实验六有机酸的测定
有机酸摩尔质量的测定
❀第三届化学分析实验技能比赛❀有机酸摩尔质量的测定参赛成员：吕珍洁胡梦云赵忠臣参赛班级：化学系2010级C班有机酸摩尔质量的测定一、 实验目的⒈熟悉物质的称量、溶液的配制和滴定分析的基本操作。
⒉学会标准溶液配制的直接法和间接标定法。
⒊学习并掌握有机酸摩尔质量的测定原理和方法。
二、 实验原理大多数有机酸是固体酸，如草酸（pKa 1=1.23, pKa 2=4.19）,酒石酸（pKa 1=2.85，pKa 2=4.34），柠檬酸（pKa 1=3.15， pKa 2=4.77， pKa 3=6.39）等，它们在水中都有一定溶解性。
若浓度达0.1mol ·L -1左右，且cK a ≥10-8,则可用NaOH 标准溶液滴定。
因滴定突跃在弱碱性范围内，常选用酚酞作指示剂，滴定至终点溶液呈微红色，根据NaOH 标准溶液的浓度和滴定时所消耗的体积及称取的纯有机酸的质量，可计算该有机酸的摩尔质量。
当有机酸为多元酸时，应根据每一级酸能否被准确滴定的判别式（810c K a a i i -≥）及相邻两级酸之间能否分级滴定的判别式（510+1+1c K a ai ic K a ai i ≥）来判别多元酸与NaOH 之间反应的计量关系，据此计算出有机酸的摩尔质量。
查文献资料知，柠檬酸（C 6H 8O 7·H 2O ）是三元弱酸（Ka 1=7.4×10-4，Ka 2=1.7×10-5,Ka 3=4.0×10-7）,其三个不同级酸都能被准确滴定，但不能被分别滴定。
柠檬酸溶液与NaOH 溶液的化学反应方程式为：34687236572C H O H O NaOH Na C H O H O ⋅+=+可推算出柠檬酸摩尔质量的计算式：68726872311041()3C H O H O C H O H O NaOH m Mr CV ⋅⋅⨯⨯=⨯本实验中，因为NaOH 不是基准物质，所以不能用直接法配制NaOH 标准溶液，因此采用间接标定法配制NaOH 标准溶液。
有机酸摩尔质量的测定-实验六有机酸摩尔质量的测定X的置
实验六有机酸摩尔质量的测定一、实验目的1. 掌握NaOH标准溶液的标定方法。
2. 掌握有机酸摩尔质量的测定方法。
二、实验原理物质的摩尔质量可以根据滴定反应从理论上进行计算。
本实验要求准确测定一种有机酸的摩尔质量值。
大多数的有机酸是弱酸。
如果某有机酸易溶于水，离解常数Ka≥10-7，用标准碱溶液可直接测其含量，反应产物为强碱弱酸盐。
由于弱酸根与水溶液中水合质子反应，使滴定突跃范围在弱碱性内，可选用酚酞为指示剂，滴定溶液由无色变为微红色即为终点。
根据NaOH 标准溶液的浓度和滴定时消耗的体积，计算该有机酸的摩尔质量值。
本实验还利用NaOH溶液的标定结果，用误差理论进行处理。
三、仪器与试剂1. NaOH溶液 0.1mol·L-1在台秤上称取约4g固体NaOH放入烧杯中，加入新鲜的或煮沸除去CO2的蒸馏水，使之溶解后，转入带有橡皮塞的试剂瓶中，加水稀释至1L，充分摇匀。
2．酚酞指示剂 0.2％乙醇溶液3．邻苯二甲酸氢钾KHC8H4O4基准物质在100-125°C干燥1小时后，放入干燥器中备用。
4. 有机酸试样，如草酸、酒石酸、柠檬酸①。
