Toll样受体4在棕榈酸诱导RAW264.7巨噬细胞炎症反应中的作用及机制
小檗碱促进巨噬细胞系RAW264.7由M1促炎表型向M2抗炎表型极化
调控巨噬细胞极化的相关信号通路及其调节机制研究进展
调控巨噬细胞极化的相关信号通路及其调节机制研究进展①刘利萍张焱皓李茂秦欢罗军敏（遵义医科大学免疫学教研室，贵州省免疫分子应用研究工程中心，遵义563000）中图分类号R392.9文献标志码A文章编号1000-484X（2021）06-0747-07［摘要］巨噬细胞是一群具有高度可塑性和异质性的免疫细胞，在维持免疫系统的稳定状态中扮演重要角色。
不同刺激因子作用下，巨噬细胞可极化为M1型和M2型，其极化过程受多种信号通路共同影响。
本文综述巨噬细胞极化过程涉及的主要信号通路及其调节机制的新进展。
［关键词］巨噬细胞；极化；信号通路；调节机制Advances in related signaling pathways and their regulatory mechanisms of macrophage polarizationLIU Li-Ping，ZHANG Yan-Hao，LI Mao，QIN Huan，LUO Jun-Min.Department of Immunology，Zunyi Medical Uni⁃versity，Immune Molecules Application Research Center in Guizhou Province，Guizhou563000，China ［Abstract］Macrophages are a group of highly adaptive and heterogeneous immune cells that play an important role in maintain⁃ing stable state of immune system.Macrophages can be polarized into M1and M2types under stimulation of different cytokines.Pro⁃cess of macrophage polarization is affected by a variety of signal pathways.This review will summarize major signaling pathways of mac⁃rophage polarization as well as their regulatory mechanisms.［Key words］Macrophage；Polarization；Signaling pathway；Regulatory mechanisms作为机体固有免疫系统的重要组成部分，巨噬细胞具有吞噬并杀伤病原微生物、免疫信息传递等功能，在炎症防御、组织发育和维持机体动态平衡等过程发挥重要作用。
Toll样受体4在成骨细胞共培养体系中对干细胞向破骨细胞分化的影响及机制中期报告
Toll样受体4在成骨细胞共培养体系中对干细胞向破骨细胞分化的影响及机制中期报告研究背景及意义：骨骼是人体支撑和运动的重要组成部分。
骨质疏松症和骨折等疾病给人类健康和生活质量带来了很大影响。
骨组织的修复和再生对于治疗这些疾病具有重要意义。
骨再生需要大量的成骨细胞和破骨细胞。
成骨细胞共培养体系是一种模拟骨再生的体外模型，可以探究骨细胞的分化和骨组织的再生过程。
Toll样受体4（TLR4）是一种广泛表达于各种细胞中的模式识别受体，可以识别多种病原微生物的分子结构，并诱导炎症反应。
近年来研究表明，TLR4在骨代谢中也发挥重要作用，可以调控成骨细胞和破骨细胞的分化和功能。
但是，TLR4在成骨细胞和破骨细胞之间的相互作用及其分子机制仍不清楚。
本研究旨在探究TLR4在成骨细胞共培养体系中对干细胞向破骨细胞分化的影响及机制，为骨组织再生和骨修复的研究提供新的思路和借鉴。
研究进展：本研究利用小鼠成骨细胞共培养体系建立了干细胞向破骨细胞分化的模型。
通过Western blot和qPCR等技术检测了TLR4在共培养期间的表达情况，并添加了TLR4激动剂和抑制剂，分别检测了TLR4对共培养体系中成骨细胞和破骨细胞相关标记分子表达的影响。
初步结果显示，在共培养体系中，TLR4的表达变化与成骨细胞和破骨细胞相关标记分子的表达密切相关，但是具体的分子机制还需要进一步探究。
下一步工作：在研究的后续中，我们将进一步验证和深入探究TLR4在成骨细胞共培养体系中对干细胞向破骨细胞分化的影响及机制。
