基因工程实验教学教案
《基因工程》实验教学教案
《基因工程》实验教学教案一、实验教学目标1. 让学生了解基因工程的基本概念、原理和操作步骤。
2. 培养学生运用基因工程技术解决实际问题的能力。
3. 帮助学生掌握基因克隆、基因编辑等实验技能。
二、实验教学内容1. 基因克隆实验：让学生通过PCR扩增目的基因，并进行琼脂糖凝胶电泳分析。
2. 基因编辑实验：让学生利用CRISPR/Cas9系统对目标基因进行编辑，并通过PCR和琼脂糖凝胶电泳验证编辑效果。
3. 基因表达实验：让学生将目的基因插入到表达载体中，转化大肠杆菌，并通过IPTG诱导表达。
4. 抗原-抗体反应实验：让学生利用基因工程方法制备重组抗原，并进行抗原-抗体特异性反应检测。
5. 基因工程应用实例：让学生了解基因工程在生物制药、农业、环保等领域的应用。
三、实验教学方法1. 讲授法：讲解基因工程的基本原理、操作步骤和实验技巧。
2. 演示法：演示基因克隆、基因编辑等实验操作，让学生直观地了解实验过程。
3. 实践操作：让学生动手进行实验，培养实验操作能力和团队协作精神。
4. 讨论法：引导学生针对实验结果进行分析和讨论，提高解决问题的能力。
四、实验教学准备1. 教材和参考资料：准备《基因工程》等相关教材和参考资料，为学生提供理论支持。
2. 实验器材：准备PCR仪器、琼脂糖凝胶电泳设备、表达载体、大肠杆菌等实验所需的器材和试剂。
3. 实验指导：制定详细的实验步骤和操作指南，方便学生查阅。
五、实验教学评价1. 过程评价：评价学生在实验操作过程中的规范性和团队协作精神。
3. 应用评价：评价学生运用基因工程知识解决实际问题的能力。
4. 学生互评：鼓励学生互相评价，提高自我认知和沟通能力。
六、实验教学流程1. 实验前准备：讲解实验原理、目的和操作步骤，检查实验器材和试剂。
2. 实验操作：按照实验指导进行基因克隆、基因编辑等实验操作。
3. 实验结果分析：对实验结果进行分析和讨论，解释实验现象。
5. 实验总结：总结实验收获和不足，提出改进措施。
基因工程课程教学教案模板
课程名称：基因工程原理与技术课时安排：2课时教学目标：1. 理解基因工程的基本概念、原理和应用。
2. 掌握基因工程的基本操作技术，如基因克隆、基因表达等。
3. 了解基因工程在生物技术、医学、农业等领域的应用。
4. 培养学生的创新思维和实践能力。
教学重点：1. 基因工程的基本原理和操作技术。
2. 基因工程的应用领域。
教学难点：1. 基因工程操作过程中的实验设计和数据分析。
2. 基因工程伦理问题的探讨。
教学准备：1. 多媒体课件2. 实验器材：DNA提取试剂盒、PCR仪、电泳仪、凝胶成像系统等3. 实验材料：大肠杆菌、质粒、DNA模板等教学过程：一、导入1. 引入话题：介绍基因工程的定义和重要性。
2. 提出问题：什么是基因工程？基因工程有哪些应用？二、讲授新课1. 基因工程的基本概念和原理- 介绍基因工程的基本概念，如基因、基因克隆、基因表达等。
- 讲解基因工程的原理，包括DNA重组技术、基因转移技术等。
2. 基因工程的操作技术- 讲解基因工程的基本操作技术，如DNA提取、PCR扩增、酶切连接、转化等。
- 通过多媒体课件展示实验操作步骤和注意事项。
3. 基因工程的应用领域- 介绍基因工程在生物技术、医学、农业等领域的应用实例。
- 分析基因工程应用的优势和挑战。
三、实验操作1. DNA提取实验- 实验目的：学习DNA提取的基本原理和操作步骤。
- 实验步骤：提取大肠杆菌DNA，进行电泳分析。
- 实验结果分析：观察DNA条带，分析提取效果。
2. PCR扩增实验- 实验目的：学习PCR扩增的基本原理和操作步骤。
- 实验步骤：设计引物，进行PCR扩增，电泳分析。
- 实验结果分析：观察PCR产物条带，分析扩增效果。
四、课堂讨论1. 伦理问题：讨论基因工程伦理问题，如基因编辑、基因治疗等。
