实验1 细菌的形态与结构
实验一：细菌基本形态与结构
操作原则：无菌操作（烧灼灭菌）
Aseptic area 10-20cm
外焰 内焰 焰芯
细菌涂片的制备
器具：接种环（上）和接种针（下）
2—5mm
柄约22cm
5—8cm
金属柄约14.5cm
绝缘柄 约7.5cm
安装环(针)的螺口(约8mm)
细菌涂片的制备
菌液采取法
三、实验器材
示教玻片、显微镜、擦镜纸、 香柏油、二甲苯
四、实验步骤
（一）普通光学显微镜 的使用
显微镜的构造 （1）支持部分：镜臂、镜筒、精细调节 （2）放大部分：接目镜、接物镜 （3）照明部分：反光镜、取光器、滤光
镜
（一）普通光学显微镜的使用
1、油镜的使用方法 （1）低倍镜观察 （2）光圈调最大 （3）标本上滴加香柏油0.5-1滴 （4）转换油镜头浸入油滴中
幽门螺杆菌
（三）细菌的特殊结构观察
芽胞示教片：破伤风梭菌。 鞭毛示教片：变形杆菌。 荚膜示教片：肺炎双球菌。
产芽芽孢胞细菌的种类
芽孢 菌体 （营养细胞）
破伤风梭菌×1000
鞭毛
变形杆菌鞭毛×1000
细菌荚膜示意图
荚膜的观察：
负染色
细菌标本染色检查法
细菌染色
活菌染色
死菌染色
（一）普通光学显微镜的使用
2、使用完毕显微镜及标本片的处理 （1）油镜用过后，应立即用擦镜纸
将镜头和玻片擦拭干净 （2）如油渍已干，须用擦镜纸蘸少
许二甲苯溶液拭去油渍，再用干擦镜 纸拭净镜头
油镜的使用与保护
1.原理 2.方法
（二）细菌的三种基本形态
球菌：双球菌、链球菌、葡萄球菌 杆菌：球杆菌、链杆菌、分支杆菌 螺形菌：霍乱弧菌、螺杆菌
实验一细菌形态和结构观察，涂片制作及染色法.pdf
实验一 细菌形态和结构观察，涂片制作及染色法 课程名称：兽医微生物学 实验学时： 2学时一、目的要求1．了解、熟悉油镜的使用和使用原理。
2．掌握细菌抹片的制备及美蓝和革兰氏染色方法。
3．能够识别革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的染色特征。
4．熟悉细菌的基本形态学特征和特殊构造。
二、知识背景细菌个体微小，无色透明，在一般显微镜下不易识别，必须用适当的染料使其着色后，才能看到其形态、排列和结构。
某些细菌因有特殊的染色性，更可借特殊的染色方法加以鉴别。
因此染色技术是细菌鉴定中的基本技术之一。
检查微生物标本，需要使用显微镜。
比较多用的是普通光学显微镜。
根据不同要求，可使用暗视野显微镜、相差显微镜、荧光显微镜和电子显微镜。
前几种显微镜用可见光线或紫外光线作照明光源，它们都属于光学显微镜；电子显微镜则是用电子流代替照明光源，与光学显微镜不同。
［普通光学显微镜的构造和使用］普通光学显微镜（或称生物显微镜）的构造，使用与保护方法，已在《组织学与胚胎学》教材中讲过，这里概述油镜的原理和使用要点：检查细菌标本，多用油镜进行，油镜是一种高倍放大（95-100倍）的物镜，一般都标有放大倍数（如95×；100×等）和特别标记，以便识别。
国产镜多用“油”字表示，国外产品则常用“Oil 或“HI”作记号。
油镜上还常漆有黑环或红环，而且油镜镜身比高倍镜和低倍镜长，镜片最小，这也是识别的另一个标志。
油镜头的晶片细小，进入镜中的光量也较少，其视野比用高倍镜时为暗。
当油镜头和载玻片之间为空气层所隔时，因为空气的折光指数与玻璃的不同，故有一部分光线被折射而不能进入镜头之内，使视野更暗；若在镜头与载玻片之间放上与玻璃的折光指数相似的油类，如香柏油等，使光线不致于因折射而大为损失，则可使视野充分照明，并能使操作者清楚地进行观察和检查（图l ）。
实验室中几种常用物质的折光指数 品名 玻璃 檀香油香柏油 加拿大树胶二甲苯 液体石蜡松节油甘油 水 折光指数 1.52-1.59 1.52 1.51 1.52 1.49 1.48 1.47 1.47 1.33进行油镜检查时，应先对好光线，但不可直对阳光，采取最强亮度（升高集光器，开大光圈，调好反光镜等）。
