腐烂茎线虫热激蛋白新基因的克隆与序列分析
腐烂茎线虫不同地理种群ITS区序列比对及系统发育
文章编号:1000-1573(2007)05-0079-05腐烂茎线虫不同地理种群IT S 区序列比对及系统发育王金成1, 季 镭2, 黄国明1, 杨秀丽1, 林茂松2(1.天津出入境检验检疫局,天津300456; 2.南京农业大学植病系,江苏南京210095)摘要:为弄清我国腐烂茎线虫(Ditylenchus destr uctor )不同地理种群IT S(I nternal transcr ibed spacer)区之间的碱基差异及系统发育关系,本研究通过网络软件Clustalw 1.83对腐烂茎线虫的核糖体I T S 区核酸序列进行了比对,结果发现腐烂茎线虫的8个种群中,DEll 、DEly 、DEAY987007三个种群(I 组)内部之间的碱基差异在1%以内,其它的5个种群(II 组)之间的差异为0~1%,而I 组与I I 组种群之间的差异达到了15%(根据IT S1+ 5.8s +IT S2序列)或20%(根据IT S1+IT S2序列)。
这说明我国腐烂茎线虫很可能是1个复合种。
根据IT S 区核酸序列构建的系统发育图同样显示,我国腐烂茎线虫的7个地理种群明显分为2个分支A 和B 。
关 键 词:腐烂茎线虫;鳞球茎茎线虫;食菌茎线虫;IT S(Inter nal transcribed spacer);系统发育关系中图分类号:S 435.621.2+9文献标识码:AAlignments of rDNA -ITS sequences and phylogeny of differentgeo populations of Ditylenchus destructor in ChinaWAN G Jin cheng 1,JI Lei 2,HU ANG Gu o ming 1,YAN G Xiu li 1,LIN Mao song 2(1.T ianjin Entr y-Exit Inspection and Quar antine Bureau,T ianjin 300456,China;2.Dept.of Plant P atholog y,N anjing A gricultural U niversity ,N anjing 210095,China)Abstract :The IT S sequences of 8populations of sw eet potato stem nematode,Ditylenchus destr uctor ,w ere analyzed.The pair-w ise divergences for IT S1+ITS2sequences and IT S1+5.8s +IT S2sequences of 3populations (group I),DEll,DEly and DEAY987007,are w ithin 1%.T he pair-w ise divergence w ithin other 5populations (group II),DEjl,DEsg ,DEws,DEw y,DEhblf,varied from 0~1%.However,the divergence betw een group I and group II is 15%for ITS1+5 8s+ITS2sequences or 20%for ITS1+IT S2sequences.T he MP analysis divided the 8above-mentioned populations into tw o clades.The clade B includes DEll,DEly and DEAY987007(group I),and the other 5populations in group II belong to clade A.Key words:Ditylenchus destr uctor ; D.dip saci; D.myceliop hagus;ITS (Internal Transcribed Spacer);phy logenetic relationships收稿日期:2006-11-10基金项目:天津自然科学基金资助项目(05YF JM JC10800)作者简介:王金成(1978-),男,山东潍坊人,硕士,农艺师,主要从事植物线虫方面的研究.E mail:goldcit ywang @yahoo.