微生物实验报告(微生物形态观察、分布、灭菌消毒)
微生物实验报告
底泥中的细菌数量和抗Cu的细菌分离提纯及其菌落形态观察2013年10月底泥中的细菌数量和抗Cu的细菌分离提纯及其菌落形态观察一、实验目的1、熟悉玻璃器皿的洗涤和灭菌前的方法。
2、了解配制微生物培养基的基本原理，掌握常规的配制、分装培养基的方法。
3、学会各类物品的包装、配制（稀释水等）和灭菌技术。
4、从污泥中分离、纯化和培养微生物，掌握常用的分离和纯化微生物的方法。
5、学会几种接种技术。
6、观察分离出来的几种细菌相应的菌落形态特征。
7、通过观察和比较细菌、放线菌、酵母菌及霉菌四大类微生物的菌落特征，达到初步鉴别上述微生物的能力。
9、学会细菌菌落总数的测定。
二、实验原理1、培养基原理培养基是微生物生长的基质，是按照微生物营养、生长繁殖的需要，由碳、氢、氧、氮、磷、硫、钾、钠、钙、镁、铁及微量元素和水，按一定的体积分数配制而成。
调整合适的pH，经高温灭菌后以备培养微生物之用。
本实验配制固体培养基，固体培养基的成分与液体相同，仅在液体培养基中加入凝固剂使呈固态。
通常加入质量浓度15-20g∕L的琼脂为固体培养基，加入质量浓度为3-5g/L 的琼脂为半固体培养基。
2、灭菌原理本次实验采取加压蒸汽灭菌法。
加压蒸汽灭菌器是能耐一定压力的密闭金属锅，加压灭菌的原理在于提高灭菌器内的蒸汽温度来达到灭菌的目的。
包括干热空气灭菌和火焰灼烧灭菌等以干热方法杀死细菌达到灭菌的目的。
3、分离纯化原理在自然界和污水生物处理中，细菌和其他微生物杂居在一起。
为了获得纯种就必须从混杂的微生物群体中分离出来。
本实验使用的平板划线法和浇注平板法。
平板划线法是指把混杂在一起的微生物不同种的不同个体或同一种的不同细胞，通过带菌的接种环在培养基表面做多次划线的稀释法，能得到较多的独立分布的单个细胞，经培养后即成单菌落，通常把这种菌落当作待分离微生物的纯种。
有时这种单菌落并非都由单个细胞繁殖而来的，故必须反复分离多次才可以得到细胞菌落的克隆纯种。
细菌的分布实验报告
细菌的分布实验报告
细菌是一类微生物，广泛存在于自然界的各个角落，它们的分布对生态系统和
人类健康都有着重要影响。
为了更深入地了解细菌的分布情况，我们进行了一项细菌的分布实验。
实验过程：
首先，我们准备了10个不同环境样本，包括土壤、水、空气、食物等。
然后，我们使用无菌棉签在每个样本表面轻轻擦拭，将擦拭得到的细菌样本分别涂抹在琼脂平板上。
接着，将琼脂平板放入恒温培养箱中，培养一定时间后观察细菌的生长情况。
实验结果：
经过培养后，我们观察到不同环境样本中细菌的分布情况有所不同。
在土壤样
本中，细菌的数量最为丰富，各种形态的细菌在琼脂平板上形成了斑点状的生长。
水样本中的细菌数量相对较少，主要以单个菌落的形式存在。
空气样本中的细菌数量也较少，但多样性较高，出现了不同形态的细菌菌落。
食物样本中的细菌数量较多，主要以链状、群落状的方式存在。
结论：
通过本次实验，我们发现不同环境中细菌的分布情况存在明显差异。
土壤中的
细菌数量和多样性最为丰富，可能与土壤中丰富的有机物质和微生物群落有关。
水样本中的细菌数量较少，可能受到水质的影响。
空气中的细菌多样性较高，可能受到空气中微生物的飘散和传播影响。