动物微生物2.1细菌的形态与结构
项目二细菌任务一细菌的形态结构一、细菌的形态结构（一）细菌细胞的形态和排列方式细菌细胞的基本形态有球状、杆状、螺旋状三种（图1-1），分别称为球菌、杆菌和螺旋菌，其中以杆状最为常见，球状次之，螺旋状较为少见。
仅有少数细菌或一些细菌在培养不正常时为其他形状，如丝状、三角形、方形、星形等。
图1-1 细菌的三种基本形态（左为模式图，右为照片）1. 球菌球菌单独存在时，细胞呈球形或近球形。
根据其繁殖时细胞分裂面的方向不同，以及分裂后菌体之间相互粘连的松紧程度和组合状态，可形成若干不同的排列方式（图1-2）。
A B C DE F图1-2 球菌的形态及排列方式（A.单球菌； B.双球菌； C.四联球菌； D.八叠球菌； E.链球菌； F 葡萄球菌）（1）单球菌细胞沿一个平面进行分裂，子细胞分散而独立存在，如尿素微球菌。
（2）双球菌细胞沿一个平面分裂，子细胞成双排列,如褐色固氮菌。
（3）四联球菌细胞按两个互相垂直的平面分裂，子细胞呈田字形排列,如四联微球菌。
（4）八叠球菌细胞按三个互相垂直的平面分裂，子细胞呈立方体排列,如尿素八叠球菌。
（5）链球菌细胞沿一个平面分裂，子细胞成链状排列,如溶血链球菌。
（6）葡萄球菌细胞分裂无定向，子细胞呈葡萄状排列,如金黄色葡萄球菌。
细菌细胞的形态与排列方式在细菌的分类鉴定上具有重要的意义。
但某种细菌的细胞不一定全部都按照特定的排列方式存在，只是特征性的排列方式占优势。
2. 杆菌杆菌细胞呈杆状或圆柱状，形态多样。
不同杆菌其长短、粗细差别较大，有短杆或球杆状（长宽非常接近），如甲烷短杆菌属；有长杆或棒杆状（长宽相差较大），如枯草芽孢杆菌。
不同杆菌的端部形态各异，有的两端钝圆，如腊状芽孢杆菌；有的两端平截，如炭疽芽孢杆菌；有的两端稍尖，如梭菌属；有的一端分支，呈“丫”或叉状，如双歧杆菌属，有的一端有一柄，如柄细菌属。
也有的杆菌稍弯曲而呈月亮状或弧状，如脱硫弧菌属。
杆菌的细胞排列方式有“八”字状、栅状、链状等多种（图1-3）。
细菌的形态和结构
无效
细胞壁的关系
细胞壁对酒精的通透性 细胞壁的化学组成不同
内毒素为阴性菌细胞壁成分 作用部位为肽聚糖 五肽交联桥 作用部位为肽聚糖 聚糖骨架
功能
1.维持细菌细胞固有外形。
2.和细菌细胞膜共同完成物质的交换。
3.细胞壁上的多种抗原决定簇、决定了抗原 性。
细菌细胞壁缺陷型（细菌L型）
细菌细胞壁缺陷型（细菌L型）
细菌细胞壁的肽聚糖结构受到理化或生物 因素的直接破坏或合成被抑制后，这种细 胞壁受损的细菌一般在普通环境下不能耐 受菌体内的高渗透压而将会胀裂死亡，但 在高渗环境下，它们仍可和存活。这种细 胞壁受损的细菌能够生长和分裂者称为细 菌细胞壁缺陷型（细菌L型）
细菌L型
返回
形态：多形态性, G培养：须在高渗低琼脂含血清的培 养基中生长，多呈油煎蛋状菌落 对作用于细胞壁的抗生素无效 常规细菌培养阴性 细菌L型仍有一定的致病能力
≥0.2μm荚膜，＜ 0.2μm 微荚膜
化学组成：多糖/多肽
形成条件：营养丰富
染色：不易着色，负染（墨汁）
Structure of G+
Wall teichoic acid
(LTA)
革兰阴性菌
外膜（outer membrane）
– 脂蛋白
LIPID BILAYER
– 脂质双层
– 脂多糖LPS
脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）
（1）脂质（类）A（lipid A） 为一种糖磷脂，由D-氨基葡萄糖双糖 组成的基本骨架，不同细菌骨架一致。 内毒素毒性与生物学活性成分 无种属特异性
临床分离葡萄球菌L型
