DNA提取试剂盒步骤--最新
QIAGEN试剂盒提取DNA步骤
QIAGEN试剂盒提取DNA步骤缓冲液AP1和AP3/E可能在储藏过程中沉淀，使用前检查，必要时65摄氏度预热溶解（注意加完乙醇后就不能再加热）缓冲液APW和AP3/E第一次使用时要加入适量乙醇（96%-100%）1.研磨前擦拭工作台。
2.研钵里加入液氮，预冷。
研磨材料，加3-5次材料，充分研磨。
液氮预冷离心管后加入材料，加至1/2或2/3处。
若暂时不加缓冲液，就放入至液氮冷冻，用时拿出。
拿出后立即轻轻开盖，防止材料喷出。
3.加入440l缓冲液AP1（必须为预热好的），。
盖好后使劲颠倒混匀材料和缓冲液。
4.加4lRNase后，剧烈涡旋，使管底的材料也与液体混合。
5.将混合物在65摄氏度下温浴15min,每5min中上下轻轻颠倒试管2-3次。
准备冰盒。
6.加入130l缓冲液AP2，上下颠倒混匀，在冰上放置5Min。
7.14000rpm/min离心5min.8.仔细缓慢将上层液体（500l）置于QIAshredder Mini Spin Colum（柱）中（紫色）。
14000rpm/min离心2min.9.将上步中的滤液（450l）缓慢吸至一新的离心管（自己准备的Axygen离心管）中，注意别吸到管底细胞碎片小球。
10.在溶解清液中仔细缓慢加入1.5倍体积（675l）的缓冲液AP3/E。
一定要仔细，慢慢抽吸至两者充分混匀。
11.将上步中650l混合液（包括形成的沉淀）加入Dneasy Mini Spin Colum（柱）中（白色），其余的混合液留着，用于再次抽提。
8000rpm/min（一般用14000rpm/min）离心1Min，丢弃废液。
准备灭菌的去离子水于65摄氏度水浴锅中预热。
12.剩余的混合液继续加入上一步的Dneasy Mini Spin Colum（柱）中，8000rpm/min（一般用14000rpm/min）离心1Min，丢弃废液和收集管。
13.将Dneasy Mini Spin Colum（柱）下置试剂盒提供的2ml离心管（取时手不要伸进去，隔着塑封袋捏出离心管）。
全血基因组DNA提取试剂盒使用说明
全血基因组DNA提取试剂盒使用说明一、试剂盒组成及存储条件：1.试剂盒包括蛋白酶K、缓冲液、洗涤缓冲液、脱水溶液等。
2.试剂盒应存放在4℃以下避光干燥处，避免冻结。
二、实验前准备：1.准备所需的实验耗材和设备，如离心管、恒温振荡器、离心机等。
2.取出全血样品，可以是新鲜全血或已离心制备的全血细胞。
三、DNA提取步骤：1.取出全血样品，用洗涤液洗涤细胞沉淀并离心收集，去除红细胞。
2.加入蛋白酶K将细胞裂解，释放DNA。
3.加入缓冲液和脱水溶液，沉淀DNA并洗涤。
4.最终稀释DNA并保存在适当的条件下。
四、实验注意事项：1.操作过程中需注意无菌操作，避免污染。
2.加入蛋白酶K的量应准确控制，不要过多或过少。
3.混合溶液时需轻轻摇匀，避免气泡的产生。
4.稀释保存DNA时，需使用无核酸酶的载体溶液，如TE缓冲液。
五、质控及结果分析：1.可以通过琼脂糖凝胶电泳或比色法检测提取的DNA质量。
2.检测DNA浓度和纯度，确保提取的DNA适用于后续实验。
3.可以保存提取好的DNA样品，以备后续实验使用。
六、应用领域：1.该试剂盒适用于从全血样品中提取DNA，可用于基因分析、疾病诊断、遗传研究等领域。
2.可以用于个体基因检测、种群遗传学研究、药物反应性研究等。
总结：全血基因组DNA提取试剂盒是用于从全血样品中提取DNA的重要工具，操作简便、提取效率高。
在实验中需注意操作规范，保证提取的DNA质量和纯度。
该试剂盒广泛应用于科研领域，为基因研究和临床诊断提供了有力支持。
希望上述使用说明能够帮助用户正确、高效地使用全血基因组DNA提取试剂盒。
血液、细胞、组织基因组DNA提取试剂盒步骤
血液、细胞、组织基因组DNA提取试剂盒步骤使用前请先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。
1. 处理材料a. 如提取材料为血液，可直接使用200ul新鲜、冷冻或加入各种抗凝剂的血液，不足200ul可加入缓冲液GA补足；注意：如需处理更大体积血液，如300ul-1ml，可按以下步骤操作：在样品中加入3倍体积红细胞裂解液（例如300ul血液加入900ul红细胞裂解液），颠倒混匀，室温放置5min，期间再颠倒混匀几次。
10000rpm(~11500×g)离心1min（若离心机最高转数不允许，可3000rpm(~3400×g)离心5min），吸去上清，留下白细胞沉淀，加200ul缓冲液GA，振荡至彻底混匀。
