100毫升。
2. 培养条件：25℃-30℃；时间：72-96小时。
二、检测与计数方法1. 梯度稀释称取适量的样品，加入带玻璃珠的三角瓶中，加入100mL的无菌水（无菌水中事先加入了分散剂3—5滴，分散剂可以是吐温，OP—80，用来分散菌团），用玻璃棒搅拌使之溶解吸水均匀后，上旋转式摇床200 r/min充分振荡60 min，,即成母液菌悬液（基础液）。
2. 用10mL无菌移液管分别吸取10mL上述母液菌悬液加入90 mL无菌水中，按1:10进行系列稀释，分别得到1:1×101，1:1×102，1:1×103，1:1×104……1:k稀释的菌悬液（每个稀释度应更换无菌移液管，每一个稀释度瓶种应放有适量的玻璃珠，以保证菌液分布均匀）。
3. 加样及培养取1个适宜的稀释度，用移液枪吸取菌悬液0.1 mL，加至预先制备好的固体培养基平板上，用无菌玻璃涂布棒将菌悬液均匀地涂于琼脂表面。
此稀释度重复3次，同时以空白作对照，于适宜的条件下培养。
4. 菌落识别根据所检测菌种的技术资料，每个稀释度取不同类型的代表菌落通过涂片、染色、镜检等技术手段确认有效菌。
当空白对照培养皿出现菌落数时，检测结果无效，应重做。
5. 菌落计数以出现20—70个菌落数的稀释度的平板为计数标准，分别统计有效活菌数目和杂菌数目。
有效活菌数按式（1）计算，同时计算杂菌数：nm = x kv1/(m0v2) ×10-8或 nv = x kv1/(v0v2) ×10-8（1）式中：nm —质量有效活菌数，亿/gnv —体积有效活菌数，亿/mLx—有效菌落平均数，个k —稀释倍数v1—基础液体积， mLv2—菌悬液加入量， mLv0—样品量，mLm0—样品量， g重点需要注意的部分在菌悬液的制备及震荡过程上，因为固态发酵的的产品大部分为聚集状态不容易分散开来，这点与液态发酵产品不同。
真菌用的培养基
真菌用的培养基
真菌的培养基根据其特点和需求不同，可以分为以下几种常见的培养基：
1. 薄膜培养基：如麦芽琼脂、马铃薯葡萄糖琼脂等。
适用于革兰氏阳性真菌和某些革兰氏阴性真菌的培养。
2. 液体培养基：如液体麦芽琼脂、液体马铃薯葡萄糖琼脂等。
适用于真菌的液体培养、发酵和产生次级代谢产物。
3. 饲养基：如麦麸葡萄糖培养基、马铃薯糖蛋白胨培养基等。
适用于饲养虫化真菌和真菌的寄生菌株。
4. 高营养培养基：如琼脂葡萄糖培养基、马铃薯葡萄糖琼脂培养基等。
适用于真菌菌株的快速生长和高产菌。
5. 特殊培养基：如选择性培养基、鉴定培养基等。
根据不同的真菌种类和需求，可以添加抗生素、抑菌剂或特定的营养成分。
此外，还可以根据真菌的特殊要求，进行改良和添加其他成分，从而满足其生长和繁殖的需要。
培养细菌真菌的方法
培养细菌真菌的方法培养细菌和真菌是微生物学中非常重要的实验技术，它们可以用于各种生物学实验、药物研发和生物工程等研究领域。
针对这个问题，我将详细介绍培养细菌和真菌的方法，并提供一些实验室技巧和注意事项。
一、培养细菌的方法：1.选择培养基：常用的细菌培养基有富尔顿培养基、LB培养基和三碱培养基等。
选择适合所研究的菌种的培养基是非常重要的，可以促进菌种的生长和繁殖。
2.准备培养基：根据选定的培养基配方，准备好所需的培养基。
通常需要加热至沸腾以溶解培养基，并在冷却后加入适当的抗生素以防止其他细菌的污染。
3.菌液接种：将所选的细菌菌株从培养基中接种到含有相应培养基的培养皿中。
可以用铅笔或石墨棒在培养皿底部作标记。
4.培养温度：不同细菌对培养所需的温度有不同要求。
常见的细菌一般在25-37摄氏度下培养，但有些特殊菌株可能需要较低的温度或特殊培养条件。
5.培养时间：培养时间因菌种而异。
能够使细菌菌落生长至可见的大小可能需要24小时以上。
6.培养皿的选择和处理：常用的培养皿有琼脂糖平板、琼脂糖管和琼脂糖深培养皿等。