通讯作者:林茂松(1948-),男,江苏徐州人,博士,教授,主要从事植物线虫方面的研究.E mail:linms@第30卷第5期2007年9月河北农业大学学报JOURNAL OF AGRICULT URAL UNIVERSIT Y OF H EBE IVol.30No.5Sep .2007腐烂茎线虫(Ditylenchus destructor)为农业上重要病原线虫,也是我国重要的植物检疫性有害生物。
腐烂茎线虫rDNA_ITS序列分析
ＧｅｎＢａｎｋ 上进行 ｂｌａｓｔ 同源性检索，发现均与 Ｄ．ｄｅｓｔｒｕｃｔｏｒ
的 ｒＤＮＡ－ ＩＴＳ 序列 （ＧｅｎＢａｎｋ ＮＯ：ＡＹ９８７００７） 同源性较
高，尤其是 Ｄｅｓ－ １ 群体的同源性最高，达到 １００ ％。根据
１：Ｄｅｓ－ １，２：Ｄｅｓ－ ２，３：Ｄｅｓ－ ３，４：Ｄｅｓ－ ５，５：Ｄｅｓ－ ６，６：Ｄｅｓ－ ７，７：ＣＫ
单条线虫 ＤＮＡ 的提取：根据 Ｓｕｂｂｏｔｉｎ 等 ２００５ 年的方法，略有改进［１２］。 １．４ 线 虫 ｒ ＤＮＡ－ ＩＴＳ 区 的 ＰＣＲ 扩 增
用已提取的 Ｄ．ｄｅｓｔｒｕｃｔｏｒ 基因组 ＤＮＡ 为模板，扩增引物为 Ｖｒａｉｎ 等 公 ［１３］ 布的扩增线虫核糖体 ＤＮＡ－ ＩＴＳ 区 的 通 用 引 物 ， 序 列 如 下 ：ｒＤＮＡ１ （５ － ３′）：ＴＴＧＡＴＴＡＣＧＴＣＣＣＴＧＣＣＣＴＴＴ；ｒＤＮＡ２ （５ － ３′）：ＴＴＴＣ ＡＣＴＣＧＣＣＧＴＴＡＣＴＡＡＧＧ。ＰＣＲ 反应体系：２．５ μＬ 的 １０×Ｔａｑ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｂｕｆｆｅｒ，１．５ μＬ 的 Ｍｇ２＋（２５ ｍｍｏｌ／Ｌ）， ０．５ μＬ 的 ｄＮＴＰ（１０ μｍｏｌ／Ｌ），ｒＤＮＡ１（１０ μｍｏｌ／Ｌ）和 ｒＤＮＡ２（１０ μｍｏｌ／Ｌ）各 １ μＬ；０．２ μＬ 的 Ｔａｑ 聚合酶（５ Ｕ／μＬ）， 加水补足 ２５ μＬ。ＰＣＲ 反应条件：９４ ℃预变性 ２．５ ｍｉｎ；９４ ℃变性 １ ｍｉｎ；５３ ℃退火 １ ｍｉｎ；７２ ℃ 延 伸 ２ ｍｉｎ， 设 ４０ 个循环；最后 ７２ ℃延伸 １０ ｍｉｎ。扩增产物在 １．０ ％的琼脂糖凝胶中电泳分离后，通过 ＡＬＰＨＡ ５５００ 的凝胶呈像系统显示记录电泳结果。 １．５ ＰＣＲ 产物的克隆
国家科技支撑计划—进境有害生物检测关键技术研究项目（编号：２００６ＢＡＫｌ０Ｂ０６－ ２）资助。 刘先宝 男，１９７７ 年生，硕士，助理研究员。研究方向：植物病原线虫。电话：０８９８－ ２３３０２８２６。 ＊ 通讯作者 葛建军，电话：０１０－ ６４９１２７４２，Ｅ－ ｍａｉｌ：Ｊｉａｎｊｕｎ１１＠１６３．ｃｏｍ。 收稿日期：２００７－ ０７－ ０９ 修回日期：２００７－ １２－ ０３
细粒棘球绦虫锌指蛋白基因的克隆、序列分析及在不同发育阶段的表达分析
细粒棘球绦虫锌指蛋白基因的克隆、序列分析及在不同发育阶段的表达分析徐梦飞;卢平萍;马勋;张艳艳;王炜烨;孟季蒙;王正荣;薄新文【期刊名称】《西北农业学报》【年(卷),期】2018(027)012【摘要】旨在分析并预测细粒棘球绦虫锌指蛋白(Echinococcus granulosus zinc finger peotein,Eg-ZFP)结构、功能及其在细粒棘球绦虫发育过程中的表达模式,预测其在细粒棘球绦虫防治中潜在的作用.通过对前期细粒棘球绦虫原头蚴(protoscolex,PSC)转录组高通量测序结果中Unigene进行筛选,克隆Eg-ZFP基因并进行序列分析,实时荧光定量PCR(Reahime fluorescence quantitative PCR,qPCR)分析Eg-ZFP在原头蚴及成虫中的表达特征,利用全量组织原位杂交(Whole mount in situ hybridization,WISH)检测该蛋白mRNA在原头蚴和成虫组织中的分布情况.