b. 如果处理血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的抗凝血液，其红细胞为有核红细胞，因此处理量5-20ul，可加入缓冲液GA补足200ul后进行下面的裂解步骤；c. 贴壁培养的细胞应先处理为细胞悬液，然后10000rpm(~11200×g)离心1min，倒尽上清，加200ul缓冲液GA，振荡至彻底悬浮；d．动物组织（脾组织用量应少于10mg）应先打碎处理为细胞悬液，然后10000rpm(~11200×g)离心1min，倒尽上清，加200ul缓冲液GA，振荡至彻底悬浮；注意：如果需要去除RNA，可加入4ul RNase A(100mg/ml)溶液（客户自备，目录号：RT405-12），振荡15s，室温放置5min。
2. 加入20ul Proteinase K，混匀。
a. 提取血液基因组时，只需加入Proteinase K混匀，即可继续进行下一步。
b. 提取细胞基因组时，只需加入Proteinase K混匀，即可继续进行下一步。
d. 提取组织基因组时，加入Proteinase K混匀后，在56℃放置，直至组织溶解，简短离心以去除管盖内壁的水珠，再进行下一步骤。
基因组dna提取步骤
基因组DNA提取步骤1.从无水乙醇中取出少许组织（约50mg）加入干净灭菌的EP管中，剪碎；2.加入400ul 1％的SDS，8ul（20mg/ml）的蛋白酶K，充分浸润，入55℃摇床（100转/分），期间振荡助溶至澄清（5-6h）；3.取出消化液，加入6mol/L的NaCl300ul，氯仿200ul，轻柔正反颠倒，使其充分乳化，4℃13000转/分离心30min；4.取出上清（约400ul），加入等体积氯仿抽提一次，轻柔颠倒后，4℃13000转/分离心10min；5.上清加入5μl RNaseA(10μg/μl), 37℃10分钟, 除去RNA(RNA对DNA的操作、分析一般无影响，可省略该步骤）。
6.取上清加入等体积异丙醇，轻柔混匀后-20℃沉淀10min；7.4℃13000转/分离心15min，弃上清；8.用75％乙醇洗涤1-2次（1000ul，11000转/分离心2min），弃上清；9.冰冻无水乙醇洗涤1-2次（1000ul，11000转/分离心4min）弃上清，自然晾干或烘干，DDW溶解，30-50ul。
基因组DNA的提取通常用于构建基因组文库、Southern杂交(包括RFLP)及PCR分离基因等。
利用基因组DNA较长的特性,可以将其与细胞器或质粒等小分子DNA分离。
加入一定量的异丙醇或乙醇，基因组的大分子DNA即沉淀形成纤维状絮团飘浮其中, 可用玻棒将其取出，而小分子DNA则只形成颗粒状沉淀附于壁上及底部, 从而达到提取的目的。
在提取过程中,染色体会发生机械断裂,产生大小不同的片段,因此分离基因组DNA时应尽量在温和的条件下操作,如尽量减少酚/氯仿抽提、混匀过程要轻缓, 以保证得到较长的DNA。
一般来说,构建基因组文库, 初始DNA长度必须在100kb以上,否则酶切后两边都带合适末端的有效片段很少。
而进行RFLP和PCR分析, DNA长度可短至50kb, 在该长度以上,可保证酶切后产生RFLP片段(20kb以下),并可保证包含PCR所扩增的片段(一般2kb以下)。
新型大量植物DNA快速提取试剂盒操作方法及步骤说明书
新型大量植物DNA快速提取试剂盒目录号：DN38适用范围：适用于快速提取植物组织、细胞、真菌基因组DNA 试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成保存10次（DN3801）RNase A(10mg/ml) -20℃500 μl缓冲液AP1 室温50 ml缓冲液AP2 室温20 ml缓冲液AP3/E 室温40 ml第一次使用前按说明加指定量乙醇漂洗液WB 室温25ml x2第一次使用前按说明加指定量乙醇洗脱缓冲液EB 室温20 ml吸附柱AC 室温10个收集管（50ml）室温10个本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
储存事项:1.裂解液AP1、AP3/E低温时可能出现析出和沉淀，可以在65℃水浴几分钟帮助重新溶解（AP3/E加入乙醇前可加热，加入乙醇后不可加热），恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
2.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