在使用培养皿前，务必高温高压灭菌杀菌以避免外源菌株的污染。
7.无菌操作：培养细菌时，需要进行无菌操作，以避免其他微生物的污染。
这包括使用无菌器材、消毒培养环境和正确处理实验物品等。
8.菌落计数和分离：在进行某些实验时，需要对细菌菌落进行计数。
为此，可以使用显微镜和细菌计数室等设备。
如果需要分离不同的细菌菌株，可以使用传代分离法或斑点分离法等。
二、培养真菌的方法：1.选择培养基：真菌培养基的选择与细菌培养基类似，常用的有马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）培养基、玛丽培养基和云芝培养基等。
根据不同的真菌选择合适的培养基是非常重要的。
2.准备培养基：根据培养基配方准备所需的培养基。
常见的方法是将配方中的成分溶解在适当的溶剂中，并在经过滤消毒后冷却。
3.真菌接种：可以将真菌菌丝块切割成小碎块，接种到含有培养基的琼脂糖培养皿中。
146种细菌-真菌-酵母培养基配方
146种培养基配方——2009年2月1日星期日by尛森蟲1. Acetobacter Medium (醋酸菌培养基)Glucose (葡萄糖) 100g Yeasst extract (酵母膏) 10gCaCO3 20g Agar (琼脂) 15gDistilled water (蒸馏水) 1000ml Adjust (调) pH to 6.8适用范围：恶臭醋酸杆菌混浊变种2. Nutrient Agar (营养肉汁琼脂)Pepton (蛋白胨) 5g Beef extract (牛肉膏) 30gNaCl 5g Agar (琼脂) 15gDistilled water (蒸馏水) Adjust (调) pH to 7.0-7.2[Note]：When cultivation of Bacillus，5mg of to MnSO4.H2O may be added .It is favorable to promote spore formation .适用范围：产气气杆菌、粪产碱杆菌、蜡状芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌蕈状变种、地衣形芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌、尘埃芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌深黑变种、苏云金芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌蜡螟亚种(青虫菌)、苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种、苏云金芽孢杆菌猝倒亚种、产氨短杆菌、黄色短杆菌、谷氨酸棒状杆菌、北京棒杆菌、大肠埃希氏菌(大肠杆菌)、铜绿假单胞菌(绿脓杆菌)、凸形假单胞杆菌、荧光假单胞菌、弯曲假单胞菌、恶臭假单胞菌、假单胞杆菌、藤黄八叠球菌、亚黄八叠球菌、尿素八叠球菌、金黄色葡萄球菌、运动发酵单孢菌3. Azotobacter Medium (固氮菌培养基)KH2PO4 0.2g K2HPO4 0.8gMgSO4.7H2O 0.2g CaSO4.2H2O0.1ｇNa2MoO4.2H2O Trace(微量) Yeast axtract(酵母膏) 0.5gMannitol(甘露醇) 20g FeCl3 Tract(微量)Distilled water (蒸馏水) 1000ml Agar (琼脂) 15gAdjust (调) pH to 7.2适用范围：固氮菌、胶质芽孢杆菌4. Corn Meal Medium (玉米粉培养基)Maize flour (玉米粉) 5g Peptone (蛋白胨) 