四、实验方法1．0.1 mol·L-1NaOH溶液的标定．在称量瓶中称量KHC8H4O4基准物质，采用差减法称量，平行称7份，每份0.4-0.6g，分别倒入250ml锥形瓶中，加入40-50ml水使之溶解后，加入2-3滴0.2％酚酞指示剂，用待标定的NaOH溶液滴定至呈现微红色，保持半分钟内不褪色，即为终点。
平行测定7份，求得NaOH溶液的摩尔浓度，其相对平均偏差≤0.2％。
否则需重新标定。
2．有机酸摩尔质量值的测定准确称取有机酸试样一份置于小烧杯中，根据选择的试样计算称样为多少②。
称好试样后，加水使之溶解，定量转入250ml容量瓶中，加水稀释至刻度，充分摇匀。
用25.00ml移液管平行移取三份，分别放入250ml锥形瓶中加酚酞指示剂2-3滴，用NaOH标准溶液滴定溶液由无色呈现微红色，30秒钟内不褪色即为终点。
分析化学实验报告6
答：放置一会儿粉色褪去，因为空气中二氧化碳溶 于水，使水溶液中酸性增加。
2. 如何计算白醋总酸的百分含量？
答：用消耗氢氧化钠的体积
m% CV 4 M 100% 0.01
乘以氢氧化钠的浓度，得到 醋酸的摩尔数，再乘以4就是
10.00mL醋酸的摩尔数，再乘
以醋酸的分子量，除以0.01，
3.反滴定法适合测定什么物质？对反应有什么要求？
6. 为什么蛋壳需要研碎，且与盐酸的反应要放置30分钟，此反应 过程能否加热？
答：为了反应完全，不能加热，否则CO2会逸出。
实验五、过氧化氢含量H
2
2Mn 5O2 8H 2O
2
2MnO4 5H 2C2O4 6H 2Mn 10CO2 8H 2O
2.蛋壳中碳酸钙含量的测定
（1） 称取0.2~0.25g已经研碎的蛋壳3份， 分别置于锥形瓶中，用滴定管逐滴加入HCl溶 液约30mL，放置30分钟，
（2加入甲基橙指示剂，用氢氧化钠标准 溶液滴定溶液由（ ）色变为（ ）色。
（3） 计算碳酸钙的含量。
配置高锰酸钾溶液，为下一次实验准备。
思考题：
1.以酚酞为指示剂时，用碱滴定酸至溶液呈浅粉色为 止，若放置一会儿出现什么现象？为什么？
5、用甲基橙、酚酞两个不同指示剂进行比较滴定时，为什么酸碱体积比VHCl/ VNaOH往 往不等？ 答：两指示剂变色范围不同，滴定终点不同。
6、如何检验滴定管是否洗净？ 答：透明并无肉眼可见的污物，内外壁能被水均匀地润湿且不挂水珠。
实验二、分析天平的称量练习及自来水硬度的测定
一、实验原理： 1 . 总硬度的测定： 在滴定开始时
一、实验室安全（电，火，玻璃）
二、实验要求 （1）纪律：迟到、安静 （2）卫生：个人要求（从来没有来过） 值日生 （3）预习报告 （4）实验记录 （5）实验报告
有机酸摩尔质量的测定
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2. 0.1mol/L NaOH溶液的标定
实验步骤
减量法准确称取0.4～0.6 g KHC8H5O4
用NaOH滴定至
40-50mL H2O 锥形瓶
微红色30s不褪色
终点
2滴 PP
平行滴定3次，计算NaOH标准溶液的浓度。
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3.有机酸摩尔质量的测定
实验步骤
移取25.00mL有 机酸试样溶液
NO.
Ⅰ
样品质量/g
消耗NaOH体积 /mL
平均体积/mL
偏差/mL
相对平均偏差/%
有机酸摩尔质量
推测为何有机酸 (n=?)