葡萄球菌L型回复后
细胞膜（cell membrane）
第一章 细菌的形态与结构
芽胞的作用
①芽胞的大小、形状和在菌体内的位 置随菌种而不同，在细菌鉴别上有 一定意义。 ②当进行消毒灭菌时往往以芽胞是否 被杀死作为判断灭菌效果的指标。
第三节 细菌形态与结构 检查法
一、显微镜放大法
第九章 细菌的形态与结构
细菌(bacterium)是一类具有细 胞壁的单细胞型微生物，在分类学 上属于原核细胞型微生物。
第一节 细菌的大小和形态
一、细菌的大小
细菌个体微小，通常以微米（μｍ） 作为测量其大小的单位。 一般大多数球菌直径在1μｍ左右； 杆菌长1～5μｍ，宽0.3～1μｍ。
二、细菌的形态
细胞壁位于细菌细胞最外层， 包绕在细胞膜的周围，是一层质地 坚韧而有弹性的膜状结构。
1.革兰阳性菌细胞壁
G+菌细胞壁主要由肽聚糖和穿 插于其内的磷壁酸组成。
(1)肽聚糖（peptidoglycan）
G+菌肽聚糖由聚糖骨架、四肽 侧链和五肽交联桥三部分组成，这 三种成分形成坚固致密的三维立体 结构 。
荚膜的作用
①抵抗宿主吞噬细胞的吞噬和消化 作用，并具有抗有害物质对细菌 的损伤作用； ②抗干燥作用； ③黏附作用； ④具有抗原性，可帮助鉴别细菌以 及作为细菌分型的依据。
（二）鞭毛 （flagellum）
鞭毛是弧菌、螺菌、许多杆菌 及少数球菌在菌体上附有的细长并 呈波状弯曲的丝状物。
鞭毛的作用
细胞质中常含有多种颗粒，多 数为细菌储备的营养物质，如多糖、 脂类、多磷酸盐等。
异染颗粒(metachromatic granules
有些细菌胞质中含有由RNA和偏 磷酸盐组成的胞质颗粒，称为迂回体 (volutin) ，又称为异染颗粒 异染颗粒可作为鉴别细菌的依据， 如白喉棒状杆菌的异染颗粒。
实验一细菌的形态结构观察
实验一细菌的形态结构观察引言：细菌属于原核生物，是一类非常小的微生物，其形态结构一直是微生物学领域的重要研究内容。
通过观察细菌的形态结构，可以了解其生物学特性，甚至为细菌的分类和鉴定提供辅助依据。
本实验旨在通过显微镜观察、绘制不同种类细菌的形态特征，并对其进行描述和分析。
材料和方法：1.细菌样本：从环境中采集的细菌样本，使用无菌技术制备细菌涂片；2.显微镜：高性能光学显微镜；3.其他实验工具：无菌培养皿、无菌移液器、无菌盖玻片、无菌镊子等。
实验步骤：1.细菌准备：在无菌实验台上，取一块无菌盖玻片，用无菌镊子取一小滴待观察的细菌悬浮液在盖玻片上；2.细菌涂片制备：将另一块无菌盖玻片，倾斜放在含细菌悬浮液的盖玻片上，使两个盖玻片接触并自然扩散，制备细菌涂片；3.固定细菌：将细菌涂片在微火上加热，使细菌固定在玻片上；4.染色：将固定的细菌涂片浸入甲醇中进行固定，并在甲醇中静置3-5分钟；5.除染：将固定染色的细菌涂片置于水龙头下轻轻冲洗，冲洗到水清澈；6.贴片：将染好的细菌涂片倒置在无菌盖玻片上，用手指轻轻压实；7.观察：将贴好的细菌涂片放在显微镜下，逐个观察细菌的形态结构；8.绘制：选取有代表性的细菌形态，在实验记录本中进行绘制和注释。
结果和讨论：通过以上实验步骤，我们观察到了不同细菌的形态结构，如以下几个典型细菌的形态特征描述。
1. 球菌（cocci）：球形或近球形的单细胞菌，如葡萄球菌（Staphylococcus aureus）。
形态特征：球形，直径约0.5-1微米，聚集在一起呈葡萄状、串珠状。
2. 杆菌（bacilli）：长形的单细胞菌，如大肠杆菌（Escherichia coli）。
形态特征：长棍状，直径约0.5-1微米，长度约2-6微米。
3. 弯曲菌（spirilla）：弯曲或螺旋形的细胞，如鲍曼不动杆菌（Vibrio cholerae）。
形态特征：螺旋形，直径约0.5-1微米，长度约2-6微米。
第一节 细菌的形态和结构