产品介绍：该试剂盒采用DNA吸附柱和新型独特的溶液系统，适合于从含酚类、多糖类和酶抑制物的植物样品中快速简单地提取基因组DNA。
可在1小时左右完成一个或多个1g新鲜或200mg干燥的植物样品DNA的纯化工作。
提取过程不需要用到有毒的酚氯仿等有机物抽提，也不需要用到耗时的异丙醇或乙醇沉淀，并能快速高效地去除多糖类、酚类和酶抑制物等杂质，纯化的DNA可直接用于PCR、酶切和杂交等实验。
新鲜或干燥的植物组织（细胞）磨碎后经裂解液裂解；蛋白质、多糖、细胞残片被沉淀去除；然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤, 进一步将多糖，多酚和细胞代谢物，蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。
产品特点：1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。
克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。
全血基因组DNA提取试剂盒使用说明
全血基因组DNA提取试剂盒使用说明DNA提取是生物学、遗传学和分子生物学等领域的一项重要实验操作。
全血基因组DNA提取试剂盒是用于从全血样本中提取DNA的试剂盒，本文将详细介绍其使用说明。
一、试剂准备：1.预先将试剂盒从-20℃的冷冻器中转移到4℃的冰箱中解冻，取出所需试剂。
2.将试剂A和试剂B随机摇匀，避免沉淀的产生。
二、样本处理：1.取出需要提取DNA的全血样本，将其加入离心管中。
2.加入适量的蒸馏水和样本量相等体积的10%梳酸混匀，使血细胞溶解。
三、样本裂解：1.准备离心管和4℃的离心机。
2.加入适量的样本处理试剂（试剂A和试剂B），混匀离心管。
4.将裂解后的样本置于冰上放置10分钟。
四、DNA纯化：1.准备离心管和4℃的离心机。
2.将样本离心管中的上清转移至新的离心管中，并加入适量的试剂C，混匀并置于冰上放置5分钟。
4.弃去上清，避免悬浮细胞的干扰。
五、脱脂：1.准备脱脂离心管和4℃的离心机。
2.加入适量的试剂D，混匀离心管，置于冰上放置5分钟。
4.弃去上清，避免沉淀的干扰。
六、洗涤：1.准备洗涤离心管和4℃的离心机。
2.加入适量的试剂E和试剂F，混匀离心管，置于冰上放置5分钟。
4.弃去上清，避免沉淀的干扰。
七、DNA溶解：1.准备离心管和4℃的离心机。
2.加入适量的试剂G，混匀并置于冰上放置5分钟。
八、DNA浓缩：1.准备离心管和4℃的离心机。
2.加入适量的试剂H，混匀离心管，置于冰上放置5分钟。
4.弃去上清，避免纯化后的DNA丢失。
九、DNA溶解：1.加入适量的蒸馏水，混匀使DNA溶解。
十、质检：1.准备质检相关设备和试剂。
2.使用紫外分光光度计检测DNA纯度和浓度。
3.对提取的DNA进行PCR扩增、酶切鉴定等质检步骤。
以上就是全血基因组DNA提取试剂盒的使用说明，希望对您在实验中提取DNA有所帮助。
在操作中，请严格按照试剂盒说明书和实验室操作规范进行操作，确保实验的准确性和可重复性。
磁珠法基因组DNA 提取试剂盒 (细胞)
磁珠法基因组DNA 提取试剂盒(细胞)样本前处理：细胞用PBS洗两次后，6000rpm/min 离心3min，弃上清，加入500ul Buffer CGP重悬沉淀，12000rpm/min离心1min，弃上清，取沉淀备用。
2.裂解结合：在细胞沉淀中，加入500μLBuffer CGL，室温放置5-10min，再加入500μl异丙醇和30ul磁珠悬浮液(MB) （使用前充分重悬），颠倒混匀，室温放置5min（期间不时颠倒混匀）；将离心管放置于磁力架上，待磁珠完全吸附后吸弃液体。
3.漂洗:(1)将离心管从磁力架上取下，向离心管中加入500 μl Buffer CGW 0,涡旋振荡5s，重悬磁珠，将离心管放置于磁力架上，待磁珠完全吸附后吸弃液体，重复该步骤1次。
(2)将离心管从磁力架上取下，向离心管中加入500 μl Buffer CGW I,涡旋振荡5s，重悬磁珠,将离心管放置于磁力架上，待磁珠完全吸附后吸弃液体。
重复该步骤一次，待磁珠完全吸附后吸弃液体（液体一定要弃尽，不然残留会影响下游实验），晾干2min。
实验准备56°C加热源磁珠用前一定要充分混匀；使用前需在Buffer CGW I中加入相应体积的无水乙醇。
4.洗脱：将离心管从磁力架上取下加入50-100μl Buffer EB ，涡旋振荡结合移液器吹打，充分吹散磁珠（一定要完全吹散磁珠，若未充分重悬会影响DNA 得率），56°C 放置5min（每隔2min振荡混匀重悬磁珠）,置于磁力架上，将上清DNA转移至一新的离心管中，放入-20 °C保存备用，保质期为2 年。
