斑马鱼jak2a载体构建及其对红系造血功能影响的初步研究

合集下载

(细胞生物学专业优秀论文)斑马鱼新基因KLP的克隆、分析及功能研究

结果１、异种同源基因的血清学筛选及鉴定以人脐静脉内皮细胞免疫获得的抗血清为筛选血清，采用ＳＥＲＥＸ方法筛选斑马鱼心脏ｅＤＮＡ文库。

噬菌斑内的重组蛋白转移到硝酸纤维素膜上经显色反应后背景呈浅紫色，阴性噬菌斑呈较淡的噬菌斑影，阳系的噬菌斑呈紫红色：筛选过程重复２—３次以排除假阳性结果。

通过斑马鱼心脏ｅＤＮＡ文库的两轮筛选获得了２２个阳性克隆，然后通过内部剪切使噬菌体转变呈噬粒以鉴定。

琼脂糖凝胶电泳结果显示，插入片断大小大部分集中于１０００ｂｐ左右。

图１左图箭头所指为ＳＥＲＥＸ阳性克隆，右图为ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＩＩ噬菌粒经ＥｃｏＲＩ和ＸｈｏＩ双酶切表２基因号人同源基因名称阳性频率功能注释ＤＬｌ６３２９Ｈｓ．３５０９６４ＴｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｚｉｎｃｆｉｎｇｅｒａｎｄＢＴＢｄｏｍａｉｎｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ４Ｄｒ３５ｃｒ７２Ｈｓ．２２７６０２２ｒｅｇｕｌａｔｅｏｆｎｕｃｌｅｒ删＾—ｂｉｎｄｇｉｎｇｐｅｒ－姝Ｎ＾ｍｏｔｉｆｐｒｏｔｅｉｎ１６未知基因（６个克隆。

２个基因）图２阳性克隆基因的功能分类３、新基因全长的克隆获得完整的ＯＲＦ是基因功能研究的第一步。

我们选择了一个基因作为重点研究对象：斑马鱼ＫＬＰ（ＫａｉＳＯＬｉｋｅ）基因，我们采用的电子克隆策略。

直接测序得到的斑马鱼ｅｓｔ序列长６４７ｂｐ，我们采用了基于基因组序列的直接预测策略。

通过与斑马鱼基因组序列的对比，可知该基于位于１２染色体的ＮＷ－－６３３３８０（共２３２５３７ｂｐ）的４６１６１－－４７０７９ｂｐ处。

选取该序列前后各３ｋｂ序列，运用ＧＥＮＥＳＣＡＮ和ＴＷＩＮＳＣＡＮ测序其中可能包含的基因，包含已知ＥＳＴ序列的预测结果即为可能的基因，长４７２５ｂｐ，编码１５７４个氨基酸。

再与Ｄｒ．１６３２９中的ＥＳＴ序列对比，通过与Ｃ０９２３１４７的序列拼接获得一长５１７１ｂｐ的基因序列，５’端延长３９５ｂｐ，编码区不变。

起始密码子周围序列为ｃｃｈａｔｇＡ，符合ｋｏｚａｋ规则，－－５７位存在终止密码予ＴＧＡ，据此可以确定已得到该基因完整的编码区。

一种转基因斑马鱼在制备特异标记原始红系造血过程的动物模型中的应用[发明专利]

专利名称：一种转基因斑马鱼在制备特异标记原始红系造血过程的动物模型中的应用
专利类型：发明专利
发明人：马宁,卢荆澳,黄春燕,林芷茵,彭昱轩,唐政,林宇
申请号：CN202111355654.2
申请日：20211116
公开号：CN114350705A
公开日：
20220415
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种转基因斑马鱼在制备特异标记原始红系造血过程的动物模型中的应用。

本发明发现斑马鱼cd99l2基因具有与斑马鱼原始红系造血相一致的时空表达谱，仅在斑马鱼原始造血阶段的红细胞中高表达。

本发明通过构建Tg(cd99l2‑4.7kpromotereGFP)转基因斑马鱼进一步发现，利用cd99l2作为标记时标记的细胞类型为未成熟的红系前体细胞，且不影响红细胞生成。