食物样本中的细菌数量较多，可能与食物的保存和加工方式有关。
综上所述，细菌的分布受到环境因素的影响，不同环境中细菌的数量和多样性
存在差异。
这对于我们深入了解细菌的生态学特征，开展环境卫生监测和食品安全
评估具有重要意义。
希望通过本次实验的结果，能够引起更多人对细菌分布的关注，促进相关领域的研究和实践。
微生物实验 细菌的培养及消毒与灭菌
固体斜面接种法 液体培养基接种法
细菌的分离接种法
平行划线接种法: 被检标本中菌量少
分区（四分区）划线接种法: 被检标本中菌量多
菌苔
固体培养基中的琼脂 平板培养基，经平板 划线分离培养，可见 单个菌落。
菌落
菌苔
细菌的纯培养
琼脂斜面接种法:
肉膏汤接种法
肉膏汤接种法
半固体穿刺法
【实验内容二】消毒与灭菌
1. 熟悉常用的物理、化学消毒灭菌法。 2. 了解微生物的分布。
【实验内容与方法】
1. 物理因素对细菌的影响─紫外线杀菌实验。 2. 化学因素对细菌的影响─皮肤消毒实验。
1.物理因素对细菌的影响─紫外线杀菌实验
细菌 黑纸片
紫外灯下垂直照射30分 钟后， 37℃温箱培养18-24h
实验三 细菌的培养及消毒灭菌
【目的要求】
1.掌握细菌的分离接种及纯培养的方法观察其生长现象。 2.熟悉常用的物理、化学消毒灭菌法。 3.了解微生物的分布。
病原生物学与免疫学教研室
【实验内容一】细菌的培养
1.培养基的概念及种类。
2.培养基的制备
调配
溶化
调pH
过滤
分装
灭菌
鉴定
3.细菌的分离培养法
平行划线法 分区（四分区）划线法
细菌Leabharlann 2.化学因素对细菌的影响─皮肤消毒实验
未消毒手指接 触培养基
1
2
5
4
3
75%酒精 1分钟
流动水洗手指 接触培养基
口腔中的微生物
环境中的微生物
【实验报告】
1.记录： 四分区划线接种 琼脂斜面接种法 方法及生长现象 肉膏汤接种法
微生物实验报告
微⽣物实验报告动物微⽣物及免疫学实验报告⼀、实验⽬的（⼀）掌握⼀般培养基的制备原理及要求，掌握培养基酸碱度的测定，熟悉⼀般培养基的制备过程和各种器⽫灭菌⽅法。
（⼆）掌握细菌分离培养的基本要领和⽅法，掌握细菌抹⽚的制备⽅法和⾰兰⽒染⾊法及油镜的使⽤⽅法，并认识⾰兰⽒染⾊的反应特性。
（三）掌握学习⽤微⽣物学原理诊断疾病的⼀般⽅法及步骤。
⼆、实验⽤品（⼀）器材量筒、烧杯、电⼦天平、漏⽃、三⾓烧瓶、空试剂瓶、玻璃棒、玻璃平⽫、刻度吸管、pH试纸、纱布、脱脂棉、天平、电炉、试剂瓶瓶塞、扎绳、放⼤镜、包装纸、洗⽿球、酒精灯、载玻⽚、⽕柴、吸⽔纸、剪⼑、记号笔、接种环、注射器、镊⼦、钳⼦、毫⽶尺、培养箱、⽔浴培养箱、⾼压蒸汽灭菌锅、油镜（⼆）试剂及材料肘胨、蛋⽩胨、猪胆盐、氯化钠、琼脂、乳糖、0.01%结晶紫⽔溶液、0.5%中性红⽔溶液、⾎清、胰化蛋⽩胨、酵母提取物、氢氧化钠、盐酸、⽜⾎清、⾰兰⽒染⾊液、蒸馏⽔、⼩⽩⿏、病猪内脏三、实验步骤（⼀）培养基的制备（所有⽤到的器⽫都已121℃⾼压灭菌15~30min，倾注平板在⽆菌操作台内完成，并放在⽆菌操作台内）1、麦康凯培养基（1）组成：蛋⽩胨17g、肘胨3g、猪胆盐5g、氯化钠5g、琼脂17g、乳糖10g、0.01%结晶紫⽔溶液10ml、0.5%中性红⽔溶液5ml、蒸馏⽔1000ml（2）⽅法：将蛋⽩胨、肘胨、猪胆盐和氯化钠溶解于400ml蒸馏⽔中，调节pH⾄7.2。