第一篇微生物的基本知识第一章细菌第一节细菌的形态和结构细菌是一类具有细胞壁的单细胞原核型微生物。
细菌在一定的环境条件下具有相对恒定的形态结构和生理生化特性，了解这些特性，对于细菌的分类鉴定、疾病的诊断、细菌的致病性与抗原性的研究，均有重要意义。
一、细菌的形态(一)细菌的大小细菌的个体微小，须用显微镜放大数百倍乃至数千倍才能看到。
通常使用显微测微尺来测量细菌的大小，以微米（μm）作为测量单位。
不同种类的细菌，大小很不一致，即使是同一种细菌在不同的生长繁殖阶段其大小也可能差别很大。
一般球菌的直径约为0.8～1.2μm；杆菌长1～10μm，宽0.2～1.0μm；螺旋菌长1～50μm，宽0.2～1.0μm。
细菌的大小，是以生长在适宜的温度和培养基中的青壮龄培养物（指对数期）为标准。
在一定条件下，各种细菌的大小是相对稳定的，而且具有明显特征，可以作为鉴定细菌的依据之一。
同种细菌在不同的生长环境（如动物体内、外）、不同的培养条件下，其大小会有所变化，测量时的制片方法、染色方法及使用的显微镜不同也会对测量结果产生一定影响，因此，测定细菌大小时，各种条件和技术操作等均应一致。
(二)细菌的基本形态和排列细菌的基本形态有球状、杆状和螺旋状三种，并据此将细菌分为球菌(图1-1，图1-2)、杆菌(图1-3，图1-4)和螺旋菌（图1-7)三种。
细菌的繁殖方式是简单的二分裂，不同细菌分裂后其菌体排列方式不同，有些细菌分裂后单个存在，有些细菌分裂后彼此仍通过原浆带相连，形成一定的排列方式。
1．球菌菌体呈球形或近似球形。
根据球菌分裂的方向和分裂后的排列状况将其分为：双球菌沿一个平面分裂，分裂后两两相连，其接触面扁平或凹入,菌体有时呈肾形，如脑膜炎双球菌；有时呈矛头状，如肺炎双球菌。
链球菌沿一个平面分裂，分裂后三个以上的菌体呈短链或长链排列，如猪链球菌。
葡萄球菌沿多个不同方向的平面分裂，分裂后排列不规则，似一串葡萄，如金黄色葡萄球菌。
细菌的形态和结构
二、细菌的特殊结构
鞭毛的功能： 1. 运动器官； 2. 与致病性有关：如霍乱弧菌穿过小肠黏液层； 3. 细菌的分类鉴定：具有抗原性，H抗原。
二、细菌的特殊结构
三、菌毛 pilus
1. 菌体表面短、细、直硬的丝状物，光学显微镜下 看不到。多见于G－菌，与运动无关。2. 化学组成：菌毛蛋白
1. 无完整的核结构、核膜、核仁和有丝分裂器等。 2. 单一闭合环状DNA，含少量蛋白质。 3. 特点：DNA量少，多为单拷贝形式，少重复序列。
二、细菌的特殊结构
一、荚膜 capsule
细胞壁外的一层较厚、黏性、胶冻样物质 ≥0.2 μm 荚膜
<0.2 μm 微荚膜 化学组成：多数为多糖，少数是多肽 形成条件：营养丰富（活体内，含血清培养基） 染色：不易着色
其中含有的一些结构：
1. 核糖体ribosome：70S（30S + 50S）
2. 质粒plasmid：染色体外的遗传物质，闭合环状DNA（以后讲）
3. 胞质颗粒：储存营养物质（如白喉杆菌的异染颗粒）
异染颗粒
质粒（EM照片）
一、细菌的基本结构
四、核质nuclear material或拟核nucleoid
第一章 细菌的形态与结构
第一节 细菌的大小与形态
一、大小
以微米(m)为测量单位，使用光镜观察。
二、形态：细菌按其外形分三类
球菌(coccus)：双球菌、链球菌、葡萄球菌、四联球菌、 八叠球菌；
杆菌(bacillus)：如大肠杆菌、炭疽杆菌、白喉杆菌等；
螺形菌(spiral bacterium)：弧菌（霍乱弧菌）、 螺菌（幽门螺杆菌）
保存全部生命必需物质：核酸、酶、合成菌体组分的结构 可发芽成繁殖体：1个细菌→1个芽胞→1个细菌 特点：壁厚，折光性强，不易着色。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
4.