因此，可将该转基因斑马鱼用于制备特异标记原始红系造血过程的动物模型，用于研究原始造血过程以及原始红细胞发育过程，还可用于制备用于筛选治疗红细胞增多或者减少性疾病药物的模型。

申请人：南方医科大学
地址：510515 广东省广州市白云区沙太南路1023号-1063号
国籍：CN
代理机构：广州粤高专利商标代理有限公司
代理人：赵崇杨
更多信息请下载全文后查看。

基因编辑技术斑马鱼模型应用的进展及展望

基因编辑技术斑马鱼模型应用的进展及展望近年来，基因编辑技术在生命科学领域中得到广泛应用。

其中斑马鱼模型作为常用的实验动物，被用于研究大量生物学问题。

本文将介绍基因编辑技术在斑马鱼模型中的应用情况、取得的进展以及未来的展望。

一、基因编辑技术在斑马鱼中的应用情况基因编辑技术主要包括CRISPR/Cas9系统、TALENs 和 zinc finger nuclease (ZFN)等。

这些技术以不同的方法，实现基因的精确编辑，可广泛应用于生命科学中的基础和应用研究。

在斑马鱼中，基因编辑技术已经广泛应用。

CRISPR/Cas9系统是其中最常用的一种技术。

利用这种技术，可以在斑马鱼中实现通过调整基因的表达，使其具有特定的生物学特性，例如，身体颜色、免疫系统等的改变。

此外，基因编辑技术还能用于研究斑马鱼的基因功能，并为我们了解人类疾病的基因突变打下基础。

二、基因编辑技术在斑马鱼中的进展近年来，随着基因编辑技术不断发展，对斑马鱼进行基因编辑的方法也得到了迅速发展。

在斑马鱼的基因研究中，利用基因编辑技术进行基因敲除是最常用的实验手段之一。

通常，利用CRISPR/Cas9系统对斑马鱼进行基因突变，使其缺失某些关键基因，以此来研究基因的功能。

除此之外，近年来，研究人员还利用基因编辑技术在斑马鱼中构建了个别基因纯合或杂合体系，以研究基因对斑马鱼生长和发育的影响，最终揭示了许多新的基因功能和调节机制。

例如，研究人员利用CRISPR/Cas9系统在斑马鱼中进行了Pten基因的单基因纯合敲除，结果发现这种突变引起了蛋白质合成和细胞存活代谢通路等方面的变化。

此外，研究人员还拓展了基因编辑技术的应用，在斑马鱼模型中实现了人类基因的表达。

例如，利用基因编辑技术，在斑马鱼中构建人类肝脏和肾脏，以探究疾病发生的机制。

三、基因编辑技术在斑马鱼中的未来展望在未来，随着基因编辑技术的不断发展，基于斑马鱼模型的研究也将有更深入的探索。

预计斑马鱼模型将被广泛应用于遗传疾病的研究、药物筛选和神经科学研究。

文献综述-斑马鱼及其应用

斑马鱼及其研究应用作者：杜颖指导老师：张源淑摘要：斑马鱼作为一种新兴的重要模式动物之一，体外受精、胚胎透明，因此可在显微镜下直接观察发育过程及检测药物引起的内脏组织变化，在生命科学领域中应用前景十分广阔。

斑马鱼体型小,适合高通量研究,还具有生长繁殖周期短及其与人类高度相似的基因组等优点，已经广泛用于人类疾病模型的建立、新药研发和药物的筛选，此外，斑马鱼还被应用于毒理学、发育生物学和遗传学等的研究。

