高效液相法测人参皂苷
高效液相色谱法测定14种人参皂苷的研究
相 关系 数 检 出 限
（ ｒ ２）
０ ． ９ ９ ９ ３
定量 限
（ ｍ Ｓ ／ ｍ Ｌ）
Ｏ ． Ｏ ２
５ ５ ６ ０ ６ ３
０ Ｏ ７ ７
ｌ Ｏ Ｏ １ ０ ０ ２ ３
（ ｍ ｇ ／ ｍ Ｌ ）
０ ． ０ ０ ６
Ｒ ｇ ｌ
Ｒ ｅ
表 １ ． ２回归分 析 、 栓 出限和 定 量 限
皂 苷 线 性 范围
（ ｍ ｇ ／ ｍ Ｌ ）
Ｒ １ ０ ． ０ ０ ８ － ８ ． ０ ０ ０ ｙ ＝１ ５ ３ ９ ． Ｉ ｘ ＋ ３ ８ ． ６ ８ ９
３ ８
４ ５
３ ２
３ ２
６ ８
６８
线 性方 程
高效液 相色谱法测 定 １ ４种人参 皂苷 的研 究
陈书华 １ ， 朴文香 ， 白龙律 ， 迟 美丽 ， 金恩华 ， 马正赫 ， 武伦鹏
（ １ ． 延边 朝鲜 族 自治 州产品 质量检 验 所 ， 吉林 延边 １ ３ ３ ０ ０ ０ ； ２ ． 国家参 茸产 品质 量监督 检验 中心 ， 吉林 延 边 １ ３ ３ ０ ０ ０ ； ３ ． 延边 大 学 ， 吉林 延 边
１ ３ ３ ０ ０ ２ ）
摘要 ： 为 准确 可靠 的定 量分析 １ ４ 种 人参 皂苷 ， 本 文通过 对 高效 液相 色谱 条件 进行 优 化 ， 确定 了测 定人 参 皂苷 的 ＨＰ Ｌ Ｃ 条件 ， 结果表
明， 最佳 分析 条件 流动相 为 乙氰 和水 ； Ｃ １ ８ 柱； 检 测 波长 ： ２ ０ ３纳米 ； 流速： １ ． ０毫升 ／ 分 。该分 析 方 法可 以达 到很 好 的分 离效 果 ， 通过 精 密
高效液相色谱法同时测定人参药材中的6种人参皂苷含量
高效液相色谱法测定人参超微粉中人参皂苷的含量
高效液相色谱法测定人参超微粉中人参皂苷的含量皂苷类是人参的主要成分和药效成分，采用高效液相色谱法可准确测定人参中各皂苷类成分，本文主要介绍采用液相色谱测定在超微粉碎技术下得到不同粒度的粉末中人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1的含量。
标签：高效液相色谱法，人参，人参皂昔本品为五加科植物人参Pana：c ginseng C.A.Mey.的干燥根和根茎。
它具有大补元气，补脾益肺，生津养血，安神益智等之功效。
临床用于体虚欲脱，肺虚气喘，肢冷脉微，脾虚食少，口渴少津，内热消渴，气血不足等[1]。
皂苷类成分是人参的主要活性物质和药效成分，因此提高它的提取率就可增强其生物利用率，以下将介绍同一批次的人参，在样品经过振动磨型超微粉碎机粉碎后得到不同粒度的粉体的皂苷含量进行测量[2]。
1 实验仪器与材料1.1 实验仪器AEL-200电子天平（沈阳龙腾电子称量仪器有限公司），AB204-N精密分析天平（METTLER TOLEDO），Agilent 1260型HPLC（Agilent Technologies），TKCD-1006超声波清洗仪（南昌科昌达超声波设备厂），Heal Force final Filter 超纯水機（上海浦东分析仪器设备厂），HH-4数显恒温水浴锅（常州国华电器有限公司），SQW-25系列超微粉碎机（山东济南三清易辰）。
1.2 实验材料人参皂苷标准品Rb1，Re，Rg1：中国药品生物制品检定所；乙腈（HPLC）。
1.3 样品制备同一批次人参（吉林省长白山）：人参粗粉（过40目筛）；人参样品经过超微振动磨型得到粒径分别为76.006～86.348 μm、29.963～30.025 μm、25.088～25.488 μm、22.163 μm。
1.4 对照品溶液的制备取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Rg1对照品适量，精密称定，加甲醇定容；分别精密量取上述对照品溶液各1 mL，置于同一10 mL 容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
二醇柱高效液相色谱法测定人参提取液中的人参皂苷(精)
第26卷第4期吉林化工学院学报Vol .26No .42009年8月JOURNAL OF J I L I N I N STIT UTE OF CHE M I CAL TECHNOLOGYAug .2009收稿日期:2009-07-16作者简介:董少鹏(1970-,男,吉林长春人,吉林省石油化工设计研究院高级工程师,主要从事石油化工方面的研究.3通讯作者:娄大伟(1973-,副教授,E -mail:lou@jlict .edu .cn文章编号:100722853(20090420005203二醇柱高效液相色谱法测定人参提取液中的人参皂苷董少鹏1,娄大伟23,孙大志2,王悦虹2,任红2(1.吉林省石油化工设计研究院工艺所,吉林长春130021;2.