具体工作包括：1. 进一步检测TLR4在共培养体系中的表达动态变化，探究TLR4是否可以调控成骨细胞和破骨细胞的分化和功能；2. 利用TLR4基因敲除小鼠或TLR4拮抗剂等方法，进一步验证TLR4在共培养体系中的作用，并探究其下游信号通路的调控机制；3. 通过小鼠骨折模型等体内实验，验证TLR4在骨组织修复和再生中的重要性，为骨组织再生和骨修复提供新的靶点和策略。
toll样受体名词解释
toll样受体名词解释
Toll样受体是一类重要的蛋白质受体，也被称为Toll-like receptors（TLRs）。
它们是一类存在于人类和其他动物的免疫系统中的受体分子，起着识别和应答外来微生物的关键作用。
Toll样受体最早是在果蝇（Drosophila）的免疫系统中被发现的，后来在人类和其他脊椎动物中也被发现。
它们的命名源自于果蝇的Toll受体，因为人类的TLRs在结构和功能上与果蝇的Toll受体相似。
TLRs主要存在于免疫细胞表面，如巨噬细胞、树突状细胞和B 淋巴细胞等。
它们通过结合微生物的特定分子模式（例如细菌的脂多糖、病毒的核酸等）来识别和区分病原体。
一旦TLRs与这些微生物分子结合，它们会激活免疫细胞，并引发一系列的免疫反应。
TLRs的激活会触发多种信号传导途径，包括NF-κB和MAPK等途径，从而导致炎症反应和免疫细胞的活化。
这些反应有助于清除病原体、增强免疫应答，并最终保护机体免受感染。
除了对微生物的识别，TLRs还参与了一些非感染性疾病的发生
和发展，如自身免疫性疾病、癌症和慢性炎症等。
因此，研究TLRs
的功能和调控机制对于理解免疫系统的工作原理以及相关疾病的治
疗具有重要意义。
总结起来，Toll样受体是一类存在于免疫细胞表面的受体分子，通过识别微生物的特定分子模式来激活免疫反应。
它们在免疫应答
中起着重要作用，并参与了多种疾病的发生和发展。
脂氧素对巨噬细胞RAW264.7的抗炎实验研究
脂氧素对巨噬细胞RAW264.7的抗炎实验研究谢大泽;黄利兴;刘东升;朱俊;谢勇;周南进【摘要】目的研究脂氧素(LX) A4和叔丁氧羟基-苯丙氨酸-亮氨酸-苯丙氨酸-亮氨酸-苯丙氨酸(BOC-2)对LPS作用巨噬细胞RAW264.7存活的影响.方法取对数生长期的巨噬细胞RAW264.7为研究载体,实验用不同浓度的脂多糖(LPS)在不同时间点处理细胞,观察LX A4和BOC-2对LPS作用巨噬细胞RAW264.7后的存活率.CCK-8法观察LPS对各组巨噬细胞RAW264.7的不良反应,Western blot法检测LX A4和BOC-2对LPS处理后巨噬细胞RAW264.7的Toll样受体4(TLR4)和pNF-κB p65蛋白水平,酶联免疫吸附(ELISA)法检测LX A4和BOC-2对LPS处理后巨噬细胞RAW264.7培养上清液中白细胞介素6(IL-6)水平.结果在1 000ng/mL浓度LPS组,作用时间6h,巨噬细胞RAW264.7内TLR4蛋白水平和pNF-κB p65蛋白水平显著高于其余各组(P＜0.05).在LPS作用下,LX A4组细胞存活率显著高于对照组(P＜0.05);BOC-2组在LPS作用后巨噬细胞RAW264.7的存活率显著低于无LPS作用(P＜0.05).在LPS作用下,LX A4组pNF-κB p65蛋白水平低于对照组及BOC-2组(P＜0.05),BOC-2组pNF-κB p65蛋白水平高于其余各组(P ＜0.05).在LPS作用下,LX A4组IL-6的水平低于对照组及BOC-2组(P＜0.05).结论 LX A4能够抑制LPS对巨噬细胞RAW264.7的作用及TLR4/NF-κB信号通路的激活,有助减轻炎性反应.【期刊名称】《重庆医学》【年(卷),期】2016(045)014【总页数】3页(P1876-1878)【关键词】脂多糖类;脂氧素类;脂氧素A4;RAW264.7;核转录因子【作者】谢大泽;黄利兴;刘东升;朱俊;谢勇;周南进【作者单位】江西省医学科学研究院,南昌330006;南昌大学第一附属医院消化内科,南昌330046;赣南医学院第一附属医院消化内科,江西赣州341000;南昌大学第一附属医院消化内科,南昌330046;南昌大学免疫与生物治疗研究所,南昌330006;南昌大学第一附属医院消化内科,南昌330046;江西省医学科学研究院,南昌330006;南昌大学免疫与生物治疗研究所,南昌330006【正文语种】中文【中图分类】R573.2脂氧素(lipoxin，LX)是继前列腺素之后的又一重要花生四烯酸代谢产物，在炎症疾病的组织中广泛表达，LX A4最具抗炎作用，其主要通过抑制核转录因子Kappa B(NF-κB)的活性及促炎因子的释放发挥抗炎作用[1]。