结果显示,细粒棘球绦虫Eg-ZFP基因的CDS序列长852 bp,具有完整的开放阅读框(852 bp),编码283个氨基酸,预测表明Eg-ZFP分子质量大小及等电点为31.6 ku和8.89;qPCR检测发现,Eg-ZFP在原头蚴及成虫阶段均有表达,且在成虫阶段表达量高;全量组织原位杂交检测结果表明,Eg-ZFP mRNA在原头蚴及成虫中分布广泛,且在成虫的生殖系统中丰度较高,提示Eg-ZFP与虫体生殖发育有关.结果表明Eg-ZFP在细粒棘球绦虫发育过程中具有重要作用,为进一步研究Eg-ZFP在E.granulosus防治中的作用奠定基础.【总页数】9页(P1707-1715)【作者】徐梦飞;卢平萍;马勋;张艳艳;王炜烨;孟季蒙;王正荣;薄新文【作者单位】石河子大学动物科技学院,新疆石河子832000;新疆农垦科学院畜牧兽医研究所,省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室,新疆石河子832000;石河子大学动物科技学院,新疆石河子832000;新疆农垦科学院畜牧兽医研究所,省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室,新疆石河子832000;石河子大学动物科技学院,新疆石河子832000;新疆农垦科学院畜牧兽医研究所,省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室,新疆石河子832000;石河子大学动物科技学院,新疆石河子832000;新疆农垦科学院畜牧兽医研究所,省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室,新疆石河子832000;新疆农垦科学院畜牧兽医研究所,省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室,新疆石河子832000;新疆农垦科学院畜牧兽医研究所,省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室,新疆石河子832000;新疆农垦科学院畜牧兽医研究所,省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室,新疆石河子832000【正文语种】中文【中图分类】S855.9【相关文献】1.细粒棘球绦虫EgM123基因序列分析及EgM家族基因在虫体不同发育阶段的差异表达分析 [J], 毛丽萍;王正荣;王伟;魏玉圆;翟少华;甘尚权;简子健2.红铃虫性信息素合成激活肽基因克隆、序列特征及在不同发育阶段的表达分析[J], 许冬;王玲;丛胜波;王金涛;李文静;万鹏3.细粒棘球绦虫脂肪酸去饱和酶1基因序列及不同发育阶段表达分析 [J], 徐梦飞;卢平萍;马勋;张艳艳;王炜烨;孟季蒙;王正荣;薄新文4.小麦锌指蛋白基因的克隆、序列与表达分析(英文) [J], 万平;令利军;周文娟;张文俊;凌宏清;朱立煌;张相岐5.新疆株细粒棘球绦虫不同发育阶段95抗原基因克隆及序列分析 [J], 林仁勇;丁剑冰;温浩;张文宝;李君;卢晓梅因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
致鹅败血症粪肠球菌溶血素激活因子基因克隆及序列分析
致鹅败血症粪肠球菌溶血素激活因子基因克隆及序列分析狄婷婷;高原;聂鑫【摘要】To understand the genetic variation of cytolysin activator(CylA) gene in Enterococcus faecalis , 2 pairs of specific primers were designed and synthesized according to the CylA gene sequence from GenBank for the 4 clinical isolates causing goose septicemia. The CylA gene was cloned into pMD18-T vector, and the recomfainant plasmid was screened to sequence and compared with the CylA genes of 4 pathogenic Enterococcus faecalis from patients in foreign countries and pigs in China respectively. The homology was alignmented and phylogenetic tree was reconstructed with Lasergene 7. 