因为斑马鱼对污染物反应灵敏，现已用于监测环境污染物及污水检测。

本文主要从几个方面对斑马鱼的研究进展进行了整理和归纳。

关键字：斑马鱼模式动物科学研究发育感染药物Zebrafish and Its ApplicationAbstract:Zebrafish as an important model animal emerging, its in vitro fertilization, transparent embryo, internal organs can be directly observed during the development and testing organ change caused by drugs under the microscope, has very broad application prospects in the field of life sciences. zebrafish also has a live, high-throughput, growth and short reproduction cycles and highly similar to the human genome, etc., it is widely used in modeling human diseases, drug screening, and secondly, zebrafish also is applied in toxicology research, developmental biology and genetics, etc.. Because of its sensitivity, it has been used to monitor environmental pollutants and water testing.This paper mainly from several aspects of zebrafish research progress has been collated and summarizedKey words:zebrafish Animal models Scientific research Development Infection Drug斑马鱼(Danio rerio)又名蓝条鱼、花条鱼、蓝斑马鱼、印度鱼、印度斑马鱼,产于孟加拉、印度东部、巴基斯坦、缅甸、尼泊尔等地,是一种常见的热带淡水硬骨鱼。

斑马鱼造血调控因子的研究进展

斑马鱼造血调控因子的研究进展
钟敏
【期刊名称】《国际输血及血液学杂志》
【年(卷),期】2011(034)001
【摘要】斑马鱼由于其独特的生物学优势,使其成为研究造血发育过程及调控机制的良好的生物模式.目前已经利用斑马鱼建立了若干和人类极为类似的血液疾病模型,如T淋巴细胞白血病和骨髓增殖性疾病(myeloproliferative diseases,MPD)等.由于其胚胎透明便于观察,并且可以结合大规模的前向遗传学筛选,从而利于发现造血过程中的未知因子,进一步了解斑马鱼的造血过程及其调控方式.
【总页数】5页(P70-74)
【作者】钟敏
【作者单位】200127,上海,上海交通大学医学院附属仁济医院血液科
【正文语种】中文
【相关文献】
1.斑马鱼造血系统发育与人类血液系统疾病研究进展
2.斑马鱼造血干细胞研究进展及其在人类白血病治疗中的应用
3.造血负调控因子研究进展
4.中科院上海分院科学家发现斑马鱼中β-Arrestin1蛋白是胚胎造血系统发育的重要调控因子
5.造血干细胞调控因子研究进展
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

一种培育肠道特异性表达红色荧光转基因斑马鱼的方法[发明专利]

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010511231.4(22)申请日 2020.06.08(71)申请人浙江大学地址 310058 浙江省杭州市西湖区余杭塘路866号(72)发明人单颖　李肖梁　方维焕　(74)专利代理机构杭州中成专利事务所有限公司 33212代理人周世骏(51)Int.Cl.C12N 15/85(2006.01)C12N 15/65(2006.01)A01K 67/027(2006.01)(54)发明名称一种培育肠道特异性表达红色荧光转基因斑马鱼的方法(57)摘要本发明涉及转基因斑马鱼的培育方法，旨在提供一种培育肠道特异性表达红色荧光转基因斑马鱼的方法。

通过观察胚胎红色荧光蛋白基因的表达情况，挑选出肠道有特异性荧光的斑马鱼胚胎，以采用人工饲养方法获得杂交子代。

通过杂交子代自交获得稳定遗传的肠道表达红色荧光蛋白斑马鱼，再将其与野生型斑马鱼测交，筛出100％肠道表达红色荧光蛋白胚胎对应的亲本斑马鱼作为双整合纯系留种保存。

本发明方法实施过程简单易控，能够获得肠道特异性表达的启动子和红色荧光蛋白在肠道高效表达的斑马鱼品系；所得斑马鱼品系用于斑马鱼肠道功能的研究，可以随时观察在任何时期的肠道红色荧光蛋白表达特征，满足对斑马鱼肠道功能研究的整体性与完整性要求。

