野生型突变型WISP3对人软骨细胞IGF信号通路的作用
igf-3低于正常值
igf-3低于正常值
IGF-3是指胰岛素样生长因子-3，它是一种由肝脏分泌的蛋白质，对于促进细胞生长和分化具有重要作用。
如果IGF-3低于正常值，可能会有一些潜在的健康问题。
首先，低IGF-3水平可能与生长发育问题相关，特别是在儿童和青少年中。
这可能导致生长迟缓或骨骼发育问题。
其次，低IGF-3水平也可能与营养不良或慢性疾病有关。
IGF-3还与肌肉质量和代谢有关，因此低IGF-3水平可能导致肌肉无力或代谢问题。
此外，IGF-3与心血管健康和免疫功能也有关，因此低IGF-3水平可能增加患心血管疾病和感染的风险。
最后，低IGF-3水平有时也与内分泌失调有关，可能需要进一步的内分泌系统检查。
总之，如果IGF-3低于正常值，建议及时就医，进行全面的身体检查，以确定具体的健康问题，并制定相应的治疗方案。
植物免疫系统中的信号转导通路
植物免疫系统中的信号转导通路植物无法逃离环境的威胁，它们只能通过不同的机制来对抗病原体和有害环境。
植物的免疫系统包括两个主要方面：基础免疫和适应性免疫。
基础免疫是植物对常见的病原体和环境应激的回应，而适应性免疫则是植物对先前未遇到的特定病原体的特异反应。
植物在免疫应答中涉及到一系列的信号转导通路，最终导致基因表达的改变和产生免疫反应。
下面，我将详细介绍植物免疫系统中的信号转导通路。
1. PAMPs信号通路PAMPs (Pathogen-Associated Molecular Patterns) 信号通路是植物基础免疫的一个重要部分。
PAMPs 是微生物体表面上的分子，如蛋白质、多糖和核酸。
它们是微生物的“指纹”，可以被植物的受体感知。
当一个 PAMPs 被植物受体识别后，植物会产生一系列的信号转导反应，导致基因表达的改变和免疫应答的触发。
这些反应包括钙离子（Ca2+）信号、PIP2 次级信号、激活蛋白激酶（MAPK）模块、NADPH 氧化酶的激活、转录因子激活等。
此外，PAMPs 信号通路还涉及一些基因的转录，例如 WRKY、MYB、NAC和 ERF 家族转录因子等。
这些转录因子能够导致基因的表达变化，从而激发免疫应答。
2. R蛋白信号通路R 蛋白（Resistance proteins）信号通路是植物适应性免疫的关键组成部分。
R蛋白能够识别细菌、真菌和病毒等寄生性微生物。
当一个 R 蛋白识别到目标病原体时，它会形成一个信号复合物，促进一系列的信号转导反应。
这些反应包括活化特异性NADPH 氧化酶、活化植物激酶（PIK）、活化 MAPK 和其他激酶以及调控转录因子的激活等。
R 蛋白信号通路还包括一些特定的转录因子，例如：TGA 转录因子和 EDS1 转录因子。
TGA 转录因子是一种可激活植物抗氧化酶的DNA结合蛋白。
EDS1 转录因子在植物免疫应答中起着重要的作用，它与 PAD4、NPR1 等蛋白质相互作用，调节免疫反应基因的表达。
基于Wnt信号通路探讨外泌体治疗椎间盘退变的机制
㊃综 述㊃[收稿日期]2022-10-01[作者简介]金芳全(1994-),男,甘肃武山人,甘肃中医药大学中医临床学院医学硕士研究生,从事中医药对脊柱疾病的防治研究㊂*通信作者㊂E -m a i l :F C H 0203@163.c o m基于W n t 信号通路探讨外泌体治疗椎间盘退变的机制金芳全1,樊成虎2*(综述),雍清锋2,陈彦同2(审校)(1.甘肃中医药大学中医临床学院,甘肃兰州730030;2.甘肃省中医院脊柱骨一科,甘肃兰州730050) [摘要] 椎间盘退变(i n t e r v e r t e b r a l d i s c d e g e n e r a t i o n ,I V D D )的主要机制是m i R N A s 靶向作用于基质金属蛋白酶(m a t r i xm e t a l l o p r o t e i n a s e s ,MM P s )诱导椎间盘细胞外基质(e x t r a c e l l u l a rm a t r i x ,E C M )分解㊂外泌体是一种细胞间可以传递遗传信息和交换物质的囊泡,通过扩散为椎间盘内细胞提供营养物质和传递生物信息㊂W n t 信号通路是一个在生物进化过程中高度保守的信号转导通路网络,对细胞的生存㊁增殖㊁分化㊁极化㊁凋亡等过程起关键调控作用,并参与椎间盘的发育㊁生长与退变,促使细胞内环境处于动态稳定平衡状态,但其中某些机制研究尚不明确㊂深入研究椎间盘退变病理机制及不同因素间的相互作用具有重要临床意义㊂本文将W n t 信号通路和外泌体对I V D D 的相互交叉协同作用进行综述,发现外泌体激活W n t 通路可加速E C M 降解㊁诱导间质干细胞定向分化;同时,外泌体抑制W n t 通路可促进髓核(n u c l e u s p u l p o s u s ,N P )细胞增值,协同W n t 通路抑制血管生成有效治疗I V D D ㊂进一步了解外泌体㊁W n t 信号㊁椎间盘退变三者之间的关系,为治疗I V D D 的基础研究和临床工作提供参考㊂[关键词] 椎间盘退行性变;基质金属蛋白酶类;外泌体 d o i :10.3969/j .i s s n .1007-3205.2023.08.022 [中图分类号] R 681.5 [文献标志码] A [文章编号] 1007-3205(2023)08-0990-04椎间盘退变(i n t e r v e r t e b r a l d i s cd e ge n e r a t i o n ,I V D D )继发腰椎间盘突出或腰椎椎管狭窄被认为是引起慢性下腰痛的主要原因之一,但当前药物治疗和手术干预均不能抑制I V D D [1]㊂随着基因工程㊁靶向治疗等生物技术的发展,来源于间质干细胞(m e s e n c h ym a l s t e mc e l l s ,M S C s )并能介导细胞间信息传递和物质交换的外泌体(e x o s o m e s ),在I V D D 的治疗方面展现出广泛的前景[2-3]㊂有证据表明外泌体靶向作用于椎间盘内特定结构蛋白治疗I V D D ,并抑制炎症介质如白细胞介素(i n t e r l e u k i n,I L )1β降低椎间盘细胞外基质(e x t r a c e l l u l a r m a t r i x ,E C M )中基质金属蛋白酶(m a t r i xm e t a l l o pr o t e i n a s e s ,MM P s )的分解代谢,延缓椎间盘的退变[2]㊂W n t 信号通路通过促进成骨细胞(o s t e o b l a s t ,O B )分化㊁抑制破骨细胞(o s t e o c l a s t,O C )活性调节骨稳态㊂研究发现M S C s 来源外泌体通过上调W n t 信号通路相关蛋白表达,促进m i R N A s 与靶基因的3'U T R 特异性结合而调节骨再生[4]㊂因此,本文就W n t 信号通路协同外泌体治疗I V D D 的调控机制进行综述,以期为I V D D 的防治提供参考㊂1 外泌体及其功能外泌体是由磷脂双分子层构成且直径在10~30n m 之间的扁平状胞外囊泡(e x t r a c e l l u l a rv e s i c l e s ,E V s ),作为信使可将其所含的不同内容物如蛋白质㊁磷脂㊁神经酰胺㊁核酸等成份传递到受体细胞,并激活效应器完成细胞间信息传递和物质交换[5]㊂此外,外泌体广泛存在于关节滑液㊁乳液㊁精液㊁血液㊁尿液等体液中,可通过超速离心和切向流过滤等方法获得[6],来源丰富㊂研究发现不同来源的外泌体通过基因调控信号转导通路在肿瘤转移㊁病毒感染和免疫调节等不同方面发挥着重要作用[7]㊂外泌体功能取决于胞吐时所包裹的分子物质㊂多数研究证明[5],外泌体所含物质多为蛋白质㊁脂类㊁核酸,但不同细胞来源的外泌体所携带的分子物质含量㊁形态大小㊁种类均不同㊂其中所含蛋白包括跨膜蛋白㊁脂锚定膜蛋白㊁外周相关膜蛋白和外泌体腔的可溶性蛋白,此类蛋白在质膜转运及融合时作为表面信号分子识别激活信号通路[4]㊂所含脂质主要是磷脂酰丝氨酸㊁磷脂酰乙醇胺,其作用是保护重要核酸物质在受体细胞接收时不被生物酶吞噬降解,从而发挥信息传递功能,另外,磷脂酰丝氨酸还是细胞凋亡标志物[7]㊂所含m i R N A s 通过碱基互补配对原则与m R N A 结合参与遗传物质的转录㊁翻译[8]㊂综上,外泌体是通过细胞间囊泡介导信号㊃099㊃第44卷第8期2023年8月河北医科大学学报J O U R N A L O F H E B E I M E D I C A L U N I V E R S I T YV o l .44 N o .8A u g. 2023 Copyright ©博看网. All Rights Reserved.