0. Result showed that CylA genes of 4 strains from goose were average 1 239bp in average, where was a completed open reading frame encoding 412 amino acids. No deletion and insertion in sequences, while only one nonsense mutation did not cause the variation of amino acid. There was not much variation in the remaining 8 strains of CylA gene and the deduced amino acids. The amino acids deduced by these CylA genes of 4 strains from goose shared 100 % homology. They were also close to the amino acids deduced by CylA genes of bacteria from patients in foreign countries and pigs in China, sharing the homologies of 98. 6% to 100%. These results indicate that CylA gene in Enterococcus faecalis is highly conserved, which is likely to become the target genes of detection and diagnosis as well as immunoprophylaxis.%目的了解粪肠球菌溶血素激活因子(CylA)基因的遗传变异情况.方法根据GenBank上已发表的粪肠球菌CylA基因序列设计2对特异性引物,对临床分离的4株致鹅败血症粪肠球菌CylA基因进行克隆及序列测定,并与国外从人体分离的和国内从猪体分离的各4株致病性粪肠球菌的CylA基因,用LaSergene 7.0软件进行同源性比对和构建系统进化发育树.结果鹅源4株茵CylA基因均长1 239bp,有1个完整的开放阅读框,编码412个氨基酸；序列中无缺失和插入,仅有l处未引起其编码氨基酸变异的无义突变.其余8株菌CylA基因及推导的氨基酸变异程度均不大.4株鹅源菌CylA基因推导的氨基酸同源性为100％；与国外人源菌和国内猪源菌CylA基因推导的氨基酸遗传距离也较近,同源性为98.6％～100％.结论粪肠球菌CylA基因高度保守,有可能成为检测诊断和免疫预防的靶基因.【期刊名称】《中国人兽共患病学报》【年(卷),期】2012(028)007【总页数】6页(P683-688)【关键词】鹅;粪肠球菌;溶血素激活因子;克隆;同源性比对;系统进化发育树【作者】狄婷婷;高原;聂鑫【作者单位】内蒙古民族大学动物科学技术学院,内蒙古高校毒物与动物疾病监控重点实验室培育基地,通辽028042;内蒙古民族大学动物科学技术学院,内蒙古高校毒物与动物疾病监控重点实验室培育基地,通辽028042;内蒙古民族大学动物科学技术学院,内蒙古高校毒物与动物疾病监控重点实验室培育基地,通辽028042【正文语种】中文【中图分类】R378肠球菌引起医院内病人感染和死亡的例数正在逐步增加［1］，其致病菌主要是粪肠球菌［2－3］。
水稻二化螟小分子量热激蛋白21.3基因的克隆和表达分析
