奈瑟菌的分离和鉴定

（3）生化反应特点

淋球菌只分解葡萄糖，产酸不产气， 不产生靛基质，不产生硫化氢，硝酸盐 还原试验阴性，氧化酶及触酶试验均阳 性。
2. 标本采集：
– （1）男性 尿道炎患者，先以无菌生理盐水清洗尿道 口，采集尿道脓性分泌物；前列腺炎患者则从直肠侧 对前列腺进行按摩，待分泌物排出后采集。 – （2）女性 尿道炎患者，先以无菌生理盐水清洗尿道 口，从阴道后壁由后向前压迫尿道，使分泌物排出， 然后用无菌拭子或接种环采集；对于宫颈炎患者，先 无菌生理盐水清洗宫颈口和阴道壁，再用阴道窥镜压 迫子宫阴道部，使分泌物排出，然后用无菌拭子或接 种环采集标本；合并肠炎的患者，可在直肠镜下，用 无菌绵拭子采集直肠窝粘膜的粘液进行送检。 – （3）眼分泌物、血液、关节液等 以无菌操作方式采 集。
（2）培养特点

本菌对营养要求高，需用巧克力平 板，或含万古霉素、多粘菌素及制霉菌 素的Thayer-Martin培养基（GC琼脂加生 长添加剂）才能生长。初次分离需供给 5~8%CO2，最适生长温度为36~37℃，最 适pH值为7.5。经48h培养，形成圆形、 不透明、灰白色凸起，细小颗粒状菌落。 直径0.6~1.0mm，进一步培养，菌落可呈 粘液样。
（2）培养检查法
1）脑脊液 取脑脊液离心沉淀物，立刻接种巧
克力平板，37℃，5~8%CO2环境培养18~24h。 如脑脊液混浊可直接种入培养基。 2）瘀斑渗出物 渗出物直接涂于巧克力平板上， 37℃，5~8%CO2环境培养18~24h。 3）鼻咽腔分泌物 将绵拭标本立即涂于， P.V(Polymyxin B.Vancomycin)卵黄琼脂或P.V 巧克力平板一端，再用接种环划线分离，进行 培养观察。 4）血液 抽取静脉血5~8ml，立刻接种注入血 培养瓶，按血液细菌培养常规操作。
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奈瑟菌的分离和鉴定
卫生部北京医院
陈东科
—、脑膜炎奈瑟菌

脑膜炎奈瑟菌(Neisseria.meningitidis) 简称脑膜炎球菌，是引起流行性脑脊髓 炎（简称“流脑”）的病原菌。多发年 龄在5~29岁。对本菌的鉴定是确定诊断 的重要依据，同时给临床治疗提供参考 价值。

人类是脑膜炎球菌的唯一宿主。流行性脑 脊髓炎病人和带菌者是本病的传染源。本病经 飞沫传染，潜伏期1~4d。细菌首先侵害鼻咽腔， 引起上呼吸道感染或局部炎症。当少量细菌侵 入血流时，可引起菌血症突发恶寒、发热、恶 心、呕吐等，并有出血或红斑性皮疹及脾肿大。 当大量细菌侵入血流时，由血液或淋巴到达脑 脊髓膜则发生脑脊髓炎的症状和体症。在我国 以A群流行为主。
1. 生物学性状
• （1）形态与染色 脑膜炎球菌为革兰阴性双球菌，菌体呈 肾形或豆形，成双排列凹面（短轴）相对。由病人体内新 分离的菌株有多糖荚膜。 • （2）培养特点 本菌为专性需氧菌，营养要求高， 5~8%CO2 可促进生长，其最适生长温度为 36~37℃，最适 pH值为7.4~7.6。在巧克力平板上经18~24h培养，形成圆形、 光滑、透明、湿润、边缘整齐菌落。直径2~3mm，在血平 板上不溶血。培养时间延长，由于细菌自溶酶的作用，菌 落可变成酪样或胶样。 • （3）生化反应特点 脑膜炎球菌可分解葡萄糖、麦芽糖， 产酸不产气。不分解蛋白质，不产生靛基质，不产生硫化 氢，不分解尿素，硝酸盐还原试验阴性，氧化酶试验阳性。
三、其他奈瑟菌
其他奈瑟菌大多寄居在人的上呼吸道中，
很少有致病性。菌落较干燥，有咬琼脂 的现象，大多呈黄色。也有少数菌落呈 光滑型，且无色素，易于脑膜炎奈瑟菌 及嗜血杆菌菌落相混淆，应注意鉴别， 奈瑟菌落一般较粘，用接种环不易刮取。
淋病奈瑟菌是否需要进行β内酰胺酶的检测？
一般来说，不需要对淋病奈瑟菌中的β-内酰 胺酶进行检测。 当前经验治疗淋病的药物为头孢曲松、头孢 克肟或喹诺酮类抗菌药物，而这些药物的抗菌活 性均不受β-内酰胺酶的影响。由于多年前就已经 不提倡用青霉素进行经验治疗，因此，不必要对 淋病奈瑟菌进行β-内酰胺酶的测试。除非在有些 国家，青霉素仍在使用且有一定的抗菌活性，在 这种情况下，就有必要进行β-内酰胺酶的检测。 另外，出于流行病学调查的需要，美国一些公共 卫生部门可能也会要求实验室进行β-内酰胺酶的 测试。但在大多数情况下，绝大部分的公共卫生 部门可以从国家性、地区性和当地的耐药监测网 络中得到这些数据，从而不需要实验室常规对林 病奈瑟菌进行β-内酰胺酶的检测。
2. 标本采集：