0.1gGlucose (葡萄糖) 1g Tap water (自来水) 1000ml[Note]:Boil the mixture in autoclave at 121℃for 1 hr. distribute the medium into 18ⅹ18 mm tubes , each contains 10 ml of the li quid , then autoclave at 121℃for 1 hr . again (15磅蒸煮1小时,分装入18ⅹ18毫米试管,每管深度达6厘米。
真菌培养常用培养基
[沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂，沙堡弱培养基，（一） 组成 40.0g 10.0g12.0- 15.0g 1000ml（二） 制法 上述混合后加入 200mg 氯霉素， 121 摄氏度 10 分钟灭菌后备用。
（三） 目的 是常用的分离或保存菌种的培养基。
[ 沙氏液基， SDB]（一） 组成 葡萄糖 40.0g 蛋白胨 10.0g 蒸馏水1000ml（二） 制法 上述混合后加入 200mg 氯霉素， 121 摄氏度 10 分钟灭菌后备用。
[ 加抗生素沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂基，SDA with antibiotic]（一） 组成 葡萄糖 40.0g 蛋白胨 10.0g 琼脂 12.0〜15.0g 蒸馏水 1000ml（二） 制法上述混合后加入 200mg 氯霉素。
250mg 放线菌酮， 121 摄氏度 10 分钟灭菌后备用。
[改良沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂基，modified SDA]（一） 组成 葡萄糖 20.0g 蛋白胨 10.0g 琼脂 12.0〜15.0g 蒸馏水1000ml（二） 制法 上述混合后 121 摄氏度 10 分钟灭菌后备用。
（三） 目的 保存菌种培养基。
[ 马铃薯葡萄糖琼脂， PDA]（一） 组成 马铃薯 200.0g 葡萄糖 20.0g 琼脂12.0〜15.0gSDA]葡萄糖 蛋白胨 琼脂 蒸馏水蒸馏水1000ml（二）制法先将马铃薯洗净去皮切片，加水180ml ，煮沸30 分钟后过滤，再加葡萄糖、琼脂，将过滤液补足到1000ml ，121 摄氏度灭菌后备用。
（三）用途此培养基是培养真菌较好的培养基，同时也是鉴定真菌较好的培养基之一。
鉴定皮肤癣菌一般不用此培养基。
[玉米吐温80 琼脂，CMA with T w80]（一）组成玉米粉琼脂蒸馏水吐温80（二）制法40.0g15.0g1000ml10ml先将玉米粉混于水中，65 摄氏度水浴一小时，过滤，再补足水量，然后加入琼脂和吐温80，121摄氏度10 分钟灭菌后备用。
各种培养基配方范文
各种培养基配方范文培养基是用于细菌、真菌、植物细胞等生物的培养和繁殖的一种营养物质。
不同生物种类和培养目的需求不同，所以有许多种不同的培养基配方。
以下是几种常见的培养基配方：1. LB培养基（Luria-Bertani培养基）LB培养基是一种常用于培养细菌的全面培养基，其配方包括：5g酵母膏、10g蛋白胨、10g氯化钠，可以用1升蒸馏水溶解，调节pH至7.0。
LB培养基可用于大多数菌种的培养，是最常用的细菌培养基之一2. TSB培养基（Tryptic Soy Broth培养基）TSB培养基是一种适用于多种细菌的全面营养培养基，其配方包括：15g胰胨蛋白胨、5g酵母膏、5g氯化钠，可以用1升蒸馏水溶解，调节pH至7.3、TSB培养基可用于培养细菌、真菌等微生物。
3. MS培养基（Murashige and Skoog培养基）MS培养基是一种用于植物组织培养的配方，适用于各种植物种类的生长和繁殖。
