葡萄球菌属检验

1．概述

葡萄球菌属是一类触酶试验阳性的革兰阳性球菌，包括金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、中间型葡萄球菌等35个种，17个亚种。金黄色葡萄球菌是最重要的致病葡萄球菌。

2. 标本类型

血液、尿液、脑脊液、穿刺液、脓液等标本。

3. 鉴定

3.1 形态与染色革兰阳性球菌，成单、双、短链或不规则葡萄状排列。

3.2 培养特性金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上的典型菌落为金黄色，周围有明显的?溶血环，部分菌落也可呈灰白色或柠檬色。在高盐甘露醇平板上呈淡橙黄色菌落。表皮葡萄球菌在血琼脂平板上菌落为白色或柠檬色，多数不溶血。

3.3 生化反应金黄色葡萄球菌触酶试验阳性，分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和甘露醇，不分解棉子糖和水杨苷，明胶、血浆凝固酶和DNA酶试验阳性，七叶苷试验阴性。

3.4 鉴别要点

3.4.1 本菌属特征革兰阳性球菌，呈葡萄状排列，触酶试验阳性。金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上菌落呈金黄色或白色，DNA酶和血浆凝固酶试验均阳性，发酵苷露醇。

3.4.2 与微球菌属的鉴别葡萄球菌属葡萄糖O/F试验为发酵型，镜下以葡萄状排列为主，菌体较小，而微球菌属为氧化型或无反应，镜下以四联排列为主，且菌体较大。

3.4.3 与链球菌属的鉴别葡萄球菌属O/F试验为发酵型，触酶试验阳性，链球菌属葡

萄糖O/F试验为氧化型，触酶试验阴性。

3.4.4 凝固酶试验阳性葡萄球菌的鉴别见下表1。

表1 凝固酶阳性葡萄球菌鉴别的关键性试验

菌名

凝固

酶触酶溶血

硝酸

盐

海藻

糖

半乳糖

苷酶

金黄色葡萄球菌金黄色亚

种

+++++-

金黄色葡萄球菌厌氧亚种+-+---

施氏葡萄球菌聚集亚种++++-ND

中间葡萄球菌++d+++

海豚葡萄球菌++++-ND

S.lutrae++++++

猪葡萄球菌d+-++-

注：“+”为90%以上菌株为阳性，“-”为90%以上菌株为阴性，“d”为11%-89%阳性，“ND”为无资料。

3.5 操作步骤

3.5.1 涂片、染色观察菌落特征，在血平板上挑取可疑菌落，涂片染色镜检。

3.5.2 触酶试验参见《触酶试验标准操作规程》。

3.5.3 凝固酶试验参见《凝固酶试验标准操作规程》。

3.5.4 鉴定从血琼脂平板上挑取纯菌落，用微生物鉴定仪或传统生化反应进行细菌鉴定。

4. 药敏

参见《药物敏感性试验标准操作规程》及CLSI M100-S20最新版本文件。

5. 质量控制

参见《质量管理程序》。

6. 检验结果解释与分析

6.1 由于葡萄球菌分布广泛，从临床标本中分离到金黄色葡萄球菌时，将其定为致病菌时应慎重。应根据凝固酶试验进一步确认。对可疑菌株的鉴定，最好利用商品化的鉴定系统根据生化图谱进行确定。表皮葡萄球菌分离自导管相关血流感染时，通常视为致病菌。溶血性葡萄球菌从泌尿感染病人分离得到时，尤其是细菌量较大或作为优势菌时，通常被视为致病菌。

6.2 甲氧西林耐药的金黄色葡萄球菌（MRSA）对多种广谱强效抗菌药物呈多重耐药性。如果检测出耐甲氧西林的葡萄球菌菌株则报告耐所有青霉素、头孢菌素、碳青霉烯类和?-内酰胺药/?-内酰胺酶抑制剂类抗生素，对氨基糖苷类和大环内酯类抗生素常协同耐药。若葡萄球菌属对四环素敏感，则对多西环素和米诺环素敏感。某些菌对四环素中介或耐药，而对多西环素和米诺环素敏感。临床感染葡萄球菌的病人用喹诺酮类治疗3-4日后，原来敏感的葡萄球菌易产生耐药。所以对这类葡萄球菌需多次反复进行药敏试验。大环内酯类

耐药葡萄球菌包括固有耐药和诱导耐药。所以临床试验室须进行“D”试验以检测克林霉素诱导性耐药，根据“D”试验结果来报告克林霉素的耐药性。

7. 临床意义

葡萄球菌属在自然界分布很广。存在于空气、水、尘埃及皮肤上的葡萄球菌大多数无致病性。金黄色葡萄球菌主要引起局部组织的化脓性感染（疖、痈和创伤感染）、菌血症、心内膜炎等全身感染等，也可引起骨髓炎、化脓性关节炎、肺炎和深部脓肿等。腐生葡萄球菌引起尿道感染、前列腺炎、外伤和菌血症等。溶血葡萄球菌引起心内膜炎、菌血症、腹膜炎、尿道感染、外伤、骨折和关节炎等。

MRSA的治疗：轻度感染可选用SMZ-TMP和喹诺酮类，严重全身感染选用万古霉素或其他糖肽类药物。

8. 鉴定流程

[1]

[2] 2007

[3] 南京：东南大学出版社，2006

[4] Murray PR. Manual of Cinical Microbilogy. 9th ed.Washington:ASM Press,2007

[5] ISO 15189：2007医学实验室-质量和能力认可准则. 2007