新华1-5号滤纸片
药敏试验方法
一、纸片扩散法该法是将含有定量抗菌药物的滤纸片贴在已接种了测试菌的琼脂表面上，纸片中的药物在琼脂中扩散，随着扩散距离的增加，抗菌药物的浓度呈对数减少，从而在纸片的周围形成浓度梯度。
同时，纸片周围抑菌浓度范围内的菌株不能生长，二抑菌范围外的菌株则可以生长，从而在纸片的周围形成透明的抑菌圈，不同的抑菌药物的抑菌圈直径因受药物在琼脂中扩散速度的影响而可能不同，抑菌圈的大小可以反映测试菌对药物的敏感程度，并与该药物对测试菌的MIC呈负相关。
二、稀释法稀释法药敏试验可用于定量测试抗菌药物对某一细菌的体外活性，分为琼脂稀释法和肉汤稀释法。
实验时，抗菌药物的浓度通常经过倍比（lg2）稀释，能抑制待测菌肉眼可见生长的最低药物浓度成为最小抑菌浓度（MIC），一个特定抗菌药物的测试浓度范围应该包含能够检测细菌的解释性折点（敏感、中介和耐药）的浓度，同时也应该包含质控参考菌株的MIC.2.1 琼脂稀释法首先制备含抗菌药物的琼脂稀释平板。
再接种待测菌株，然后是结果判读。
2.2 肉汤稀释法三、抗生素浓度梯度法四、自动化仪器法一、实验材料普通营养琼脂培养基：可去生化试剂店购买，做不同细菌的药敏试验可选择不同的培养基，如做大肠杆菌的药敏试验可选择普通营养琼脂或麦糠凯培养基。
做沙门氏菌可选择血清培养基。
药敏试纸：购买或自制（详见实验准备）细菌：待做药敏试验的细菌仪器：接种环、酒精灯、打孔器、牛津杯、移液器、滴头二、实验准备2.1 药敏片的准备：购买或自制2.1.1 制备方法：取新华1号定性滤纸，用打孔机打成6毫米直径的圆形小纸片。
取圆纸片50片放入清洁干燥的青霉素空瓶中，瓶口以单层牛皮纸包扎。
经15磅15-20分钟高压消毒后，放在37℃温箱或烘箱中数天，使完全干燥。
2.1.2 抗菌药纸片制作：在上述含有50片纸片的青霉素瓶内加入药液0.25毫升，并翻动纸片，使各纸片充分浸透药液，翻动纸片时不能将纸片捣烂。
同时在瓶口上记录药物名称，放37℃温箱内过夜，干燥后即密盖，如有条件可真空干燥。
两种载体在洗涤剂抑菌效果试验中的应用研究
QB/T 2738-2012《日化产品抗菌抑菌效果的评价方法》中，用抑菌环法检测洗涤剂的抑菌率，标准中要求所用载体为新华一号定性滤纸，而新华定性滤纸分为定性快速滤纸、定性中速滤纸、定性慢速滤纸。
文章研究了定性快速滤纸和定性慢速滤纸对同一实验结果的影响，以期望对标准加以完善。
1 实验与方法1.1 实验仪器及试剂1.1.1 实验设备生物安全柜，型号：BSC-1100II A2-x ，济南鑫贝西生物技术有限公司；抑菌剂载体（5mm 直径圆形新华定性快速滤纸片和定性慢速滤纸片，经压力蒸汽灭菌处理后，置120o 烤干2h ，保存备用）；恒温生化培养箱，上海一恒科技仪器有限公司；TYJ-2A 菌落计数器，上海宏汇电器厂；涡旋仪，海门市其林贝尔仪器制造有限公司；微量移液器（5m L-50m L ，可调式）；游标卡尺，成都量具刃具总厂；玻璃平板；接种环；玻璃试管；棉拭子；刻度吸管5mL 、1mL 。
1.1.2 生化试剂营养琼脂培养基（pH7.2～7.4），北京路桥两种载体在洗涤剂抑菌效果试验中的应用研究姚海航 于 文（西安开米股份有限公司，陕西 西安 710075）摘 要：按照行业标准QB/T 2738-2012《日化产品抗菌抑菌效果的评价方法》中抑菌环法的操作步骤，研究了定性快速滤纸和定性慢速滤纸为载体对抑菌环法抑菌性能的影响。
结果表明：用不同载体测定同一种洗涤剂结果有显著差异，定性慢速滤纸测定的抑菌效果明显优于定性快速滤纸的抑菌效果。
关键词：洗涤剂；抑菌环；定性滤纸；载体中图分类号：TQ649 文献标识码：B 文章编号：1672—2701（2018）11—66—03中国洗涤用品工业杂志《工业与公共设施清洁》662 0 1 8 年 第 11 期技术圆桌技术有限公司；营养肉汤培养基（pH7.2～7.4），北京路桥技术有限公司；磷酸盐缓冲溶液（PBS ，0.03mol/L ，pH7.2）；标准硬水（硬度342mg/L ）。
高效纤维素降解菌的筛选[1]
