实验 葡萄球菌属和链球
球菌的培养与鉴定(实验)
链球菌属
（一）菌落特征（血琼脂平板） • 肺炎链球菌
– 灰色，较小， α溶血，“脐窝”状凹陷，有荚膜菌株可 成粘液样
• 化脓性链球菌（A群）
– 灰白色，较小，半透明，无/有光泽，周围有较大的β 溶血环
• 无乳链球菌（B群）
– 灰白色，较A群大，平坦，有光泽，不透明，周围有狭 窄的β溶血环
蕈糖 乳糖 麦芽糖 蔗糖 甘露糖
四、操作步骤
（2）肺炎链球菌
Optochin敏感试验 胆汁溶菌试验（有对照）
（3）化脓性链球菌与无乳链球菌
杆菌肽敏感试验 CAMP试验
四、操作步骤
（4）粪肠球菌
触酶试验 65g/LNaCl 胆汁-七叶苷试验 精氨酸双水解酶试验（有对照管） 甘露醇 山梨醇 阿拉伯糖 棉子糖
球菌的培养与鉴定
苏州大学附属第二医院 刘婷婷
1
实验目的
2
实验内容
3
实验材料
4
操作步骤
5
实验结果
一、实验目的
• 掌握葡萄球菌属、链球菌属、肠球菌属的 菌落特点、染色形态及鉴别实验；
• 了解其它球菌的菌落特点、染色形态及鉴 别。
二、实验内容
葡萄球菌属
金黄色葡萄球菌 表皮葡萄球菌
链球菌属
肺炎链球菌 化脓性链球菌 无乳链球菌
3 结果
在两种细菌划线交界处出现箭头状透明溶血环区 为阳性，否则为阴性。
CAMP试验
链球菌属
2、肺炎链球菌
Optochin敏感试验：＋ 胆汁溶菌试验：＋ 荚膜肿胀试验：＋ 分解菊糖
Optochin敏感试验
1 原理
Optochin能干扰肺炎链球菌叶酸合成，抑制 细菌生长，故肺炎链球菌对其敏感。
实验五 葡萄球菌与链球菌
葡萄球菌与链球菌
实验四 目的要求：
葡萄球菌与链球菌
1、熟悉致病性葡萄球菌与链球菌的微生物学诊断方法。
2、掌握致病葡萄球菌与链球菌形态、培养特性。
实验内容：
一、显微镜观察致病葡萄球菌与链球菌形态。
二、实验观察致病葡萄球菌与链球菌培养特性。
三、链球菌的CAMP试验（示教）。
致病性葡萄球菌常引起各种化脓性疾患、 败血症和脓毒败血症。 葡萄球菌属分为3种：金黄色葡萄球 菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌。
致病葡萄球菌形态
致病葡萄球菌形态
致病葡萄球菌形态
葡萄球菌培养特性
葡萄球菌培养特性
葡萄球菌培养特性
葡萄球菌的微生物学检验程序：
病料 （脓汁、渗出液、血液乳汁等） 直接涂片镜检：普通染色、革兰氏染色 培养：增菌培养 普通肉汤 分离培养 血液平板 普通平板
链球菌形态
链球菌形态
链球菌形态
实验四
葡萄球菌与链球菌
实验报告：1、描述致病葡萄球菌与链球菌培养特性。 2、实验观察的致病葡萄球菌与链球菌基本形态。
在普通琼脂平板形成湿润、光滑、隆起的 圆形菌落，直径１～２mm。菌落颜色依菌 株而异，初呈灰黄色，继而为金黄色、白色 或柠檬色。致牛乳腺炎以及耐药菌株常为深 黄色。色素的形成也依培养条件而异，通常 在22℃或在含糖、牛乳、血清的培养基中， 产生色素较多；有氧及CO2条件下易形成色 素。 在血液琼脂平板形成的菌落较大，产溶血 素的菌株为病原菌，在菌落周围呈现明显的 β溶血。
链球菌形态
链球菌培养特性
链球菌培养特性
链球菌培养特性
链球菌培养特性
链球菌培养特性
链球菌的微生物学诊断
病料
（脓汁、渗出物病灶 病料、呼吸道分泌物 等；败血症：心血、 实质器官等）
2011实验4葡萄球菌属的检验
实验一葡萄球菌属的检验金黄色葡萄球菌(以下简称金葡菌)在食品污染病例中占据十分重要的位置，同时也是医院临床感染导致肺炎及伤口感染的主要病原菌，占医院感染病例的l0％；而抗生素的广泛应用导致了耐药菌株尤其是耐甲氧西林葡萄球菌的大量出现，使其成为与艾滋病、乙型肝炎并列的世界三大感染顽疾。