吉林化工学院化学与制药工程学院,吉林吉林132022摘要:采用二醇柱,在等度洗脱条件下,建立了高效液相色谱(HP LC 定量分析人参提取液中人参皂苷的检测方法.优化的色谱条件:L i Chr os pher 100D i ol 柱(250mm x 2mm i .d .,5μm ,流动相为乙腈2水(体积比为82∶18,流速为1.0L ・m in -1,检测波长为200n m,柱温为15℃.研究结果表明:在较低温度下,采用二醇柱分析7种主要人参皂苷,具有分析速度快,不需要梯度洗脱程序,方法简单等优点.关键词:高效液相色谱柱;二醇柱;等度洗脱;人参皂苷中图分类号:R 286.0文献标识码:A人参是我国名贵的药材,已有数千年的药用历史.目前,国内外对其主要的活性成分人参皂苷预防和抑制肿瘤的作用进行了深入研究.研究结果发现:人参总皂苷及各单体化合物对促进肿瘤细胞凋亡,促使肿瘤细胞分化,提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性,以及提高机体抗肿瘤的免疫力等方面有重要的作用.按照人参皂苷的结构类型、糖基的数量和位置将分离鉴定出的数十余种单体皂苷化合物分为3组:(a20(S 一原人参二醇型,如人参皂苷Ra,Rb1,Rb2,Rb3,Rc,Rd,Rg3,Rh2,R s;(b 20(S 一原人参三醇型,如人参皂苷Re,Rf,Rg1,Rg2,Rh1;(c 齐墩果酸型,如人参皂苷Ro .在所有这些人参皂苷中,7种主要成分(Rf,Rg1,Rd,Re,Rc,Rb2,和Rb1是含量最高的,也是主要的药理活性成分.一些分离方法包括:薄层色谱(T LC [1]、气相色谱(GC [2]和配有紫外检测器(UV 、蒸发光散射检测器的高效液相色谱或质谱检测[3-6]都已经被研究.在这些方法中,高效液相色谱已经广泛应用于人参皂苷的分析.由于它的灵敏度高,广泛应用于不挥发性化合物,而且其不需要有衍生化就能完成分析.高效液相色谱也更容易应用于上述的各种检测技术.在高效液相色谱法中,研究普遍采用了传统的C18柱,使用梯度洗脱,流动相采用乙腈与水的混合物或缓冲液.这些方法使人参皂苷成分分离受到限制,而且分离时间很长,大部分分离时间需要60m in 左右.本文建立了一种新的人参皂苷分离方法,采用了固相萃取前处理技术对样品进行处理后,使用二醇柱进行等度洗脱分离.与传统的C18分离方法相比,该法具有分离速度快,分离度好,灵敏度高等优点,而且实现了样品中7种主要人参皂苷的同时测定.1实验部分1.1试剂与仪器人参皂苷标准对照品Rf,Rg1,Rd,Re,Rc,Rb2和Rb1购于法国Extrasynthese 公司,置于4℃冰箱中避光保存;用于液相色谱流动相或样品处理的乙腈和甲醇(色谱纯,购于天津市大茂化学试剂厂;所有实验用水均采用高纯水;人参样品购于kanebo 公司.岛津LC —20AT 高效液相色谱仪(紫外2可见检测器;色谱柱:L i Chr os pher 100D i ol 柱(250mm ×2mm i .d .,5μm ;色谱工作站:浙大智达N2000系统(浙江大学智达信息工程有限公司;固相萃取小柱:C18(500mg/3mL,北京华尔博科技有限公司.1.2标准溶液的配制使用甲醇为溶剂配制成浓度为300ng/μL的标准储备液.取适量的标准储备液逐级稀释后得到所需浓度的标准溶液.用于高效液相色谱定性分析时,配制成适宜浓度的单品溶液.所有样品均置于冰箱内保存.1.3样品处理方法准确量取人参提取液1mL于5mL样品瓶中,加入1mL水,超声处理10m in.取1mL处理液过C18固相萃取小柱(预先用5mL甲醇和5mL 水活化.分别用5mL水和5mL30%的甲醇水溶液洗柱后,用3mL甲醇洗脱待分析物,洗脱液经0.2μm PTFE滤膜过滤后,在室温条件下用氮气吹干.残留物用适宜量甲醇定容后,用于高效液相色谱测定.1.4色谱条件流动相:乙腈2水(体积比为82∶18,流速: 1.0L/m in;检测波长:200nm;柱温:15℃;柱温控制:将色谱柱置于含有常温水的保温水槽中,在不断搅拌条件下,向水槽中不断加入碎冰,待温度达到实验温度,停止加冰.温度稳定5m in后,进行液相色谱测定[7].2结果与讨论2.1色谱分离条件的优化由参考文献得知,人参皂苷的最大吸收波长在203n m,实验选取了198~205nm,在其他条件相同条件下测试人参皂苷,得出在200n m时,人参皂苷有最大的响应值.实验在室温条件下进行流动相配比的优化,在乙腈与水的体积比为82∶18时,7种人参皂苷的分离效果最好.然而,人参皂苷Rf和Rg1,Rd 和Re仍未完全分离.因此,研究中主要考察了温度对分离条件的影响.实验选取0,5,10,15,20, 25℃为主要温度控制点,分别进行高效液相色谱分离测定.结果表明:在流动相组成乙腈与水的体积比为82∶18,温度为15℃时,所有的人参皂苷达到了最好的分离效果.