传递和分子转移的复合信号颗粒㊂2外泌体治疗I V D D的可能作用机制I V D D导致下腰痛是脊柱外科医生面临的共同难题㊂外泌体作为细胞间信号传递的介质,其内容物可调节细胞功能,有效延缓I V D D㊂有研究发现[9],I V D D主要是I L-1β积累㊁蛋白多糖丢失和细胞因子扩散进入E C M,进而激活MM P s,引起髓核(n u c l e u s p u l p o s u s,N P)细胞的病理性凋亡㊂与干细胞相比,外泌体具有不同特性㊂首先,外泌体中m i R N A s作为转录后调节因子可作用于各个靶点直接改变相关蛋白的表达,调节N P功能,在细胞和组织工程学角度为改善甚至逆转I V D D提供可能[10];其次,外泌体更能适应由椎间盘退变造成的低细胞结构㊁低葡萄糖㊁高渗透压㊁低p H和低氧的恶劣环境[9,11];最后,外泌体通过转移游离的蛋白质和m i R N A s抑制T细胞免疫㊂通常T细胞在减少同种异体免疫排斥反应中发挥重要作用,本体M S C s提取的外泌体制剂在治疗I V D D时,间接激活T细胞可相对降低急性免疫炎症反应的发生[12-13],这提示外泌体可能是未来治疗I V D D的潜在研究方向㊂3W n t信号通路在治疗I V D D中的作用机制W n t信号通路在调节细胞生长发育和维持组织稳态中发挥重要的作用㊂W n t通路包括经典通路和非经典通路,其转导主要经过三个步骤:胞膜中W n t信号转导㊁细胞质中β-c a t e n i n蛋白的调节和细胞核中W n t靶基因的激活[14]㊂研究发现,激活W n t信号通路的靶因子主要有丝氨酸-苏氨酸激酶3㊁β-c a t e n i n蛋白㊁分泌型卷曲相关蛋白1㊁蛋白磷酸酶2A㊁A D P核糖基化因子[15]㊂将这类激活因子研发为成药,靶向治疗疾病已成为当前的科研热点㊂例如,Z h a n g等[16]在骨质疏松大鼠模型中,发现m i R-542-3p激活W n t通路靶向作用于分泌型卷曲相关蛋白1,抑制O C活性,促进O B分化,加速细胞外基质矿化进而增加大鼠骨量㊂由此可见,W n t通路在调控骨代谢中起正向调节作用㊂W n t信号通路在椎间盘的形成㊁生长㊁退变及修复中均发挥重要作用[17]㊂I V D D是由于椎间盘内糖化蛋白减少㊁胶原蛋白数量增加导致髓核失水,最终引起椎间盘结构改变㊂在正常椎间盘中E C M 的合成和降解处于动态平衡,其中β-c a t e n i n和MM P s可以加速E C M降解,因此,激活W n t信号通路可诱导I V D D[18]㊂研究证实在低氧㊁低p H环境中激活W n t通路,促进β-c a t e n i n蛋白表达,抑制N P细胞增殖并促进凋亡[19]㊂此外,髓核脱水致椎间盘压力负荷增加㊁细胞活力降低,随着暴露时间的延长,W n t1和β-c a t e n i n表达过量可加剧诱导N P 细胞凋亡[20]㊂总之,激活W n t通路㊁促进β-c a t e n i n 蛋白表达可促使N P细胞衰老㊁凋亡,加快E C M分解㊂如果抑制W n t信号通路表达则治疗I V D D成为可能㊂4外泌体协同W n t通路对I V D D的机制4.1外泌体激活W n t通路,加速E C M降解 E C M 加速降解是I V D D的重要标志,之前研究证实激活W n t通路可加快E C M降解㊂外泌体是m i R N A s的转运者,通过E V s在细胞间传递信息㊂因此探索外泌体携带的m i R N A s是否可以激活W n t通路治疗I V D D值得深入研究㊂通过实验发现,随着髓核间质干细胞来源的外泌体介入量增加,W n t3的m i R N A和β-c a t e n i n蛋白水平显著增加,说明W n t 通路被激活从而在I V D D中发挥作用[18]㊂大量研究证实来源于N P细胞的m i R N A s作为转录后调节因子通过W n t通路作用于MM P s调控E C M代谢,其中MM P-1/2/3/9/13/14表达与I V D D的严重程度呈正相关[21-27],见表1,因此寻找W n t通路激活剂及其MM P s作用靶点以减缓或改善I V D D,具有深远启发意义和探索价值㊂表1椎间盘中与E C M降解相关的m i R N A及其相应靶点M i R N A靶蛋白m i R N A来源参考文献M i R-93MM P-2N P[21] M i R-431MM P-1N P[22] M i R-15a MM P-3N P[23] M i R-140-5p MM P-7N C[24] M i R-22MM P-9N P[25] M i R-276MM P-13N P[26] M i R-193-3p MM P-14N P[27] 4.2外泌体联合W n t通路,诱导干细胞定向分化除研究W n t通路抑制剂或激活剂作用于靶基因治疗I V D D外,探究外泌体和W n t通路是否诱导M S C s定向分化为N P细胞以延缓I V D D同样具有一定价值㊂L u o等[28]通过超高速离心和透射电子显微镜提取并鉴定来自软骨终板干细胞(c a r t i l a g e e n d p l a t e s t e mc e l l s,C E S s)的外泌体(C E S s-E x o s),研究发现C E S s-E x o s通过自分泌机制,增加低氧诱导因子1α激活W n t信号通路,促进转化生长因子β表达,诱导C E S s向椎间盘迁移并分化为N P细胞,延缓I V D D㊂然而低氧诱导因子1α在转录信息时对m i R N A s的选择还具有争议,今后可能成为新的研究热点㊂Z h a n g等[29]通过甲苯胺蓝染色发现,在E x o-m i R-15a处理的共培养N P细胞-M S C s中,软㊃199㊃河北医科大学学报第44卷第8期Copyright©博看网. All Rights Reserved.