2. 应用前景：探讨基因工程在未来的应用前景。
五、总结1. 回顾本节课的重点内容，如基因工程的基本概念、操作技术和应用领域。
基因工程教案
基因工程教案基因工程教案一、教学目标：1. 了解基因工程的基本概念和发展历程；2. 了解基因工程在农业、医学、环境等领域的应用；3. 学习基因工程的基本原理和技术；4. 培养学生的科学研究和实践能力。
二、教学重点：1. 基因工程的基本概念和发展历程；2. 基因工程在农业、医学、环境等领域的应用；3. 基因工程的基本原理和技术。
三、教学难点：1. 基因工程的基本原理和技术；2. 基因工程在农业、医学、环境等领域的应用。
四、教学方法：1. 教师讲授相结合的教学方法；2. 实验操作和实践活动相结合的教学方法；3. 讨论和小组合作学习的教学方法。
五、教学过程：1. 创设情境：教师先引导学生回顾遗传学的相关知识，如基因的定义、结构和功能，然后通过引入基因工程的概念，告诉学生基因工程是一种技术手段，通过改变生物体的基因组成来达到改变其性状的目的。
2. 概念讲解：教师通过投影仪或幻灯片，讲解基因工程的基本概念和发展历程，让学生了解基因工程的研究历史和重要里程碑。
3. 应用探究：教师将基因工程在农业、医学、环境等领域的应用案例呈现给学生，引导学生进行讨论和思考，了解基因工程的实际应用和其对人类和社会的影响。
4. 实验操作：教师组织学生进行基因工程实验操作，如基因转导、PCR、酶切等实验操作，让学生亲自体验基因工程的基本原理和技术。
5. 实践活动：教师组织学生进行基因工程相关的实践活动，如基因改造植物的种植、基因检测和诊断等活动，培养学生的科学研究和实践能力。
6. 总结回顾：教师引导学生对基因工程学习进行总结回顾，梳理所学内容，并对基因工程的前景和问题进行探讨。
六、教学评价：1. 观察学生对基因工程的理解和应用的能力；2. 对学生进行实验和实践活动的评价；3. 考试、作业和讨论等形式的评价。
七、教学资源：1. 教学投影仪或幻灯片；2. 基因工程实验器材和试剂；3. 基因工程相关的书籍和资料。
《基因工程的基本操作程序》教案
《基因工程的基本操作程序》教案一、教学目标1. 知识目标了解基因工程的概念及其应用领域。
掌握基因工程的基本操作程序和原理。
理解基因工程在生物技术和农业上的重要性。
2. 技能目标能够运用基因工程的原理和技术，设计和实施基因改造实验。
能够分析基因工程实验结果，并提出合理的解释和结论。
3. 情感目标培养对基因工程技术的兴趣和好奇心，提高对生物科学的热情。
培养学生的团队合作意识和批判性思维能力。
二、教学内容1. 基因工程概述介绍基因工程的概念和定义。
讨论基因工程在生物技术和农业上的应用领域。
2. 基因重组技术解释基因重组技术的原理和步骤。
介绍基因重组技术在基因工程中的应用实例。
3. 基因克隆与表达讲解基因克隆的概念和过程。
探讨基因表达的调控机制和表达水平的优化方法。
4. 基因编辑技术介绍基因编辑技术的原理和操作步骤。
探讨基因编辑技术在基因工程中的应用实例和前景。
5. 基因工程实验设计学习基因工程实验设计的基本原则和方法。
练习设计和实施基因改造实验。
三、教学方法1. 讲授法通过教师的讲解，引导学生掌握基因工程的基本概念和原理。
结合实例讲解基因工程技术的应用和实验设计方法。
2. 实验法安排基因工程实验课程，让学生亲手操作，实践基因改造技术。
引导学生分析实验结果，培养学生的实验操作和数据分析能力。
3. 小组讨论法分组让学生讨论基因工程技术的应用和实验设计问题。
培养学生的团队合作意识和批判性思维能力。
四、教学评价1. 课堂参与度观察学生在课堂上的发言和提问情况，评估学生的参与度。
2. 实验报告评估学生在基因工程实验中的操作技能和实验结果分析能力。