因此对金葡菌的检测研究一直以来备受重视，其研究方向主要集中在两个方面：耐甲氧西林金葡菌的检测及产致病性毒素金葡菌的检测。
传统的检测方法先做选择性培养，然后做鉴定试验，包括血浆凝固酶试验、免疫学试验、耐热核酸酶活性试验及各种糖、醇发酵试验及新生霉素敏感试验等，其优点是操作简便，所需设备简单，但一般都存在耗时长、灵敏性差等缺点，且Baird-Parker选择性培养时无法识别受热处理而损伤的菌体；凝固酶试验及耐热核酸酶试验与传统的经典方法有很好的对应性，但一些凝固酶及耐热核酸酶阴性菌同样可以产生致病性毒素，或其他少数葡萄球菌也可以产生耐热核酸酶或相似酶而导致假阳性，一定程度上限制了酶活性检测的应用；成品凝集检测试剂盒虽有很好的特异性，但在实际样品的检测时灵敏性差异明显，且成本较高。
随着分子生物学技术的广泛应用，对金葡菌的检测也从传统方法过渡到以PCR及杂交探针、基因芯片为主的现代技术手段，从基因水平更准确、灵敏地检测病原菌的存在。
表4-1-1 三种葡萄球菌的主要性状和生化反应表4-1-2 葡萄球菌属常用试验的用途【实验目的】1. 熟悉葡萄球菌的形态、染色及培养特征。
2. 掌握葡萄球菌血浆凝固酶试验的原理、方法和临床意义。
3. 了解葡萄球菌肠毒素的测定。
【实验器材和材料】1. 菌种金黄色葡萄球菌A TCC25923、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌液体培养物（接种用、新生霉素试验用、肠毒素试验用）、沸水浴加热灭活的三种菌液1滴/组（耐热核酸酶试验用）2. 培养基普通琼脂平板、血琼脂平板、甘露醇发酵管甲苯胺蓝核酸琼脂、10g/L盐水琼脂、液体培养基（肠毒素试验用）3. 试剂新鲜兔血浆或人血浆、3%H2O2、致敏胶乳试剂、新生霉素纸片、生理盐水、载玻片、小试管、革兰染色液、肠毒素血清、标准抗毒素血清4. 接种环、打孔器、尺子5. 沸水浴6. 投影仪【方法和步骤】1. 划线接种：用接种环将三种葡萄球菌分别划线接种普通平板和血琼脂平板。
葡萄球菌实验报告
葡萄球菌实验报告葡萄球菌实验报告引言：葡萄球菌是一种常见的细菌，可以存在于人体、土壤、水源等多种环境中。
它既可以是人类的益友，也可以是人类的健康威胁。
本实验旨在研究葡萄球菌的特性和对人体的影响，以期增进对葡萄球菌的了解。
实验方法：1. 实验前准备：a. 收集葡萄球菌培养基和培养器具；b. 消毒培养器具，以确保实验的准确性；c. 选择适当的实验地点，保持实验环境的洁净。
2. 葡萄球菌培养：a. 取一定量的葡萄球菌培养基放入培养皿中；b. 用无菌的针头将葡萄球菌接种到培养基上；c. 将培养皿放入恒温箱中，设定适当的温度和湿度。
3. 菌落观察：a. 每天观察培养皿中的菌落形态和数量；b. 记录菌落的颜色、形状和大小等特征。
4. 抗生素敏感性测试：a. 准备含有不同抗生素的培养基；b. 将葡萄球菌接种到含有不同抗生素的培养基上；c. 观察不同抗生素对葡萄球菌的抑制效果。
实验结果：1. 菌落观察：在培养皿中，我们观察到葡萄球菌形成了黄色的圆形菌落。
菌落的大小约为2-3毫米，表面光滑而凝结。
2. 抗生素敏感性测试：我们测试了青霉素、红霉素和氯霉素对葡萄球菌的抑制效果。
结果显示，葡萄球菌对青霉素和红霉素敏感，而对氯霉素具有抗性。
讨论：1. 葡萄球菌的特性：葡萄球菌是一种革兰氏阳性细菌，可以通过空气、食物和接触传播。
它可以在人体的皮肤、喉咙和鼻腔内定植，并且在免疫力低下时引发感染。