如在实验过程中发生有菌材料溅出、污染环境或化学药品
灼伤等意外情况，应立即报告老师，以便及时处理。
5. 爱护仪器设备，不经老师批准，不准自行接通、断开电
源或拆卸仪器。对仪器设备造成人为损坏的，要酌情赔 偿。实验结束后，仪器设备状态复原。 6. 实验结束后，清洁台面、所有循环使用器材复原；安排 值日生打扫卫生；检查水、电、门、窗等设施，并经实 验室负责人检查认可。
功能：帮助细菌在液体环境中自由运动
细菌的特殊结构
芽孢：
定义：某些细菌在一定条件下，能在菌体内形成一个
圆形或卵圆形的小体，是细菌为适应恶劣环境，维持 生存而处于代谢相对静止的特殊结构。
液体培养基：
表面生长
均匀混浊生长
沉淀生长
固体培养基：
半固体培养基：
无动力
有动力
革兰染色
由丹麦细菌学家革兰1884年发明而得名
单染色
染色 标本
复染色
特殊染色
鞭毛、芽孢、荚膜
细菌的基本形态
Cocci Bacilli Spiral bacteria
细菌的特殊结构
荚膜：
定义：某些细菌在其细胞壁外包绕的一层黏液
性物质，为多糖或蛋白质的多聚体。 功能：抗吞噬、黏附、抗有害物质损伤
细菌的特殊结构
鞭毛：
分类：单鞭毛、双鞭毛、丛鞭毛、周鞭毛
细菌分离培养方法——平板划线法
（混合菌液） I
1/10
Flame loop Rotate 90
II
1/5
Flame loop Rotate 90 Rotate 90
III
1/4
IV
细菌代谢产物检查方法——IMViC试验接种
（大肠埃希菌、产气肠杆菌）
材料： 葡萄糖蛋白胨水（4支） 蛋白胨水（2支） 枸橼酸盐斜面（2支） VP test Citrate test Indole test Methyl red (MR) test
大肠杆菌 蛋白胨水
产气杆菌 蛋白胨水
葡萄糖蛋白胨水 葡萄糖蛋白胨水 葡萄糖蛋白胨水 葡萄糖蛋白胨水 枸橼酸盐斜面 枸橼酸盐斜面
纯种接种
液体接种
斜面接种
The end
实验一
细菌的形态及培养
病原生物学实验室守则
1.
学生进实验室应穿好白大衣；与实验无关物品不准带入实
验室，所有实验材料严禁带出实验室。
2. 3.
实验室内禁止吸烟及饮食。 严格操作规程，杜绝生物安全事故。污染标本及使用过的 有菌器材放于指定的消毒缸内，统一进行消毒处理。需要 培养的物品做好标记，放于指定培养箱内。
用肥皂或消毒液洗手、脱隔离衣后方可离开实验室。
本次实验内容
内容一 细菌形态学 1. 细菌基本形态及特殊结构（示教） 2. 革兰染色（操作）
内容 二 细菌的培养
1. 细菌的生长现象（示教） 2. 细菌的分离培养（操作） 3. 细菌的纯种接种（操作）
细菌的形态学观察
动力观察
不染色 标本
革兰染色、抗酸染色、albert 染色
原理：
尚为完全阐明，但与细胞壁结构密切相关。 等电点学说、通透性学说、化学学说
革兰染色（Gram stain)
步骤：
意义：
鉴别细菌 选择抗菌药物 研究细菌致病性
涂片
干燥 结晶紫1分钟
5%酒精脱色
水洗
稀释石炭酸复红30秒
水洗
干燥
油镜观察
革兰染色结果
油镜下模式图 ×1000