骨分化增加,进一步研究表明,E x o-m i R-15a激活W n t3a/β-c a t e n i n轴,下调MM P-3促进髓核间质干细胞软骨分化,诱导I V D D㊂因此,筛选外泌体m i R N A诱导干细胞定向分化为N P细胞治疗I V D D具有重要研究意义㊂4.3外泌体产生m i R N A s抑制W n t通路,促进N P 细胞增殖外泌体产生的m i R N A s已被证明在诱导C E S s分化为N P的过程中扮演重要角色,通过激活W n t通路,上调相关蛋白表达可进一步促进C E S s分化㊁增值㊂有研究表明外泌体携带的m i R N A s并不都是激活W n t通路,部分可抑制W n t 通路调节N P㊂Y u n等[30]证实m i R-185可抑制W n t通路,特异性结合β-c a t e n i n蛋白,负调节半乳糖凝集素3㊁促进自噬因子和促凋亡因子表达,增强N P细胞活力,抑制N P细胞自噬和凋亡,从而阻止I V D D的发展㊂但是m i R N A种类数量较多,目前研究发现椎间盘内表达的R N A有1800多种, m i R N A50有多个[31],如何区分这些m i R N A s是W n t通路抑制剂或激活剂,仍是现阶段研究面临的巨大挑战㊂4.4 W n t通路协同外泌体抑制血管生成W n t通路在I V D D中已有较为系统的研究,随着外泌体研究的逐步发展,对其转运的m i R N A s研究也取得初步结果,若能证明W n t通路对某种来源的干细胞产生m i R N A s的水平有正向调节作用,也能为I V D D 的治疗提供新的思路㊂椎间盘是由髓核㊁纤维环㊁软骨终板组成的人体最大的无血管器官,有学者认为血管生成和异常神经侵犯激活免疫细胞和炎性细胞因子,从而打破椎间盘稳态,在I V D D进展中发挥重要作用[32]㊂有研究指出,W n t通路被激活时,骨髓间质干细胞来源的外泌体携带的m i R-140-5p水平显著上升,MM P-7表达水平下调,抑制血管生成[24]㊂此外,正常椎间盘来源的纤维环细胞分泌外泌体,下调MM P-3/13和血管内皮生长因子表达,抑制血管生成[33]㊂因此W n t通路协同外泌体所含m i R N A s抑制血管生成可延缓I V D D㊂抑制血管生成不仅在防治I V D D领域至关重要,在癌症㊁心肌梗死等疾病的治疗上同样具有探索价值[34-35]㊂5小结与展望综上所述,本研究主要综述外泌体与W n t通路协同调节E C M代谢治疗I V D D的机制㊂当前研究表明外泌体具备作为理想药物载体的条件和特性,有望发展为一种新的诊疗方法[36]㊂但外泌体医学领域研究尚处于初始阶段,在I V D D方向研究相对较少,多数研究主要集中在骨质疏松症等骨代谢异常疾病上[37],与W n t通路相互作用的机制研究更是缺乏㊂本研究所知W n t通路不仅参与椎间盘的退变,还参与发育和生长,说明不同时间阶段激活W n t通路具有不同效应,但发育阶段分子水平的研究机制尚未统一定论,能否在发育阶段通过基因水平改造椎间盘值得憧憬㊂因此,研究前景机遇与挑战并存,挑战在于目前外泌体分离方法所获得的产量有限,作为临床药物而言,外泌体的药代动力学仍然相对模糊,人体内吸收㊁分布和代谢机制尚未阐明,最佳有效剂量和给药频率目前尚无共识,并且不同来源的外泌体效应具有明显异质性[38],如何区分并加以利用是重点㊂机遇在于随着研究的深入,外泌体与靶细胞间信息传递机制逐步揭示,且对W n t 通路的研究也逐步成熟,为进一步探究二者之间的相互作用奠定了基础㊂在接下来的工作中应该注重外泌体输送方法,包括直接注射和将m i R N A s载体化,将注射MM P s水凝胶多聚体胶束作为m i R N A s 的两级递送系统,在退变的椎间盘中识别更多的m i R MA s及对应的作用靶点㊂加强c i r c R N A-m i R N A-m R N A网状系统研究,深入探索W n t通路与外泌体协同治疗I V D D的机制,为研发高效药物并早日运用于临床奠定基础㊂[参考文献][1] K i r n a z S,C a p a d o n a C,W o n g T,e t a l.F u n d a m e n t a l s o fi n t e r v e r t e b r a l d i s cd e g e n e r a t i o n[J].W o r l dN e u r o s u r g,2022,157:264-273.[2] X i aC,Z e n g Z,F a n g B,e t a l.M e s e n c h y m a l s t e mc e l l-d e r i v e de x o s o m e s a m e l i o r a t e i n t e r v e r t e b r a l d i s c d e g e n e r a t i o nv i a a n t i-o x i d a n t a n da n t i-i n f l a mm a t o r y e f f e c t s[J].F r e e R a d i c B i o lM e d,2019,143:1-15.[3]S h a nS K,L i nX,L iF,e t a l.E x o s o m e sa n db o n ed i s e a s e[J].C u r rP h a r mD e s,2019,25(42):4536-4549.[4] Y a n g S,G u o S,T o n g S,e t a l.E x o s o m a l m i R-130a-3pr e g u l a t e s o s t e o g e n i c d i f f e r e n t i a t i o n o f H u m a n A d i p o s e-D e r i v e ds t e m c e l l st h r o u g h m e d i a t i n g S I R T7/W n t/β-c a t e n i na x i s e[J].C e l l P r o l i f,2020,53(10):e12890[5] K a l l u r iR,L e B l e u V S.T h eb i o l o g y,f u n c t i o n,a n db i o m e d i c a la p p l i c a t i o n so fe x o s o m e s[J].S c i e n c e,2020,367(6478):e a a u6977[6] Z h a n g Y,B iJ,H u a n g J,e ta l.E x o s o m e:A R e v i e w o fi t sc l a s s i f i c a t i o n,i s o l a t i o n t e c h n i q u e s,s t o r a g e,d i a g n o s t i c a n dt a r g e t e d t h e r a p y a p p l i c a t i o n s[J].I n tJ N a n o m e d i c i n e,2020,15:6917-6934.[7]S k o t l a n dT,H e s s v i k N P,S a n d v i g K,e ta l.E x o s o m a l l i p i dc o m p o s i t i o na nd t he r o l e of e t h e r l i p i d s a n d p h o s p h o i n o s i t i d e si ne x o s o m e b i o l o g y[J].JL i p i dR e s,2019,60(1):9-18.[8] L i B,C a oY,S u nM,e t a l.E x p r e s s i o n,r e g u l a t i o n,a n d f u n c t i o no f e x o s o m e-d e r i v e d m i R N A s i n c a n c e r p r o g r e s s i o n a n dt h e r a p y[J].F a s e bJ,2021,35(10):e21916.㊃299㊃河北医科大学学报第44卷第8期Copyright©博看网. All Rights Reserved.[9] K o s N,G r a d i s n i k L,V e l n a r T.A B r i e f r e v i e w o f t h ed e g e n e r a t i v e i n t e r v e r t e b r a l d i s c d i s e a s e[J].M e dA r c h,2019,73(6):421-424.