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Ⅱ
Ⅲ
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六、思考问题
(1) 如 NaOH 标准溶液在保存过程中吸收了空气中的 CO2， 用该标准溶液测定某有机酸的含量，NaOH 浓度是否会改变？ 测定结果有何影响？ (2) 草酸、柠檬酸、酒石酸等多元有机酸能否用 NaOH 溶液 分步滴定 ? (3) Na2C2O4 能否作为酸碱滴定的基准物质？为什么？
式为
MA
mA
1 2
cBVB
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2. NaOH 溶液浓度的标定 NaOH不是基准物，其标准溶液必须用标定法配制。本
实验采用邻苯二甲酸氢钾为基准物质标定NaOH 溶液的浓度， 酚酞为指示剂，反应式为：
OH- + HC8H4O4- = C8H4O42- + H2O 溶液颜色由无色变为微红色，保持30s不褪即为终点。
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参考文献
[1] 分析化学(第三版).武汉大学编.高等教育出版社. [2] 分析化学实验(第四版).武汉大学编.高等教育出版社.2001.5 [3] 基础分析化学实验(第二版).北京大学出版社，1998
有机酸摩尔质量的测定
1.称量：用差减法准确称 0.3~0.4 克草酸试样于小烧杯中； 2.定容：用适量蒸馏水溶解，定量转移至 250mL 容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀； 3.滴定：用移液管移取试液 25.00ml 于锥形瓶中，加 2 滴酚酞指示剂，用 0.02 mol/L 的 NaOH 标准溶液滴定至由无色变为微红色, 半分钟不褪色，即为终点，记录滴定所消耗的 NaOH 溶 液的体积，再重复滴定 2 次。
126.07
测量结果的相对误差
六、结果讨论（分析引起测定结果与理论值有误差的原因）
….. ….. …… 七、安全与环保
…… ……
五、数g 草酸配成（
）mL 溶液
c（NaOH）=
mol/L
记录项目
标定序号
1
2
3
移取草酸溶液的体积（mL）
NaOH 标液初读数（mL）
NaOH 标液终读数（mL）
消耗 NaOH 标液体积（mL）
草酸摩尔质量(g/mol)
平均摩尔质量 M (g/mol)
H2C2O4·2H2O 摩尔质量理论值(g/mol)
预习与思考
有机酸(草酸)摩尔质量的测定
1、复习理论书上关于滴定多元弱酸的相关知识
2、思考并回答问题
用约 0.02mol/L NaOH 标准溶液测定 H2C2O4·2H2O( Ka1 5.9102 , Ka2 6.4105 )的
摩尔质量 (1) 判断有几个滴定突跃；(写出判据)
(2) 选用什么指示剂；
量点在弱碱性范围内，选用酚酞作指示剂，滴定至终点溶液呈微红色 30s 不退色。
三、主要仪器和试剂
分析天平，称量瓶，锥形瓶，碱式滴定管，容量瓶，烧杯，移液管，玻璃棒
0.02mol/L NaOH 溶液 、0.2％酚酞溶液(乙醇溶液)、邻苯二甲酸氢钾 (A.R，在 100～125℃ 下干燥 1h 后，置于干燥器中备用)、有机酸(草酸)试样 四、实验步骤
实验六熔点的测定--有机化学
实验六熔点的测定一、实验目的：了解测定熔点的意义；掌握用毛细管法测定熔点的方法。
二、实验原理：每一个晶体有机物都具有固定的熔点。
一个纯化合物从始熔至全熔的温度范围叫熔程，一般为0.5∽1℃。
当含有杂质时，会使熔点下降，且熔程变宽。
因此测熔点可以检验有机物的纯度。
纯晶体物质具有固定和敏锐的熔点，在测定熔点的过程中，当接近熔点时，升温的速度不能快，要使熔化过程尽可能接近于两相平衡状态，密切注意加热情况，以每分钟上升约1℃为宜。