![高效纤维素降解菌的筛选[1]](https://img.taocdn.com/s3/m/07e44f56312b3169a451a439.png)
mL - 1 mL - 1
X21 14
9
X22 16
11
X23 10
7பைடு நூலகம்
Z21 18
22
Z22 73
35
Z23 54
29
Z24 22
18
Z25 55
24
透明圈 直径
1. 1 1. 3 1. 0 1. 5 3. 4 2. 0 1. 5 1. 2
CM C 酶 FPA 透明圈 菌种 U · U · 直径
mL - 1 mL - 1
21. 5 21. 5 21. 5 21. 5 21. 5 21. 5 21. 5
0. 000 0. 264 0. 427 0. 592 0. 754 0. 811 1. 112
DN S 法测糖。在上述条件下, 定义每分钟催化纤维素
水解生成 1 Λg 葡萄糖的酶量为一个酶活力单位U 。
滤纸酶活 (FPA ) 的测定 将新华 1 号滤纸 (1
2. 2. 1 GL C 标准曲线 用 DN S 法, 在波长为 520 nm 条件下, 测定一
系列已知样品, 制备标准 GL C 曲线, 制备过程见表 1, 绘制结果见图 2。
表 1 葡萄糖标准曲线测定结果
含糖总量 m g 葡萄糖液 mL 蒸馏水 mL DN S 试剂 mL 加热 冷却 蒸馏水 mL 光密度 O. D.
Keywords: Screen ing Cellu lo se2decom po sing M icroo rgan ism s
植物纤维素约占植物体干重的 33. 4%～ 50% , 是地球上最丰富的有机物质。但是, 由于纤维素中存 在许多高能的氢键, 因此其水解、利用均很困难。 世 界上平均每年约生成 1500～ 2000 亿 t 植物性有机 物, 其中约有一半为纤维素类物质, 仅能利用一小部 分。绝大部分都被弃置[1], 因此如何更有效地开发和 利用纤维素资源已成为当今世界的热门课题之一。 能够降解纤维素的微生物有很多, 可是目前的研究 却大多集中在有限的几个菌株上, 如康宁木霉、里氏 木霉等。然而这些菌株仍然存在着产酶成本高, 酶活 性不稳定, 作用 pH 范围狭窄等问题。 因此寻找更 多、更高效、作用范围更广泛的新菌种是十分必要 的。作者研究比较了几种纤维素降解菌筛选方法, 并 从自然界筛得高效纤维降解细菌 1 株, 真菌 3 株。该 细菌可在 4 d 内将滤纸平板完全降解为粘质, 初步 鉴定为嗜纤维菌属。 此外, 3 株真菌均为木霉菌, 降 解活性也很高, 其中一株在发酵培养第 6 d, 滤纸酶 活 (FPA ) 即可达到 51 U mL。
药学论文
TCDCANa的合成及抗茵抗炎作用研究作者工作单位摘要：以鹅去氧胆酸( CDCA) 和牛磺酸为基本原料合成了牛磺鹅去氧胆酸钠(TCDANa ) ，以萃取和重结品法提纯,收率为 6 3 . 4 ％，ω ( T C D C A N a ) ≥9 2 % , T LC和I R法确定了其结构。
并将牛磺鹅去氧胆酸钠与鹅去氧胆酸钠( CDCANa ) 进行了抗菌、抗炎和镇咳对比实验。
药效实验结果为:TCDCANa和CDCANa 均具有抗革兰阳性菌作用 (抑菌环直径分别为 2 .46± 0.08 cm 和 1.91 ± 0.13 cm ) ,抗炎作用抑制率分别为( 79.1 ±25.4) ％和 (71.2 ±23.1 ) ％，镇咳作川减咳率分别为(29.1±5.6 ) ％和(18.2±6.8 ) ％，牛磺鹅去氧胆酸钠与鹅去氧胆酸钠存在显著性差异。
药效文验表明，TCDCANa具明显的镇咳、平喘和抗菌作用,作用慢于CDCANa。
关键词：牛磺鹅去氧胆酸；抗菌；抗炎；中药现代化前言牛磺鹅去氧胆酸{ TCDCA，2-[ 3 α，7α-dihydroxy-24-oxo-5β—cholan-24-y1)amino]ethanesulfonic acid}是鸡、鸭、鹅等动物胆汁的主要有效成分之一，其质量占鸡胆汁中胆汁酸的 8 0 ％，也是蛇胆的主要胆汁酸[1-3]成分之一。