将琼脂加⼊600ml蒸馏⽔中，并加⼊乳糖，加热熔化。
将两液混合，分装于烧瓶内，⽤纱布、扎绳等捆好后，121℃⾼压灭菌15~30min。
待冷却⾄50 ~ 55℃时，加⼊结晶紫和中性红⽔溶液，摇匀后倾注平板。
注：结晶紫和中性红⽔溶液配好后需经⾼压灭菌。
2、⾎清平板（1）组成：营养琼脂、⽜⾎清（2）⽅法：将灭菌的营养琼脂加热熔化，冷却⾄45~50℃时，加⼊⽜⾎清，并混匀，倾注平板。
注：不得将⽜⾎清⼀并加⼊后再灭菌。
微生物实验报告微生物的分布实验报告_0
微生物实验报告微生物的分布实验报告食品微生物学实验一生物显微镜的构造和使用实验一、目的与要求（1）学习普通光学显微镜的结构、各部分功能及使用方法。
（2）观察并学会拍下现成的标本玻片在显微镜下显现的图像。
二、原理普通光学显微镱由机械装置和光学系统2大部分构成。
在光学系统中，物镱的性能最为关键，它直接影响着显微镜的分辨率。
而在普通光学显微镜中配置的几种物镱以油镱的放大倍数最大，与其它物镜相比，使用较特殊，需在载玻片与镜头之间加滴镜油，以增加照明亮度和提高分辨率。
三、材料与仪器（1）材料现成的标本玻片（2）仪器UB102i型生物显微镜（重庆奥浦光电技术有限公司），擦镜纸四、操作步骤（1）显微镜的安置置显微镜于平整的实验台上，镜座距实验台边缘3～4cm，镱检时姿势要端正。
（2）调节光源安装在镜座内的光源灯可通过调节电压以获得适当的照明亮度，而使用反光镱采集自然光或灯光作为照明光源时，应根据光源的强度及所用物镜的放大倍数选用凹面或平面反光镜度调节其角度，使视野内的光线均匀，亮度适宜。
（3）低倍镜观察将标本玻片置于载物台上，用标本夹住，移动推进器使观察对象处在物镜的正下方，下降10×物镜，使其接过标本，用粗调节器（粗调螺旋）慢慢升起镜筒，出现图像后再用细调节器（细调螺旋）调节图像至清晰。
通过标本夹推进器慢慢移动玻片，认真观察标本各部位，找到合适目的物，仔细观察。
（4）高倍镜观察在低倍镜下找到合适的观察目标并将其移至视野中心后转动物镜转换器将高倍镜移至工作位置，以聚光镜器光圈及视野进行适当调节后微调细调节器使物象清晰，利用推进器移动标本仔细观察并记录。
（5）显微镜用后处理1、上升镜筒，取下载片。
2、用擦镜纸擦去镜头上的残留物3、用擦镜纸清洁其他物镜和目镜，用绸布清洁显微镜的金属部件。
4、将各部分还原，反光镜垂直于镜座，将物镜转成“八字形”再向下旋，同时把聚光镜降下，以免物镜与聚光镜发生碰撞危险。
五、实验结果低倍镜下观察到的植物细胞组织实验二细菌培养基的配制一、实验目的1了解并掌握培养基的配制、分装方法；2掌握各种实验室灭菌方法及技术。
微生物实验报告
动物微生物及免疫学实验报告一、实验目的（一）掌握一般培养基的制备原理及要求，掌握培养基酸碱度的测定，熟悉一般培养基的制备过程和各种器皿灭菌方法。
（二）掌握细菌分离培养的基本要领和方法，掌握细菌抹片的制备方法和革兰氏染色法及油镜的使用方法，并认识革兰氏染色的反应特性。
（三）掌握学习用微生物学原理诊断疾病的一般方法及步骤。