在3个典型的温度下,人参皂苷标准品的色谱图如图1所示.因此,实验选取了检测波长200nm,流动相组成乙腈2水(体积比为82∶18,柱温15℃为最佳色谱分离条件.t/min t/mint/m in1.Rf;2.Rg1;3.Rd;4.Re;5.Rc;6.Rb2;7.Rb1图13个温度条件混合人参皂苷标准品的色谱图2.2实际样品分析采用本法对人参提取液实际样品进行了测定,并在最优化条件下对7种主要人参皂苷进行了定量分析.人参样品的色谱图如图2所示.t/m in1.Rf;2.Rg1;3.Rd;4.Re;5.Rc;6.Rb2;7.Rb1图2人参样品的色谱图表1表明了其定量结果.6吉林化工学院学报2009年表1人参提取液中的人参皂苷含量人参皂苷皂苷含量3/[mg ・(10mL -1]样品人参提取液Rf 2.009±0.0532.62Rg16.406±0.0610.95Rd 4.614±0.0390.84Re M ean ±S DRS D /%6.368±0.0180.28Rc 8.837±0.0941.07Rb210.068±0.0720.72Rb114.415±0.0210.143n =3.3结论本文建立了用二醇柱同时分离7种主要活性人参皂苷的分离方法,该方法解决了传统C18柱分析时间长、分离效果差等缺点,而且无需梯度洗脱条件,在等度洗脱情况下17m in 之内即可完成.结果表明,该方法具有简单、快速,同时分离效果好等优点,可以用于人参皂苷的分离和检测.参考文献:[1]Vanhaelen -Fastre R.,FaesM.,Vanhaelen M..H igh 2perf or mance thin -layer chr omat ographic deter m inati on of six maj or ginsenosides in Panax ginseng [J ].J.Chr omat ogr .A,2000,868:269-276.[2]Cui J.F .,B j?erkhem I .,Ener oth P .Gas chr omat o 2graphic -mass s pectr ometric deter m inati on of 20(S 2p r ot opanaxadi ol and 20(S 2p r ot opanaxatri ol for study on hu man urinary excreti on of ginsenosides after in 2gesti on of ginseng p reparati ons [J ].J.Chr o mat ogr .B,1997,689:349-355.[3]L iW.,Gu C .,Zhang H.,et al .U se of high -perfor m 2ance liquid chr omat ography tande m mass s pectr ometry t o distinguish Panax ginseng C .A.M eyer (A sian Gin 2seng and Panax quinquef olius L.(North American Ginseng [J ].Anal .Che m.,2000,72:5417-5422.[4]J i H.Y .,Lee H.W.,Ki m H.K .,etal .,Si m ultaneousdeter m inati on of ginsenoside Rb1and Rg1in hu man p las ma by liquid chr omat ography 2mass s pectr ometry [J ].J.Phar m.B i omed .Anal .,2004,35:207-212.[5]Lou D.W.,Sait o Y .,J inno K .Solid -phase extracti onand high -perf or mance liquid chr omat ography f or si m 2ultaneous deter m inati on of i m portant bi oactive ginsen 2osides in phar maceutical p reparati ons [J ].Chr oma 2t ographia,2005,62:349-354.[6]Lou D.W.,Sait o,Y .,J inno K .Si m ultaneous LC deter 2m inati on of ginsenosides using a modified extracti on p r ocedure and an i m p r oved step gradient p r ogra m [J ].Chr omat ographia,2006,63:31-37.