[10] C a z z a n e l l i P,W u e r t z-K o z a k K.M i c r o R N A s i ni n t e r v e r t e b r a ld i s c de g e n e r a t i o n,a p o p t o s i s,i nf l a mm a t i o n,a n dm e c h a n o b i o l o g y[J].I n t JM o l S c i,2020,21(10):3601. [11] N a k a s e I,U e n o N,M a t s u z a w a M,e ta l.E n v i r o n m e n t a l p Hs t r e s s i n f l u e n c e s c e l l u l a r s e c r e t i o na n du p t a k e o f e x t r a c e l l u l a rv e s i c l e s[J].F e b sO p e nB i o,2021,11(3):753-767. [12] G o n z a l e z-N o l a s c oB,W a n g M,P r u n e v i e i l l eA,e t a l.E m e r g i n gr o l e o f e x o s o m e s i na l l o r e c o g n i t i o na n d a l l o g r a f t r e j e c t i o n[J].C u r rO p i nO r g a nT r a n s p l a n t,2018,23(1):22-27.[13] B e n i c h o uG,W a n g M,A h r e n sK,e t a l.E x t r a c e l l u l a rv e s i c l e si na l l o g r a f t r e j e c t i o na n dt o l e r a n c e[J].C e l l I mm u n o l,2020,349:104063.[14] H u a n g P,Y a n R,Z h a n g X,e ta l.A c t i v a t i n g W n t/β-c a t e n i ns i g n a l i n g p a t h w a y f o r d i s e a s e t h e r a p y:C h a l l e n g e s a n do p p o r t u n i t i e s[J].P h a r m a c o lT h e r,2019,196:79-90. [15] K a r n e rC M,L o n g F.W n t s i g n a l i n g a n d c e l l u l a rm e t a b o l i s mi no s t e o b l a s t s[J].C e l lM o l L i f eS c i,2017,74(9):1649-1657.[16] Z h a n g X,Z h u Y,Z h a n g C,e t a l.m i R-542-3p p r e v e n t so v a r i e c t o m y-i n d u c e do s t e o p o r o s i s i n r a t s v i a t a r g e t i n g S F R P1[J].JC e l l P h y s i o l,2018,233(9):6798-6806. [17] W uZ L,X i eQ Q,L i uT C,e t a l.R o l eo f t h e W n t p a t h w a y i nt h e f o r m a t i o n,d e v e l o p m e n t,a n d d e g e n e r a t i o n o fi n t e r v e r t e b r a l d i s c s[J].P a t h o lR e sP r a c t,2021,220:153366.[18] Z h a n g F,L i nF,X uZ,e ta l.C i r c u l a rR N AI T C H p r o m o t e se x t r a c e l l u l a rm a t r i xd e g r a d a t i o nv i aa c t i v a t i n g W n t/β-c a t e n i ns i g n a l i n g i n i n t e r v e r t e b r a l d i s c d e g e n e r a t i o n[J].A g i n g(A l b a n y N Y),2021,13(10):14185-14197.[19] L u K,L i H Y,Y a n g K,e t a l.E x o s o m e s a s p o t e n t i a la l t e r n a t i v e s t o s t e m c e l l t h e r a p y f o r i n t e r v e r t eb r a l d i s cd e g e n e r a t i o n:i n-v i t r o s t u d y o n e x o s o m e si ni n t e r a c t i o n o fn u c l e u s p u l p o s u sc e l l sa n db o n e m a r r o w m e s e n c h y m a l s t e mc e l l s[J].S t e m C e l lR e sT h e r,2017,8(1):108.[20] H o l g u i n N,S i l v a M J.I n-v i v o n u c l e u s p u l p o s u s-s p e c i f i cr e g u l a t i o no f a d u l tm u r i n e i n t e r v e r t e b r a l d i s c d e g e n e r a t i o n v i aW n t/B e t a-C a t e n i n s i g n a l i n g[J].S c i R e p,2018,8(1):11191.[21] G a o D,H a o L,Z h a o Z.L o n g n o n-c o d i n g R N A P A R T1p r o m o t e s i n t e r v e r t e b r a l d i s cd e g e n e r a t i o nt h r o u g hr e g u l a t i n gt h em i R93/MM P2p a t h w a y i nn u c l e u s p u l p o s u s c e l l s[J].I n tJM o lM e d,2020,46(1):289-299.