3. 小组讨论报告评估学生在小组讨论中的表现和提出的观点，包括团队合作意识和批判性思维能力。
4. 课后作业和测验布置相关基因工程主题的课后作业和测验，评估学生对知识点的掌握情况。
五、教学资源1. 教材和参考书选择适合基因工程课程的教材和参考书，为学生提供全面的学习资源。
基因工程教案大学
课程名称：生物技术授课对象：大学本科生课时： 2课时教学目标：1. 理解基因工程的基本原理和操作步骤。
2. 掌握基因工程在各个领域的应用。
3. 培养学生运用基因工程技术解决实际问题的能力。
教学内容：第一课时一、导入新课1. 介绍基因工程的定义和背景。
2. 提出问题：基因工程是如何改变生物性状的？二、基本原理1. 基因的概念：DNA、基因、遗传信息的载体。
2. 基因表达：转录、翻译。
3. 基因重组：目的基因的获取、基因表达载体的构建、目的基因的导入和表达。
三、操作步骤1. 目的基因的获取：PCR、限制酶、DNA合成等。
2. 基因表达载体的构建：载体选择、基因克隆、表达调控等。
3. 目的基因的导入：转化、转染、显微注射等。
4. 目的基因的表达和检测：报告基因、荧光标记、蛋白质检测等。
四、课堂讨论1. 举例说明基因工程在农业、医药、环保等领域的应用。
2. 讨论基因工程可能带来的伦理、安全等问题。
第二课时一、复习巩固1. 回顾基因工程的基本原理和操作步骤。
2. 回答上节课的课堂讨论问题。
二、案例分析1. 案例一：转基因抗虫棉的培育。
2. 案例二：基因治疗艾滋病。
3. 案例三：基因工程药物的生产。
三、总结与展望1. 总结基因工程在各个领域的应用及其意义。
2. 展望基因工程的发展前景。
教学手段：1. 多媒体课件：展示基因工程的原理、操作步骤、应用案例等。
2. 课堂讨论：引导学生积极参与，提高学生的思维能力和表达能力。
3. 案例分析：帮助学生理解基因工程在实际应用中的问题。
教学评价：1. 课堂参与度：观察学生的课堂表现，评价学生的积极性和参与度。
2. 课堂讨论：评价学生的思维能力和表达能力。
3. 案例分析：评价学生对基因工程应用的理解程度。
教学反思：1. 教师应根据学生的实际情况调整教学内容和教学方法。
2. 注重培养学生的创新思维和实际应用能力。
3. 关注基因工程在各个领域的最新进展，不断更新教学内容。
基因工程的基本操作程序教案
一、教案基本信息基因工程的基本操作程序教案课时安排：45分钟教学目标：1. 让学生了解基因工程的基本概念。
2. 使学生掌握基因工程的基本操作程序。
3. 培养学生对基因工程技术的兴趣和好奇心。
教学重点：1. 基因工程的基本概念。
2. 基因工程的基本操作程序。
教学难点：1. 基因工程的技术操作步骤。
2. 基因工程在实际应用中的意义。
二、教学过程1. 导入（5分钟）通过展示基因工程的图片或相关案例，引发学生对基因工程的兴趣，激发学生的探究欲望。
2. 基因工程的基本概念（5分钟）介绍基因工程的定义、原理和应用领域，帮助学生建立对基因工程的基本认识。
3. 基因工程的基本操作程序（15分钟）a. 目标基因的获取：介绍PCR技术、基因克隆等方法。
b. 基因载体的构建：介绍载体选择、目的基因插入、连接酶等。
c. 目标基因的表达与检测：介绍转化、表达、检测等方法。
d. 基因工程产品的应用：介绍基因工程在医药、农业等领域的应用。
4. 案例分析（5分钟）提供几个基因工程的实际案例，让学生分析案例中基因工程技术的应用，加深学生对基因工程操作程序的理解。
5. 总结与展望（5分钟）总结基因工程的基本操作程序，强调基因工程技术在现代生物科学中的重要性，并展望其在未来的发展前景。
三、教学方法1. 讲授法：讲解基因工程的基本概念、基本操作程序等内容。
2. 案例分析法：分析实际案例，让学生更好地理解基因工程技术的应用。
3. 互动教学法：引导学生提问、讨论，提高学生的参与度和积极性。