[7]Lou D.W.,Sait o,Y .,Zarzycki P .K .,Oga wa M.,J in 2no K .Is ocratic separati on of ginsenosides by high -perf or mance liquid chr omat ography on a di ol colu mn at suba mbient te mperatures [J ].Anal .&B i oanal .Che m.,2006,385:31-37.D eterm i n a ti on of g i n senosi des i n g i n seng flu i dextract usi n g h i gh2perfor mance li qu i d chro ma tography w ith d i ol colu mnDONG Shao 2peng 1,LOU Da 2wei 2,S UN Da 2zhi 2,WANG Yue 2hong 2,REN Hong2(1.J ilin Petr ochem ical Design &Research I nstitute,Changchun130021,China;2.College of Che m istry and Phar maceutical Engi 2neering,J ilin I nstitute of Che m ical Technol ogy,J ilin City 132022,ChinaAbstract:A high 2perfor mance liquid chr omat ographic method was devel oped f or deter m inati on of ginsenosidesin ginseng fluidextract using di ol colu mn with is ocratic eluti on .The op ti m izati on conditi ons were carried out on a L i Chr os pher 100di ol column (250mm ×2mmi .d .,5μm with acet onitrile and water (82∶18v/v as mo 2bile phase at a fl o w rate of1.0mL /m in .The detecti on wavelength was 200nm ,and the colu mn te mperature was 15℃.The results showed that the p r oposed method is rap id and si m p le f or separati on of seven ginsen 2osides without gradient eluti on p r ogra m at l ower te mperature .Key words:high 2perfor mance liquid chr omat ography;di ol colu mn;quantification;ginsenosides7第4期董少鹏,等:二醇柱高效液相色谱法测定人参提取液中的人参皂苷。
高效液相法测人参皂苷
以测Re、Rg1为例1 色谱条件的选择1.1采用C18（4.6mm×250mm，5um）1.2流动相乙腈(A) - 水(B)，20:801.3流速1.0mL/min1.4波长的选择（203nm）以人参皂苷对照溶液在200 ~ 300nm 范围进行光谱扫描测定, 结果人参皂苷在nm 波长处有最大特征吸收, 选择nm作为人参皂苷的测定波长。
1.5温度301.6进样量10ul2 溶液制备2.1对照品溶液的制备精密称取干燥的人参皂苷Re对照品5.790mg 人参皂苷Rg1对照品6.325mg，置于50mL的容量瓶中，加入甲醇进行溶解并稀释至刻度，摇匀，后静置，即得对照品溶液( 其中含有人参皂苷Rg10.1235mg/mL，人参皂苷Re0.1028mg/mL)。
2.2 供试品溶液的制备取样品2g，至于具塞锥形瓶中，加甲醇5ml,超声10min,离心15min，转速为2500r/min，取上清液过滤，甲醇定容至5ml。
加5ml水饱和正丁醇萃取两次，合并正丁醇液，蒸干，残渣用甲醇定容至5ml。
2.3 阴性样品溶液的制备取缺少人参的其他药材，制成缺少人参的阴性样品，再按照2.2项下的步骤制成阴性样品溶液。
3 系统适应性试验取对照品溶液供试品溶液阴性对照品溶液按照1项下的色谱条件，分别将3种溶液以10ul进样，测定分离度,均应≥1.5，色谱峰对称性，理论塔板数，说明空白对照样品的测定无干扰性。