纯度效果评价通过测定洗脱液中DNA的A260来确定RNA产量，通常情况下A260值在0.1～1.0之间数据比较可信。
如果不在此范围内，请稀释或浓缩样品调整；通过测定洗脱液中RNA的A280和A230来确定DNA纯度，A260/A280比值在1.8-2.0之间，小于1.8表示可能有蛋白质污染。
游离DNA提取试剂盒（磁珠法）说明书
游离DNA提取试剂盒（磁珠法）说明书【产品名称】通用名称：核酸提取或纯化试剂商品名称：游离DNA 提取试剂盒（磁珠法）英文名称：Magbind CFDNA Kit 该试剂盒提供了一种简单、快速、高效的游离DNA (Free circulating / Cell-free DNA)提取方法，适用于从血清、血浆、淋巴液、尿液等无细胞体液中提取游离DNA 。
纯化得到的离DNA 质量稳定、可靠，可用于下游常规实验。
该试剂盒可与转移液体法的核酸提取仪配套使用，简单、快速地进行大规模提取，大大降低了实验者的工作量和实验中的人为误差。
【预期用途】 样品裂解后，在高盐存在时，DNA 结合于硅基包被的磁珠表面，漂洗后，高纯度DNA 被洗脱于洗脱缓冲液或去离子水中。
DNA 得率与样品的类型、储存条件、时间以及个体间差异有很大关系。
【检验原理】50次/盒；400次/盒【包装规格】版本号：11/2020【样本要求】1．适用标本类型：新鲜或冷冻的全血（用柠檬酸盐、EDTA 或肝素等抗凝剂处理过的血液样品）、血浆、血清、淋巴细胞、无细胞体液等样本。
2．标本处理与保存：血清及血浆样本按常规方法制备，新鲜样本应尽快处理或分装后于-70℃冻存，避免反复冻融。
3．样本运输：应采用冰壶或者泡沫箱加冰或干冰密封运输。
【检验方法】实验前准备：向蛋白酶K 中加入指定用量的蛋白酶K 保存液使其溶解，终浓度为20 mg/ml ，-20℃保存。
1．向1.5 ml 离心管中加入20 μl 蛋白酶K 溶液。
2．向上一步的离心管中加入200 μl 血清/血浆样品。
注意：冻存样品需提前在4℃冰箱中放置使其溶化。
溶化过程中反复颠倒样品储存管使其混匀。
3．向上一步的离心管中加入200 μl 裂解缓冲液，涡旋振荡5秒钟使其充分混匀后将离心管放于56℃、1300 rpm 的Thermomixer 上振荡裂解10分钟。
注意：1）如无Thermomixer ，需将离心管放于56℃水浴锅或金属浴中孵育10分钟，期间每隔2分钟涡旋振荡5秒钟。
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组织基因组DNA提取试剂盒（离心柱型）
储存条件
该试剂盒置于室温（15-25℃）干燥条件下，可保存12个月，更长时间的保存可置于2-8℃。
2-8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10 min，以溶解沉淀。
注意事项
1．第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇。
2．样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。
3．若缓冲液GA或GB中有沉淀，可在37℃水浴中重新溶解，摇匀后使用。
4．所有离心步骤均为使用台式离心机，室温下离心。
操作步骤
使用前请先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。
1. 处理材料
用干烤过的镊子和剪刀剪取一定量的冰冻组织，体积约两个绿豆大小，放入DNAase-free的1.5ml EP中。
向EP管中加入等体积的磁珠，以及加入200 μl缓冲液GA，振荡悬浮。
置于组织破碎仪中运行5mins/次，共3次。
每破碎一次，需将含组织的EP管放入离心机中短暂离心来沉淀组织和磁珠，使其在下次破碎时更好的接触。
可根据观察匀浆的效果来决定匀浆的次数，目标是“碾磨均匀”，不能有较大体积的组织块（>2mm的组织块）。
如果需要去除RNA，需加入4 μl RNaseA（100 mg/ml）溶液（客户自备，目录号：RT405-12），振荡15 sec，室温放置5 min。
2. 加入20 μl Proteinase K溶液，混匀。
提取组织基因组时，加入Proteinase K混匀后，在56℃放置1~3 h，直至组织溶解，每小时颠倒混合样品2-3次，用水浴振荡器也可。
放入10,000rpm (~11,500×g) 的离心力高速离心1mins来沉淀未碾碎的组织和磁珠。