四、教学评价1. 课堂问答：检查学生对基因工程基本概念的理解。
2. 小组讨论：评估学生在案例分析中的表现，检验学生对基因工程操作程序的掌握程度。
3. 课后作业：布置相关题目，巩固学生对基因工程知识的学习。
五、教学资源1. 课件：展示基因工程的基本概念、操作程序等内容。
2. 案例资料：提供基因工程实际案例，供学生分析。
3. 参考书籍：推荐相关书籍，供学生进一步学习。
基因工程生物教案模板范文
---一、教学目标1. 知识目标：- 理解基因工程的基本原理，包括DNA重组技术。
- 掌握基因工程的基本操作步骤和工具。
- 了解基因工程在农业、医学和工业等领域的应用。
2. 能力目标：- 通过实验操作，培养学生的动手能力和实验设计能力。
- 培养学生分析问题和解决问题的能力。
3. 情感目标：- 激发学生对生物科学的兴趣和探索精神。
- 增强学生对科学技术应用的认识和责任感。
---二、教学重难点1. 重点：- 基因工程的基本原理和操作步骤。
- 基因工程在各个领域的应用。
2. 难点：- DNA重组技术的操作细节。
- 基因工程的安全性评估。
---三、教学过程（一）导入新课1. 展示一些转基因生物的图片，如转基因作物、转基因动物等，激发学生的兴趣。
2. 提问：这些转基因生物是如何产生的？引出基因工程的概念。
（二）新课讲授1. 基因工程的基本原理：- 介绍DNA重组技术的基本概念和原理。
- 讲解限制酶、DNA连接酶等工具酶的作用。
- 通过动画或模型演示DNA重组的过程。
2. 基因工程的操作步骤：- 提取目的基因。
- 制备运载体。
- 将目的基因导入受体细胞。
- 选择和鉴定重组细胞。
3. 基因工程的应用：- 农业领域：转基因抗虫、抗病作物。
- 医学领域：基因治疗、基因疫苗。
- 工业领域：生产药物、生物制品。
（三）课堂活动1. 小组讨论：针对某一具体案例，如转基因抗虫棉，讨论其优点和潜在风险。
2. 实验操作：进行DNA重组实验，让学生亲身体验基因工程的操作过程。
（四）课堂小结1. 回顾本节课的主要内容，强调基因工程的基本原理和应用。
2. 强调基因工程的安全性，提醒学生关注科学技术发展的伦理问题。
---四、教学评价1. 课堂表现：观察学生的参与度和讨论积极性。
2. 实验操作：评估学生的实验技能和实验报告的质量。
3. 课后作业：布置与基因工程相关的拓展阅读或实验设计作业。
---五、教学反思本节课通过理论讲解、实验操作和课堂讨论等多种方式，帮助学生全面了解基因工程的基本原理和应用。
基因工程教案
基因工程教案一、教学目标通过本节课的学习，学生应该能够：1. 理解基因工程的概念和基本原理；2. 掌握常见的基因工程技术方法；3. 了解基因工程在生物医学、农业和环境保护等领域的应用；4. 培养学生的科学研究能力和创新意识。
二、教学重点1. 基因工程的基本概念和原理；2. 常见的基因工程技术方法；3. 基因工程在不同领域的应用。
三、教学内容- 导入通过引入一个生物医学领域的实际案例或图像，激发学生对基因工程的兴趣，并引发思考。
- 基因工程的概念和原理1. 概念解释：基因工程是指通过改变生物体的遗传物质，使其具有新的性状或功能的一项技术；2. 基本原理：基因工程通过分离、修饰和重组DNA，将特定基因导入到目标生物体中，从而改变其遗传性状；3. DNA的结构和功能：简要回顾DNA的结构，介绍其携带遗传信息和编码蛋白质等功能。
- 基因工程技术方法1. DNA的分离与扩增：介绍聚合酶链式反应（PCR）技术和其在基因工程中的应用；2. 基因的克隆：介绍构建基因文库、DNA序列比对等方法；3. 重组DNA技术：介绍限制性内切酶和DNA连接酶的作用，以及重组DNA的构建方法；4. 基因转导技术：简要介绍转化、转染和病毒载体等基因转导方法。