4 线性关系考察分别精密取2.2项下的供试品溶液1、2、4、6、8、10、12 uL，按照1项下的色谱条件进样测定，以峰面积( Y) 对浓度( X) 进行线性回归，回归方程分别为( r=) 结果表明人参皂苷在g范围内线性关系良好。
5 精密度考察取2.1项下方法制备的对照品溶液10.0u L，在1色谱条件下依法重复进样6次，记录其峰面积，结果表明峰面积的RSD为%，表明其精密度良好。
6 稳定性考察取同一批供试品溶液，分别于0、2、4、8、12、24、36、48h，精密吸取溶液10 uL，注入高效液相色谱仪中，按照1项下进行测定，记录色谱峰面积结果峰面积的RSD为%，表明样品溶液在48h内基本稳定。
高效液相色谱法测定降糖宁胶囊中人参皂苷Rg1、Re、Rb1的含量
10天津药学Tianjin Pharmacy2020年第32卷第3期高效液相色谱法测定降糖宁胶囊中人参皂B R&i、Re、Rbi的含量崔小菲，王军栋(烟台市食品药品检验检测中心，山东264670)摘要目的:建立降糖宁胶囊中人参皂苷Rg i、Re、Rb i的含量测定方法。
方法:采用Waters Symmetryshield0™RP18 (250mm"4.6mm,5!))色谱柱；流动相A为乙睛，流动相B为水，进行梯度洗脱；流速：1.0ml/min;检测波长为203 nm;柱温：30%。
结果:人参皂苷Rg i在0.01522-0.7610mg/ml(!=1)、人参皂苷Re在0.01551-0.7753mg/ml(!=1)、人参皂苷Rb i在0.01483-0.7414mg/m(r=1)浓度范围内与峰面积均呈良好的线性关系，平均回收率("=6)分别为97.68%(RSD 为1.34%)、101.25%(RSD为1.97%)和95.10(RSD为1.71%)。
结论:本方法简单、快捷、专属性强、重复性好,可用于降糖宁胶囊的质量控制。
关键词降糖宁胶囊，高效液相色谱法，含量测定，人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1中图分类号:R927.2文献标识:A文章编号：1006-5687(2020)03-0010-03降糖宁胶囊处方由人参、山药、知母、黄芪、甘草等中药组成,具有益气、养阴、生津的功效，广泛用于糖尿病气阴两虚者。
刘成功等11334研究发现,降糖宁胶囊能有效提高肌体对胰岛素的敏感性,控制患者病情,具有一定的临床推广价值。
但降糖宁胶囊的现行质量标准比较简单，作为方中的君药人参，标准中仅有对其的薄层色谱鉴别而无定量标准，因此本试验对人参中3种皂苷成分进行了定量测定，为今后降糖宁胶囊的标准提高提供依据。
1仪器与试药1.1仪器LC-20A高效液相色谱仪(日本岛津公司)；AB265-S电子天平(瑞士梅特勒-特利多仪器有限公司)；KQ-300DE超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。
高效液相色谱法快速测定保健品中6种人参皂苷的含量
高效液相色谱法快速测定保健品中6种人参皂苷的含量居广琳（福建省产品质量检验研究院，福建福州 350002）摘 要：目的：快速高效检测非人参及其加工品为主要原料的保健品中6种人参皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re和Rg1的含量。
方法：以75%甲醇为提取剂超声提取，采用高效液相色谱法测定。
结果：6种人参皂苷在0.1～1.0 mg·mL-1线性关系良好；人参皂苷 Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re和Rg1在阿拉伯糖粉中的加标回收率分别为93.1%、95.3%、94.8%、94.1%、98.6%和93.9%；在力保健牛磺酸功能饮料中的加标回收率分别为90.8%、94.6%、93.0%、91.7%、98.0%和92.1%；在蜂胶软胶囊中的加标回收率分别为91.1%、95.0%、92.3%、92.7%、98.4%和92.5%。
结论：本法能快速高效提取并测定非人参及其加工制品为主要材料的保健品中6种人参皂苷的含量。