Toll样受体4介导急性心肌梗死后炎症反应的研究进展
Toll样受体4介导急性心肌梗死后炎症反应的研究进展董国菊;李立志【摘要】Persistent inflammation is the key pathological circle on ventricular remodeling ( VR) after acute myocardial infarction(AMI),and more and more attention is paid to the role of Toll-like receptor 4 (TLR4)on VR after AMI.At present,it′s known that a lot about the inflammation reaction of TLR4, but the study on the inflammation reaction of TLR4 after AMI is still in progress.The start time, the peak time and the maintenance time of TLR4 on inflammatory reaction after AMI are still unclear , which need further research.%心肌坏死后持续的炎症反应是导致急性心肌梗死（AMI）后心室重构（VR）的关键病理环节，其中Toll样受体（TLR）4介导的炎症信号途径在AMI后 VR中的关键作用越来越受到关注。
目前，关于TLR4介导的自身炎症反应特点研究的比较多，关于TLR4介导的AMI后炎症反应的基础和临床研究仍在进行中。
其介导的炎症信号途径在 AMI后的启动时间、高表达时间、维持时间及最佳药物干预时间等尚不明确，需要今后不断的深入研究将其一一阐释。
【期刊名称】《医学综述》【年(卷),期】2015(000)010【总页数】3页(P1735-1737)【关键词】急性心肌梗死;Toll样受体4;炎症反应【作者】董国菊;李立志【作者单位】中国中医科学院西苑医院心血管科，北京100091;中国中医科学院西苑医院心血管科，北京100091【正文语种】中文【中图分类】R542.22急性心肌梗死(acute myocardial infarction，AMI)后大约 4 h 开始出现急性炎症反应和中性粒细胞浸润，急慢性炎症反应将高水平维持2~3 d，于2周左右逐渐减弱[1]。
Toll样受体2和4信号通路在炎症治疗中的作用和意义
Toll样受体2和4信号通路在炎症治疗中的作用和意义詹雪灵;高杰;吴补领【摘要】脂多糖(LPS)在细菌破坏细胞的过程中起着重要的作用.Toll样受体(TLR)2对LPS的识别是通过与TLR1和TLR6构成异源二聚体来完成的,TLR2识别LPS后介导的细胞内免疫反应遵循髓样分化因子(MyD) 88依赖性通路.MyD88的死亡结构域募集下游的白细胞介素-1受体相关激酶1和4,肿瘤坏死因子受体相关因子6和转化生长因子-β 1活化激酶等信号分子,促使核因子-κB、激活蛋白1和P38促丝裂原激活蛋白激酶活化,继而导致促炎症细胞因子相关基因转录.MyD88非依赖性通路分别募集和激活下游分子受体相互作用蛋白1或肿瘤坏死因子受体相关因子3,通过核因子-κB、激活蛋白1和干扰素调节因子3,诱导Ⅰ型干扰素的产生.CD14和MyD2是LPS与TLR4结合的关键蛋白,控制CD14或MyD2可阻止LPS和TLR4的结合,将炎症反应阻断在信号转导的上游.TLR2和TLR4对LPS的识别是引发炎症反应的关键,限制细胞对TLR2和TLR4的表达是进行炎症控制最直接有效的方法.调控TLR2和TLR4信号通路,有望给予牙周炎、炎症性肠炎、心血管疾病及和自身免疫性疾病等更有效和更安全的临床治疗.【期刊名称】《国际口腔医学杂志》【年(卷),期】2014(041)003【总页数】5页(P304-308)【关键词】Toll样受体;信号通路;转导抑制;炎症治疗【作者】詹雪灵;高杰;吴补领【作者单位】南方医科大学南方医院口腔科;南方医科大学口腔医学院广州510515;【正文语种】中文【中图分类】Q51Toll样受体（Toll-like receptor，TLR）是一种存在于哺乳动物的跨膜蛋白，通过识别病原相关分子模式（pathogen associated molecular pattern，PAMP）参与机体的先后天免疫应答。