[22] W a n g X,W a n g B,Z o uM,e t a l.C i r c S E MA4B t a r g e t sm i R-431m o d u l a t i n g I L-1β-i n d u c e d d e g r a d a t i v e c h a n g e s i n n u c l e u sp u l p o s u sc e l l si ni n t e r v e r t e b r a ld i s c d e g e n e r a t i o n v i a W n tp a t h w a y[J].B i o c h i m B i o p h y sA c t aM o l B a s i sD i s,2018,1864(11):3754-3768.[23] Z h a n g Q,S h e nY,Z h a oS,e t a l.E x o s o m e sm i R-15a p r o m o t e sn u c l e u s p u l p o s u s-m e s e n c h y m a l s t e m c e l l s c h o n d r o g e n i cd i f fe r e n t i a t i o nb y t a r g e t i n g MM P-3[J].C e l l S i g n a l,2021,86:110083.[24]S u n Z,L i u B,L i u Z H,e t a l.N o t o c h o r d a l-c e l l-d e r i v e de x o s o m e s i n d u c e d b y c o m p r e s s i v el o a di n h i b i ta n g i o g e n e s i sv i at h e m i R-140-5p/W n t/β-C a t e n i n A x i s[J].M o l T h e rN u c l e i cA c i d s,2020,22:1092-1106.[25] W a n g X,Z o u M,L i J,e t a l.L n c R N A H19t a r g e t sm i R-22t om o d u l a t eH2O2-i n d u c e dd e r e g u l a t i o n i nn u c l e u s p u l p o s u s c e l ls e n e s c e n c e,p r o l i f e r a t i o n,a n d E C M s y n t h e s i st h r o u g h W n ts i g n a l i n g[J].JC e l l B i o c h e m,2018,119(6):4990-5002.[26] L iH R,C u iQ,D o n g Z Y,e t a l.D o w n r e g u l a t i o no fm i R-27b i si n v o l v e di nl o s s o ft y p eⅡc o l l a g e n b y d i r e c t l y t a r g e t i n gm a t r i x m e t a l l o p r o t e i n a s e13(MM P13)i n h u m a ni n t e r v e r t e b r a l d i s cd e g e n e r a t i o n[J].S p i n e(P h i l aP a1976),2016,41(3):E116-123.[27]J i M L,Z h a n g X J,S h i P L,e t a l.D o w n r e g u l a t i o n o fm i c r o R N A-193a-3p i s i n v o l v e d i n i n v e r t e b r a l d i s cd e g e n e r a t i o nb y t a r g e t i n g MM P14[J].J M o l M e d(B e r l),2016,94(4):457-468.[28] L u oL,G o n g J,Z h a n g H,e t a l.C a r t i l a g ee n d p l a t es t e mc e l l st r a n s d i f f e r e n t i a t ei n t o n u c l e u s p u l p o s u sc e l l s v i a a u t o c r i n ee x o s o m e s[J].F r o n tC e l lD e vB i o l,2021,9:648201.[29] Z h a n g Q,S h e nY,Z h a oS,e t a l.E x o s o m e sm i R-15a p r o m o t e sn u c l e u s p u l p o s u s-m e s e n c h y m a l s t e m c e l l s c h o n d r o g e n i cd i f fe r e n t i a t i o nb y t a r g e t i n g MM P-3[J].C e l l S i g n a l,2021,86:110083.[30] Y u nZ,W a n g Y,F e n g W,e t a l.O v e r e x p r e s s i o n o fm i c r o R N A-185a l l e v i a t e s i n t e r v e r t e b r a l d i s c d e g e n e r a t i o n t h r o u g hi n a c t i v a t i o n o f t h e W n t/β-c a t e n i n s i g n a l i n g p a t h w a y a n dd o w n re g u l a t i o n of G a l e c t i n-3[J].M o l P a i n,2020,16:1744806920902559.[31] L i Z,S u n Y,H e M,e ta l.D i f f e r e n t i a l l y-e x p r e s s e d m R N A s,m i c r o R N A s a n d l o n g n o n c o d i n g R N A s i n i n t e r v e r t e b r a l d i s cd e g e n e r a t i o n i d e n t i f i e d b y R N A-s e q u e n c i n g[J].B i o e n g i n e e r e d,2021,12(1):1026-1039.[32] K w o n WK,M o o n H J,K w o n T H,e ta l.I n f l u e n c eo fr a b b i tn o t o c h o r d a l c e l l s o n s y m p t o m a t i c i n t e r v e r t e b r a l d i s cd e g e n e r a t i o n:a n t i-a n g i o g e n i cc a p a c i t y o n h u m a ne n d o t h e l i a lc e l l p r o l i f e r a t i o nu nde rh y p o x i a[J].O s t e o a r t h r i t i sC a r t i l a g e,2017,25(10):1738-1746.