权利要求书2页说明书7页序列表9页附图3页CN 111621522 A 2020.09.04C N 111621522A1.一种培育肠道特异性表达红色荧光转基因斑马鱼的方法，其特征在于，是以Tol2转座酶系统为工具，构建以肠道脂肪酸结合蛋白启动子带动DsRed红色荧光蛋白在肠道特异表达的转基因斑马鱼；该方法具体包括以下步骤：(1)从斑马鱼肠道组织基因组扩增获得肠道特异性启动子Pifabp，其序列如SEQ ID NO:1所示；(2)从商品化质粒中扩增获得dsred片段，其序列如SEQ ID NO:2所示；(3)以mini Tol2质粒为骨架，构建基于肠道特异性启动子Pifabp表达红色荧光蛋白dsred的重组表达载体；(4)将步骤(3)中的重组表达载体显微注射至斑马鱼受精卵，筛选出存在红色荧光信号的胚胎，并按常规方法饲养，得到F0代；(5)将F0代斑马鱼与野生型斑马鱼杂交获得F1代，筛选获得杂合的肠道特异性表达红色荧光转基因斑马鱼；(6)将F1代斑马鱼进行自交获得F2代，筛选得到纯合及杂合的肠道特异性表达红色荧光转基因斑马鱼；(7)将F2代斑马鱼与野生型斑马鱼测交，筛选出后代100％肠道表达红色荧光蛋白对应的F2代亲本斑马鱼，作为纯品系留种保存。