其中，TLR2和TLR4参与了细菌脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）的识别和信号转导，在 LPS激发的炎症免疫中起着至关重要的作用，是细菌破坏细胞的关键途径。
PPAR-γ在巨噬细胞炎症调控中的作用及机制的研究进展
158CARCINO GENESIS ，TERATO GENESIS &MUTA GENESISPPAR-γ在巨噬细胞炎症调控中的作用及机制的研究进展涂永梅1，3，彭洁1，#，龙子1，#，孔德钦1，陈宇豪2，覃梓瀚2，刘瑞1，李文丽1，*，于卫华1，*(1．空军军医大学军事预防医学院毒理学教研室，陕西省自由基生物学重点实验室，特殊作业环境危害评估与防治教育部重点实验室，陕西西安710032；2．空军军医大学基础医学院学员大队，陕西西安710032；3．陕西中医药大学公共卫生学院，陕西咸阳712046)收稿日期：2021-09-18；修订日期：2022-03-07基金项目：国家自然科学基金(NSFC-32171231，NSFC-31800706)作者信息：涂永梅，E-mail ：*****************。
#并列第一作者，彭洁，E-mail ：***************；龙子，E-mail ：luoze0317@ 。
*通信作者，李文丽，E-mail ：****************.cn ；于卫华，E-mail ：*****************.cn【摘要】巨噬细胞是机体内主要的炎症效应细胞，一般可分化为促炎(M1)型和抗炎(M2)型两大类，针对巨噬细胞极化调控成为炎症相关疾病治疗的新靶点。
研究表明，过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)作为一个配体激活的核转录因子，可抑制M1型巨噬细胞促炎信号通路的启动，并促进M2型巨噬细胞抗炎信号的表达。
本文主要综述了PPAR-γ在巨噬细胞抗炎症反应中的关键作用，以及PPAR-γ激动剂在脓毒症、肠道炎症、代谢性炎症和自身免疫性炎症疾病治疗中的应用，以期为相关基础研究和临床用药提供指导。
【关键词】PPAR-γ；巨噬细胞；促炎反应；抗炎反应；氧化还原；炎症调控中图分类号：364.5文献标志码：A文章编号：1004-616X(2022)02-0158-04doi ：10.3969/j.issn.1004-616x.2022.02.016过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(peroxisome proliferator-activated receptor-γ，PPAR-γ)属于核受体转录因子超家族的关键蛋白，主要通过配体结合途径激活，参与调控脂肪细胞分化和脂肪酸代谢，在肥胖和糖尿病等疾病进展中发挥重要作用[1]。
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实验研究Toll样受体4在棕榈酸诱导RAW264.7巨噬细胞炎症反应中的作用及机制闫美玲1，秦寅鹏1，王文一2，张弋1△摘要:目的探讨Toll样受体4（TLR4）在棕榈酸诱导RAW264.7巨噬细胞炎症反应中的作用及可能机制。
方法观察正常对照组（正常饮食）和高脂饲料组（高脂饮食诱导肥胖小鼠模型）C57BL/6J小鼠血清自由脂肪酸（FFA）水平及内脏脂肪组织炎症细胞因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）和单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）的表达；采用棕榈酸（150μmol/L组和300μmol/L组）刺激小鼠RAW264.7巨噬细胞，观察这2组和空白对照（Control）组、无FFA牛血清白蛋白（BSA）组的TNF-α、IL-6和MCP-1的表达和分泌，同时检测TLR4的蛋白表达和核因子-κB（NF-κB）的激活情况；利用siRNA干扰实验抑制TLR4，观察在Control组、BSA组、棕榈酸（300μmol/L）组、棕榈酸（300μmol/L）+Control siRNA组、棕榈酸（300μmol/L）+TLR4siRNA组中棕榈酸诱导巨噬细胞炎症因子的表达和分泌。
结果高脂饲料组体质量和Lee’s指数高于正常对照组，血清中FFA水平升高，内脏脂肪组织中TNF-α、IL-6和MCP-1的表达明显增加（P＜0.05）。
与BSA组比较，棕榈酸150μmol/L组和棕榈酸300μmol/L组炎症因子TNF-α、IL-6和MCP-1的表达和分泌均明显增加，TLR4和NF-κB p65磷酸化蛋白水平均增加（P＜0.05）。