葡萄球菌的菌落形态和颜色可以用于鉴定和分类。
2. 葡萄球菌对人体的影响：葡萄球菌可以引发多种感染，包括皮肤感染、呼吸道感染和食物中毒等。
它产生的毒素可以导致发热、疼痛和炎症等症状。
此外，葡萄球菌还可以产生耐药性，对抗生素的治疗产生挑战。
3. 抗生素敏感性的意义：抗生素敏感性测试可以帮助医生选择合适的抗生素治疗感染。
对于葡萄球菌来说，选择对其有效的抗生素可以提高治疗效果，减少抗药性的发展。
结论：通过本实验，我们了解了葡萄球菌的特性和对人体的影响。
葡萄球菌和链球菌的微生物学检查
青岛农业大学兽医微生物实验报告题目：葡萄球菌和链球菌的分离鉴定姓名：阿芳学院：动物科技学院专业：动物科学班级： 201X级X班学号：（201XXXXX）指导教师：任慧英完成日期 2014年3月22日葡萄球菌和链球菌的分离鉴定摘要目的：对实验提供的A、B两种细菌进行分离鉴定。
主要方法：通过对细菌的分离培养，形态的观察以及生化反应的现象等方法进行鉴定。
关键词：葡萄球菌；链球菌；分离鉴定引言1葡萄球菌是一群革兰氏阳性球菌，因常堆聚成葡萄串状，故名。
多数为非致病菌，少数可导致疾病。
葡萄球菌是最常见的化脓性球菌。
无鞭毛，无荚膜，不产生芽胞，营养要求不高，在普通培养基上生长良好，在含有血液和葡萄糖的培养基中生长更佳，需氧或兼性厌氧，少数专性厌氧。
28～38℃均能生长，致病菌最适温度为37℃，PH为4.5～9.8，最适为7.4。
在琼脂平板上形成圆形凸起，边缘整齐，表面光滑，湿润，不透明的菌落。
葡萄球菌在血琼脂平板上形成的菌落较大，有的菌株菌落周围形成明显的完全透明溶血环（β溶血），也有不发生溶血者。
多数葡萄球菌能分解葡萄糖、麦芽糖和蔗糖，产酸不产生气。
致病性菌株能分解甘露醇。
葡萄球菌在自然界中分布很广，健康禽类的皮肤、羽毛、眼睑、粘膜、肠道等都有葡萄球菌存在。
链球菌是化脓性球菌的另一类常见的细菌，常排列成链状，无芽胞，无鞭毛，有菌毛样结构，革兰氏染色阳性。
需氧或兼性厌氧，有些为厌氧菌。
营养要求较高。
普通培养基中需加有血液、血清、葡萄糖等才能生长。
最适温度37℃，最适PH7.4～7.6，血琼脂平板上形成灰白色、有乳光、表面光滑、边缘整齐、直径0.5—0.75mm的细小菌落，不同菌株有不同溶血现象。
根据在血琼脂培养基上的溶血特征可分为三种不同类型：α型溶血性链球菌又称草绿色链球菌，菌落周围出现草绿色溶血环，致病力弱。
β型溶血性链球菌产生强烈的溶血毒素，在血琼脂培养基上，可使菌落周围出现宽2～4毫米、界限分明、无色透明的溶血环，致病力强。
葡萄球菌属的常规鉴定重点标准操作程序
葡萄球菌属旳常规鉴定原则操作程序1 概述葡萄球菌属是一类触媒实验阳性旳革兰阳性球菌，涉及金黄色葡萄球菌，表面葡萄球菌、腐生葡萄球菌等32个种。
是临床最常用旳化脓性球菌，广泛分布于自然界中，在人体表面鼻、咽、肠道也常常存在。
2 形态与染色革兰阳性球菌，直径0.4~1.2µm成单、双、短链或不规则状排列。
在液体培养基浓汁标本中，往往排列成双或短链状多数有鞭毛。
3 培养特性金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上典型菌落为金黄色，周边有明显旳透明（β）溶血环，部分菌落呈橙色，在高盐甘露醇平板上呈橙色菌落。
表皮葡萄球菌等其她葡萄球菌在血琼脂平板上菌落为白色或柠檬色，不溶血。
4 生化反映触酶实验阳性，多数能分解葡萄糖、麦蚜糖、蔗糖和甘露醇。
不分解棉籽糖和水杨苷，液化明胶，血浆凝固酶和DNA酶实验分阳性。
5 鉴别要点5.1 本菌属特性：触酶实验阳性，革兰阳性球菌，葡萄状排列，菌落中档大小，中档干燥。
