家畜类腔前卵泡的体外分离方法和培养体系研究进展

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农 业 生 物 技 术 学 报
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用， 造成了卵巢生殖资源的极大浪费。 目前仅有小鼠原始卵泡经体外培养后，其卵母 细胞成熟、 受精、 并获得后代的报道 ； 家畜类（主要
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时期的卵母细胞不但体积增大，质量也获得了显著 增加，主要表现在蛋白含量的增加和卵母细胞在成 熟、受精及植入前胚胎发育过程中所需物质的储备 增加，但这时的卵母细胞还不具备重新启动减数分 裂的能力， 与减数分裂相关的因子和 +,- 的成分还 在合成中$9"%。 随着卵泡的进一步发育， 卵泡内出现了腔隙， 称 为卵泡腔， 这时的卵泡称为有腔卵泡。 在有腔卵泡发 育期， 卵母细胞顺序性地获得了减数分裂启动、 完成 第一次减数分裂和完成第二次减数分裂的能力， 这 一结果是以卵母细胞的生长为基础的，如：直径在
农业生物技术学报
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・ 综述 ・
家畜类腔前卵泡的体外分离方法和培养体系研究进展 .
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刘瑞华 $’’’’ 李 明 $)%’’’’ 焦丽红 $’’’’ 郑 行 %’’’’ 王 红 $.’.
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9""*! ! 的猪和牛的卵母细胞可以启动减数分裂但 不能完成第一次减数分裂，而直径在 99"! : 的牛 卵母细胞和 99;! : 的猪பைடு நூலகம்母细胞均能完成第一次 $99<* 减数分裂， 停滞在第二次减数分裂的中期（+" ）
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。来自于小的有腔卵泡的卵母细胞虽然能完成核
但其受精 成熟（如排出第一极体）而 进 入 + " 期 ， 率较低， 而且很难发育到囊胚期； 而大的有腔卵泡的 卵母细胞其受精率和囊胚发育率则显著增加。卵母 细胞在各阶段的发育能力与卵母细胞和卵泡的大小 直接相关$9!%。
! 基金项目 ! 国家杰出青年基金项目（"#$%&##’( 和中国科学院知识创新工程资助。
刘瑞华 !’ 女 )’*+,* 年生 )- 博士研究生。
.. 通讯作者。 /01234-534-63447893:;7:67<’=>?@AB!-CD@:E2F-9@:;@<A3G<@6<6:H<------ 收稿日期： %I#%>#">%J----- 接受日期： %II%>*%>%&
卵泡的体外培养还处于研究的早期阶段。本文就哺 乳动物卵泡在体内的生长、发育情况和目前技术条 件下体外分离和培养家畜类腔前卵泡的方法进行综 述。
发育 " ****家畜类腔前卵泡的体外分离、
腔前卵泡期卵母细胞的培养体系因实验目的的 不同分为两种： 一是完整卵泡的培养， 观察单个卵泡 的发育特征；二是从腔前卵泡分离卵母细胞 1 颗粒 细胞复合体的培养， 目的是研究卵母细胞的生长、 发 育机制。 目前， 啮齿类腔前卵泡期卵母细胞的体外生 长体系较为成功，不论是卵母细胞 1 颗粒细胞复合 体还是完整卵泡的培养，卵母细胞均能完成两次减 数分裂， 并经体外受精获得后代 $#<*9!%， 家畜类腔前卵 泡期卵母细胞的体外发育体系还处于建立的早期阶 段， 主要是完整的腔前卵泡的体外培养。 卵泡的培养 不但可以使卵泡细胞或卵母细胞分泌的许多对卵母 细胞生长、分化起重要作用的因子在卵泡液中积聚 至较高浓度并发挥作用，而且完整的卵泡结构保证 了卵母细胞、颗粒细胞和卵泡内膜细胞之间的信息 交流和物质交换。 不足之处是必须从结缔组织丰富、 质地较韧的家畜卵巢分离完整卵泡。 家畜类腔前卵泡的体外分离 "# !$$$$ 卵泡分离的成功与否直接影响其体外发育。
（ $’ 中国科学院动物研究所计划生育生殖生物学国家重点实验室， 北京 $IIIOI ； %’ 中国农业大学生物学院，北京 $III+P ）
摘要：在哺乳动物体内， 启动卵泡生长的机制还不完全清楚， 卵泡的体外培养遇到较大困难； 由于不同物种卵泡的成熟时 间和调节机理有较大差异， 因此它们的体外培养技术还不能通用。在过去的几年， 不同动物的卵泡体外培养体系的建立均有一 定程度的发展， 而且对卵泡的发育过程也有了很好地了解， 但是获得高质量的成熟卵母细胞还有相当的距离。在目前的技术条 件下， 啮齿类的腔前卵泡已能经体外培养发育至有腔卵泡期， 而且从有腔卵泡分离的卵母细胞经体外成熟、 体外受精后已能产 生新的个体。但家畜类腔前卵泡的体外培养体系还处于早期研究阶段， 探讨早期卵泡的发育特征， 建立成功的体外分离方法和 培养体系是开发家畜类卵巢资源的基础。 关键词：腔前卵泡 Q’’ 体外分离 Q’’ 体外培养
发育 ! ****哺乳动物卵泡在体内的生长、
在胚胎期的卵巢内一旦生殖细胞停止有丝分 裂，即与周围的一小部分前颗粒细胞建立联系而形 成原始卵泡， 生殖细胞随之进入减数分裂期， 成为卵 母细胞。进入减数分裂的卵母细胞暂停在第一次分 裂前期的网线期，直到细胞内合成足够的减数分裂 启动因子 （+,-） 才重新启动减数分裂。 在新生卵巢 内， 形成了一个原始卵泡库， 它们的数量随动物种类 和年龄的不同而不同$.%。原始卵泡库一旦建立， 卵泡 便开始生长、 发育， 但是到目前为止启动卵泡生长、 发育的因素仍是卵巢生物学中令人困绕的难题。许 多分子 / 因子被认为是通过旁分泌或自分泌的方式 调节原始卵泡的发育， 如： 成视网膜细胞 01234 基因、 瘤蛋白以及一系列生长因子等， 但均缺乏确切证据， 而且也没有在哪一个变异的或转基因动物中观察到 只含有原始卵泡的卵巢。 随着卵泡的生长，卵母细胞以及卵泡内的其它 细胞也开始生长、 分化， 这时的卵泡称为腔前卵泡。 在腔前卵泡期， 卵母细胞体积增大， 颗粒细胞增殖形 成多层， 卵 泡 内 膜 细 胞（456078*0688 ）从 周 围 的 基 质 中分化出来， 这 # 种细胞共同构成了卵泡单位。 这一
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