它是由鹅去氧胆酸 ( C D C A， 3α- 7α- dihydroxy- 5β- cholan- 2，4- oicacid)的羧基与牛磺酸(taurine，2 – aminoethanesulfonic acid ) 的氨基以酰胺键相连而成的一种结合型胆汁酸( conjugated bile acids) 。
据文献报道[1,3-5]，新鲜的动物胆汁中几乎不含游离型胆汁酸，但是由于肝胆疾病或贮存方法不当也可引起TCDCA分解为游离型的CDCA。
纸片扩散法资料
抗生素敏感实验——纸片扩散原理：纸片扩散法是将含有定量抗菌药物的滤纸片贴在已接种了测试菌的琼脂表面上，纸片中的药物在琼脂中扩散，随着扩散距离的增加抗菌药物的浓度呈对数减少，从而在纸片的周围形成一种浓度梯度。
在药物扩散的同时，纸片周围抑菌浓度范围内的测试菌不能生长，而抑菌浓度范围外的菌株则继续生长，从而在纸片的周围形成透明的抑菌圈。
不同抗菌药物抑菌圈的直径因受药物在琼脂中的扩散速率的影响而可能不同，抑菌圈的大小可反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的最低抑菌浓度（MIC）呈负相关，即抑菌圈越大，MIC越小原理通俗说法：将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测定菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸取琼脂中的水分，溶解后便不断的向纸片周围区域扩散形成递减的梯度浓度。
在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，从而形成透明的抑菌圈。
该抑菌圈表示药物对该种细菌的生长繁殖具有抑制作用。
通过测定抑菌圈的直径大小，可以判定药物的抑菌强弱，抑菌圈直径越大表示药物抑菌作用越强，抑菌圈直径越小表示药物抑菌作用弱，没有抑菌圈表示该药物没有抑菌作用。
并且，经稀释法测得的MIC的对数和用纸片测定相应的菌株得到的抑菌直径之间大致呈直线相关，因此将两种方法相对应地测试各种据菌株所得数据，进行统计学的相关回归分析处理，可得到一条回归线，依此可推断该菌株的MIC，两者呈负相关关系，即MIC愈小，抑菌圈直径愈大。
材料（以大肠杆菌为例）：1.药品及细菌——诺氟沙星、新霉素、硫酸链霉素、氟苯尼考、卡那霉素、泰乐菌素、生理盐水、磷酸盐缓冲液、MH营养肉汤、MH琼脂培养基、大肠杆菌。
2.器材——纸片、试管、移液器、烘箱、培养皿、培养箱、镊子、1000ml烧杯、PH试纸、量筒、天平、高压灭菌锅、三角瓶、打孔器方法1.培养基的制备：2.药敏纸片的制备2.1纸片制备：选择优质新华1号滤纸，用打孔器制成直径6mm的圆形滤纸片。
每200张一管，经120℃2h灭菌后备用2.2药物稀释每张以吸入20μL药液为标准，如纸片薄，药物原液需作调整。
药敏纸片的制备完整版
药敏纸片的制备HEN system office room 【HEN16H-HENS2AHENS8Q8-HENH1688】药敏纸片的制备及药敏试验方法抗菌药物对预防或治疗动物疾病发挥了巨大的作用，但随着抗菌药物在兽医临床的广泛使用，尤其为了防治疾病，常常以亚剂量水平的药物添加于饲料中，以致长期使用后病原微生物产生了耐药性，使本来对治疗病原微生物感染有效的抗菌药物失去作用，给兽医临床上有效地预防和治疗疾病的发生带来一定的困难。
通过制作自家药敏纸片进行试验,可快速进行药物的筛选,获得对病原微生物敏感的药物, 对指导临床合理用药，提高治疗效果，节约养殖过程的用药费用，有着重要的意义。