5.2 与微球菌属旳鉴别：触酶实验都为阳性，但O∕F实验葡萄球菌属为发酵型，而微球菌为氧化型或无反映，并且菌体较葡萄菌属更大，排列呈四联状为主。
5.3 与链球菌属旳鉴别：葡萄球菌属触酶实验都为阳性，而链球菌为阴性，O∕F实验葡萄球菌属为发酵型而链球菌为氧化型。
5.4 凝固酶阳性葡萄球菌旳鉴别见下表。
结合型凝游离型凝鸟氨酸脱菌名PYP实验DNA实验VP实验固酶实验固酶实验羧酶实验金黄色葡萄球菌+ + - + + -中间型葡萄球菌- + + + - -施氏葡萄球菌+ - + + + -路邓葡萄球菌+ - + - + +注：“+”为90%以上菌株为阳性，“--”为90%以上菌株为阳性。
5.5 凝固酶阳性葡萄球菌旳鉴别见下表+腐生葡萄球菌——+ V + +—。
葡萄球菌链球菌
第二节 链球菌属
链状排列 引起化脓性炎症、猩红热、新生儿败血症、 细菌性心内膜炎、风湿热等过敏性疾病。
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第二节 链球菌属
一、链球菌 ㈠ 生物学特性 1.形态染色： G+球形或
椭圆形、呈链状排列、 液体培养基中链长， 无芽孢、无鞭毛。
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第二节 链球菌属
2.培养特性：①需氧或 兼性厌氧②营养要求 较高，需加血清、血 液。液体培养基中为 絮状或颗粒状沉淀生 长；血平板：灰白色、 表面光滑、凸起、细 小菌落，出现不同溶 血环。
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第二节 链球菌属
㈣耐药性 青霉素是抗链球菌的首选药物，此外头孢菌 素、红霉素、万古霉素也是治疗链球菌感 染的选择药物。
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第二节 链球菌属
㈢微生物学检查 1.标本采集： 根据不同感染部位采集标本 2.检验程序
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第二节 链球菌属
3.检验方法 ⑴直接镜检：革兰染色 ⑵分离培养： ①杆菌肽敏感试验：A群（敏感） ②Optochin敏感试验：肺炎链球菌﹥18mm ③胆盐溶菌试验：肺炎链球菌（+） ④血清学分类鉴定：streptex ⑤抗SLO试验（仪器法）
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第二节 链球菌属
3.生化反应：触酶阴性，能分解多种糖类、 蛋白质和氨基酸 不分解菊糖、不被胆汁溶解
4.抗原构造：三种 ①蛋白质抗原（表面抗原）：型特异性 ②多糖抗原（C抗原）：群特异性，分为20个
群 ③核蛋白抗原或称P抗原，无特异性
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第二节 链球菌属
5.分类 ⑴根据溶血现象分类：3类 ①甲型：草绿色溶血（ α ），条件致病菌 ②乙型：2～4 mm宽的透明溶血环，致病性强 ③丙型：无溶血环，非致病性
实验报告葡萄球菌的种类
实验报告葡萄球菌的种类实验报告：葡萄球菌的种类1. 引言葡萄球菌（Staphylococcus）是一类革兰氏阳性球菌，由属于“葡萄簇大肠杆菌科”这一科的细菌组成。
葡萄球菌被广泛分布于自然界的土壤、水中、人体皮肤、鼻腔等处，并且主要以环境中的细菌形态存在。