二、实验用品（一）器材量筒、烧杯、电子天平、漏斗、三角烧瓶、空试剂瓶、玻璃棒、玻璃平皿、刻度吸管、pH试纸、纱布、脱脂棉、天平、电炉、试剂瓶瓶塞、扎绳、放大镜、包装纸、洗耳球、酒精灯、载玻片、火柴、吸水纸、剪刀、记号笔、接种环、注射器、镊子、钳子、毫米尺、培养箱、水浴培养箱、高压蒸汽灭菌锅、油镜（二）试剂及材料肘胨、蛋白胨、猪胆盐、氯化钠、琼脂、乳糖、0.01%结晶紫水溶液、0.5%中性红水溶液、血清、胰化蛋白胨、酵母提取物、氢氧化钠、盐酸、牛血清、革兰氏染色液、蒸馏水、小白鼠、病猪内脏三、实验步骤（一）培养基的制备（所有用到的器皿都已121℃高压灭菌15~30min，倾注平板在无菌操作台内完成，并放在无菌操作台内）1、麦康凯培养基（1）组成：蛋白胨17g、肘胨3g、猪胆盐5g、氯化钠5g、琼脂17g、乳糖10g、0.01%结晶紫水溶液10ml、0.5%中性红水溶液5ml、蒸馏水1000ml （2）方法：将蛋白胨、肘胨、猪胆盐和氯化钠溶解于400ml蒸馏水中，调节pH至7.2。
将琼脂加入600ml蒸馏水中，并加入乳糖，加热熔化。
将两液混合，分装于烧瓶内，用纱布、扎绳等捆好后，121℃高压灭菌15~30min。
待冷却至50 ~ 55℃时，加入结晶紫和中性红水溶液，摇匀后倾注平板。
注：结晶紫和中性红水溶液配好后需经高压灭菌。
2、血清平板（1）组成：营养琼脂、牛血清（2）方法：将灭菌的营养琼脂加热熔化，冷却至45~50℃时，加入牛血清，并混匀，倾注平板。
注：不得将牛血清一并加入后再灭菌。
微生物免疫学实验报告
1实验内容：2显微镜油镜的使用与保护。
3细菌的形态与结构的观察。
4实验目的：5学会显微镜的使用，重点掌握油镜的使用与保护。
6进一步认识细菌的形态，明确细菌的大小与测量单位。
7熟悉细菌的特殊结构。
8实验材料：显微镜、擦镜纸、液体石蜡、消毒液、细菌的基本形态标本、细菌的特殊结构标本。
4实验方法：(1)显微镜油镜的使用与保护显微镜是一种贵重的光学仪器，而油镜又是显微镜的最精密部分，是观察细菌最重要的工具。
因此，要求大家必须熟练地掌握显微镜的使用和保护，尤其是油镜，避免损坏。
1识别油镜：95╳、100╳、HI、OeL。
2对光：自然光用平面反光镜，人工光用凹面反光镜；先用低倍镜对光，次用高倍镜。
对好光源后，染色标本将聚光器升高，光圈放开。
3、调节焦距：选一张细菌染色标本置于载物台上，用推进器固定，用低倍镜先找准物象，再用高倍镜看清物体，于标本上加镜油一滴。
⑴用眼从侧面观察，转动粗螺旋调节器，将油镜头徐徐下降浸入其中，切不可用力过猛，以免损坏油镜。
⑵用左眼从接目镜观察，徐徐向上转动粗螺旋调节器，见模糊物象后，再用细螺旋调节器，直到物象完全清晰为止。
4、显微镜的保护：⑴所有的光学部分结构都不能用手指、普通布擦拭，用过的油镜头应立即先用擦镜纸蘸少许二甲苯擦拭，再用干擦镜纸擦去二甲苯，以防二甲苯镜头上的固定胶，致使镜片脱落。
⑵显微镜的光学部分应避免日光直射。
避免接触强酸、强硷、氯仿、酒精。
⑶显微镜用毕，将物镜转成品字形并下降集光器和镜筒，用软布擦拭各部件后覆盖于接目镜上，双手端平送入镜箱内。
置于干燥处，以防受潮。
(二)细菌形态观察1、细菌的基本形态；球菌：肺炎球菌、脑膜炎球菌、葡萄球菌、链球菌杆菌：大肠杆菌、炭疽杆菌、结核杆菌、白喉杆菌弧菌：霍乱弧菌2、细菌的特殊结构：荚膜：肺炎球菌、产气荚膜杆菌鞭毛：水弧菌（周毛菌）一、实验内容：3细菌标本片的制备（操作）4革兰染色法（操作）二、实验目的：1进一步了解细菌特殊结构在鉴别细菌过程中的实用意义。