三、实验步骤及装置：记录始熔和全熔的温度温度计自然冷却至，用纸擦去浴液，用水冲洗浴液冷却后倒入回收瓶中注意：1.浴液的高度与上测管相平或高出上侧管口0.5cm。
浴液的熔点应高于被测物的熔点，浴液不与被测物作用且经济、安全。
浓硫酸用于熔点为170℃以下的物质；液体石蜡用于熔点为220℃以下的物质；熔点在220℃以上者用硫酸与硫酸钾（7∶3）混合物（达320℃）；（3∶2）混合物（达365℃）。
2.称取0.1∽0.2g苯甲酸与肉桂酸的混合物。
3.样品高度为2∽3mm。
将样品装入内径为1mm，长60∽70mm一端封闭的毛细管内（将药品堆成小山样于称量纸上或表面皿上，将毛细管未封口一端插入药品中），然后将封闭一端朝下放入长为50∽60cm的玻璃管内自由落下2∽3次（在称量纸上或表面皿上完成）。
样品中如有空隙，则传热不好。
用纸拭去沾于熔点管外的粉末，以免污染提勒管中的导热液。
4.先将温度计插入带凹巢的软木塞中，然后将熔点管用橡皮圈绑在温度计的刻度线的左侧，使样品位于水银球中部，凹巢对准（与大气相通，排出气泡），刻度线正对视线（便于读数），水银球插入浴液至b形管两支管口的正中间，橡皮圈置于浴液之上，熔点管高出液面3∽4mm。
5.加热时使温度升高5℃/min。
6.记录晶体熔化的温度。
停止加热。
7.待温度下降30℃后，再装样、固定熔点管、插入浴液、再加热（开始时，温度升高5℃/min，待比粗测熔点低10∽15℃时，调节火焰，使温度升高1∽2℃/min，越接近粗测熔点升温速度应越缓慢，控制上升0.2∽0.3℃/min，升温速度是准确测定熔点的关键）。
食品化学实验指导
食品化学实验指导目录实验一水分的测定（烘重量法）实验二食品水分活度的测定（直接测定法）实验三食品水分活度（a w）的测定（水分活度仪测定法）实验四粗灰分的测定（干式灰化法）实验五总酸的测定（滴定法）实验六还原糖的测定实验七淀粉含量的测定实验八淀粉含量的测定（碘量法）实验九美拉德反应初始阶段的测定实验十果胶的提取和果酱的制备实验十一淀粉糊化及酶法制备淀粉糖浆及其葡萄糖值的测定实验十二豆类淀粉和薯类淀粉的老化（粉丝的制备与质量感官评价）实验十三粗脂肪的测定（索氏抽提法）实验十四脂肪氧化、过氧化值及酸价的测定（滴定法）实验十五大豆中油脂和蛋白质的分离实验十六蛋白质的盐析和透析实验十七蛋白质的功能性质（一）实验十八蛋白质的功能性质（二）实验十九粗蛋白质的测定（微量凯氏定氮法）实验二十可溶性蛋白质的测定（考马斯亮蓝G-250法）实验二十一茚三酮法测定氨基酸总量实验二十二维生素C含量的测定(2,6-二氯酚靛酚法)实验二十三维生素C含量的测定（紫外快速测定法）实验二十四总抗坏血酸含量的测定（荧光法）实验二十五从番茄中提取番茄红素和β—胡萝卜素实验二十六β-胡萝卜素含量的测定（HPLC法）实验二十七类黄酮含量的测定（HPLC法）实验二十八绿色果蔬分离叶绿素及其含量测定实验二十九水果皮颜色和淀粉白度的测量（测色色差计的使用）实验三十食品感官质量评价实验一水分的测定（烘重量法）一、原理常用的果蔬新鲜原料含水量的测定, 是将称重后的果蔬置于烘箱中烘去水分, 其失重为水分重量。
在烘干过程中, 果蔬中的结合水, 在100℃以下不易烘干, 若在105℃以上, 样品中一些有机物质（如脂肪）是易氧化使干重增加, 而果蔬中的糖分, 在100℃上下则易分解, 也可使测定产生误差, 故烘干温度先为60-70℃, 至接近全干时再改用100-105℃干燥。
二、材料、仪器与试剂（一）材料: 苹果、梨、黄瓜、番茄等。
（二）仪器: 烘箱或真空干燥箱、分析天平、称量瓶、干燥器。
实验六 水果中总酸及pH的测定
实验六水果中总酸及pH的测定实验六水果中总酸及ph的测定实验六水果中总酸和pH值的测定一、目的要求1.更加熟悉和规范滴定操作。
2.学习及了解碱滴定法测定总酸及有效酸度的原理及操作要点。
3.掌握水果中总酸度及有效酸度的测定方法和操作技能。