关键词：保健品；人参皂苷；液相色谱Rapid Determination of Six Ginsenosides in Health Productsby HPLCJU Guanglin(Fujian Inspection and Research Institute for Product Quality, Fuzhou 350002, China) Abstract: Objective: To quickly and efficiently detect the content of six ginsenosides Rb1, Rb2, Rc, Rd, Re, and Rg1 in health products mainly made from non ginseng and its processed products. Method: The extracts were ultrasonically extracted with 75% methanol as the extractant and determined by high performance liquid chromatography (HPLC). Result: The six ginsenosides exhibited good linear relationships within the range of 0.1 mg·mL-1 to 1.0 mg·mL-1; the recovery rates of ginsenosides Rb1, Rb2, Rc, Rd, Re, and Rg1 in arabinose powder were 93.1%, 95.3%, 94.8%, 94.1%, 98.6%, and 93.9%; the recovery rates of Lipovitan taurine functional beverages were 90.8%, 94.6%, 93.0%, 91.7%, 98.0%, and 92.1%; the recovery rates of propolis soft capsules were 91.1%, 95.0%, 92.3%, 92.7%, 98.4%, and 92.5%. Conclusion: This method can quickly and efficiently extract and determine the content of six ginsenosides in health products mainly made from non ginseng and its processed products the main materials.Keywords: health products; ginsenoside; high performance liquid chromatography人参皂苷是人参、西洋参等人参属植物中被证实具有增强体质、调节神经、延缓衰老及抗肿瘤等功效的有效成分[1-2]。
UPLC法测定血栓通注射液中人参皂苷类成分的含量
UPLC法测定血栓通注射液中人参皂苷类成分的含量目的：研究超高效液相色谱法（简称UPLC法）在中成药人参皂苷类成分含量测定中的应用效果。
方法：以血栓通注射液为检测样品，分别采用高效液相色谱法（简称HPLC法）和UPLC法对其中的皂苷类成分进行测定，对比两种测定方法下的测定结果，比较两种检测方法所用时间。
结果：两种检测方法下，人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rd以及三七皂苷R1等5种皂苷成分平均含量的测定值以及RSD值一致，提示两种检测方法在血栓通注射液人参皂苷类成分含量测定中，均具有良好的应用效果；对比测定所需时间，UPLC法检测平均用时（15.12±0.75）min，显著短于HPLC法的（47.15±0.73）min，差异有统计学意义（P＜0.05）。
结论：应用HPLC法和UPLC法，均能准确有效地测定中成药中人参皂苷类成分含量，而UPLC超高效液相色谱法测定更为高效，实践应用中，可根据实际需要选定检测方法。
标签：UPLC法；HPLC法；人参皂苷成分；含量测定UPLC法，是在HPLC法上进一步开发得来的，较之传统的HPLC法，UPLC 法的主要突破表现在色谱分离上，色谱的解析度更高。
高速度、高分离度和高灵敏度，是UPLC法的突出优势[1]。
UPLC法目前还处于新兴阶段，实践应用主要集中于生化领域，而在天然产物的成分和精度分析上的应用，也在逐渐兴起。
而对中成药进行成分分析，是确定药品安全性，指导临床科学用药的重要环节，所以，应用UPLC法进行中成药中有关成分含量的测定，应用也逐渐广泛[2]。
本研究分析两种方法在中成药的人参皂苷类成分含量测定中的应用效果。
1 资料与方法1.1 一般资料1.1.1 样品血栓通注射液（广西梧州制药（集团）股份有限公司，批准文号：国药准字Z45021769）为分析样品，样品来自本药检所留样，为同一批次药物；对照品来自中国食品药品检定研究院。
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以测Re、Rg1为例1 色谱条件的选择1.1采用C18（4.6mm×250mm，5um）1.2流动相乙腈(A) - 水(B)，20:801.3流速1.0mL/min1.4波长的选择（203nm）以人参皂苷对照溶液在200 ~ 300nm 范围进行光谱扫描测定, 结果人参皂苷在nm 波长处有最大特征吸收, 选择nm作为人参皂苷的测定波长。