微生物学实验报告
微生物学实验报告微生物学实验报告实验目的：观察和学习微生物在不同条件下的生长和繁殖特性。
实验原理：微生物是一类非常小型的生物体，包括细菌、真菌、病毒等。
它们广泛存在于自然界中的土壤、水体和空气中。
微生物可以通过分裂、繁殖等方式进行增殖，并且受到温度、pH值、营养条件等环境因素的影响。
实验材料：培养皿、琼脂、试管、移液器、细菌液等。
实验步骤：1. 准备好所需的培养皿，将琼脂均匀地倒入各个培养皿中。
2. 将培养皿放入高压锅中进行高压灭菌处理，以杀死培养皿中的病原体。
3. 等待琼脂冷却固化后，将培养皿倒置放置。
4. 使用无菌手术针，从微生物液体中获取一定量的微生物液体。
5. 将微生物液体均匀地涂抹在琼脂培养皿上。
6. 使用无菌眼刷将一部分涂抹的微生物液体划线，以便观察微生物的生长情况。
7. 将培养皿放入恒温箱中进行培养，并设置不同的温度、pH 值、营养条件等。
8. 每隔一段时间，观察培养皿上微生物的生长情况，并记录下来。
实验结果和分析：根据观察和记录的结果，我们发现微生物在不同条件下的生长速度和繁殖能力是有差异的。
在适宜的温度、pH值和营养条件下，微生物的生长速度相对较快，生物量也相对较高。
而在不适宜的条件下，微生物的生长速度会减慢或停止，甚至会死亡。
实验结论：微生物的生长和繁殖特性与环境条件密切相关。
适宜的温度、pH值和营养条件可以促进微生物的生长和繁殖，而不适宜的条件会影响微生物的生长。
因此，在实际应用中，我们需要根据微生物的需求条件来选择合适的培养条件，以提高微生物的生长和繁殖能力。
实验总结：通过本次实验，我们进一步了解了微生物在不同条件下的生长和繁殖特性。
微生物的生长和繁殖受到温度、pH 值、营养等环境因素的影响，这是我们在环境控制和微生物培养中需要注意的因素。
掌握微生物的生长和繁殖特性，有利于我们更好地应用微生物技术，并解决一些与微生物相关的问题。
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微生物实验微生物实验细菌形态观察细菌分布消毒灭菌细菌形态观察一、实验目的1. 掌握光学显微镜（油镜)的使用及日常维护2. 掌握细菌的三种形态3. 掌握临床常见细菌的形态及染色4. 掌握细菌的特殊结构5. 了解支原体、衣原体、立克次氏体、螺旋体及真菌的结构特点二、实验原理1. 普通光学显微镜（油镜）的使用1. 在标本欲检部位滴一滴香柏油，然后转换油镜头2. 从侧面观察并慢慢转动粗调节器，使油镜头浸没在油滴内，当油镜头几乎接触玻片时停止转动,以免碰撞玻片，用双眼观察目镜,同时调节细调节器，直至细菌清晰3. 根据需要调节显微镜亮度2. 普通光学显微镜的维护1. 移动显微镜时，用右手持镜壁,左手托镜座,平端于胸前2. 油镜用毕后，要立即用擦镜纸擦去香柏油;再用滴有二甲苯的擦镜纸擦油镜头；最后，用干净擦镜纸将镜头上的二甲苯擦去，以免损伤油镜头3. 镜头擦净后,降低接物镜并将其转成八字形,罩好镜罩放入柜内4. 做好使用记录3. 微生物知识1. 