药剂学实验指导——热原检查
热原的检查方法
热原的检查方法
热原是一个广义名称，用于描述产生或传递热量的物体、物质或现象。
在工业、能源和环境等领域中，检查热原的方法对于确保过程的正常运行和预防故障至关重要。
以下是几种常见的热原检查方法：
1. 热传导检测法：这是一种测量热量传递速率的方法。
热传导检测仪通常包括一个发热体和一个温度传感器。
当电流通过发热体时，它会产生热量并传递到周围的物体。
这样就可以测量热量的传递速率以及物体的热导率。
2. 热扫描电镜（SEM）：热SEM利用电子束来扫描样本，并通过观察样本的热反应来检查热原的性能。
可以通过观察样品的温度分布图来确定样品的热特性。
3. 红外线热成像（IRT）：这是一种无接触的检测方法，可以用于观察对象的表面温度分布。
热成像仪使用红外线相机（或传感器）来捕捉物体或物质的表面温度，并将其转换成彩色图像。
这种方法可以用于检测特定区域的温度梯度以及区域的温度变化。
4. 热重量分析（TGA）：这是一种测量样品热性能的方法。
TGA可以测量样品的质量随时间和温度的变化，从而确定样品的热稳定性和分解特性。
5. 示温器法：这种方法通常用于测量液体和气体的表面温度。
温度的变化可以观察到指针的变化和液晶显示屏的变化。
总的来说，选择特定的热原检测方法取决于所需的精度、检测对象的类型、要求的速度和测量条件。
在选择特定的热原检测方法之前，最好先了解不同方法的优缺点。
最终的目标是针对特定的应用选择最适合的检测方法，以确保最准确、快速和可靠的结果。
热原检查标准操作规程(2015版药典)
热原检查标准操作规程（2015版药典）1．目的：通过本规程的制定，使该检查操作进一步规范化，标准化，以减少误差的发生。
2．依据：《中国药典》2015年版四部通则1142 P153。
3．适用范围：本标准适用于本公司有热原检查的操作。
4．责任：热原QC检验人员对本规程的实施负责。
5．程序：5．1．概述本法系将一定剂量的供试品，静脉注入家兔体内，在规定时间内，观察家兔体温升高的情况，以判定供试品中所含热原的限度是否符合规定。
5．2．实验材料及用具5．2．1．天平（精度50g，家兔称重用）。
5．2．2．电热干燥箱（0~300±）℃5．2．3．恒温水浴箱（37~100）℃5．2．4．家兔固定盒5．2．5．实验用具：注射器、针头、金属直镊、注射器盒、时钟、75％酒精棉球、手术镊。
5．3．将供试品放入恒温水浴箱中，温热至约38℃。
5．4．供试用家兔供试用的家兔应健康合格，体重1.7kg以上，雌兔应无孕。
预测体温前7日即应用同一饲料饲养，在此期间内，体重应不减轻，精神、食欲、排泄等不得有异常现象。
未曾使用于热原检查的家兔；或供试品判定为符合规定，但组内升温达0.6℃的家兔；或3周内未曾使用的家兔，均应在检查供试品前7日内预测体温，进行挑选。
挑选试验的条件与检查供试品时相同，仅不注射药液，每隔30分钟测量体温1次，共测8次，8次体温均在38.0~39.6℃的范围内，且最高与最低体温相差不超过0.4℃的家兔，方可供热原检查用。
用于热原检查后的家兔，如供试品判定为符合规定，至少应休息48小时方可再供热原检查用，其中升温达0.6℃的家兔应休息2周以上。
对用于血液制品、抗毒素和其他同一抗原性供试品检测的家兔可在5天内重复使用1次。
如供试品判定为不符合规定，则组内全部家兔不再使用。
5．5．试验前的准备5．5．1．用具的除热原：所有与药液接触的器具，都必须清洗干净后，置电热干燥箱中经250℃、50分钟加热除热原。
注射器、针头、手术镊清洗干净后，放入注射器盒内，密闭，放入电热干燥箱中经250℃，50分钟加热除热原。
热原检查法
热原检查法热原检查法是一种用于检测微生物的方法，它基于微生物在特定温度下产生的热量来进行检测。
该方法被广泛应用于食品、水质、医药等领域，具有灵敏度高、快速、可靠等优点。
下面将从原理、操作步骤、优缺点和应用等方面进行详细介绍。
一、原理热原检查法是通过测量微生物在特定温度下产生的热量来进行检测的。
该方法主要基于微生物代谢活动所产生的热量，利用热电偶或红外线传感器对微生物所产生的热量进行实时监测。