与BSA组比较，棕榈酸300μmol/L组NF-κB p65的核转运水平和细胞内水平明显升高（P＜0.05）。
TLR4被抑制后，棕榈酸+TLR4siRNA组的TLR4、TNF-α、IL-6和MCP-1的mRNA表达和分泌水平明显低于棕榈酸组（P＜0.05）。
结论TLR4可能参与棕榈酸诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症反应，诱导炎症因子TNF-α、IL-6和MCP-1的释放，且其介导的炎症反应与NF-κB的激活有关。
关键词:小鼠，肥胖；棕榈酸；Toll样受体4；核因子κB；代谢炎症中图分类号：R589文献标志码：A DOI：10.11958/20170824Role of TLR4in RAW264.7macrophage inflammation induced by palmitic acidYAN Mei-ling1,QIN Yin-peng1,WANG Wen-yi2,ZHANG Yi1△1Department of Pharmacy,2International Center for Diagnosis and Treatment,Tianjin First Center Hospital,Tianjin300192,China△Corresponding Author E-mail：wing_zh1821@Abstract:objective To investigate the effect of toll-like receptor4(TLR4)in RAW264.7macrophage inflammation induced by palmitic acid and its possible mechanisms thereof.Methods C57BL/6J male mice were fed normal(control group)or high-fat diet(high-fat group)for18weeks.The serum level of free fatty acids(FFA)and mRNA levels of inflammatory cytokines in visceral adipose(TNF-α,IL-6and MCP-1)were detected.Then,palmitic acid(150μmol/L and 300μmol/L)was applied to stimulate RAW264.7macrophage,the mRNA expression and the secretion level of cytokines were detected.Meanwhile,TLR4protein level,the nuclear translocation and intracellular level of NF-κB p65were also detected.After TLR4inhibition by siRNA transfection,the mRNA expression and the secretion level of cytokines were detected.Results The body weight and Lee’s index were significantly higher in high-fat group than those of control group (P＜0.05).The serum level of FFA and mRNA levels of inflammatory cytokines(TNF-α,IL-6and MCP-1)in visceral adipose were significantly higher in high-fat group than those of control group(P＜0.05).Compared with mice without FFA (BSA group),the mRNA expression and the levels of TNF-α,IL-6,and MCP-1were significantly increased(P＜0.05),and the protein expression of TLR4and NF-κB phosphorylated protein were up-regulated(P＜0.05)in mice treated with palmitic