斑马鱼模型在免疫学中的应用研究

斑马鱼模型在免疫学中的应用研究斑马鱼（zebrafish）是一种常见的热带鱼类，因其在科学研究中的广泛应用而备受关注。

近年来，斑马鱼模型在免疫学中的应用研究引起了越来越多的关注和重视。

本文将从斑马鱼模型在免疫学方面的应用和研究进展角度展开讨论。

一、斑马鱼模型在免疫学方面的应用斑马鱼模型作为一种生命科学研究工具，具有许多优越性。

相对于哺乳动物模型，斑马鱼模型体积小、繁殖力强、生命周期短，而且发育过程可见。

这些优点使得斑马鱼模型成为研究生命科学、特别是免疫学问题的有力工具。

斑马鱼是脊椎动物，其免疫系统与哺乳动物的免疫系统有很多相似之处。

斑马鱼模型可以对人类免疫系统相关疾病的机制进行研究。

斑马鱼还可以通过植入肿瘤细胞来建立癌症模型，从而探究癌症的发生机制。

同时，斑马鱼可以被用来进行免疫功能的研究，包括免疫细胞的发育、分化、功能和免疫反应等方面。

二、斑马鱼模型在免疫学研究中的进展随着研究的不断深入，斑马鱼模型在免疫学研究中的应用也不断推进。

1. 斑马鱼模型在免疫细胞发育过程中的应用斑马鱼模型可以被用来研究免疫细胞的发育和功能，特别是针对一些疾病中免疫细胞发育异常的情况。

例如，在过敏反应中，嗜酸性粒细胞（Eosinophil）对于炎症反应的调节非常重要。

研究人员曾经在斑马鱼模型中发现，一些免疫调节因子会影响斑马鱼嗜酸性粒细胞的发育和活动，从而使得其免疫系统得以平衡。

2. 斑马鱼模型在炎症反应中的应用炎症反应是免疫系统对感染和组织损伤的反应。

研究人员可以在斑马鱼模型上研究各种炎症反应，并研究其中代表性的信号通路和分子机制，这有助于对炎症反应进行更深入的研究。

3. 斑马鱼模型在免疫激活过程中的应用免疫激活是免疫系统对于感染等外部刺激的反应。

斑马鱼模型可以被用来研究免疫激活的过程。

例如，在炎症反应中，一些细胞因子和蛋白质的产生与免疫激活密切相关。

斑马鱼模型可以被用来研究这些细胞因子和蛋白质的分泌和相关机制。

4. 斑马鱼模型在肿瘤研究中的应用肿瘤研究是斑马鱼模型在免疫学领域中的另一大应用。

斑马鱼造血系统发育过程中Hox基因的表达模式研究

位杂交试验。

我们发现在20hpf胚胎Hoxa2b表达在头部，Hoxa5a和Hoxa9a分别在中部和尾部。

但在3dpf幼鱼，这种前后表达模式消失。

Hoxa2b、Hoxa5a和Hoxa9a 都在假想的斑马鱼胸腺原基高表达。

在成体，Hoxa2b、Hoxa5a、Hoxa9a基因主要分布在脾红髓中，白髓中少量分布。

在肾脏，Hoxa2b、Hoxa5a、Hoxa9a基因主要分布在肾小管边缘及肾小管之间的间隙里。

由于Hox基因主要表达在分化程度较低的干细胞或者祖细胞中，因此我们推测Hoxa2b、a5a、a9a在肾脏和脾脏的表达部位可能反映了肾小管附近和脾红髓为斑马鱼肾脏造血干细胞增生并向髓样先祖细胞分化的场所。