当微生物数量较多时，其代谢活动所产生的热量也会相应增加，从而能够通过仪器显示出来。
二、操作步骤1. 样品制备：将待测样品按规定方法处理后，制备成适宜的试样。
2. 检测设备准备：根据使用说明书正确安装设备，并连接好电源和计算机。
3. 仪器调试：按说明书要求对仪器进行调试，并进行空白测试和标准曲线建立。
4. 样品检测：将制备好的样品加入检测仪器中，按要求设定温度和时间，进行检测。
5. 结果分析：根据仪器显示结果进行分析判断，确定样品中微生物的种类和数量。
三、优缺点优点：1. 灵敏度高：热原检查法对微生物的检测灵敏度高，可以检测到微生物数量较少的样品。
2. 快速：该方法操作简便，可以在短时间内获得检测结果，适用于快速筛查大批量样品。
3. 可靠性强：该方法结果准确可靠，并且不受环境影响。
4. 适用范围广：热原检查法适用于多种类型的样品，包括食品、水质、医药等领域。
缺点：1. 无法区分微生物种类：热原检查法只能确定样品中是否存在微生物以及其数量，并不能区分不同种类的微生物。
2. 对温度要求高：该方法对温度要求较高，在操作过程中需要掌握好温度控制以及时间控制等参数。
3. 不适用于活菌数的计数：由于热原检查法只能检测到微生物代谢产生的热量，因此不适用于活菌数的计数。
四、应用热原检查法广泛应用于食品、水质、医药等领域。
在食品领域中，该方法可以用于检测肉制品、水产品、奶制品等样品中的微生物。
在水质领域中，该方法可以用于检测自来水、污水等样品中的微生物。
药典规定的检测热原质的方法
药典规定的检测热原质的方法1. 微生物法：微生物法是药典规定的一种常用的检测热原质的方法。
该方法是通过观察热原质对微生物的生长和繁殖的影响来判断样品中是否含有热原质。
药典通常使用大肠杆菌（Escherichia coli）或鼠伤寒沙门氏菌（Salmonella typhimurium）等细菌来进行测试。
具体的方法是将待检样品与细菌培养基混合，观察一定时间后，观察细菌的生长情况。
如果待检样品中存在热原质，就会抑制细菌的生长，从而判断样品中存在热原质。
2.物理法：物理法是药典规定的另一种常用的检测热原质的方法。
该方法是通过测量待检样品的热效应来判断样品中是否含有热原质。
药典中常用的物理法包括热量计法和热成像法。
热量计法是使用热量计来测量待检样品在加热或反应过程中产生的热量，如果样品中存在热原质，就会产生明显的热效应。
热成像法是使用红外热像仪来观察样品在加热或反应过程中的温度变化，如果样品中存在热原质，就会在红外热像仪上显示出明显的热点。
3.化学法：化学法是药典规定的另一种常用的检测热原质的方法。
该方法是通过化学反应来判断样品中是否含有热原质。
药典中常用的化学法包括直接显色法和间接显色法。
直接显色法是将待检样品与其中一种试剂直接混合反应，如果样品中存在热原质，则会产生明显的颜色变化。
间接显色法是将待检样品与其中一种试剂混合反应后，再加入其他试剂观察颜色变化，如果样品中存在热原质，则会产生明显的颜色变化。
药典规定的上述方法在检测热原质方面具有可靠性和准确性，被广泛应用于药物制剂的质量控制和检测中。
但需要注意的是，不同药典对于检测热原质的方法可能会有一些差异，具体的检测方法应根据具体的药典要求进行操作。
另外，在实际操作中也应注意正确选择适用的方法，并且保证实验操作的准确性和标准化，以获得可靠的检测结果。
药品的安全性检查-热原
热原
二、家兔检查法
3只兔：0.5小时测1次，共6次， 最高-最低＝升高的温度 结果：均升高在0.6℃以下 且升高的总数在1.3℃以下 认为符合规定。
药品的安全性检查——热原
热原
一、基本知识
（一）基本概念 热原(pyrogen)系指药品中含有的能引起体温升高的杂质，
主要为细菌性热原。 方法：家兔检查法，即将一定剂量的供试品，静脉注入家
兔体内，在规定时间内，观察家兔体温升高的情况，以判定供 试品中所含热原的限量是否符合规定。 （二）检查对象
供静脉滴注用的注射剂以及容易感染热原的品种。
执业西药师《药学综合知识与技能》：热原检查
热原检查目前各国药典仍为家兔法。
家兔法：选用家兔作试验动物，是因为家兔对热原的反应和人是相同的。