本实验旨在研究葡萄球菌的种类，为进一步了解和应对葡萄球菌相关感染提供基础知识。
2. 材料与方法（1）实验室提供的葡萄球菌样本。
（2）营养琼脂平板培养基。
（3）培养皿。
（4）灭菌针。
（5）培养细菌的操作台、培养箱、离心机等设备。
3. 实验步骤（1）从葡萄球菌样本中取一小部分，利用灭菌针将其划入含有营养琼脂的培养皿上。
（2）高温高压灭菌培养皿，以保证培养基的无菌状态。
（3）将培养皿置放在37的培养箱中进行培养。
（4）观察培养皿上的菌落生长情况，并利用形态学特征和生理生化检测手段进行初步鉴定。
（5）若初步鉴定结果显示为葡萄球菌，可进一步进行进化生物学检测。
4. 结果与讨论根据实验结果，我们成功培养出了葡萄球菌的不同种类，并进行了初步鉴定。
通过观察菌落生长情况和形态学特征，我们发现葡萄球菌的种类多样且具有一定差异。
根据生理生化检测结果，我们可以进一步确定具体的葡萄球菌种类。
葡萄球菌根据其对某些抗生素的敏感性以及席菲林的产量，可分为不同的亚种。
例如，金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是最常见的葡萄球菌亚种之一，其在琼脂平板上形成金黄色菌落。
此外，盘尼西林耐药金黄色葡萄球菌（Methicillin-resistant Staphylococcus aureus，MRSA）是一种对多种抗生素具有抗性的葡萄球菌菌株。
另外，葡萄球菌根据产生酶的类型可分为凝固酶阳性菌种和凝固酶阴性菌种。
其中，凝固酶阳性菌种表明能够产生凝固酶，如库林葡萄球菌（Staphylococcus epidermidis）和库拉耶葡萄球菌（Staphylococcus saprophyticus）。
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（一）菌落特点、菌体形态及染色性
1.葡萄球菌
金黄色葡萄球菌
2.链球菌
肺炎链球菌
3.肠球菌
三步骤和方法
革兰氏阳 性球菌鉴 定流程
1 触酶 2 O/F 3胆盐溶菌
4凝固酶
5新生霉素
6杆菌肽
7CAMP 四
（二）鉴定相关试验
1.触酶试验
2.凝固酶试验
3.甘露醇发酵试验
原理：致病性葡萄球菌多能发酵甘露醇产酸， 使培养基由紫色变为黄色。
4.新生霉素敏感性
5. Optochin敏感试验
原理： Optochin可抑制肺炎链球菌的生长。 结果判定：抑菌圈直径≥14mm为阳性。反 之阴性。
6. 胆汁七叶苷实验
方法：待测菌接种胆汁-七叶苷琼脂培养基， 35度孵育18-24h。 结果：细菌生长，培养基变黑色为阳性，不变 色为阴性。
实验 葡萄球菌属、链球菌属 和肠球菌属的培养和鉴定
临床病原生物学教研室
一目的要求
1. 熟悉葡萄球菌、链球菌和肠球菌的菌落 特点、菌体形态及染色性。 2. 掌握葡萄球菌、链球菌和肠球菌的分离 培养、鉴定方法和常用鉴定实验。
二器材和试剂
1.菌种 金葡、表葡、腐生，甲、乙、丙链 、肺链和肠球菌等。 2.培养基 普通培养基、血平板等。 3.试剂 3%过氧化氢、去氧胆酸钠、新鲜血 浆和细菌微量生化培养管等。 4.其他 新生霉素、杆菌肽 、Optochin纸片、 生理盐水、载玻片等。
7. 65g/LNaCL生长试验
方法：将肠球菌接种于高盐肉汤培养基中， 孵育18-24h。 结果：有细菌生长为阳性，不生长为阴性。
四注意事项
1.触酶试验不宜用血平板上的菌落，会出现 假阳性，陈旧培养物会丢失触酶活性而又出 现假阴性。因此每次试验应做阴(链球菌)阳 (金葡)对照。 2.凝固酶试验玻片法应注意控制好时间， 10S内观察结果，且必须制备浓厚的菌悬液。