根据病期不同，采集的标本也有所 不同。菌血症期病人可采取血液；出现 出血点或瘀斑者，可挑取瘀斑渗出液； 如出现脑脊髓膜刺激症状者，必要时可 抽取脑脊液；上呼吸道感染期的疑似病 人和带菌者，可取鼻咽腔分泌物进行检 查。因该菌易自溶，故应立即送检，最 好在床边接种。
3. 检验方法：
二、淋病奈瑟菌

淋病奈瑟菌（N.gonorrhoeae）简称 淋球菌，它是淋病的病原菌。主要通过 不洁性交引起泌尿生殖系统化脓性炎症， 也可通过污染器械、带菌衣物、用具发 生间接污染。也有肛门及咽部的淋球菌 感染病例。新生儿经过产道时，可被感 染而患淋病性眼结膜炎。
1. 生物学性状：
• （1）形态与染色 • 淋球菌的形态与脑膜炎球菌很相似，菌体呈 球形、肾形或豆形，成对排列，两球菌接触面平 坦，形似一对黄豆。革兰染色阴性，无芽孢、无 鞭毛、有荚膜。在急性淋病患者尿道脓汁标本中 可见细菌被吞噬于中性粒细胞内；慢性淋病时多 在细胞外。
注意事项：
• 最好在治疗前采集样品；取材前不论 有无症状一律禁用消毒药；对女性患者取 材时不要碰阴道粘膜，以防污染正常菌群； 由于本菌抵抗力甚弱，标本采集要迅速并 立即送检，最好床边接种，立即培养。
3. 检验方法：
• （1）直接检查法 取标本直接涂片进行革兰染色， 急性期在脓细胞内可找到许多革兰阴性双球菌， 有诊断意义。本法最适用于泌尿生殖道标本，男 性与培养结果符合率达到98%，一般可不作培养； 女性与培养结果符合率仅达50%左右，需进行培 养鉴定。 • （2）培养检查法 采取脓汁或粘液标本后，应立 即接种于预温的巧克力平板上进行分离培养。 （3）生化反应 取纯培养物，如其形态、菌落特 征典型，氧化酶阳性，可按表1进行鉴定。
• （1）直接检查法：
• 1）脑脊液 以无菌方法获得脑脊液标本后，经3000r/min离 心 30min ，取沉淀物，首先接种培养，然后再涂片染色检 查。通常制两张涂片，一张作革兰染色，一张作美蓝染色 进行镜检。若脑脊液较清应先增菌，即在脑脊液中加入少 量葡萄糖肉汤培养液，经37℃4~6h增菌培养后，再行涂片 染色镜检，可提高阳性检出率。一般情况下，患病早期的 脑脊液中脑膜炎球菌数量较少，且大多数在细胞外；在疾 病后期菌量增大，大多数在细胞内。 • 2）瘀斑（出血点） 选择细小的色泽鲜红，境界明显的瘀 点，或无瘀点时用充血皮肤，经消毒干燥后刺入 0.5cm ， 用清洁玻片采血三滴，涂成血膜片，自然干燥。用美蓝或 革兰染色镜检。第一滴血含菌量比第二、三滴血高数倍， 故不能按常规采血弃去第一、二滴血。
（3）生化反应

取纯培养物，如其形态、菌落特征 典型，氧化酶阳性，可按表1进行鉴定。
（4）凝集试验

包括血清凝集试验、SPA协同凝集 试验、反向乳胶凝集试验等方法。
（5）荚膜肿胀试验

取一接种环菌掖或脑脊液，于玻片 上，再加一环抗血清及二环吕氏美蓝液 混合，加上盖玻片，20min，用油镜观察 荚膜是否肿胀，同时用盐水作对照。此 试验仅适用于A群和C群菌株。
表1 G-球菌的鉴别特征



——————————————————————————————————— 菌 名 巧克力琼脂 营养琼脂 葡萄糖 麦芽糖 还 原 还 原 DNA酶 乙酰脂酶 （22℃） （35℃） NO3 NO2 ——————————————————————————————————— 脑膜炎奈瑟菌 — — + — — — — — 淋病奈瑟菌 — — + + — V — — 卡他莫拉菌 V + — — + + + + 其他奈瑟菌 V + — — —* V — — ——————————————————————————————————— *粘膜奈瑟菌阳性。V:不定。