具体试验方法和结果判断标准参看《中国药典2005版》二部附录。
采用直肠热电偶代替直肠温度计，热电偶在整个实验中固定在直肠内，其温度可在仪表中显示出来。
因而免除对单个家兔温度多次测量操作。
国内四川绵阳医用电子仪器厂生产的RY型热原测试仪基本上符合这种要求，具有分辨率高，读数精确的优点，同时可测虽16只动物，能满足一般热原测定需要。
鲎试验法：利用鲎的变形细胞溶解物与内毒素之间的胶凝反应，试验时制备或购买鲎热原试剂，即送变形细胞溶解物。
然后取一定量的热原试剂，加入一定量的供试品放入洁净的无热原试管中，于37℃水溶液中培育60分钟，观察结果。
同时作阴性对照。
判断如下：如试验品出现凝胶或粘稠度和不透明度增加者为阳性反应，表明供试品有热原。
贵州学|习网收集整理若供试品无变化或仅有絮状物者为阴性，表明供试品无热原。
有人比较兔试验与鲎试验法的灵敏性，结果说明鲎试验法能检出0.0001ug的内毒素，而兔试验法只能检出0.001ug的内毒素，故认为鲎试验比免试验灵敏十倍。
鲎试验特别适用于某些不能用家免进行热原检测的品种，如放射性药剂、肿瘤抑制剂等。
因为这些制剂具有细胞毒性具有一定的生物效应，用家兔检测是不适宜的。
其对革兰氏阴性以外的内毒亲不够敏感，不能代替家兔热原试验法。
热原检查法课件
供试品溶液图
然后每隔30 min按前法测其体温 1次，共测6次，以6次体温中最高的 一次减去正常体温，即为该家兔体 温的升高度数。
计算机测出家兔体温曲线升高值
家兔体温测 温装置
试验用的注射器、针头及一切和供试品接触
的器皿，应置烘箱中用250℃加热30 min
家兔体温 检查确实
实验器具 的准备
注射器、针头等和供试品接 触的器皿， 应250℃加热30 min，或其他适宜的方法除去 热原。
选择适用的家兔3只作为一组
检 查 法
给每组家兔编号图
给设定的每组输入供试品资料
给设定的每组输入注射时间
测定其正常体温后15 min内，自 耳静脉缓缓注入规定剂量(参见表51,5-2.5-3)并温热至约38℃的供试品溶 液
测体温
(30 mi/次，8次 38.0～39.6℃ 体温差<0.4℃)
家 兔 的 准 备
饲养环 境要求
热 原 试 验 检 查 前 准 备
家兔处同一环境，实验室（图）和饲养室 （图）温差不得大于 5℃，实验室温度在 17 ～ 25℃， 实验全过程中，室温变化不 得大于3℃，应避免噪音干扰 家兔正常体温在 38.0℃～ 39.6℃，各 兔间正常体温之差不得超过1℃。 肛温计插入深度和时间各兔相同 ( 一 般 约 6 cm) ， 时 间 不 得 少 于 1min ， 30min 测次，一般测 2 次，两次体温 之差不得超过 0.2℃，以此两次体温 的平均值作为该兔的正常体温。
第五章
药品有害物质检查技术
第二节 药品的热原检查
热 原 检 查 的 方 法
《中国药典》热原检查方法是采用家 兔升温法进行检查。
本法系将一定剂量的供试品，静脉 注入家兔体内， 在规定时间内， 观察家兔体温升 高的情况，以判定 供试品中所含热原 的限度是否符合规 定。
YBB60232012热原检查法
YBB60232012热原检查法Reyuan JianchafaTests for Pyrogen本法系将供试液经静脉注入家兔体内，在规定时间内，观察家兔体温升高的情况，以判定供试品中所含热原的限度是否符合规定。
供试用家兔应符合热原检查法（中国药典2010年版二部附录ⅪD）中供试用家兔的要求。
试验前的准备应符合热原检查法（中国药典2010年版二部附录ⅪD）中试验前的准备要求。
供试品溶液的制备制备过程应按无菌操作法进行。
将供试品用纯化水冲洗干净后，用滤纸吸干，切成约0.5cm×3cm条状，置浸提容器内。
除另有规定外，供试品置高压蒸汽灭菌器内，在115℃保持30分钟，再按表1规定加入浸提液，使浸提液浸没供试品，按表2条件浸提，即得。
供试液应在制备后2小时内使用。