[33]S u n Z,Z h a o H,L i u B,e ta l.A F c e l ld e r i v e d e x o s o m e sr e g u l a t e e n d o t h e l i a l c e l l m i g r a t i o n a n d i n f l a mm a t i o n:I m p l i c a t i o n s f o r v a s c u l a r i z a t i o n i n i n t e r v e r t e b r a l d i s cd e g e n e r a t i o n[J].L i f eS c i,2021,265:118778.[34] O l e j a r z W,K u b i a k-T o m a s z e w s k a G,C h r z a n o w s k a A,e ta l.E x o s o m e si n a n g i o g e n e s i s a n d a n t i-a n g i o g e n i c t h e r a p y i nc a n c e r s[J].I n t JM o l S c i,2020,21(16):5840.[35]S u nJ,S h e n H,S h a o L,e ta l.H I F-1αo v e r e x p r e s s i o ni nm e s e n c h y m a l s t e m c e l l-d e r i v e d e x o s o m e s m e d i a t e sc a rd i o p r o te c t i o n i n m y o c a r d i a l i nf a r c t i o n b y e n h a n c e da n g i o g e n e s i s[J].S t e m C e l lR e sT h e r,2020,11(1):373.[36] L u a nX,S a n s a n a p h o n g p r i c h a K,M y e r sI,e ta l.E n g i n e e r i n ge x o s o m e s a s r ef i n e d b i o l og i c a l n a n o p l a t f o r m s f o r d r u gd e l i v e r y[J].A c t aP h a r m a c o l S i n,2017,38(6):754-763.[37] L u J,Z h a n g Y,L i a n g J,e ta l.R o l eo fe x o s o m a lm i c r o R N A sa n d t h e i r c r o s s t a l kw i t h o x i d a t i v e s t r e s s i n t h e p a t h o g e n e s i s o fo s t e o p o r o s i s[J].O x i dM e dC e l l L o n g e v,2021,2021:6301433.[38] L i M,L iS,D u C,e ta l.E x o s o m e sf r o m d i f f e r e n tc e l l s:c h a r a c t e r i s t i c s,m od i f i c a t i o n s,a n d t he r a p e u t i c a p p l i c a t i o n s[J].E u r JM e dC h e m,2020,207:112784.(本文编辑:刘斯静)金芳全等基于W n t信号通路探讨外泌体治疗椎间盘退变的机制Copyright©博看网. 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WISP3基因多态性与绝经后骨质疏松症的关联研究迟发性脊柱骨骺发育不良伴进行性骨关节病家系WISP3基因突变分
WISP3基因多态性与绝经后骨质疏松症的关联研究迟发性脊柱骨骺发育不良伴进行性骨关节病家系WISP3基因突变分析第一部分WISP3基因多态性与绝经后骨质疏松症的关联研究背景：骨质疏松症是多基因和环境因素共同作用的复杂疾病,遗传因素占60-90%。
WISP3基因编码Wntl诱导信号通路蛋白3,调控软骨及骨发育,可能是骨质疏松症的易感基因之一。
目的：探讨WISP3基因多态性与北京地区汉族人群绝经后骨质疏松症表型包括骨密度、脆性骨折及椎体骨折的关系。
方法：本研究对象源自PK-VF研究,系采用多级分层抽样的方法从北京地区随机抽样1570名汉族绝经后妇女,以双能X 线吸收仪检测腰椎、股骨颈和全髋骨密度,通过问卷调查确定脆性骨折表型,通过阅读胸腰椎X线片确定椎体骨折表型,使用TaqMan基因分型技术检测WISP3基因所有标签及功能区的8个单核苷酸多态性位点（SNP）,采用协方差分析、多元线性回归、二分类逻辑回归等统计学方法分析SNP位点基因型和单体型与骨质疏松表型的关系。
结果：1、WISP3基因rs1230345位点的多态性与腰椎骨密度显著关联,其少见等位基因纯合子（TT）是另两种基因型（GG及GT）携带者骨量减少及骨质疏松患病风险的1.554倍（OR=1.554,95%可信区间1.116-2.165,P=0.009）,同时TT基因型携带者股骨颈骨密度低于GG及GT基因型携带者（P值分别为0.028,0.027）。
2、WISP3基因rs4947163位点的多态性与椎体骨折关联,其少见等位基因纯合子比常见等位基因纯合子和杂合子的椎体骨折患病风险增加3.8倍（OR=4.833,95%可信区间1.002-22.85,P=0.047）。
3、WISP3基因rs9400518位点的多态性与椎体骨折关联,其少见等位基因纯合子和杂合子比常见等位基因纯合子的椎体骨折患病风险增加57%（OR=1.567,95%可信区间1.008-2.435,P=0.046）。
Wnt诱导分泌蛋白3对软骨细胞增殖分化的作用
Wnt诱导分泌蛋白3对软骨细胞增殖分化的作用黄佼;马丽珍;詹宇红;陈军【期刊名称】《医学研究杂志》【年(卷),期】2012(41)12【摘要】Objective To observe the effects of recombinant human WISP3 ( rhWISP3 ) on the proliferation and differentiation in human immortalized chondroeytes cell lines T/C -28a2. To investigate whether the effects is through the IGF - 1 signaling pathway. Methods T/C -28a2 cell lines were treated with various rhWISP3 concentrations with or without recombinant human IGF - 1 (rh IGF - 1 ) , and the proliferation of cell lines was determined by [3H] - Tdr incorpotation. The expression of collagen Ⅱ of chondroeytes treated by RhWISP3 was determined by Western blot. The cell lines were treated with an IGF - 1 signaling pathway inhibitor JB1 , and the