4.掌握ph计的维护和使用方法。
二、实验原理1.总酸测定原理当用标准碱液滴定时，水果中的有机酸被中和成盐。
以酚酞为指示剂滴定，直至溶液变红，30s不褪色为终点。
根据消耗标准碱液的浓度和体积，计算水果中总酸的含量。
2.有效酸测定原理用PH计测量水果的有效酸度（PH）是将玻璃电极和饱和甘汞电极插入挤压果汁中，形成一个主电池。
电池的电动势与果汁的pH值有关。
也就是说，在25℃下，每个pH单位差将产生59.1mv的电池电动势。
电池电动势由酸度计测量，并直接以pH值表示，因此可以直接从酸度计中读取果汁的pH值。
3、仪器和试剂1仪器水浴锅，酸度计，玻璃电极，饱和甘汞电极，现在多用复合电极。
2.试剂0.1mol/lnaoh标准溶液，酚酞乙醇溶液，pH=4.01标准缓冲溶液。
4、实验步骤1总酸度的测定(1)样液制备将样品用组织捣碎机捣碎并混合均匀。
称取适量样品，用15ml无co2蒸馏水将其移入250ml容量瓶中，在75~80℃水浴上加热0.5h，冷却后定容，用干滤纸过滤，弃去初始滤液25ml，收集滤液备用。
（2）准确吸取上述制备的滤液50ml，加入3~4滴酚酞指示剂，用0.1mol/lnaoh标准溶液滴定至微红不褪色30s。
记录消耗的NaOH标准溶液的体积。
2.水果中有效酸度（PH）的测定(1)样品处理将水果样品榨汁后，取汁液直接进行ph测定。
(2)酸度计的校正① 打开pH计电源，预热30分钟，连接玻璃和甘汞电极，并将读数开关降至零。
②测量标准缓冲溶液的温度，调整pH计的温度补偿旋钮。
③将二电极浸入缓冲溶液中，按下读数开关，调节定位旋钮使ph计指针在缓冲溶液的ph上，放开读书开关，指针回零，如此重复操作二次。
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7种有机酸标准混合液，吸取各有机酸10 ml定容到100ml，即可作工作液。 （本实验只配MA、CA、TA三种标准混合液）
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五、操作步骤
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（一）样品制备
称取水果(苹果）200g左右，洗净、切碎， 用组织捣碎机匀浆，称样品10g，置三角 瓶中，加入pH2.65 重蒸水60－70ml，沸 水浴中加热60min以浸提有机酸，冷却， 用pH2.65重蒸水移入100ml容量瓶中，定 容，过滤，再用 0.45um微孔滤膜过滤， 待上机测定。
实验报告：
1、各浓度标准苹果酸洗脱图 2、样品洗脱图。（要求编辑成WORD文档打印） 3、绘制标准工作曲线（在EXCEL中进行打印）。 4、结果计算报告
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实验分组安排
全班以2人/组为单位，进行提取样品一份 供检测，约1小时左右。
液相系统条件设定平衡1小时左右
100ug/ml,50ug/ml,25ug/ml,12.5ug/ml,6.25ug /ml,3.125ug/ml浓度苹果酸进样，绘制工作 曲线，约1小时左右。
样品进样分析测定：1-15组轮流进样（约 20分钟/组）
系统冲洗维护。
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思考题
1、有机酸的测定—HPLC法中样品峰的定性依 据是什么？
2、通过本次实验要想得到分离效果较好的样 品洗脱图谱的工作条件主要取决于哪些？
3、HPLC法测定有机酸与其它方法比较有哪些 优点？
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1
实验六、有机酸的测定
（HPLC法）
2
一、实验目的