表1 供试品表面积或重量与浸提液的比例供试品厚度（mm）表面积或重量与浸提液体积的比例≤0.5 6cm2/ml＞0.5~1.0 3cm2/ml＞1.0 1.25cm2/ml不规则形状0.2g/ml表2 浸提条件浸提温度（℃）浸提时间（小时）37±1 24±237±1 72±250±2 72±270±2 24±2检查法取适用的家兔3只，测定其正常体温符合要求后15分钟以内，自耳静脉缓缓注入温热至约38℃的供试品溶液，注射剂量为10ml/kg，然后每隔30分钟按前法测量其体温1次，共测6次，以6次体温中最高的一次减去正常体温，即为该兔体温的升高温度（℃）。
如3只家兔中有1只温度升高0.6℃或高于0.6℃，或3只家兔体温升高的总和达1.3℃或高于1.3℃，应另取5只家兔复试，检查方法同上。
结果判断在初试的3只家兔中，体温升高均低于0.6℃，并且3只家兔体温升高总和低于1.3℃；或在复试的5只家兔中，体温升高0.6℃或高于0.6℃的家兔不超过1只，并且初试、复试合并8只家兔的体温升高总和为3.5℃或低于3.5℃，均判定供试品的热原检查符合规定。
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实验十四热原检查
实验目的
●掌握注射剂热原检查的操作方法及要点。
●掌握注射剂热原检查结果的判定方法。
●理解注射剂热原检查试验前的准备工作。
实验器材
药品注射剂供试品。
器材家兔、无菌无热原的注射器及针头、肛温计。
实训指导
1．方法步骤
（1）供试用家兔的选择供试用的家兔应健康合格，体重1.7～3.0kg，雌兔应无孕。
预测体温前7日即应用同一饲料饲养,在此期间内，体重应不减轻，精神、食欲、排泄等不得有异常现象。
挑选试验的条件与检查供试品时相同，仅不注射药液，每隔30min测量体温1次，共测8次，8次体温均在38.0～39.6℃的范围内,且最高与最低体温的差不超过0.4℃的家兔，方可供热原检查用。
（2）试验前的准备在作热原检查前1～2日，供试用家兔应尽可能处于同一温度的环境中，实验室和饲养室的温度相差不得大于5℃，实验室的温度应在17～25℃,在试验全部过程中，应注意室温变化不得大于3℃，防止动物骚动并避免噪音干扰。
家兔在试验前至少1h开始停止给食并置于适宜的装置中,直至试验完毕。
肛温计（精密度为±0.1℃）插入肛门的深度和时间各兔应相同，深度一般约6cm，时间不得少于1.5min，每隔30min测量体温1次，测量2次，两次体温之差不得超过0.2℃,以此两次体温的平均值作为该兔的正常体温。
当日使用的家兔，正常体温应在38.0～39.6℃的范围内，且各兔间正常体温之差不得超过1℃。
（3）检查法取适用家兔3只,测定其正常体温后15min内，自耳静脉缓缓注入规定剂量并温热至约38℃的供试品溶液，每隔30min测体温1次,共测6次,以6次体温中最高的一次减去正常体温，即为该兔体温的升高温度(℃) 。
如3只家兔中有1只体温升高0.6℃或0.6℃以上,或3只家兔体温升高均低于0.6℃，但体温升高的总和达1.4℃或1.4℃以上，应另取5只家兔复试，检查方法同上。
（家兔升温为负值时，均以0℃计）（4）结果判断在初试3只家兔中，体温升高均低于0.6℃，且3只家兔体温升高总和低于1.4℃；或在复试的5只家兔中，体温升高0.6℃或0.6℃以上的家兔不超过1只，且初试、复试合并8只家兔的体温升高总和为3.5℃或3.5℃以下,均判为供试品的热原检查符合规定。
在初试3只家兔中，体温升高0.6℃或0.6℃以上的家兔超过1只；或在复试的5只家兔中，体温升高0.6℃或0.6℃以上的家兔超过1只；或在初试、复试合并8只家兔的体温升高总和超过3.5℃，均认为供试品的热原检查不符合规定。
将热原检查结果填入表14-1中。
2．注意事项
（1）试验用的注射器、针头及一切和供试品溶液接触的器皿,应置烘箱中用250℃加热30min，或用其他适宜的方法除去热原。
（2）已经用于热原检查的家兔，如上次供试品判断为符合规定，休息2日以上方可供第2次热原检查用。
实训报告
实验十四热原检查
实训目的
实训结果
表14-1热原检查结果
供试品正常体温（T正，℃）给药后的最高体温（T max，℃） T max- T正（℃）热原检查第1只
第2只
第3只
实训讨论
姓名: 学号: 实验日期: 气温:℃。