expression of collagen Ⅱ of chondroeytes was determined by Western blot. Results RhWISP3 had no effect on the proliferation of T/C -28a2 cell lines. RhIGF - 1 promoted proliferation of cell lines significantly, and rhWISP3 also had no effect on the proliferation of cell lines treated with RhIGF - I. RhWISP3 increased the production of collagen Ⅱ in a dose dependent manner. RhIGF - 1 also had effect on production of collagen Ⅱ . JB1 inhibited the increasing expression of collagen Ⅱ treated with rh IGF - 1 ,but had no effect on increasing expressio n of collagen Ⅱ treated with rhWISP3. Conclusion RhWIS3 has no effect on the proliferation of T/C -28a2 cell lines,but increases the production of collagen I in a dose dependent manner,possibaly through IGF - 1 independent signaling.%目的研究重组人Wnt诱导分泌蛋白3(rhWISP3)对人永生化软骨细胞株T/C-28a2增殖和分化的作用,探讨其作用是否通过胰岛素样生长因子-1(IGF-1)信号通路发生.方法分别应用不同浓度rhWISP3干预T/C-28a2细胞株,用[3H]-脱氧胸腺嘧啶([3H]-TdR)摄入法测定细胞增殖活性.rhWISP3与重组人IGF-1蛋白(rh IGF-1)同时干预T/C-28a2细胞,[3H]-TdR摄入法测定细胞增殖活性.免疫印记法检测不同浓度rhWISP3干预的T/C-28a2细胞Ⅱ型胶原表达变化.用IGF-1信号通路阻断剂JB1干预细胞后,免疫印记法检测rhWISP3对T/C-28a2细胞Ⅱ型胶原表达的影响.结果 rhWISP3对软骨细胞增殖无明显影响.rh IGF-1明显促进T/C-28a2细胞增殖,rhWISP3对rh IGF-1促T/C-28a2细胞增殖作用无影响.rhWISP3明显促进软骨细胞Ⅱ型胶原的表达,呈浓度依赖性.rh IGF-1干预T/C-28a2细胞能明显促进软骨细胞Ⅱ型胶原的表达.IGF-1信号通路阻断剂JB1能阻断rh IGF-1促进软骨细胞Ⅱ型胶原的表达作用,不能阻断rhWISP3促进软骨细胞Ⅱ型胶原的表达作用.结论rhWISP3对T/C-28a2细胞增殖作用无明显影响,呈浓度依赖型促进Ⅱ型胶原的表达,这种促表达的作用可能是通过独立于IGF-1信号通路而产生.【总页数】4页(P110-113)【作者】黄佼;马丽珍;詹宇红;陈军【作者单位】310000 杭州市第一人民医院内分泌科;310000 杭州市第一人民医院内分泌科;310000 杭州市第一人民医院内分泌科;310000 杭州市第一人民医院内分泌科【正文语种】中文【相关文献】1.基于Wnt/β-catenin信号通路探讨透骨消痛胶囊含药血清对经TNF-α诱导的软骨细胞多靶点保护作用 [J], 隋利强;陈星强;陈春蓉;庄志强2.Wnt-1诱导分泌蛋白-1表达与乳腺癌预后的关系 [J], 欧阳倩雯;涂剑宏;吴晓波;曹亚丽;刘秋明;胡平华;瞿伟;雷秋模3.Wnt1诱导分泌蛋白-1通过NF-κB通路促进管鳞癌细胞的增殖和侵袭转移 [J], 凌锐;周玲;周月鹏;毛朝明;陈德玉4.Wnt-1诱导分泌蛋白2的表达与食管鳞癌患者临床病理参数及预后的相关性分析 [J], 迪丽努尔·阿合拜尔; 卡吾力·居买; 伊力亚尔·夏合丁5.Wnt-1诱导分泌蛋白2对胃癌细胞上皮间质转化的影响 [J], 任春梅; 许斌; 邹文蓉; 彭鹏; 文黎明因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
sting通路相关基因
sting通路相关基因Sting通路是一种重要的免疫反应通路，它可以识别并响应细胞内外的DNA和RNA，从而引发免疫反应。
Sting通路的激活可以促进炎症反应、细胞凋亡、自噬和抗病毒免疫等生物学过程。
在本文中，我们将讨论Sting通路相关基因的功能和作用。
1. Sting基因Sting基因是Sting通路的核心基因，它编码一种膜蛋白，被称为Sting蛋白。
Sting蛋白是一种跨膜蛋白，它位于内质网膜上，并且在细胞内外都有表达。
Sting 蛋白的主要功能是识别细胞内外的DNA和RNA，并将信号传递给下游的信号通路，从而引发免疫反应。
2. Tmem173基因Tmem173基因也被称为Sting1基因，它是Sting通路的另一个核心基因。
Tmem173基因编码的蛋白与Sting蛋白相似，也是一种跨膜蛋白，它与Sting 蛋白一起参与Sting通路的激活。
Tmem173基因的突变会导致Sting通路的异常激活，从而引发自身免疫疾病。
3. Ifih1基因Ifih1基因编码的蛋白被称为MDA5，它是一种能够识别细胞内RNA的受体。
MDA5与Sting蛋白相互作用，共同参与Sting通路的激活。
Ifih1基因的突变会导致MDA5的功能异常，从而影响Sting通路的激活和免疫反应的发生。
4. Tbk1基因Tbk1基因编码的蛋白是一种激酶，它与Sting蛋白和Ifih1蛋白相互作用，共同参与Sting通路的激活。
Tbk1蛋白的主要功能是磷酸化Sting蛋白和Ifih1蛋白，从而促进Sting通路的激活和免疫反应的发生。
Tbk1基因的突变会导致Tbk1蛋白的功能异常，从而影响Sting通路的激活和免疫反应的发生。
5. Irf3基因Irf3基因编码的蛋白是一种转录因子，它与Sting蛋白和Tbk1蛋白相互作用，共同参与Sting通路的激活。
Irf3蛋白的主要功能是转录免疫相关基因，从而促进炎症反应和抗病毒免疫的发生。
免疫和炎症相关信号通路
免疫与炎症相关信号通路一、Jak/Stat Signaling:IL-6 Receptor FamilyJak和Stat是许多调节细胞生长、分化、存活和病原体抵抗信号通路中的关键部分。
就有这样一个通路涉及到IL-6 （gp130）受体家族，它帮助调节B细胞的分化，浆细胞生成和急性期反应。
细胞因子结合引起受体的二聚化同时激活受体结合的Jak蛋白，活化的Jak蛋白对受体和自身进行磷酸化。
这些磷酸化的位点成为带有SH2结构的Stat蛋白和接头蛋白的结合位臵，接头蛋白将受体和MAP 激酶，PI3激酶/Akt还有其他的通路联系在一起。
受体结合的Stat蛋白被Jak磷酸化后形成二聚体，转移进入细胞核调节目的基因的表达。
细胞因子信号传导抑制分子（SOCS）家族的成员通过同源或异源的反馈减弱受体传递的信号。
Jak或Stat 参与其他受体蛋白的信号传导，在下面Jak/Stat使用表格中有这方面的列举。
研究人员已经发现Stat3和Stat5在一些实体肿瘤中被酪氨酸激酶而不是Jaks组成性激活。
JAK/STAT途径介导细胞因子的效应，如促红细胞生成素，血小板生成素，G-CSF,这些细胞因子分别是用于治疗贫血，血小板减少症和中性粒细胞减少症的蛋白质类药物。
该途径也通过干扰素介导信号通路，干扰素可以用来作为抗病毒和抗增殖剂。
研究人员发现，失调的细胞因子信号有助于癌症的发生。