1.5温度301.6进样量10ul2 溶液制备2.1对照品溶液的制备精密称取干燥的人参皂苷Re对照品5.790mg 人参皂苷Rg1对照品6.325mg，置于50mL的容量瓶中，加入甲醇进行溶解并稀释至刻度，摇匀，后静置，即得对照品溶液( 其中含有人参皂苷Rg10.1235mg/mL，人参皂苷Re0.1028mg/mL)。
2.2 供试品溶液的制备取样品2g，至于具塞锥形瓶中，加甲醇5ml,超声10min,离心15min，转速为2500r/min，取上清液过滤，甲醇定容至5ml。
加5ml水饱和正丁醇萃取两次，合并正丁醇液，蒸干，残渣用甲醇定容至5ml。
2.3 阴性样品溶液的制备取缺少人参的其他药材，制成缺少人参的阴性样品，再按照2.2项下的步骤制成阴性样品溶液。
3 系统适应性试验取对照品溶液供试品溶液阴性对照品溶液按照1项下的色谱条件，分别将3种溶液以10ul进样，测定分离度,均应≥1.5，色谱峰对称性，理论塔板数，说明空白对照样品的测定无干扰性。
4 线性关系考察分别精密取2.2项下的供试品溶液1、2、4、6、8、10、12 uL，按照1项下的色谱条件进样测定，以峰面积( Y) 对浓度( X) 进行线性回归，回归方程分别为( r=) 结果表明人参皂苷在g范围内线性关系良好。
5 精密度考察取2.1项下方法制备的对照品溶液10.0u L，在1色谱条件下依法重复进样6次，记录其峰面积，结果表明峰面积的RSD为%，表明其精密度良好。
6 稳定性考察取同一批供试品溶液，分别于0、2、4、8、12、24、36、48h，精密吸取溶液10 uL，注入高效液相色谱仪中，按照1项下进行测定，记录色谱峰面积结果峰面积的RSD为%，表明样品溶液在48h内基本稳定。
7 重复性考察取同一批号的样品溶液，按照上述2.2项下方法得供试品溶液5份，按照含量测定法，分别精密吸取10u L，按照1色谱条件，测定峰面积，结果峰面积的RSD为%，表明该含量测定方法重复性良好。
8 回收率试验精密吸取5份已知含量的样品20mL置于50mL的容量瓶中，各瓶中分别精密加入标准混合的储备液5.0、5.0 、7.0 、7.0 、9.0、9.0mL，加流动相稀释至刻度照1项下的色谱条件进行测定，平均加样回收率为%，RSD 为%。
9 样品含量测定取3批样品，按照2.2项下方法配制成供试品溶液，精密吸取10u L溶液，按照1色谱条件进行测定，同时按照外标一点法进行计算3批供试品的含量测定。
组分色谱柱流动相流速温度1 Rb1Rb2RcRdReRg1F1 F2Rg3Rh1Rh2C-KPPD 250mm*4.6mm，5um水（A）—乙氰（B）0(77%）→13(77%）→ 33(56%）→38(32%）→45(32%）→55(0%）60(0%）→ 63(77%）1.0ml/min252 Rg1 Re 250mm*4.6mm，5um 二元梯度洗脱，需两个高压泵0.1mol/LKH2PO4（A），为乙腈∶水=75∶25，PH=3.5（B）1.0ml/min383 Rg1 200mm*4.6mm，5um 乙腈- 水 ( 20 : 80 ) 1.0ml/min室温4 Rg1 、Re 、R f、Rg 2 、Rb1 、Rc、Rb2、Rb3、Rd 150mm*4.6mm，5um乙腈( A) - 水(B)0(18% )→ 24(22%)→ 26(26%)→30(32%)→50(33.5%)→55(38%)1.0ml/min355 Rg1 Rb1 250mm*4.6mm，5um 乙腈( A) - 水(B)10(81% )→35(81-71%)→50(71%)1.2ml/min306 Rg1 150mm*4.6mm，5um 乙腈- 水 ( 25 : 75 ) 1.0ml/min307 Rg1 Rb1 250mm*4.6mm，5um 乙腈- 0.05%磷酸水溶液(18：82) 1.0ml/min308 Rg1Re Rb1 150mm*4.6mm，5um乙腈( A) - 水(B)0(19% )→35(19-28%)→50(28%)→60(28—29%)→75(29%)0.7ml/min259 Re 乙腈 - 0.05 m o l /L 磷酸二氢钾溶液( 19.5 : 80.5 ) 1.0ml/min2510 Rb1 250mm*4.6mm，5um 乙腈-0.015%磷酸溶液（31∶69） 1.0ml/min组分对照品制备供试品制备线性关系1 Re10ul Re0.3mg/ml取1.5g ,水饱和正丁醇100ml ,称定重量, 加热回流1小时,补足减失的重量, 滤过, 弃去初滤液, 取续滤液5 0 