- 基因工程的应用1. 生物医学应用：介绍基因治疗、基因诊断和药物生产等在医学领域的应用；2. 农业应用：介绍转基因作物的育种和抗病虫害能力等农业应用；3. 环境应用：介绍基因工程在清洁能源生产、生态修复和环境监测等方面的应用。
- 综合案例分析通过一个综合案例分析的形式，让学生综合运用所学知识，提出自己的想法和解决方案。
四、教学方法1. 探究式教学：引导学生通过实际案例分析和讨论，主动探索基因工程的概念和原理；2. 合作学习：组织学生进行小组讨论，共同解决综合案例分析中的问题；3. 多媒体辅助教学：使用多媒体课件、实验视频等辅助教学资料，增强学生的学习兴趣和理解能力。
五、教学评价1. 学生小组讨论的表现，包括对基因工程概念和技术方法的理解和应用能力；2. 综合案例分析的问题解决能力和创新思维；3. 课堂参与度，包括提问和回答问题的积极性。
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基因工程实验教学方案湖南人文科技学院生命科学系生物技术教研室实验一重组质粒的提取及转化表达型菌株Ⅰ质粒DNA的提取实验目的通过本实验学习和掌握碱裂解法提取质粒的技术与方法。
实验原理1．碱变性法基本原理是，在Ph12.0-12.6碱性环境中，线性的大分子量细菌染色体DNA变性，而共价闭环质粒DNA仍为自然状态。
将PH调至中性并有高盐浓度存在的条件下，染色体DNA之间交联形成不溶性网状结构大部分DNA和蛋白质在去污剂SDS的作用下形成沉淀，而质粒DNA仍为可溶状态，通过离心可除去大部分细胞碎片，染色体DNA，RNA及蛋白质，质粒DNA尚在上清中，再用酚氯仿或硅基质膜柱子进一步纯化DNA。
2．设计构建体外重组DNA分子构建体外重组DNA分子，首先要了解目的基因的酶切图谱。
选用的限制性内切酶不能在目的基因内部有识别位点，也就是说用一种或两种限制性内切酶就能切割得到完整的外源DNA基因。
构建体外重组DNA分子，最简单的重组方式就是在目的基因DNA的两端用两种不同的限制性内切酶进行酶解，产生两个不同的粘性末端。
再用这两种限制性内切酶去选择合适的载体进行酶切，也产生这两个不同的粘性末端，这样构建的重组DNA分子，目的基因DNA片段是从一个方向插入质粒载体中的，重组的效率高，也易于筛选处重组子。
附表达载体pGEX-6P-1-mreB的构建图：仪器材料与试剂（一）仪器1．恒温摇床2．台式离心机3．漩涡混合仪（二）材料与试剂1．含pGEX-6P-1-mreB质粒的大肠杆菌DH5α2．含pGEX-6P-1质粒的大肠杆菌DH5α3．液体LB培养基4．100mg/mL氨苄青霉素Amp5．新捷质粒提取试剂盒实验步骤分为两组：一组提取质粒pGEX-6P-1-mreB，另一组提取质粒pGEX-6P-1。
1）12000rmp 离心30秒收集1-5ml过夜培养的细菌，弃尽培养基。
加入250ul 已加入Rnase A的BufferⅠ, 充分悬浮细菌沉淀。
2）加入250ul BufferⅡ, 温和并充分地翻转离心管4-6次。
3）加入350ul Buffer Ⅲ,温和并充分地翻转离心管4-6次。
4）13000 rmp 离心10分钟。
5）将核酸纯化柱置于2ml 离心管中，转移步骤4中的上清液到核酸纯化柱中，盖上管盖，12000rmp离心30秒。
6）弃2ml 离心管中的滤液，将核酸纯化柱置回到2ml离心管中，在核酸纯化柱中加入700ul Buffer W2,盖上管盖，12000rmp离心30秒。
7）弃2ml离心管中的滤液，将核酸纯化住置回到2ml离心管中，14000 rmp离心1分钟。
8）弃2ml离心管，将核酸纯化住置于一个洁净的1.5ml离心管中，在纯化柱的膜中央加入50-100ul Buffer TE ,盖上管盖，室温静置1分钟，12000rmp离心30秒。
9）弃纯化柱，洗脱的质粒可立即用于各种生物学实验，或储存于-20℃。