水稻二化螟小分子量热激蛋白21.3基因的克隆和表达分析宋杰;于同英;崔亚东;陆明星;杜予州【期刊名称】《环境昆虫学报》【年(卷),期】2018(040)003【摘要】小分子量热激蛋白(sHSPs,small heat shock proteins)在昆虫中分布广泛,能影响昆虫的生长繁殖、参与多种生理过程以及增强昆虫的温度耐受性.水稻二化螟Chilo suppressalis (Walker)是水稻上的主要害虫之一,目前在我国局部稻区危害严重.为了深入了解sHSPs在水稻二化螟生长发育及温度耐受性中的功能,利用RT-PCR和RACE技术克隆出一个二化螟小分子量热激蛋白CsHSP21.3基因.Cshsp21.3的cDNA序列全长为844 bp,其中开放阅读框(ORF)为555 bp,编码184个氨基酸,理论分子量为21.3 kDa,等电点为5.97;基因组结构分析发现,Cshsp21.3缺失内含子.实时定量PCR的实验结果表明:在脂肪体中Cshsp21.3的表达高于其它不同组织器官;在二化螟的不同发育阶段,3龄幼虫Cshsp21.3的表达水平最高,而且雌雄蛹的表达差异显著;高低温不能显著诱导Cshsp21.3的表达,说明该基因对温度胁迫不敏感.总之,Cshsp21.3与二化螟的温度耐受性之间没有密切的联系,但在二化螟的生长发育方面起着重要的作用.【总页数】9页(P505-513)【作者】宋杰;于同英;崔亚东;陆明星;杜予州【作者单位】扬州大学园艺与植物保护学院,扬州大学应用昆虫研究所,江苏扬州225009;阜阳师范学院生命科学学院,安徽阜阳236032;阜阳师范学院生命科学学院,安徽阜阳236032;扬州大学园艺与植物保护学院,扬州大学应用昆虫研究所,江苏扬州225009;扬州大学园艺与植物保护学院,扬州大学应用昆虫研究所,江苏扬州225009【正文语种】中文【中图分类】Q963;S433.4【相关文献】1.莲草直胸跳甲小分子热激蛋白s H sp20.8基因的克隆及生物信息学分析 [J], 袁晓芳;徐朝茜;纪周瑜;马瑞燕;贾栋2.水稻中2个小分子热激蛋白基因启动子的序列分析及功能鉴定 [J], 郭虹霞;王创云;赵丽;王陆军;张丽光;邓妍3.甜椒内质网小分子热激蛋白基因(CaHSP22.5)克隆及其在转基因烟草中的表达分析 [J], 苏振华;张泽鑫;李妹芳;郭尚敬;冀芦沙4.甜椒内质网小分子热激蛋白基因(CaHSP22.5)克隆及其在转基因烟草中的表达分析(英文) [J], 苏振华;张泽鑫;李妹芳;郭尚敬;冀芦沙5.棉铃虫小分子热激蛋白sHSP22.0基因的克隆及表达谱分析 [J], 杨朔;刘少凯;赵少轩;朱宇辰;徐磊;李童云;刘晓光;安世恒;魏纪珍因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
马铃薯腐烂茎线虫rDNA-ITS序列、特异性检测引物及一步双重PCR检测方法[发明专利]
![马铃薯腐烂茎线虫rDNA-ITS序列、特异性检测引物及一步双重PCR检测方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/d928f8e9f12d2af90342e6bb.png)
专利名称：马铃薯腐烂茎线虫rDNA－ITS序列、特异性检测引物及一步双重PCR检测方法
专利类型：发明专利
发明人：彭德良,杨玉文
申请号：CN200510086261.0
申请日：20050819
公开号：CN1763193A
公开日：
20060426
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及“马铃薯腐烂茎线虫rDNA－ITS序列、特异性检测引物及一步双重PCR检测方法”。
马铃薯腐烂茎线虫rDNA－ITS，其具有如SEQ NO1或SEQ NO2所示的核苷酸序列；针对该rDNA－ITS序列设计的特异性检测引物SSsj与通用引物AB28结合，同时加入内标引物D3A和D3B，利用一步双重PCR方法检测，马铃薯茎线虫的PCR扩增结果能得到特异性623bp片段和345bp片段，而其它茎线虫的PCR扩增结果只能得到345bp片段。
该发明对为茎线虫的检疫检验和生产实践中茎线虫的识别提供快速准确的分子检测方法，为制定茎线虫病害综合治理决策提供理论参考。
申请人：中国农业科学院植物保护研究所
地址：100094 北京市海淀区圆明园西路2号
国籍：CN
代理机构：北京海虹嘉诚知识产权代理有限公司
代理人：张涛
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马铃薯腐烂茎线虫类毒液过敏原蛋白基因cDNA全长的克隆与序列分析