为了验证上述假说，我们最后制备了MLL-AF9转基因斑马鱼。

MLL-AF9融合蛋白已被证明能进行增加髓样先祖细胞A簇Hox基因，特别是5`端Hox基因表达。

本研究我们发现Hoxa2b、a9a、b5a、b5b在转基因鱼相对于正常鱼高表达。

这些结果进一步证明Hox基因在造血细胞和它们的巢居场所呈特征性时空表达模式。

总之，Hox基因的时空表达模式，即Hox密码在Hox造血过程中发挥明显作用。

但到底是Hox基因的表达模式指引造血细胞迁移到造血器官，还是造血器官微环境授予造血细胞的Hox基因表达模式有待继续研究。

无论如何，本课题为进一步研究Hox基因在成体干细胞的迁移和巢居中的作用开辟了新方向。

关键词：同源盒基因，成体干细胞，巢居，实时荧光定量，原位杂交，斑马鱼The expression pattern of Hox genes in the development ofzebrafish hematopoietic systemsABSTRACTFrom Drosophila to mammals all Hox genes (homeobox gene) contain a highly conserved DNA-binding domain. The basic function of Hox genes is to control how and where parts of the body develop. During vertebrate evolution, Hox genes have co-opted to achieve a variety of functions. V arious downstream targets of Hox proteins identified within the developing central nervous system (CNS) suggest that Hox genes not only play a role in patterning of the CNS during early development, but also contribute to cell specification and identity. There is increasing evidence that Hox transcription factors play a direct role in normal proliferation and differentiation of hematopoietic cells, as well as tissue regneration and turmorigenesis. All hematopoietic progenitors express Hox genes in a pattern characteristic of the lineage and stage of differentiation of the cell. In murine immatured hematpoietic cells, at least 22 of the 39 Hox genes are expressed. Expression of clustered Hox genes, and enforced overexpression and knockout studies have demonstrated that dysregulation of Hox genes can lead to various developmental abnormalities and malignancies. Hox genes encode DNA-binding proteins that are deployed in overlapping domains along various body axes during embryonic development. This sequential activation of Hox genes in temporal and spatial mode, the Hox code, is critical for the proper positioning of segmented structures along those axes, which include the vertebrate, the limbs and also, the digestive and reproductive tracts. It remains unknown how Hox genes are regulated to determine the identity of hematopoietic stem cells and their derivatives which migrate and express most Hox genes.Zebrafish as a model organism is widely used in the study of human development and disease models. It has a number of advantages such as transparent embryos, easy cultivation, esay operation and powerful regenerative capacity. What the most important is, zebrafish has a complete blood circulatorysystem, and its hematopoietic genetic network in the evolutionary is highly conserved with the human’s. Compared to 39 Hox genes with humans and other mammals, zebrafish has at least 48 Hox genes. Therefore, zebrafish is an ideal model to further investigate Hox code in hematopoietic system.In this study, we first use quantitative RT-PCR or qRT-PCR,to examine the expressions of 41 Hox genes in 30 hpf and60hpf of zebrafish embryos and four adult organs. These adult organs are supposed to closely link to hematopoiesis. Our results show that the number and abundance of the Hox gene expression reduces when the embryos grow.There are 31 hox genes expressing at 30hpf, and 26 hox genes at 60 hpf. In adult organs, five Hox genes are expressed in, liver, 24 in heart, 22 in spleen and 23 in kidney. The majority of the expressed genes belong to the A & B cluster, and mostly are located the the 3 'end including paralogs 1 to 9. While the genes of a10b，a11a，a11b，c4a，c6b，c11a，c11b，c12b，d4a，d9a，d10a，d11a are transiently expressed, the expression of Hoxa2b，a5a，a9a， b2a，b8a and d3a are stably detected in heart, spleen and kidney. Consistently, Hoxa1a，a2b，a3a，a4a，a5a，a9a，a11a，b5a，b6a，b7a，b8a and d3a are highly expressed in the embryos, spleen and kidney, suggesting that these genes may be specific to hematopoiesis.To determine the spatio-temporal expression patterns of Hox genes, we then select three representative Hox genes and perform RNA in situ hybridizations. We find that the expression of Hoxa2b is located in the head area while, Hoxa5a and Hoxa9a are respectively expressed in the central and caudally part of the embryo of 20hpf. In 3dpf juvenile fish, however, the anterior-posterior (AP) patterns disappear. Hoxa2b, Hoxa5a and Hoxa9a genes become expressed in similar domain，localized in the presumptive thymic primordium. In adult, Hoxa2b、Hoxa5a、Hoxa9a genes are mainly distributed in the red pulp of the spleen, and in the edge of renal tubules. Given that Hox genes are mainly expressed in the lower differentiated stem cells e or precursors, we propose that the neighbor of renal tubules and red pulp of the spleen may be the homing sites where hematopoietic stem cells proliferate and differentiate into hemacytoblasts or myeloblasts.To verify our hypothesis mentioned above, we finally create the MLL-AF9 transgenic zebrafish. MLL-AF9 fusion protein has been shown to aggreasively increase the the expression of Hoxa cluster genes, particularly of 5’ Hoxa cluster genes. In this study we do find higher expression levels of Hoxa2b，a9a，b5a，b5b in transgenic zebrafish.These results further demonstrate that Hox genes are spatotemporally expressed in hematopoeitic cells and their homing locations.In conclusion, the Hox code refers to the expression pattern of Hox genes in a mode of time and spatial collinearity. This characteristic expressionm play critical roles in in the hematopoietic developemnt of the zebrafish. It is still unknown whether Hox expression pattern determines the homing and trifficking og hematopoietic cells or homing microenviroment confers Hox expression patterns to hematopoietic cells. Whatever, our study has proivided a new venue for us to further validate the functions of Hox gene in the migration and homing of adult stem cells.KEY WORDS: Homeobox gene, adult stem cells, Homing, Real-time PCR, in situ hybridization,zebrafish.目录第一章综述 (1)1.1 同源盒基因及Hox密码 (1)1.2 Hox基因家族的主要生理功能。