实验结果实验安排3个小时Ⅱ质粒DNA的转化实验目的通过本实验，掌握大肠杆菌转化的方法与技术。
实验原理细菌处于容易吸收外源DNA的状态称感受态。
转化是指质粒DNA或以其为载体构低渗溶液中，菌细建的重组子导入细菌的过程。
其原理是细菌处于0℃、CaCl2胞膨胀成球形。
转化混合物中的DNA形成抗DNA酶的羟基-钙磷酸DNA复合物粘附于细胞表面，经42℃短时间热击处理，促进细胞吸收DNA复合物。
将细胞放置在非选择性培养基中保温一段时间，促使在转化过程中获得的新的表型（如Amp r等）得到表达，然后将此细胞培养物涂在选择性培养基上。
E.coli DH5α是一种用于质粒克隆的菌株。
E.coli BL21是一种适合于外源蛋白表达的菌株，其内源性的蛋白酶基因缺失。
仪器材料与试剂（一）仪器1.超净工作台2.恒温摇床3.制冰机4.高压灭菌锅(二) 材料与试剂1.大肠杆菌Bl21感受态细胞2.质粒DNA：pGEX-6P-1-mre B、pGEX-6P-1。
3．固体LB培养基平板（含Amp 120ug/ml）实验步骤分为两组：一组加入质粒pGEX-6P-1-mreB，另一组加入质粒pGEX-6P-1。
1.取100ul 新鲜制备的感受态细胞，加入质粒DNA 2ul混匀，冰上放置30min。
同时做一个对照管，仅加入100ul感受态细胞，不加质粒。
2.将管放到42℃热击90s。
3.冰浴2min。
4.每管加400ul LB 液体培养基，37℃培养1h(150r/min)5．将适当体积（200ul）的复苏细胞，涂布在含有氨苄青霉素的LB培养皿中，正置平皿30min。
6.倒置平皿37℃培养12-16h,出现菌落。
实验结果实验安排这整个大实验从质粒提取到转化需一天，第二天早晨观察结果。
实验二外源基因在大肠杆菌中的诱导表达和检测Ⅰ外源基因在大肠杆菌中的诱导表达实验目的通过本实验了解外源基因在原核细胞中表达的特点和方法。
实验原理将外源基因mreB克隆在含有Tac启动子的表达载体pGEX中，让其在E.coli中表达。
先让宿主菌生长，lacI产生的阻遏蛋白与lac操纵基因结合，从而不能进行外源基因的转录及表达，此时宿主菌正常生长。
然后向培养基中加入lac操纵子的诱导物IPTG（异丙基-β-D-硫代半乳糖苷），阻遏蛋白不能与操纵基因结合，则外源基因大量转录并高效表达。
表达蛋白可经SDS-PAGE进行检测，或做蛋白质印迹，用抗体识别表达蛋白。
Tac启动子：Tac启动子是一组由Lac和trp启动子人工构建的杂合启动子，受Lac阻遏蛋白的负调节，它的启动能力比Lac和trp都强。
其中Tac 1是由Trp启动子的－35区加上一个合成的46 bp DNA片段(包括Pribnow 盒)和Lac操纵基因构成，Tac 12是由Trp的启动子-35区和Lac启动子的-10区，加上Lac操纵子中的操纵基因部分和SD序列融合而成。
Tac启动子受IPTG的诱导。
仪器材料和试剂（一）仪器1.恒温摇床2.离心机3.超净工作台4.分光光度计（二）材料与试剂1.含pGEX-6P-1-mreB表达质粒的表达菌株E.coli BL21（DE3）plysS2. 含pGEX-6P-1表达质粒的表达菌株E.coli BL21（DE3）plysS2.液体LB培养基3.100mg/mL氨苄青霉素Amp4. 1mol/L IPTG实验步骤1.挑取一含有pGEX-6P-1-mreB表达质粒的单菌落到1.5mL含有100μg/mLAmp的液体LB培养基中，37度摇12小时。
2.挑取一含有pGEX-6P-1表达质粒的单菌落到1.5mL含有100μg/mLAmp的液体LB培养基中，37度摇12小时。
（这是不含目的基因仅含载体的对照）。
3.将培养的菌液1mL 接种于100mL含有100μg/mLAmp的液体LB培养基中，37度摇至A600 0.6-0.8。
4.向其中一瓶加入IPTG至终浓度0.4mmol/L ,另一瓶不加（对照），转至28度诱导过夜。