异常的IL-6的信号或导致自身免疫性疾病，炎症，癌症，如前列腺癌和多发性骨髓瘤的发生。
Jak 抑制剂目前正在多发性骨髓瘤模型中进行测试。
Stat3具有潜在促癌性（原癌基因），在许多癌症中持续的表达。
在一些癌细胞中，细胞因子信号传导和表皮生长因子受体（EGFR）家族成员之间存在交流。
Jak激活突变是恶性血液病中主要的分子机制。
研究人员已经在Jak2假激酶域中发现一个特有的体细胞突变（V617F），这个突变常常发生于真性红细胞增多症，原发性血小板增多症和骨髓纤维化症患者。
软骨细胞中内质网应激信号通路的研究进展
软骨细胞中内质网应激信号通路的研究进展闻娟;李煌【期刊名称】《国际口腔医学杂志》【年(卷),期】2012(39)6【摘要】10.3969/j.issn.1673-5749.2012.06.015% 内外环境多种刺激均可导致内质网中未折叠蛋白的积聚，引起细胞内的应激反应，改变细胞的功能和存活状态，这个过程称为内质网应激(ERS).软骨细胞是关节软骨内唯一的细胞成分，低糖性损伤、白细胞介素-1β和一氧化氮以及一些药物均能使其发生ERS. ERS可引发蛋白激酶R样内质网调节激酶(PERK)、肌醇需酶(IRE)1和活化转录因子(ATF)6三条主要的信号通路构成未折叠的蛋白反应(UPR). UPR中多种信号分子对软骨细胞的生长、程序性死亡以及软骨的炎症都有重要的影响，本文就ERS信号通路机制、 PERK信号通路、 IRE1信号通路和ATF6信号通路等研究进展作一综述.【总页数】5页(P756-759,765)【作者】闻娟;李煌【作者单位】南京大学医学院附属南京市口腔医院正畸科南京 210093;南京大学医学院附属南京市口腔医院正畸科南京 210093【正文语种】中文【中图分类】Q51【相关文献】1.内质网应激中GRP78和ATF4-CHOP-Puma信号通路与帕金森病的关系及其治疗靶点的研究进展 [J], 王琪;段冷昕;2.内质网应激中GRP78和ATF4-CHOP-Puma信号通路与帕金森病的关系及其治疗靶点的研究进展 [J], 王琪;段冷昕3.内质网应激反应IRE1α信号通路与细胞衰老在癌症中的作用及关系的研究进展[J], 郭茜晨;张婷婷;王润新;赵法明;盛夏4.内质网应激反应IRE1α信号通路与细胞衰老在癌症中的作用及关系的研究进展[J], 郭茜晨;张婷婷;王润新;赵法明;盛夏5.内质网应激与mTOR信号通路在消化系统肿瘤中的研究进展 [J], 吴晓曼;李明因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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硕士学位论文第二章结果
第二章结果
一、ＲｈＷＩＳＰ３减少ＩＧＦ－ｌ诱导的Ｔ脚ａ２细胞ｌＧ卜ＩＲ、ＩＲＳ－１和Ｅ涨活化
在４００ｎｇ／ｍｌｒｈＷＩＳＰ３蛋白干预下，Ｔ／Ｃ－２８ａ２细胞ＩＧＦ－ＩＲ和ＩＲＳ一１磷酸化减弱（图１），提示ＷＩＳＰ３蛋白能抑制ＩＧＦ—Ｉ诱导的Ｔ／Ｃ－２８ａ２细胞１６Ｆ—ＩＲ和ＩＲＳ一１活化。
ｌｌｈＩＧＦ—Ｉ对Ｅ腿ｌ／２磷酸化的作用在ｒｈｌ６Ｆ—Ｉ刺激５ｍｉｎ后起效，刺激４５ｍｉｎ后达最强。
４００ｌＩｇ／ｍｌＷＩＳＰ３能抑制ｒｈＩＧＦ－Ｉ刺激Ｏ－４５ｍｉｎ后ＥＲＫｌ／２磷酸化水平，但对Ａｋｔ的磷酸化无影响（图２），表明ＷＩＳＰ３蛋白能抑制Ｔ／ｃ－２８ａ２细胞中ＩＧＦ－Ｉ所诱导的ＥＰ，Ｋ活化。
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硕士学位论文第二章结果
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Ｉｄ图２ＲｈＷＩＳＰ３减少ＩＧＦ－Ｉ诱导的ＴｉＣ一２８ａ２细胞ＥＲＫ活化
注：将Ｔ／Ｃ－２８ａ２细胞以４００ｎｇ／ｍｌｒｈＷＩＳＰ３干预２４ｈ前后，以２０ｎｇ／ｍｌＩＧＦ－Ｉ刺激５－４５ｍｉｎ．以免疫印记法检测ＥＲ［１／２和Ａｋｔ磷酸水平．以磷酸化／总蛋白水平比值表示ＥＲＫｌ／２活化率．・与对照组相比，Ｐ＜０．０５．
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二、稳定转染野生型／突变型ＷＩＳＰ３的Ｃ２０／Ａ４细胞转染效率鉴定
以空白载体／ｐｃＤＮＡ３．１（＋），ＷＴ－ＷｌＳＰ３／ｐｃＤＮＡ３．１（＋）。
硼俨＂／ｐｃＤＮＡ３．１（＋）和ＭＵＴ…呵ｐｃＤＮＡ３．１（＋）稳定转染Ｃ２０／Ａ４细胞．免疫印记法表明ＷＴ－ＷＩＳＰ３／ｐｃＤＮＡ３．１（＋）、硼Ｔｌ””，ｃ／ｐｃＤＮＡ３，１（＋）和蜘Ｐ…Ｔ／ｐｃＤＮＡ３．Ｉ（＋）转染组ＷＩＳＰ３过表达，稳定转染空白载体／ｐｃＤＮＡ３．Ｉ（＋）组ＷＩＳＰ３微量表达（图３），表明转染效率稳定。
图３：稳定转染野生型／突变型ＷＩＳＰ３的Ｃ２０／Ａ４细胞转粢效率鉴定．
注：以免疫印记法检测稳定转染野生型／突变型ＷＩＳＰ３的Ｃ２０１Ａ４细胞－１ＳＰ３的表达水平．１：裁体；２：ＷＴ－－ＩＩＳＰ３／裁体；３：删Ｔ－－ＩｓＰ３“Ｉｔ／裁体；４：Ｍｍ，ＩｓＰ３ｌ””，栽体
・与对照组相比，Ｐ＜ｏ．０５．
三、ＷＩＳＰ３稳定转染抑制Ｃ２０／Ａ４细胞ＩＧＦ－ＩＲ、ｌＲｓ－１和ＥＲＫ活化
为检测野生型及突变型ＷＩＳＰ３基因对人软骨细胞ＩＧＦ－ＩＲ和ＩＲＳ一１活化的差别，以免疫沉淀法测定转染ＷＴ－ＷＩＳＰ３及ＭＵＴ－ＷＩＳＰ３的ｃ２０／Ａ４细胞ＩＧＦ—ＩＲ和ＩＲＳ－Ｉ磷酸化水平。
与空自载体组相比，ＷＴ－ＷＩＳＰ３／ｐｃＤＮＡ３．Ｉ（＋）转染组ＩＧＦ－ＩＲ和ＩＲＳ－Ｉ活化水平降低，删ｒ“＇１。
／ｐｃＤＮＡ３．Ｉ（＋）和ＭＵＴｌ””，Ｉ，ｃＤＮＡ３．１（＋）转染组活化水平增强（图４Ａ）。
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固４Ａ：ＷＩＳＰ３稳定转橐抑制Ｃ２０／Ａ４细胞ＩＧＦ－Ｈｔ和ＩＲ￥－Ｉ活化注：以免疫沉淀法检测稳定转染野生型／突变型ＷＩＳＰ３的Ｃ２０／Ａ４细胞ＩＧＦ－ＩＲ和ＩＲＳ一１活化水乎．以磷酸化／总蛋白水平比值表示ＩＧＦ－ＩＲ和ＩＲＳ－１活化率．１：空白我体；２：ＷＴ－ＷＩＳＰ３／栽体；３：删Ｔ－－ＩｓＰ３‘”１ｔ，裁体；４：ＭＵＴ－ＷＺＳＰ３１。
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化率
硕士学位论文第二章结果
为检测野生型及突变型ＷＩＳＰ３基因对人软骨细胞ＥＲＫ活化的差别，以免疫印记法测定转染ＷＴ－ＷＩＳＰ３及ＭＵＴ－ＷＩＳＰ３的Ｃ２０／Ａ４细胞Ｅ照ｌ／２磷酸化水平。
免疫印记法显示，与空白载体组相比，ｒｒ－ｗｉｓＰ３／ｐｃＤＮＡ３。
１（＋）转染组ＥＲＫｌ／２磷酸化水平降低，而抓胪”“＇／ｐｃＤＮＡ３．１（＋）和ＭＵＴｌ”■ｐｅＤＮＡ３．１（＋）转染组Ｅｌｌｌ【ｌ／２磷酸化水平增高，ＷＳＩＰ３转染对Ａｋｔ磷酸化水平无影响（图４Ｂ）。
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圈４Ｂ，ＷＩＳＰ３稳定转染抑制ｃ２０／Ａ４细胞ＥＲＫｌ／２活化
注：以免疫印记法检测稳定转染野生型／突变型ＷＩＳＰ３的Ｃ２０／Ａ４细胞ＥＲＫＩ／２和Ａｋｔ磷酸化水平．以磷酸化／总蛋白水平比值表示ＥＲＫ活化水平．１：裁ｈ－；２：ｈｆｌ／Ｔ－ＷＩＳＰ３１４４。
ｍｌＴ／载体；３：ｇＵＴ－ＷＩＳＰ３１。
”／裁体；４：ｌｒｒ－－ｉｓＰ３／栽体
＊－ｂ对照组相比，Ｐ＜Ｏ．０５．
以上结果表明在ｃ２０／Ａ４细胞中，野生型ＷＩＳＰ３基因能抑制ＩＧＦ—ＩＲ及下游ＩＲＳ一１和ＥＲＫ激酶磷酸化水平，突变型ＷＩＳＰ３基因能促进ＩＧＦ－ＩＲ及下游ＩＲＳ－１和ＥＲＫ激酶磷酸化水平．
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活化率。