ml用正丁醇饱和的氨试液洗涤4次( 50 , 50 , 40 , 30m l ) , 弃去氨液, 正丁醇液用正丁醇饱和的水洗涤2 次( 50 , 40m l ) , 弃去水洗液, 正丁醇液置水浴上蒸干,甲醇定容至10ml用微孔滤膜( 0.4 5 mm ) 滤过R e对照品溶液4 、8 、1 2 、16 、20ul2 Rb110ul Rb10.4mg/ml0.9 g，甲醇50 ml，称定重量，超声处理30 min，用甲醇补足减少的重量，过滤，取续滤液20 ml，65 ℃水浴蒸干，残余物用40 ml水饱和正丁醇分次溶解，用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次20 ml，保留正丁醇液；合并二次水液，用水饱和的正丁醇萃取2次，分别为20 ml、15 ml，弃去水液；合并前后的正丁醇液，65 ℃减压浓缩至干。
残余物加甲醇10 ml定容用0.45 mm微孔滤膜滤过。
Rb1对照品溶液10、20、50 ul稀释10倍10、20 ul3 Rg110ul Rg10.225mg/ml20 g , 甲醇100 mL , 回流1 h ,滤过, 用甲醇洗残渣3 次, 合并滤液, 蒸干。
残渣加水40 mL溶解, 乙醚萃取 2 次, 每次40 mL , 水饱和正丁醇萃取2次,每次40 mL , 合并正丁醇层, 氨试液洗 2 次, 每次40 mL , 正丁醇层蒸干溶剂,残渣加水10 mL 溶解移至D 101 大孔吸附树脂柱(内径1 . 5 c m, 长12 c m, 经2 , 4 , 6 ,8, 10 ,12 ,14ul过 4 % 氢氧化钠溶液前处理)以水50 mL 洗脱, 弃去水液, 再用40 % 乙醇30 mL 洗脱, 弃去洗脱液, 用70 % 乙醇洗脱, 收集洗脱液, 蒸干, 甲醇1 0 mL 定容4 Rg1Re10ul Rg10.1235mg/mlRe0.1028mg/ml精密取3批样品各20mL，分别置于25mL的容量瓶中，加入流动相稀释至刻度，静置后即得供试品溶液各10 ul510ul Rg1Rb1Rg10.2mg/ml，Rb10.2mg/ml3g精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50mL,称定,超声30min,再称定,用甲醇补足减失质量,摇匀,滤过,取续滤液15mL,蒸干,残渣用甲醇分多次溶解,转移置10mL量瓶中，加甲醇至刻度2，4，10，16，18,20u l610ul Rg1ReRb10.2400.2100.205mg/ml10g,置索氏提取器中，加三氯甲烷乙醚( 3∶1) 溶液100mL加热回流30min脱脂，弃去溶剂，药渣挥干溶剂，转移至100mL锥形瓶中，精密加水饱和正丁醇50mL，密塞，放置过夜，超声处理30min，滤过，精密量取续滤液25mL，至蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇定容至5mL，滤过2、4、6、8、10 ul72 0μL Rg1ReRfRg2Rb1Rc、Rb2、Rb3、Rd约1g →滤纸包好→置索氏提取器中→加适量乙醚→加热回流4h →弃去乙醚液→药渣挥去乙醚→加甲醇适量→加热回流10 h →置蒸发皿中→蒸干甲醇→加色谱甲醇溶解→定容到10mL，用0.45 μm微孔滤膜过滤1、凝胶处理：A：样品0.5g，流动相稀释定容至25ml，取5ml离心5min，转速为4000r/min，上清液过滤。
B：样品0.5g，流动相稀释定容至50ml，过滤。
C：样品5g，水稀释定容至10ml。
D：样品3g，乙醇稀释定容至50ml，过滤，取滤液10ml 用50%乙醇定容至25ml。
E：样品0.5g，加甲醇超声10min，定容至50ml，0.45um 微孔滤膜过滤。
F：样品3g，甲醇稀释定容至100ml，过滤,取滤液1ml，甲醇定容至10ml。
G：样品2.5g，甲醇稀释定容至5ml。
2、流动相：乙腈(A) - 水(B)Rg1(A%):20 25 Rb1(A%):30 Re(A%):20Rd(A%):35 Rb3(A%):30 Rc(A%):30出柱顺序：Rg1 Re Rh1 Rb1 Rc F1 Rb2 Rd F2 Rg3 C-K Rh2 PPD3、分离度：R=2(tR2-tR1)/(W1+W2）tR:保留时间，进样到出现最大峰值的时间W :色谱峰基线宽度R越大，表明相邻两组分分离越好。
一般说当R＜1时，两峰有部分重叠；当R=1.0时，分离度可达98%；当R=1.5时，分离度可达99.7%。
通常用R=1.5作为相邻两组分已完全分离的标志。
R≥1.5称为完全分离。
《中国药典》规定R 应大于1.5。
理论塔板数：N=（tR/σ）2=16(tR)2/W =5.54(tR/W1/2)2理论塔板数越高，柱子的柱效越好。