其配方包括：4.4gMS盐基础培养基粉、30g蔗糖，可以用1升蒸馏水溶解，调节pH至5.8、MS培养基还可以根据不同植物种类的需求调整添加适当的植物激素。
4. YPD培养基（Yeast Peptone Dextrose培养基）YPD培养基是用于酵母菌培养的常用培养基，其配方包括：10g蛋白胨、20g葡萄糖、20g酵母浸出物，可以用1升蒸馏水溶解，调节pH至6.0。
YPD培养基可满足酵母菌对碳源、氮源等营养物质的需求。
5. SDA培养基（Sabouraud Dextrose Agar培养基）SDA培养基是一种常用的真菌培养基，其配方包括：20g葡萄糖、15g 琼脂、10g酵母提取物，可以用1升蒸馏水溶解，调节pH至5.6、SDA培养基可用于分离和培养真菌。
以上是几种常见的培养基配方，不同生物种类和培养目的需要选择适合的培养基。
培养基的配方还可以根据需要进行调整和优化，以满足特定菌种或细胞的生长需求。
最适合的培养基应根据具体实验需求进行选择。
实验室常用培养基
．常用培养基的制备（1）马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）和马铃薯蔗糖琼脂（PSA）培养基培养真菌最常用的培养基，成分如下：去皮马铃薯200 g 葡萄糖或蔗糖20g琼脂15－20g 水1000 ml配制方法：将马铃薯洗净去皮，称取200 g，切成小块（不必大小）放入锅中，加水1000ml，煮沸半小时，稍冷后用双层纱布过滤，在滤液中加蔗糖20g，加水补足到1000ml。
配成的培养基一般呈酸性，用于培养真菌，可以不必调pH。
如配制固体培养基，在加蔗糖前先加15－20g 琼胶加热熔化，最后加入蔗糖，混匀并加水补是至1000ml，趁热分装在试管或三角瓶中。
标准试管（15×150mm）分装量如下：一般用作斜面培养的每试管装培养基3－5ml，用作平面培养的每试管约10ml，加棉花塞后灭菌。
培养细菌用的培养基必须调节其酸度值到中性（pH7．0左右）。
（2）牛肉汁蛋白胨培养基（NA）是培养细菌最常用的培养基，又称营养琼脂或肉汤培养基。
成分如下：酵母浸膏1g 牛肉浸膏3g蛋白胨5-10g 蔗糖（或葡萄糖）l0g琼脂15-20g 水1000mlpH7.0配制方法：称取牛肉浸膏及蛋白胨溶于少量热水中备用，在其余水中加入琼脂，加热溶化后将牛肉浸膏和蛋白胨溶液加入混匀，然后加水补足到1000 ml，用NaOH或HCL调整至pH7.0，趁热分装，加棉花塞后灭菌。
（3）玉米叶培养基取一定数量的玉米叶片，洗净后剪成1㎝2左右的小块，放在250ml的三角瓶中，盛放量一般为三角瓶的1／3，然后加少量的水以保持湿润，加棉花塞后灭菌。
天然培养基一般不必调整pH。
（4）查氏（Czapek）培养基查氏培养基是一种组合培养基，其成分如下：NaNO3 2g K2HPO4 1 gMgSO4·7H2O 0．5g KCl 0．5gFeSO4 0．01g 蔗糖30g水1000ml（5）灭菌水的配制蒸馏水（或自来水）经过灭菌处理即成灭菌水，是实验室用量最大的必备品之一，常用于病原菌的分离、稀释、保湿等。
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（三）目的是常用的分离或保存菌种的培养基。
[沙氏液基，SDB]（一）组成葡萄糖40.0g蛋白胨10.0g蒸馏水1000ml（二）制法上述混合后加入200mg氯霉素，121摄氏度10分钟灭菌后备用。
[加抗生素沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂基，SDA with antibiotic] （一）组成葡萄糖40.0g蛋白胨10.0g琼脂12.0～15.0g蒸馏水1000ml（二）制法上述混合后加入200mg氯霉素。