一. 药敏纸片的制备1.材料抗菌药物、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、冰醋酸、新华1号定性滤纸、50mL容量瓶、无菌过滤器或一次性过滤器等2．方法PBS的配制A.制备L储备液LNa2HPO4： +1000 mL蒸馏水或 +1000 mL蒸馏水L NaH2PO4: +1000 mL蒸馏水或 +1000 mL蒸馏水B.将两种储备液按下表比例，配制成不同pH值的PBS,室温保存备用L磷酸缓冲液的配制抗菌药物原液的配制和保存期限－20℃4℃抗菌药物溶剂浓度（?g/mL）青霉素 PBS 1280 3个月1周半合成青霉素类 PBS 1280 3个月1周头孢菌素类 PBS 1280 3个月1周氨基糖苷类 PBS 1280 3个月4周四环素类 PBS 12803个月1周PBS 12803个月2周多粘菌素B硫酸盐PBS 12803个月2周林可或氯林可霉素12803个月2周红霉素先用少量乙醇溶解，再用 PBS1280长期长期氯霉素先用少量乙醇溶解，再用 PBS12803个月1周利福平先用甲醇溶解，再用PBS万古霉素蒸馏水12803个月2周两性霉素B 蒸馏水12803个月1周12803个月2周5－氟胞嘧啶先用少量二甲基甲酰胺溶解，再用蒸馏水1280长期长期甲氧苄氨嘧啶先用L乳酸溶解再用蒸馏水稀释各种磺胺药先用NaoH溶解再用蒸2560长期长期配制方法A.按抗菌药物原液中药物百分含量的要求，计算出纯抗菌药物的重量，方法是：抗菌药物终浓度×终体积。
药敏纸片的制备
药敏纸片的制备及药敏试验方法抗菌药物对预防或治疗动物疾病发挥了巨大的作用，但随着抗菌药物在兽医临床的广泛使用，尤其为了防治疾病，常常以亚剂量水平的药物添加于饲料中，以致长期使用后病原微生物产生了耐药性，使本来对治疗病原微生物感染有效的抗菌药物失去作用，给兽医临床上有效地预防和治疗疾病的发生带来一定的困难。
通过制作自家药敏纸片进行试验,可快速进行药物的筛选,获得对病原微生物敏感的药物, 对指导临床合理用药，提高治疗效果，节约养殖过程的用药费用，有着重要的意义。
一. 药敏纸片的制备1.材料抗菌药物、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、冰醋酸、新华1号定性滤纸、50mL容量瓶、无菌过滤器或一次性过滤器等2．方法2.1 PBS的配制A.制备0.2mol/L储备液0.2mol/LNa2HPO4 ：35.61g Na2HPO4.2H2O+1000 mL蒸馏水或71.62g Na2HPO4.12H2O+1000 mL蒸馏水0.2mol/L NaH2PO4 :31.2g NaH2PO4.2H2O+1000 mL蒸馏水或27.6g NaH2PO4.H2O+1000 mL蒸馏水B.将两种储备液按下表比例，配制成不同pH值的PBS,室温保存备用0.2mol/L磷酸缓冲液的配制2.2 抗菌药物原液的配制和保存期限2.2.1抗菌药物配制溶剂和保存期限抗菌药物溶剂浓度（ g/mL）－20℃4℃青霉素pH6.0 PBS 1280 3个月1周半合成青霉素类pH6.0 PBS 1280 3个月1周头孢菌素类pH7.8 PBS 1280 3个月1周氨基糖苷类pH7.8 PBS 1280 3个月4周四环素类pH4.5 PBS 12803个月1周多粘菌素B硫酸盐pH6.0 PBS 12803个月2周林可或氯林可霉素pH7.8 PBS 12803个月2周12803个月2周红霉素先用少量乙醇溶解，再用pH7.8 PBS1280长期长期氯霉素先用少量乙醇溶解，再用pH6.0 PBS12803个月1周利福平先用甲醇溶解，再用pH6.0PBS万古霉素蒸馏水12803个月2周两性霉素B 蒸馏水12803个月1周12803个月2周5－氟胞嘧啶先用少量二甲基甲酰胺溶解，再用蒸馏水1280长期长期甲氧苄氨嘧啶先用0.1mol/L乳酸溶解再用蒸馏水稀释2560长期长期各种磺胺药先用NaoH溶解再用蒸馏水稀释2.2.2 配制方法A.按抗菌药物原液中药物百分含量的要求，计算出纯抗菌药物的重量，方法是：抗菌药物终浓度×终体积。
生化与分子生物学实验指导
⽣化与分⼦⽣物学实验指导⽣化与分⼦⽣物学实验指导-（)————————————————————————————————作者:————————————————————————————————⽇期:实验⼀氨基酸纸层析法⼀、实验⽬的通过氨基酸的分离，了解层析法的基本原理和操作⽅法。