1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。

ｅｆｆｅｃｔｏｆｓｕｃｈｏｖｅｒｅｘＤｒｅｓｓｉｏｎｏｎｅｒｙｔｈｒｏｉｄｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓｂｙｕｓｉｎｇＯ— ｄｉａｎｉｓｉｄｉｎｅｓｔａｉｎｉｎｇｉｎａｎａｔｔｅｍｐｔｔｏｌａｙａｆｏｕｎｄａｔｉｏｎｆｏｒ
定基础。方法根据ｊａｋＺａ基因ＧｅｎＢａｎｋＮＭ一１３１０９３序列Ｖ５８１Ｆ突变位点上下游序列设计引物，以ｐＧＭ— Ｔ — ｊａｋ２ａＶ５８１Ｆ质粒载体为模板进行ＰＣＲ后，用ＤｐｎＩ酶对产物进行消化去除模板，转化感受态细菌ＤＨ５ａ，通过蓝白筛选酶切
鉴定阳性菌落，小量提取质粒，ＮｄｅＩ限制性内切酶线性化ｐＧＭ— Ｔ — ｊａｋ２ａｗｔ质粒，运用Ｔ７ＴｒａｎｓｃｒｉｐｔＡｉｄ酶对ｊａｋＺａ基
因进行体外转录及加帽。经凝胶电泳对目的片段进行鉴定。以２００ｎｇ／￣Ｌ浓度ｊａｋ２ａ — ｗｔｍＲＮＡ加帽产物显微注射斑马鱼单胞期受精卵，运用邻联茴香胺染色检测其对红系增殖的影响。结果完成ｐＧＭ－Ｔ～ｊａｋ２ａＶ５８１Ｆ的定点突变，成功构建ｐＧＭ－Ｔ — ｊａｋ２ａ — ｗｔ载体，ＤＮＡ序列分析的结果与ＧｅｎＢａｎｋ上的序列（ＮＭ一１３１０９３）一致，酶切线性化及体外转录加帽ｐＧＭ— Ｔ — ｊａｋ２ａ — ｗｔ，凝胶电泳鉴定ＲＮＡ分子大小与预期完全一致。对过表达ｊａｋ２ａ的鱼卵进行邻联茴香胺染色，发
第４２卷第６期第６９９页
２０１３年１２月
华中科技大学学报（医学版）
ＡｃｔａＭｅｄＵｎｉｖＳｃｉＴｅｃｈｎｏｌＨｕａｚｈｏｎｇ
Ｖｏ１．４２Ｎｏ．６Ｐ．６９９
现斑马鱼卵黄囊及ＩＣＭ区红细胞明显增多。结论成功完成斑马鱼ｐＧＭＴ — ｊａｋ２ａＶ５８１Ｆ基因定点突变并体外转录及加帽ｐＧＭ－Ｔ — ｊａｋ２ａｗｔ，体内过表达ｊａｋ２ａ对红系发生有显著影响。
ＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｗｕｈａｎ４３００３０，Ｃｈｉｎａ
ＡｂｓｔｒａｃｔＯｂｉｅｃｔｉｖｅＴｏｃｏｎｓｔｒｕｃｔｔｈｅｉａｋ２ａｗｔｖｅｃｔｏｒａｎｄｍａｋｅｉｔｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｎｔｈｅｚｅｂｒａｆｉｓｈａｎｄｔｈｅｎｔｏｅｘａｍｉｎｅｔｈｅ
ＣｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆＪａｋ２ａＶｅｃｔｏｒｏｆＺｅｂｒａｆｉｓｈａｎｄＥｆｆｅｃｔｏｆＩｔｓｏＶｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ
ｏｎＥｒｙｔｈｒｏｉｄＨｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ
ＺｈｕＸｉａｎｍｉｎ，ＪｉａｎｇＬｉｊｕｎ，ＺｈａｏＬｅｉｅｔａｌ
ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｅｍａｔｏｌｏｇｙ，ＴｏｎｇｊｉＨｏｓｐｉｔａｌ，ＴｏｎｇｊｉＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ，ＨｕａｚｈｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆ
Ｄｅｃ．２０１３
斑马鱼ｊａｋ２ａ载体构建及其对红系造血功能影响的初步研究＊
朱贤敏，姜利军，赵磊，关军，肖湘慧，张义成△
华中科技大学同济医学院附属同济医院血液科，武汉４３００３０
关键词：ｊａｋ２ａ基因；定点突变；体外转录；邻联茴香胺染色
中图分类号：Ｒ３ ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ １．２Ｄ０Ｉ：１０．３８７０／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２０７４１．２０１３．０６．０１６
摘要：目的构建ｊａｋ２ａ野生型（ｗｉｌｄｅｔｙｐｅ，ｗｔ）载体并完成其在斑马鱼体内的过表达，运用邻联茴香胺染色观察其
对红系造血的影响，为后续探讨斑马鱼骨髓增殖性疾病（ｍｙｅｌｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅｄｉｓｏｒｄｅｒｓ，ＭＰＤ）模型的Ｊａｋ／Ｓｔａｔ信号通路奠