250mg放线菌酮，121摄氏度10分钟灭菌后备用。
[改良沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂基，modified SDA]（一）组成葡萄糖20.0g蛋白胨10.0g琼脂12.0～15.0g蒸馏水1000ml（二）制法上述混合后121摄氏度10分钟灭菌后备用。
（三）目的保存菌种培养基。
[马铃薯葡萄糖琼脂，PDA]（一）组成马铃薯200.0g葡萄糖20.0g琼脂12.0～15.0g蒸馏水1000ml（二）制法先将马铃薯洗净去皮切片，加水180ml，煮沸30分钟后过滤，再加葡萄糖、琼脂，将过滤液补足到1000ml，121摄氏度灭菌后备用。
（三）用途此培养基是培养真菌较好的培养基，同时也是鉴定真菌较好的培养基之一。
鉴定皮肤癣菌一般不用此培养基。
][玉米吐温80琼脂，CMA with Tw80（一）组成玉米粉40.0g琼脂15.0g蒸馏水1000ml吐温80 10ml（二）制法先将玉米粉混于水中，65摄氏度水浴一小时，过滤，再补足水量，然后加入琼脂和吐温80，121摄氏度10分钟灭菌后备用。
（三）用途用于观察白念珠菌厚壁孢子及假菌丝；红色毛癣菌在此培养基产色素较好。
[米饭培养基rice grain medium](一)组成大米300.0g蒸馏水1000ml（二）制法将3g大米放入试管中，加入10ml蒸馏水，高压121摄氏度10分钟灭菌后备用。
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真菌培养基
一、沙保罗琼脂培养基
[用途]
供真菌及酵母样真菌的分离培养用。
[配法]
麦芽糖40g,蛋白胨10g,琼脂20g，蒸馏水1L。
将上述成分溶于水，加热溶解，调pH至6.0±0.2，分装三角瓶或试管中，118℃灭菌15mi n，倾注平板或置斜面，无菌试验后备用。
[用法]
将标本接种培养基，如系血液标本，则采取1～2ml，与冷却至45℃左右沙保琼脂混合，倾注接种平板。
分别置35℃和25℃恒温箱内同时培养。
35℃培养48h,25℃需连续培养5天,逐日观察结果。
发现真菌及酵母样可疑菌落，转种沙保菌斜面，获得纯培养后进行鉴定。
[质量控制]
白色念珠菌和新型隐球菌生长良好。
注：
⑴本培养基如不加入琼脂，即为沙保罗液体培养基，供真菌及念珠菌的增菌培养用。
⑵增加氯霉素0.05～0.125mg/ml或放线菌酮0.5mg/ml，可抑制细菌和污染的霉菌及隐球菌生长。
此二种药均耐热，可直接加入培养基内高压灭菌。
⑶添加酵母浸膏5mg/ml，可促进皮肤癣菌生长。
增加维生素B 0.1mg/ml，可促进紫色癣菌和断发癣菌生长。
⑷将麦芽糖减少到20g/L，为沙保罗20g/L麦芽糖琼脂培养基，可供诱导真菌产生孢子用。
⑸该培养基呈酸性，应提高20%的琼脂用量。
二、玉米粉琼脂培养基
[用途]
鉴定酵母样真菌用。
白色念珠菌在该培养基上25℃24h培养可长出假菌丝，顶端有典型的厚壁孢子，可与其它念珠菌鉴别。
[配法]
玉米粉4g，琼脂粉8g，蒸馏水1L
（pH6.0±0.2）。
将细米粉加水浸泡数分钟，扎紧瓶口，浸入60℃水浴4h，取出后用沙布过滤，除去粗渣，补足水分。
无须调整pH。
加入琼脂，煮沸溶解，有沉淀物再过滤1次，分装试管，121℃灭菌15min备用。
用玻璃片法点种后，置平皿内，保持一定湿度，置23～26℃下培养24～48h。
取出玻片培养物，用高倍镜观察真假菌丝和有无厚壁孢子。
[质量控制]
白色念珠菌（ATCC 26790）厚膜孢子阳性；新型隐球菌（ATCC 9763）厚膜孢子阴性。
注：
⑴玉米粉可用糯米粉或可溶性淀粉代替,效果相同。
⑵该培养基加入10ml/L Tween-80，制成玉米粉Tween-80琼脂，用途相同，效果更好。