细菌按形态分类:球菌:球形（包括双球菌、四联球菌、八叠球菌、葡萄球菌、链球菌等）杆菌:杆状（包括单杆菌、双杆菌、链杆菌、分枝杆菌、双歧杆菌等）螺旋菌:螺旋状（包括螺旋菌、弧菌等）2. 细菌的基本结构细胞壁、细胞膜、细胞质、核质、核蛋白体3. 细菌的特殊结构荚膜：如肺炎双球菌鞭毛：又分单毛菌、双毛菌、丛毛菌、周毛菌.如：变形杆菌为周毛菌菌毛芽胞:如破伤风梭菌、炭疽芽胞杆菌、肉毒梭菌4. 微生物是一切肉眼看不见或看不清的微小生物的总称，包括原核类、真核类和非细胞类。
原核类:细菌、放线菌、蓝藻、衣原体、支原体、立克次氏体真核类:真菌、原生动物、显微藻类非细胞类：病毒、亚病毒5. 真菌单细胞：圆形、芽生孢子。
如:酵母菌多细胞：菌丝及孢子、孢子出芽.如：霉菌6. 白假私酵母菌（白念)生物学性状:G+单细胞真菌、芽生孢子、类酵母型菌落厚膜孢子、假菌丝有助于鉴定致病性：皮肤粘膜一一鹅口疮、内脏感染、CNS感染微生物学检查：直接涂片、染色后镜检一一菌体、芽生孢子、假菌丝7. 新型隐球菌生物学性状：圆形酵母型菌、外周有厚荚膜(比菌体大1-3倍）致病性:吸入后侵犯皮肤、粘膜等一一慢性炎症和脓肿；侵袭 CNS亚急性或慢性脑膜炎微生物学检查:脑脊液离心后取沉淀、痰和脓标本直接检查；墨汁负染见出芽菌体外围有宽厚荚膜为阳性三、实验材料记号笔：1支；大镊子：1支；火柴:1盒;蜡笔:1支；试管架：1个；酒精灯：1个; 接种环:1支；OlymPUS显微镜：1台;显微镜使用记录本： 1个四、实验内容1. 观察细菌三种形态1) 球菌链球菌、葡萄球菌、肺炎双球菌（子弹形）、脑膜炎双球菌(蚕豆形）、四联菌2) 杆菌破伤风杆菌、白喉杆菌（异染颗粒）、绿脓杆菌、伤寒杆菌、变形杆菌3) 螺形菌弧菌——霍乱弧菌;螺菌；螺杆菌 -—幽门螺杆菌；弯曲菌2. 观察细菌的特殊结构芽胞、鞭毛、荚膜、异染颗粒、钩端螺旋体、幽门螺杆菌3. 绘图葡萄球菌（StaPhyIoCCoCUS);肺炎双球菌(Pneumo CoCCUS）;脑膜炎球菌(meningococcus) ; 破伤风杆菌（Clostridium TantenUS )；霍乱弧菌(Vibrio cholera)；芽胞（SPOre）;鞭毛(flagellum）；荚膜(CaPSUIe);钩端螺旋体（leptospira)五、实验结果绘8幅细菌镜下图，已交。
六、思考与讨论1 。
显微镜高倍镜使用时看不清楚的常见原因(1)未滴加镜油(2)镜头不干净(3)标本放置反了,所以达不到对焦平面(4)制片问题：标本太厚、染色误差等细菌分布一、实验目的1. 掌握固体培养基的制备2. 掌握机体常见部位及环境中的细菌采样、培养、及初步鉴定3. 掌握革兰氏染色方法及结果判定二、实验原理1. 培养基：1. 细菌生长所需营养物质:水、碳源、氮源、无机物和生长因子2. 培养基分类:（1）根据营养物质：营养培养基、选择培养基、鉴别培养基（2）根据物理性质：液体培养基、固体培养基和半固体培养基3. 细菌在培养基中的生长状况：表面生长、均匀浑浊生长、沉淀生长2. 革兰氏染色:革兰阳性细菌细胞壁的肽聚糖（PePtidoglyCa n）层较厚,经乙醇处理后使之发生脱水作用而使孔径缩小，通道弯曲，结晶紫与碘的复合物保留在细胞内而不被脱色；而革兰阴性细菌的肽聚糖层很薄，脂肪含量高，经乙醇处理后孔径仍可使结晶紫与碘的复合物通过，因而将染料洗去而被脱色。