（ｙｔｉｅｒ ｈ ｓｃｅｏｙ ｐｏｅｎ Ｃ ＩＰ） 族 的 一 肽 ， ｃ ｓｅ —ｉ ｅｒｔｒ ｒ ｔｉ， Ｒ Ｓ 家 ｎ ｃ 表达场所 在亚腹 食道腺 ， 在植物 寄生线虫 与寄 主
员 ［ ， 家族蛋 白在植 物 和动 物 中分 布广 泛 。类 毒 互作 的功能 还不 明确 。而 编码在植 物食道腺 细胞表 ２该 ］
克 隆在 食道腺 细胞 的编码分 泌蛋 白的寄生基 因
８ ｊ 及 自由生活线虫 秀丽小 杆线 虫 （ ａｎ ｒａ ｄ ｔ ｌ— 对理 解线虫 对植物 的寄生起 关键作 用ｌ 。 目前 国内 Ｃ ｅ ｏｈ ｂ ｉ ｓ ｅ ｉｅ ｇ ｎ ）６中也 有发 现 和报 道 。该类 基 因 目前 在 根结 外 没有马铃 薯腐烂茎 线虫类 毒液过 敏原蛋 白基 因的 ａ ｓｌ ］
克 隆到类 毒液 过敏原 蛋 白基 因 （ －ａ 一 ） Ｄｄｖ ｐ ２ 。
毒液 过敏 原 蛋 白基 因 Ｍｂ ｐ １ Ｎｏ ｔｅｎ杂 交 分 ｍｓ ， ｒ ｒ ｈ
１ 材 料与 方 法
析显 示该基 因在侵染前 ２ 龄幼 虫和侵染 期 ２ 幼虫 １１ 供 试 材 料 龄 ． 利用 中 国农业 科学 院植物保 护研究 所线虫 实验 均有 信号 ， 在 成 熟 雌 虫 中 未检 测 到 信 号 。Ｗａ ｇ 但 ｎ 等 ｌ从 南方根结 线虫 中获得第 ２ 类毒 液过敏原 蛋 室 已有 的马铃薯腐 烂 线 虫纯 培 养体 系 ， 河北 省 昌 ２ ］ 个 从
第 ３ 卷 第 ２期 Ｏ ２１ 年 ４ ０１ 月
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Ｖｏ ． ０ Ｎｏ ２ １３ ．
Ａｐ ．２ １ ， ８ ￣ １ ６ ｒ ０ ｌ１ ２ ８
小麦TaLSD1锌指蛋白基因的电子克隆及序列分析
西北植物学报,2007,27(11):2147-2152Acta Bot.Bor eal.2Occident.Sin.文章编号:100024025(2007)1122147206*小麦TaLSD1锌指蛋白基因的电子克隆及序列分析黄新杰,郭军,屈志鹏,黄丽丽,康振生*(西北农林科技大学植物保护学院,陕西省农业分子生物学重点实验室,陕西杨陵712100)摘要:采用电子克隆与R T2PCR相结合的技术,在条锈菌(P uccinia str iif or mis f.sp.tr itici)侵染的小麦中克隆了一个LSD1型锌指蛋白基因,命名为T aLS D1(GenBank登录号为EF553327)。
序列分析表明,该基因全长1024 bp,编码生成1个包含3个保守LSD1型锌指结构(CxxCxRxxLMYxxGASxVxCxxC)且长度为146个氨基酸的多肽。
进化树分析表明,T aLSD1与水稻(Oryz a sa tiva)、拟南芥(Ar a bidopsis tha liana)和芜菁(Br assica r a pa)中部分含有3个保守LSD1型锌指结构的同源基因亲缘关系较近,而与其它包含不同数目的LS D1型锌指结构基因亲缘关系较远。
推测Ta LSD1在进化中丢失了部分序列,进而执行新的功能。
半定量RT2PCR结果显示,该基因在亲和以及非亲和组合中的表达模式很相似,均表现在前期基因表达被抑制而后期恢复正常。
初步推测Ta LSD1在转录水平上的表达受光诱导,同时,作为一个细胞程序性死亡的负调控因子在小麦与条锈菌互作过程中起作用。
关键词:条锈菌;电子克隆;进化树分析;半定量RT2PCR;LS D1型锌指结构中图分类号:Q789文献标识码:AIn Silico Cloning and Sequence Analysis of a TaLSD1Zinc Finger Protein Gene from Wheat Infected by S tripe Rust FungusH UAN G Xin2jie,GU O Jun,QU Zhi2peng,H U ANG Li2li,KAN G Zhen2sheng*(College of Plant Protection and Sh aanxi Key Lab oratory of Molecular Biology for Agricu lture,Northwes t A&F University,Yangling,Shaanxi712100,China)Abstr act:Using