5.8000r/min 离心收集菌体细胞沉淀，四种类型分别做好标记，-20度保存。
注（四种类型分别为：pGEX-6P-1-mreB转化菌诱导，pGEX-6P-1-mreB转化菌未诱导，不含目的基因的pGEX-6P-1转化菌诱导，pGEX-6P-1转化菌未诱导。
）Ⅱ SDS-PAGE检测表达蛋白实验目的通过本实验了解和掌握SDS-PAGE检测蛋白的基本原理和操作。
实验原理SDS（十二烷基硫酸钠）是一种阴离子去污剂，在溶液中能与蛋白质分子的疏水部分定量结合，把大多数蛋白质拆成亚单位，并带上阴离子。
这些阴离子掩盖了蛋白质分子本身所带的电荷差异，所以SDS-PAGE消除了电荷效应，只有分子筛效应故蛋白质电泳迁移率完全取决于相对分子质量，迁移率与相对分子质量对数呈线性关系，在电场下，按相对分子质量大小在板状胶上排列。
仪器材料和试剂（一）仪器1.垂直板电泳槽及配套的玻璃板、封胶条、梳子2.恒压恒流电泳仪3.脱色摇床（二）材料与试剂PBS缓冲液2×LaemmLi样品缓冲液：100 mmol/L Tris-HCl（pH6.8），4%SDS，0.02%溴酚蓝，20%甘油，临用前加入100μL巯基乙醇到900μL上样液中。
30%丙烯酰胺储液：丙烯酰胺：甲叉双丙烯酰胺＝29：1 (W/W)，置于棕色瓶中于4℃，隔几月需重配。
分离胶缓冲液：1.5mol/L Tris-Cl pH8.8浓缩胶缓冲液：1mol/L Tris-Cl pH6.810%SDS(W/V)(十二烷基硫酸钠)10％APS（W/V）（过硫酸胺）：取0.1g APS定容至1mL，少量配制，隔周新配。
电泳缓冲液：3.03g Tris-base，14.4g Glycine，1g SDS，加蒸馏水至1L。
固定液：40％乙醇，10％乙酸Blue silver染色液：0.12％考马斯亮蓝G-250，10％（NH4）2SO4，10％H3PO4，20％甲醇。
实验步骤（1）把玻璃板放入制胶架上，架好胶板，用琼脂封底。
（2）按如下比例配好分离胶，混匀后立即加入到两玻璃板之间，到上口大于梳子插入的长度止，再加一层异丙醇，约30min等胶自然凝聚后倾斜倒出异丙醇，并用蒸馏水洗三次，倒干净蒸馏水。
混匀后立即加到分离胶上，在两玻璃板夹缝中水平插入1.5mm的梳子，用琼脂封住梳子两端。
聚合后，把玻璃板放入电泳槽中，装好电泳缓冲液后小心拔出梳子。
3．样品制备：样品与2×上样缓冲液1:1混匀（本实验Ⅰ的四种样品），并在100℃水浴中煮10min，取出待用。
4.丄样、电泳：将样品和标准蛋白分别加到样品孔中开始电泳，先恒压80V，样品进入分离胶后恒压120V，直至溴酚蓝走至前沿为止。
5．固定染色：电泳完毕，将胶板从电泳槽中取出，小心从玻璃板上取下凝胶，将凝胶在固定液中固定30min,用蒸馏水洗三次，每次10min,再将凝胶在染色液中染色2h。
实验结果实验安排第一天晚上挑菌落预培养第二天：诱导表达第三天：制胶，跑SDS-PAGE电泳检测。
实验三 Western 杂交实验目的通过本实验了解Western 杂交的方法和操作要点。
实验原理Western 杂交一般由：凝胶电泳；样品的印迹和固定化；各种灵敏的检测手段如抗原抗体反应等三大实验部分组成。
1.生物大分子凝胶电泳分离: Western 杂交的第一步一般是将蛋白质进行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）,使待测蛋白在电泳中按分子相对质量大小在板状胶上排列。
2.蛋白质样品的印迹和固定：第二步就是把凝胶电泳已分离的分子区带转移并固定到一种特殊的载体上，使之形成稳定的、经得起各种处理及容易检出，即容易和各自的特异性配体结合的固定化生物大分子。
现用的最多的载体材料是PVDF聚偏氟乙烯膜，它们和生物大分子是非共价结合的。