三、实验材料咽拭子、羊血培养皿：1套/人;大号普通培养皿：1块/2人；载玻片:1片/人;A、B菌： 6套/桌；NS：1份/人;滤纸：1张/人;消毒液：4套/桌；三角瓶、电天平、营养琼脂、称药纸、称药勺、量筒：1套/桌四、实验内容1. 培养基制备1）按产品要求称取营养琼脂2）每实验桌制备200ml3）高压蒸汽灭菌后，在洁净工作台内倒平皿4）所制备的普通平皿用于空气培养2. 机体不同部位的细菌采样、培养1）咽部正常菌群的采样、培养咽拭子擦拭咽部，平行划线法接种于羊血平皿。
2）手指消毒前后细菌的采样培养未消毒手指平行划线法接种于普通平皿；同一手指碘酒、酒精消毒后平行划线法接种于普通平皿。
3. 环境中细菌采样培养1）空气培养将培养皿打开暴露于空气中，20分钟后盖好平皿盖儿2）流通纸币（或硬币）的细菌采样培养将硬币正反面分别在培养基上充分接触3) 采样结束后,将培养皿底部朝上放入铁丝筐，统一置培养箱: 37C 18-24小时4. A、B、C菌鉴定(革兰氏染色法)1) 。
细菌涂片制备程序：(1)取一干净玻片，火焰上方缓缓通过三次去油(2)蜡笔画线将玻片分割为 A、B、C三区域(3)接种环取生理盐水分别滴入 A、B两区域各一滴(4)分别取少许 A、B、C菌,与生理盐水充分混匀成菌液，风干后形成菌膜(5)固定（火焰上方缓缓通过三次)(6)革兰氏染色(7)滤纸吸干水分，油镜观察2) 。
革兰氏染色：(1)细菌涂片、火焰固定(2)结晶紫初染 1mi n(3)卢戈氏碘液媒染 1min(4)95%乙醇脱色 30—40s(5)沙黄复染 1mi n五、实验结果A： G+,球菌,推测为金黄色葡萄球菌；B： G-，短杆菌，推测为大肠杆菌;六、思考与讨论1 。
影响革兰氏染色的因素:(1)细菌本身因素：菌龄：如果菌龄太大，可能出现假阴性(2)操作因素涂片：取菌应适量，涂片要均匀，如果某个部分菌层太厚,可能在脱色时达不到，会导致局部假阳性固定：固定温度太高或时间太长都会导致细菌结构破坏而出现假阴性; 但是固定不够，细菌会在水洗时被冲掉初染：初染时间虽然说是 1分钟,但是可以适当延长，时间太短会出现假阴性；染色滴加不均匀可能出现半阴半阳媒染：和初染一样脱色：脱色时间不能过长，基本上用酒精滴过之后马上水冲就可以了，否则容易出现假阴性复染：复染时间需足够长,否则可能会染不上消毒灭菌一、实验目的1. 了解实验室常用消毒灭菌方法及其原理2. 掌握实验中所用仪器的使用方法3. 掌握机体常见部位及环境中的细菌培养物的初步鉴定4. 强化革兰氏染色技能二、实验原理1 . 口咽部及皮肤正常菌群鼻咽部及扁桃体：葡萄球菌、类白喉杆菌、肺链、溶血及非溶血性链球菌、奈瑟菌等口腔：链球菌多见、放线菌、螺旋体、G-杆菌等皮肤:表皮葡萄球菌、丙酸杆菌、类白喉杆菌、铜绿假单胞菌2 •溶血类型α溶血：现象：草绿色溶血环常见菌种:机会致病菌(甲链、肺链)原理：细菌产生过氧化氢将血红蛋白氧化成深绿色的高铁血红蛋白β溶血：现象：透明溶血环常见菌种：致病菌（乙链)原理：细菌释放溶血素使红细胞破裂，血红蛋白释放三、实验材料咽拭子培养物：1套/人；空气、纸币、手指消毒前后培养物：1套/2 ；载玻片：1片/人;NS: 1支/人;滤纸：1张/人四、实验内容1. 常用消毒灭菌方法:（示教讲解）1) .热力灭菌：（1）干热灭菌法：焚化、烧灼、干烤（ 160 C ， 2小时）（2) 湿热灭菌法:煮沸（2％Na2CQ， 105 C)；高压蒸汽灭菌（103.4kPa , 20分钟,121 C ,临床运用最广的灭菌方法)2）。
