细菌培养常用培养基和抗生素的配制方法

细菌培养常用培养基和抗生素的配制方法

、常用培养基

1、LB 培养基将下列组分溶解在0.9L 水中：蛋白胨10g

酵母提取物5g

氯化钠10g

如果需要用INNaOH （〜1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。

2 、SOB 培养基

将下列组分溶解在0.9L水中：

蛋白胨20g

酵母提取物5g

氯化钠0.5g

1mol/L 氯化钾2.5ml

用水补足体积到1L。分成100ml的小份，高压灭菌。培养基冷却到室温后，再在每100ml 的小份中加1ml 灭过菌的1mol/L 氯化镁。

3、SOC培养基

成分、方法同SOB培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后，除了在每100ml的小份中

加1ml 灭过菌的1mol/L 氯化镁外，再加2ml 灭菌的1mol/L 葡萄糖（18g 葡萄糖溶于足够水中，再用水补足到100ml，用0.22um的滤膜过滤除菌）。

4 、TB 培养基

将下列组分溶解在0.9L水中:

蛋白胨12g

酵母提取物24g

甘油4ml

各组分溶解后高压灭菌。冷却到60 C , 再加100ml灭菌的

170mmol/LKH2PO4/0.72mol/LK2HPO4 的溶液（2.31g 的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中，使终体积为100ml。高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌）。

5、2X Y培养基

将下列组分溶解在0.9L水中:

蛋白胨16g

酵母提取物10g

氯化钠4ml

如果需要用INNaOH (〜1ml )调整pH 至7.0，再补足水至1L 。注：琼脂平板需添加琼脂粉 12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉 7g/L 。

6、YPD 培 养基

将下列组分溶解在 0.9L 水中： 蛋白胨 20g 酵母提取物 10g 葡萄糖 20g

用水补足体积为 1L 后，高压灭菌。建议在高压灭菌之前，对色氨酸营养缺陷型每升培养基 添加1.6g 色氨酸，因为 YPD 培养基是色氨酸限制型培养基。为了配制平板，需要在高压灭 菌前加入 20g 琼脂粉。

二、常用抗生素 氨苄青霉素( ampicillin )( 100mg/ml ) 溶解 1g 氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至 25ug/ml 〜 50ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。 羧苄青霉素( carbenicillin )( 50mg/ml )

溶解0.5g 羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至 以 25ug/ml 〜 50ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。 甲氧西林( methicillin )( 100mg/ml )

溶解1g 甲氧西林钠于足量的水中， 最后定容至10ml 。分装成小份于-20C 贮存。常以37.5ug/ml 终浓度与 100ug/ml 氨苄 青霉素一 起添加于生长培养基。 卡那霉素( kanamycin )( 10mg/ml )

溶解0.1g 卡那霉素于足量的水中， 最后定容至10ml 。分装成小份于-20C 贮存。常以10ug/ml 50ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。 氯霉素( chloramphenicol )( 25mg/ml )

溶解 0.25g 氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至 12.5ug/ml 〜25ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。 链霉素( streptomycin )( 50mg/ml )

溶解 0.5g 链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至 常以 10ug/ml 〜 50ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。 萘啶酮酸( nalidixicacid )( 5mg/ml )

溶解0.05g 萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至 10ml 。分装成小份于-20C 贮存。常以

15ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。 四环素（tetracyyline ） （ 10mg/ml ）

溶解0.1g 四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至 10ml 。

分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于

-20 C 贮存。常以10ug/ml 〜50ug/ml 的终浓

10ml 。分装成小份于-20C 贮存。常以

10ml 。分装成小份于-20C 贮存。常 10ml 。分装成小份于-20 C 贮存。常以 10ml 。分装成小份于-20 C 贮存。

度添加于生长培养基。

小技巧：如配制10mg/ml卡那霉素，先在盐水瓶或血清瓶加入10ml双蒸水，高压，冷却后

加入0.1g卡那霉素，混匀，滤膜过滤到试管中，再以1ml/管分装到EP管中待用。

抗生素储存液工作浓度（mg/ml）保存条件严紧型质粒（ug/ml）松驰型质粒（ug/ml）氨苄青霉素50（溶于水）-20 °C

20 60羧苄青霉素50（溶于水）-20 C 2060氯霉素34（溶于乙醇）-20 C 25170卡那霉素10（溶于水）-20 C1050 链

1050四环素5（溶于甲醇）-20 1050

霉素10（溶于水）-20

浓度：50 mg/ml

配制量：50ml

配制方法：

1 •称取2.5g利福平置于50ml塑料离心管中。

2 •加入40ml甲醇，振荡充分混合溶解之后定容50ml，可以涡旋。

3•过滤灭菌后，小份分装（1-2ml每管）后，置于—20C保存。

4•配制时每毫升可加入〜5滴10 N NaOH以助溶。若以DMSO做溶剂，可不滴加NaOH。