in silico cloning and RT2PCR,an LSD1type zinc finger pr otein gene,Ta LSD1,was cloned from wheat infected by stripe rust fungus(Puccinia str iif ormis f.sp.tritici).Sequence analysis showed that the full2length cDNA of T aLSD1was1024bp,which encoded a polypeptide of146amino acids with three conserved motifs(CxxCxRxxLMYxxGASxVxCxxC).Phylogenetic tree indicated that T aLSD1 might share a common ancestor with other LSD1type zinc finger protein genes which contained three con2 served LSD1type zinc finger motifs in rice(Or yza sativa),turnip(Bra ssica ra pa)and Ara bidopsis(Ara2 bidopsis tha liana),whereas it had a fur ther r elationship with other homologous genes with differ ent num2 ber of LSD1type zinc finger motifs.It was assumed that T aLSD1performs new function since some infor2 mation had been lost during evolution.The results of semi2quantitative RT2PCR showed that the transcrip2 tion profile of T aLSD1,which became normal after being down2regulated in the early stage,was similar in *收稿日期:2007205209;修改稿收到日期:2007209220基金项目:教育部重大科技培育项目(20042295);教育部长江学者和创新团队发展计划资助(IRT0558);国家自然科学基金资助项目(30671350);高等学校学科创新引智计划资助项目(B07049)作者简介:黄新杰(1981-),男,硕士,主要从事植物免疫学研究。
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家族 和 小 分 子 ＨＳ Ｐ家 族 ， 中分 子 质 量 在 ８ ～ 延伸 需要 多种 蛋 白相 互 作 用 协 同完 成 ， 中 多种 蛋 其 ２ 其 ９ ｕ之 间的热 激 蛋 白为 ＨＳ ９ ＿Ｊ Ｏｋ Ｐ ０ｌ 。ＨＳ ９ 族 白与蛋 白、 白与 Ｄ Ｐ ０家 蛋 ＮＡ 序 列 之 间 的相 互 作 用 均 需
第３ Ｏ卷 第 ６ 期
２１ ０ １年 １ 月 ２
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Ｊ ｕ ｎ ｌ ｆＨｕ ｚ ｏ ｇＡｇ ｉｕｔ ｒｌＵｎｖ ｒｉ ｏ ｒ ａ ａ ｈ ｎ ｒ ｌ ａ ｉｅ ｓｔ ｏ ｃ ｕ ｙ
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能 。范海 延 等人 研 究 了 黄 瓜 品系 ￥ ７叶 片受 白粉 １
ＨＳ ９ ｓ参 与 多种 生 物学 过 程 ， 有 复 杂 的 生 病菌胁 迫 后 的蛋 白质 组 变 化 ， 果 发 现黄 瓜 叶片 接 Ｐ０ 具 结 物学 功能 。ＨＳ ９ ｓ具有 ＡＴＰ酶活性 ， 与底 物 蛋 种 白粉 病 菌 ４ Ｐ０ 其 ８ ｈ之 后 ， 激 蛋 白 ９ 热 Ｏ基 因 上 调 表
白 ９ 。 统 进 化 分 析 结 果 显 示 ， －ｓ ９ － 与 松 材 线 虫 热 激 蛋 白 ９ Ｏ系 Ｄｄｈ ｐ ０ １ Ｏ基 因 （ ｎ ａｋ登 录 号 ＡＣ １ １ ） 缘 关 ＧｅＢ ｎ Ｙ０ ９ ８ 亲