⼆、实验原理纸层析法(ｐａp ｅｒ c ｈro ｍａt ｏgr ａphy ）是⽣物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常⽤技术,可⽤于蛋⽩质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定。
纸层析法⼜称纸⾊谱法,是⽤滤纸为⽀持物,所⽤展层溶剂⼤多由⽔和有机溶剂组成,滤纸纤维与⽔的亲和⼒强,与有机溶剂的亲和⼒弱,因此在展层时，纸纤维上吸附的⽔分是固定相,有机溶剂是流动相。
溶剂由下向上移动的,称上⾏法；由上向下移动的,称下⾏法。
将样品点在滤纸上(此点称为原点),进⾏展层，样品中的各种氨基酸在两相溶剂中不断进⾏分配。
由于它们的分配系数不同,不同氨基酸随流动相移动的速率就不同,于是就将这些氨基酸分离开来，形成距原点距离不等的层析点。
溶质在滤纸上的移动速率⽤Rf 值表⽰：在⼀定条件下某种物质的Ｒf 值是常数。
Ｒf 值的⼤⼩与物质的结构、性质、溶剂系统、温度、湿度、层析滤纸的型号和质量等因素有关。
只要条件(如温度、展层溶剂的组成）不变,Rf 值是常数,故可根据Ｒf 值作定性判断。
样品中如有多种氨基酸，其中某些氨基酸的R ｆ值相同或相近,此时如只⽤⼀种溶剂展层,就不能将它们分开。
为此，当⽤⼀种溶剂展层后，将滤纸转动90度,再⽤另⼀溶剂展层,从⽽达到分离⽬的,这种⽅法称为双向纸层析法。
氨基酸⽆⾊,可利⽤茚三酮显⾊反应,将氨基酸层析点显⾊作定性、定量⽤。
所有氨基酸及具有游离α-氨基的肽与茚三酮反应都产⽣蓝紫⾊物质,只有脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应产⽣(亮)黄⾊物质。
三、药品器材1器材层析滤纸（新华1号)、喷雾器、剪⼑、层析缸、⽑细管、电吹风、刻度尺、铅笔。
R ｆ=原点到层析斑点中⼼的距离原点到溶剂前沿的距离2试剂(1)氨基酸溶液:赖氨酸、脯氨酸、缬氨酸溶液以及他们的混合溶液(各组分浓度0．5％)。
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新华1-5号滤纸片
WHATMAN定性滤纸用于定性分析技术中鉴定物质的性质。
折叠好的定性滤纸与相同型号平整的小组相比，回忆了流速和增加了负载力。
WHATMAN定性滤纸-标准级分类
Grade1（1号）:
11μm 在日常过滤中最经常使用的，中等保留力的流速。
非常广泛地用于实验室应用，澄清液体。
典型地用于沉淀物的定量分析分离，如硫酸铅、草酸钙和碳酸钙。
在农业方面，它用于土壤和种子测试：在食品方面，Grade1滤纸常用于从相关液体和抽离液体分离固体食品的常规方法。
并且广泛用于教学中简单的定性分析分离。
在空气污染监测方面，有圆片和卷状可供使用，从气流中收集大气灰尘然后用光度计测量；在气体探测中滤纸用发色剂浸湿，用光反射来定量。
Grade2（2号）:
8μm 比Grade1保留力略强，但过滤时间却相对长些（即过滤速度相对慢些），吸附性比Grade1强，已折叠好的为Grade2V。
除8μm大小颗粒的普通过滤之外，它额外的吸附性能也派上用场，例如，在植物生长实验中截留土壤营养，也用于监测空气和土壤测试中的特殊污染物。
已折叠好的为Grade2V。
Grade3（3号）
6μm 厚度是Grade1的两倍。
负载力好，颗粒保留较小。
由于其湿强度好适合放在布氏漏斗中使用。
其高吸附性能可用作为样品的载体。
Grade4（4号）：
20-25μm 非常适用于分析中常规生物液体和有机浸出物澄清的快速过滤，空气污染监测中只要求高流速但对细小颗粒收集要求不严的采样。
Grade5（5号）:
2.5μm 最高效的定性滤纸，用于收集小颗粒，流速慢。
适用于化学分析、澄清悬浮物和水/泥土分析。
Grade6（6号）:
3μm 流速是Grade5的两倍，但颗粒保留度相等。
常被指定用于锅炉水分析。