将上清转移至新的EP管中。
3. 加入200 μl缓冲液GB，充分颠倒混匀，70℃放置10 min，溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的水珠。
注意：加入缓冲液GB时可能会产生白色沉淀，一般70℃放置时会消失，不会影响后续实验。
如溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻底，可能导致提取DNA量少和提取出的DNA不纯。
4. 加人200 μl 无水乙醇，充分振荡混匀15 sec，此时可能会出现絮状沉淀，简短离心以去除管盖内壁的水珠。
5. 将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CB3中（吸附柱放入收集管中），12,000 rpm (~13,400×g)离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放回收集管中。
6. 向吸附柱CB3中加入500 μl缓冲液GD （使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm (~13,400×g)离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。
7. 向吸附柱CB3中加入600 μl 漂洗液PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm (~13,400×g)离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。
8. 重复操作步骤7。
9. 将吸附柱CB3放回收集管中，12,000 rpm (~13,400×g)离心2 min，倒掉废液。
将吸附柱CB3置于室温放置5mins，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。
10. 将吸附柱CB3转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50-200 μ（100ul）洗脱缓冲液TE，室温放置2-5 min，12,000 rpm (~13,400×g)离心 2 min，将溶液收集到离心管中。
为增加基因组DNA 的得率，可将离心得到的溶液再加入吸附柱CB3中，室温放置2 min，12,000 rpm (~13,400×g )离心2 min。
注意：洗脱缓冲液体积不应少于50 μl，体积过小影响回收效率。
洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。
若用ddH2O做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率；且DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。
11.溶解的DNA样品其A260/280 比值< 1.7 ~ 1.9。
将DNA溶液放入-20°C冰箱中保存。
若要长期保存DNA样本，最好加入相应2.5倍体积的无水乙醇来沉淀DNA。
混匀后便可看见白色絮状物。
短暂离心后放置于-80℃低温冰箱中保存至少一年。
若需使用，需在7000~8000×g的离心机中离心5min，使DNA重新沉淀，再加入TE 溶液溶解DNA沉淀。
必要时须重新检测DNA的纯度和浓度。
DNA/RNA纯品的OD260/OD280为1.8或2.0，故根据OD260/OD280的值可以估计DNA的纯度。
若比值较高说明含有RNA，比值较低说明有残余蛋白质存在。
OD230/OD260的比值应在0.4-0.5之间，若比值较高说明有残余的盐存在。
DNA: OD260/OD280比值应接近1.80，若R值大于1.8。
说明存在RNA，可重新用RNaseA处理。
若R值小于1.8，则说明有蛋白质等杂质存在，需再用蛋白酶K、SDS及盼、氯仿、异戊醇重新对DNA进行纯化（也可加入1/8体积的3M NaAc(pH5.2)与冷乙醇一同促使DNA沉淀析出。
RNA: OD260/OD280比值在1.8-2.0时，认为RNA中蛋白或者时其他有机物的污染是可以容忍的，不过要注意，当你用Tris作为缓冲液检测吸光度时，R值可能会大于2（一般应该是<2.2的）。
当R<1.8时，溶液中蛋白或者时其他有机物的污染比较明显，你可以根据自己的需要决定这份RNA的命运。
当R>2.2时，说明RNA已经水解成单核酸了。