紫外线(Ultraviolet radiation）：波长265nm—266nm(DNA吸收光谱）杀菌能力最强。
紫外光穿透力差，一般只用于不耐热物品表面的消毒.3) 。
过滤（filtration）用物理阻流的方法除去液体或空气中的细菌，用于不耐热物质的灭菌（血清、毒素、抗生素等）滤菌器:薄膜滤菌器、玻璃滤菌器、石棉滤菌器、素陶瓷滤菌器4）.低温保存菌种(冷冻真空干燥法）6）。
实验室常用化学消毒剂:70—75％乙醇洁净台消毒：来苏水擦拭防腐剂：三氯甲烷、硫柳汞、叠氮钠2. 细菌分布结果鉴定1) 观察菌落2) 取部分菌落的细菌进行革兰氏染色并观察五、实验结果1. 咽部正常菌群的采样、培养结果:在羊血培养皿上出现四种菌落：(1)数目多,划线沿线都有；针尖大小；无色、光滑、湿润、透明、圆形。
周围出现草绿色溶血环，发生了不完全溶血即α溶血。
(2)数目较多，划线沿线都有；较小;乳白色、光滑、湿润、半透明、圆形。
(3)少，只出现在四个点;中型;乳黄色、光滑、半湿润、不透明、形状不规则.在此种菌落下方的培养基出现了透明溶血环,发生了完全溶血即β溶血。
(4)1个菌落；较大;乳白色、光滑、湿润、半透明、圆形.粘稠.取（1)、(2）、（3）进行革兰氏染色，结果如下;(1)G+,链球菌，根据不完全溶血推断，为甲型链球菌.(2)G-,球菌，细胞个体小，形状像金黄色葡萄球菌，但是染色为阴性。
(3)G—,球菌。
2. 手指消毒前后细菌的采样培养结果:1) 消毒前:仅出现2个菌落，较小；乳白色、光滑、湿润、有光泽、圆形。
革兰氏染色结果:G—，杆菌2) 消毒后：无菌落出现。
3. 硬币正反面的细菌采样培养结果：1）正面三种菌落:(1)13个菌落；较小；乳白色、光滑、湿润、有光泽、圆形。
和手指消毒前的菌落一样。
(2)1个菌落；较大；白色、光滑、湿润、近似圆形。
(3)5个菌落；较大；中央乳黄色边缘颜色变浅、光滑、湿润、中间凸、不规则、边缘光滑取其中(2)、( 3)进行革兰氏染色，结果如下：（2）G—，杆菌。
和手指消毒前的细菌一样(3）G-，链杆菌。
形态较大，形状像炭疽芽胞杆菌,但是没有芽孢且染色为阴性。
2）反面两种菌落:（1）2个；较大，乳白色、光滑、湿润、有光泽、圆形。
（2）多个，沿硬币边缘线连成一片；针尖大小、无色、光滑、湿润、透明.4. 空气培养结果平皿敞开在实验室的窗台上放置了约20分钟,当时阳光照在上面：平皿出现了五种菌落:（1）11个；中等大小；白色、光滑、湿润、半透明、圆形（2) 2个；较大；周围白色，中间有一个透明圈，光滑、湿润、中间凹的圆饼状(3）1个；较大;周围黄色，中间有一个透明的圆形区域，半湿润、没有光泽（4) 1个；较大；边缘橘黄色，中央偏白、明显凸起、干燥、形状不规则（5）1个；较大;边缘透明,中央乳黄色,光滑、湿润、半透明、圆形取其中(3）、（4)进行革兰氏染色，结果如下:（3）G-，杆菌。