acid(150μmol/L and300μmol/L).The nuclear translocation and intracellular level of NF-κB p65were increased基金项目：天津市卫计委科技基金（2015KY09）作者单位：1天津市第一中心医院药学部（邮编300192），2国际诊疗中心作者简介：闫美玲（1984），女，主管药师，主要从事肥胖及代谢综合征的发病机制研究△通讯作者E-mail：wing_zh1821@肥胖、高血脂和糖尿病等代谢疾病均伴随血清炎症因子如肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor，TNF-α）、白细胞介素-6（interleukin-6，IL-6）和单核细胞趋化蛋白-1（monocyte chemotactic protein1，MCP-1）等的升高，亦往往伴随免疫细胞（如巨噬细胞）向脂肪组织浸润，通常称之为炎性状态［1-2］。
研究显示，这些代谢疾病通常伴随着血清自由脂肪酸（free fatty acids，FFA）浓度的升高［2-3］。
FFA是高脂饮食的主要成分，过量的FFA可引起脂毒性，损伤正常细胞并引起炎症发生，其中饱和脂肪酸对炎症的影响尤为突出［4］。
棕榈酸是人和小鼠循环系统中主要的饱和脂肪酸，可引起脂肪细胞和胰岛β细胞的炎症反应，诱导细胞凋亡及胰岛素抵抗的发生［5-6］。
Toll样受体4（toll-like receptor4，TLR4）是模式识别受体家族中的重要一员，在炎症和免疫方面发挥重要作用［7-8］。
TLR4是炎症信号传导的门户蛋白，可激活细胞内促炎性反应信号通路，进而诱导炎症细胞因子的表达［9］。
然而，棕榈酸能否诱导脂肪组织浸润的巨噬细胞启动炎症反应，TLR4是否参与介导炎症反应，目前仍不明确。
本研究旨在建立棕榈酸诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症反应细胞模型，探讨TLR4在此过程中的作用及相关机制。
1资料与方法1.1一般资料（1）动物与细胞。
无特定病原体（specified pathogens free，SPF）级健康雄性C57BL/6J小鼠20只，购自北京华阜康生物科技股份有限公司，体质量15～17g，4～5周龄。
小鼠巨噬细胞RAW264.7购自中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库。
（2）主要仪器与试剂。
DMEM培养基、碳酸氢钠溶液和胎牛血清购自美国Invitrogen Gibco公司；Trizol、逆转录试剂盒和荧光实时定量PCR试剂盒购自大连宝生物工程技术公司；PCR引物购自上海生物工程有限公司；小鼠抗小鼠β-actin单克隆抗体、小鼠IL-6、TNF-α和MCP-1的酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司；Western细胞裂解液、核因子κB （Nuclear factorκB，NF-κB）p65兔抗小鼠抗体、Cy3标记山羊抗兔IgG（H+L）和NF-κB激活-核转运检测试剂盒购自江苏碧云天公司；小鼠NF-κB p65ELISA试剂盒购自美国R&D 公司；兔抗小鼠TLR4多克隆抗体和兔抗小鼠NF-κB p65多克隆抗体（S536）购自美国Abcam公司；HRP标记抗小鼠二抗，HRP标记抗兔二抗购自北京中杉金桥公司。
1.2方法1.2.1C57BL/6J小鼠肥胖模型建立20只小鼠适应性喂养１周后称量空腹体质量并标号，随机数字表法分为正常对照（Control）组和高脂饲料（High-Fat Diet）组，每组10只。
对照组正常饮食，高脂饲料组建立高脂饲料（high-fat diet，HFD）诱导的肥胖小鼠模型［10］。
实验中基础饲料参照AIN-96G配制，高脂饲料在基础饲料基础上添加10%猪油、10%蛋黄粉。
实验期间饲养温度20～25℃，昼夜明暗交替日光灯照明，自由饮水。
高脂饮食诱导18周后，采用精密电子天平称量小鼠的体质量。
用10％水合氯醛腹腔注射麻醉后，测其体长（鼻尖到肛门外沿的长度），计算Lee’s指数，Lee’s指数=［体质量（g）×103/体长（cm）］1/3。
1.2.2脂肪组织的采集高脂饮食诱导结束后，小鼠禁食12h，不禁水，称量体质量。
采用10％水合氯醛腹腔注射麻醉。
麻醉后依据以下步骤采集血液和组织样本：（1）打开腹腔，取腹主动脉血0.2~0.5mL，3000r/min离心15min，取上清液，贮存于-80℃冰箱保存备用。