学习和掌握有机酸样品的处理和HPLC检 测方法。 进一步了解高效液相色谱仪的使用操作 性能。 掌握标准工作曲线的建立、数据的处理 及定量分析。
3
二、原理
果蔬及其制品、各种酒类、乳及乳制品中的主要 有机酸可用高效液相色谱进行测定。样品经过处 理、离心及超滤，用C-18反相柱和pH2.65的纯蒸 馏水作流动相，在紫外214nm处定量测定。
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（二）色谱条件
色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶填料Octadecylsilyl， 简称ODS）C-18(150*3.9mm,walers) 流动相：pH2.65重蒸水（用磷酸调制） 流速：0.4ml/min 检测器：UV214nm 柱温：18~20度 进样量：20ul
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（三）标准曲线的制作
取有机酸标准母液(苹果酸）用倍比稀释法稀释 成100ug/ml,50ug/ml,25ug/ml,12.5ug/ml, 6.25ug/ml,3.125ug/ml浓度，进样量为20ul,进行分 离，并以各种有机酸的浓度对峰高（或峰面积） 分别制成标准曲线。在标准曲线的线性范围内 进行样品中各种有机酸含量的测定。
蒸水pH至2.65,置超声波振荡仪上排气后 用0.45um膜过滤，待用。
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有机酸标准母液配制：分别称取苹果酸
10mg，柠檬酸10mg、酒石酸5mg，琥珀酸 20mg，延胡索酸10mg，吸取乳酸10ul，冰乙 酸10ul，置100ml棕色容量瓶中，以 pH2.65重 蒸水溶解并定容，使有机酸的浓度分别为 100,100,50,200,100,100和100mg/kg.
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（四）样品测定：
取样品处理液20ul 进行色谱分析，以标 准色谱图进行对照，根据保留时间确定 样品中的各种有机酸。
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六、计算
按下列公式计算样品中各种有机酸的含量（C）
C=N*(H/Hm)*F.50.(V/W).(1000/1000) 式中：C—各种有机酸的含量，以mg/kg(L)表示
N—20ul有机酸含量ug/20ul H—样品中某种有机酸的峰高(mm) Hm—标准溶液中某种有机酸的峰高（mm) F—稀释倍数 V—样品的定容体积（100ml) W—样品的称取量（g或ml)
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本实验用样品洗脱曲线的峰面积查标准 曲线计算结果。注意单位换率试验表明，除易挥发的乙酸外， 其它有机酸的回收率都较理想。
本法可同时测定柠檬酸、苹果酸、酒石酸、 琥珀酸、乳酸、乙酸及延胡索酸等7种有机酸。
4
三、材料与仪器
材料：果蔬、橘汁、酒等。
仪器：高效液相色谱仪（Agilent 1100)、 分析天平、组织捣碎机、研钵、三角瓶、 水浴、离心机、0.45um滤膜、溶剂过滤 器、 样品过滤器等。
5
四、试剂
磷酸（AR） 流动相的制备：用磷酸调节新配制的重
实验中可用已知浓度的苹果酸25ug/ml,进样20ul 计算样品回收率。
上机之前对各样品及标样用0.45um膜过滤2ml左 右，并用剩余的样品测 pH值, pH小于2.5不能 上机。
手动进样时必需用力均匀，水平注入，避免进
样引起误差。
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八、实验报告要求
预习报告：根据查阅有机酸测定文献资料及
教材写出预习报告。