系最近 ， 氨基酸序列一致性达到 ８ ． ５ 。同时 ， ６ ６ 热激蛋 白 ９ 基 因的系统进 化分析结 果也体现 了植物寄生 线虫 Ｏ
境胁迫 等相关 的多功 能基 因。本试验 以 Ｒ － Ｃ Ｔ Ｐ Ｒ结 合 Ｒ Ｅ方 法从腐烂 茎线虫 Ｄｉ ｌ ｃｕ ｅ ｒｃ ｒ中克隆 ＡＣ ｔ ｅ ｈ ｓ ｓ ｕｔ ｙｎ ｄ ｔ ｏ 出 １个 ｈｐ ０命名 为 Ｄ －ｓ ９ 一 ， 因登 录号 为 ＨＱ９ １ ９ 。Ｄｄｈｐ９ — ｅ ＮＡ 全 长序列含 有 １ ２１ ０ｂ ｓ９ ， ｄｈｐ Ｏ １基 ０５５ －ｓ ０ １Ｄ 个 ６ ｐ 的开放性 阅读框 （ Ｆ ， ＯＲ ） 编码 ７ ９个氨基 酸残 基 ， ５末 端和 ３末端 分别 含有 ７ ｐ和 １ ７ｂ １ 其 Ｏｂ １ ｐ的非 编码 区 （ Ｒ） ＵＴ 。Ｄｄｈｐ ０ １内含子外显子结构分析结果表 明 ， －ｓ ９ — 其基因组序列包含 ９ 内含子 ， 个 且各 内含子两端剪 接位 点序列遵守 ＧＴ Ａ 规则 。Ｄｃｈｐ Ｏ １基 因的推定蛋 白 Ｄ － Ｐ ０１分子质量约为 ８ ． ９ｋ 。该基 因为单 拷 ／Ｇ ｌｓ ９一 － ｄＨＳ ９ — ２ ７ ｕ 贝基 因， 且与其他热激蛋 白 ９ 因高度 同源。ＤｄＨＳ ９ — 具 有热激蛋 白 ９ 并 Ｏ基 － Ｐ ０１ Ｏ家族保守 的序列和基系 。此外 ， 该基 因还具有胞质 型热激蛋 白 ９ Ｏ的 ５个特征序列 和特异 ＭＥ ＶＤ基 系 ， 表 明 Ｄｄｈｐ９ 一 Ｅ 这 －ｓ Ｏ １为胞质 型热 激蛋
ｄ ｉｌ Ｆ －ｓｏ ｉｔｄｐ ｏｅ ， ＡＰ 和 细菌 高 温 发挥 抗原 递 呈作 用 （ｎｉｅ ｒｓｎａｉｎ ＿ 。在 植 ｒ ａ ＴＮ Ｒ ａｓ ｃ ｅ ｒｔｉ ＴＲ ） ａ ｎ ａｔ ｎｐｅｅ ｔｔ ）７ ｇ ｏ ］ 蛋 白 Ｇ （ ａｔｒ ｌ ｈｇ ｔｍｐ ｒｔｒ ｐｏ ｅ 物 的生 物 抗 性 反 应 中 ， Ｐ ０同 样 具 有 重 要 的 功 ｂ ｃｅｉ ｉｈ ｅ ｅａｕ ｅ ｒ ｔｉ Ｇ， ａ ｎ ＨＳ ９
Ｐ ０的参与 。 ｊ 又 可 分 为 ５个 亚 蛋 白 家 族 ：位 于 细 胞 质 中 的 要 ＨＳ ９
ＨＳ ９ Ａ、 于 内质 网 中 的 ＨＳ ９Ｂ、位 于 叶 绿 体 ＰＯ 位 Ｐ０
在动 物免疫 系 统 中 ， Ｐ ０能 与 抗 原 多肽 （ ｎ ＨＳ ９ ａ—
中的ＨＳ ９Ｃ、 粒 体 Ｔ Ｒ 关 联 蛋 白 （ ｔｃｏ — ｔ ｅｉ ｐｐｉｅ） Ｐ０ 线 ＮＦ ｍｉ ｈｎ ｉ ｎｃ ｅｔ ｓ结合 ， 将其 传递 给 ＭＨＣ １分 子 ， ｏ ｇ ｄ 并 －
之 间 的取 食 行 为 差 异 。
关键词
腐烂茎线虫 ；热激蛋 白 ９ 因；克隆 ； Ｏ基 序列分析 Ｓ４ ２ ４ ３． ５ 文献标识码 Ａ 文章 编号 １０ －４ １ ２ １ ） ６０ ９—８ ０ ０２２ （０ １０ —６３０
中图分类号
热 激 蛋 白 （ ｅｔｓ ｏ ｋ ｐ ｏｅ ｓ ＨＳ ｓ 为 一 类 ＨＳ ９ ｓ能促 进 脑 视 网膜 血 管 瘤 病 肿 瘤 抑 制 因 子 ｈ ａ ｈ ｃ ｒ ｔｉ ， Ｐ ） ｎ Ｐ０
Ｖｏ ｐ ｅ ｎ ａ ｉ ｓ — ｅ ｕ ｕ ｕ ｐ ｅｓ ｒ 的 多 基 家族 蛋 白 ， 据 热激 蛋 白 的分 子 质 量 和氨 基 （ ｎＨｉｐ ｌＬｉｄ ｕｄｓ ａｅｔｍｏ ｒｓ ｐ ｒｓｏ ） 依
酸 序列 Ｉ源 性 与 功 能 ， 将 其 分 为 ５个 主要 家 族 ： 降解 ＿ 。此外 ， Ｐ ０ Ｉ ｉ Ｊ 可 ５ ］ ＨＳ ９ ｓ在 端 粒 的延 伸 过 程 中具 有
腐 烂 茎线 虫热 激 蛋 白新 基 因 的克 隆 与序 列分 析
耿 甜 彭德 良 李 建 洪 黄 文 坤 王 高 峰 彭 焕 龙 海 波
２ 华中农业大学植 物科 学技 术学院 ， ． 武汉 ４ ０ ７ ３０ ０ 摘要 热激蛋 白 ９ Ｏ基因（ ｅｔ ｈ ｃ ｒｔｉ ０ｇｎ ｓｈｐ Ｏ ） 与生物发 育 、 物 防御 反应 以及 生物 抗环 ｈ ａ ｏ ｋｐｏｅ ９ ｅｅ ，ｓ ９ ｓ是 ｓ ｎ 生 １ 中国农业科 学院植物保 护研 究所／ ． 植物病 虫害生物 学国家重点实验 室， 北京 １ ０ ９ ； ０ １３