枯草溶菌素转换酶9siRNA抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的THP-1源性巨噬细胞炎症因子表达
前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶9及其抑制剂在动脉粥样硬化中的作用研究进展
ＬＤＬ￣Ｃ [２９] ꎮ ＬＤＬ 中 的 ＡｐｏＢ１００ 结 合 ＬＤＬＲ 形 成 复
合物后ꎬ通过网格蛋白小窝蛋白介导的内化作用进
入细胞ꎬ随后在酸性环境条件下ꎬＬＤＬＲ 脱离复合物
并重新返回到细胞膜上发挥作用ꎬ而 ＬＤＬ 则在细胞
积、血管平滑肌细胞增殖和细胞泡沫化等病变ꎬ从而
ｄｅｎｓｉｔｙ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ￣１ꎬＬＯＸ￣１) 的表达ꎬ促进巨
血液中 的 ＬＤＬ￣Ｃ 可 以 通 过 损 伤 的 内 皮 细 胞
氧化低 密 度 脂 蛋 白 受 体￣１ ( ｌｅｃｔｉｎ￣ｌｉｋｅ ｏｘｉｄｉｚｅｄ ｌｏｗ￣
诱发和促进 ＡＳ [１１￣１４] ꎮ
噬细胞摄取氧化型低密度脂蛋白胆固醇 ( ｏｘｉｄｉｚｅｄ
( ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌꎬＥＣ) 进入血管内膜ꎮ ＬＤＬ￣Ｃ 被氧化
是治疗低密度脂蛋白( ｌｏｗ ｄｅｎｓｉｔｙ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎꎬＬＤＬ)
而形成一个恶性循环ꎮ 此外ꎬ血管 ＥＣ 还能分泌黏
ＬＤＬ￣Ｃꎬｏｘ￣ＬＤＬ￣Ｃ) 而 形 成 泡 沫 细 胞ꎮ 因 此ꎬ ＰＣＳＫ９
反应在 ＡＳ 的发生、发展中发挥重要作用ꎮ 低密度脂蛋白受体( ＬＤＬＲ) 是负责清除血液中密度脂蛋白( ＬＤＬ) 的主要
分子之一ꎮ 前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶 ９( ＰＣＳＫ９) 能够通过多种途径促进 ＬＤＬ 介导的 ＡＳ 的发生和发展ꎬ其已被证
实是治疗 ＡＳ 的重要靶点ꎬ目前已有多种类型的 ＰＣＳＫ９ 抑制剂应用于 ＡＳ 的临床治疗或临床试验研究ꎮ 本文综述了
前肽( 相 对 分 子 质 量 １４ ０００ ) ꎬ 产 生 成 熟 的 ＰＣＳＫ９
前蛋白转化酶枯草溶菌素9及其单克隆抗体调脂研究进展
前蛋白转化酶枯草溶菌素9及其单克隆抗体调脂研究进展周莹;杜志民
【期刊名称】《中国心血管杂志》
【年(卷),期】2013(018)006
【摘要】2003年，法国学者Abifadel等首次报道前蛋白转化酶枯草溶菌素9（proproteinconveasesubtilisin／kexintype9，PCSK9）基因突变引起常染色体显性高胆固醇血症（autosomaldominanthypercholester0Iemia，ADH）。
【总页数】4页(P473-476)
【作者】周莹;杜志民
【作者单位】510080广州,中山大学附属第一医院心血管医学部;510080广州,中山大学附属第一医院心血管医学部
【正文语种】中文
【相关文献】
1.前蛋白转化酶枯草溶菌素9单克隆抗体研究进展 [J], 梁依;刘璇;赵文君;郭艺芳
2.前蛋白转化酶枯草溶菌素9及其单克隆抗体调脂作用研究进展 [J], 郭玲玉
3.调脂新药前蛋白转化酶枯草溶菌素9抑制剂的研究进展 [J], 余凌;许如意;杨晔;叶平
4.前蛋白转化酶枯草溶菌素9单克隆抗体治疗冠状动脉粥样硬化性心脏病的临床研究进展 [J], 罗聪聪;鲍春荣;何斌
5.前蛋白转化酶枯草溶菌素9单克隆抗体的研究进展 [J], 卜文飞;龙明智
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氧化型低密度脂蛋白诱导内皮细胞凋亡中前蛋白转化酶枯草溶菌素9与炎症因子的关系
氧化型低密度脂蛋白诱导内皮细胞凋亡中前蛋白转化酶枯草溶菌素9与炎症因子的关系钱正瑶;李广平;李娇;梁雪;徐昭;陈艳;赵辉【期刊名称】《临床荟萃》【年(卷),期】2016(031)004【摘要】Objective To investigate the relationship between proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 (PCSK9)and inflammatory factor expression in apoptosis of human umbilical vein endothelial cells (HUVECs ) induced by oxidized low density lipoprotein(ox-LDL).Methods HUVECs were incubated with ox-LDL for different times (0 h,12 h,24 h,36 h,48h).The mRNA and protein expression of PCSK9,inter leukin 6 (IL-6 ),monocyte chemotactic protein-1 (MCP-1 ), matrix metalloprotein-9 (MMP-9 ), C-reactive protein (CRP ) and the nucler displacement of nucler factor-kappa B (NF-κB)were detected.The siRNA for PCSK9 was designed and synthesized, then was transfected into HUVECs by Lipofectamine 2000.After transfection for 6 h,cells were treated with ox-LDL for 24 h,the mRNA and protein expression of PCSK9,IL-6,MCP-1,MMP-9,CRP and the nucler displacement of NF-κB were detected.Results With the increase of ox-LDL processing time,the mRNA expressions of PCSK9,IL-6, MCP-1,MMP-9 and CRP were significantly higher,and the nucler displacement of NF-κB was significantly increased, especially for 24 h incubation,and the subsequent expression and the nucler displacement were graduallydecreased (P<0.05).The protein concentration of IL-6,MCP-1,CRP and MMP-9 in cell culture supernatant increased gradually over time,and reached the peak at 48 pared with the 0 h group,the 48 h group increased most obviously (P <0.01).The mRNA and protein expressions of PCSK9,IL-6,MCP-1,MMP-9,CRP and the nucler displacement of NF-κB in siRNA group were significantly lower than those in negative transfection group (P <0.01 ).Conclusion PCSK9 siRNA can inhibit inflammation factor expression in apoptosis of HUVECs induced by ox-LDL.And PCSK9 may be involved in the regulation of inflammation.%目的：观察氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡中前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)与炎症因子表达的关系。
前蛋白转化酶枯草溶菌素9与老年慢性心力衰竭患者近期不良心血管事件的关系=王小婕，李媛媛，李学善
临床研究前蛋白转化酶枯草溶菌素9与老年慢性心力衰竭患者近期不良心血管事件的关系王小婕1，李媛媛1，李学善2△摘要：目的探讨前蛋白转化酶枯草溶菌素9（PCSK9）与老年慢性心力衰竭患者近期不良心血管事件的关系。
方法选取老年慢性心力衰竭患者126例，所有患者均进行12个月的随访，根据患者是否发生不良心血管事件将其分为预后不良组（40例）和预后良好组（86例）。
比较2组患者的相关资料以及血清PCSK9水平，采用多因素Logistic 回归分析老年慢性心力衰竭患者预后不良的危险因素，采用受试者操作特征（ROC）曲线分析相关指标对患者近期不良心血管事件发生风险的预测价值。
分析不同PCSK9表达水平的患者不良心血管事件发生率的差异。
结果预后不良组的纽约心脏病协会（NYHA）分级Ⅳ级比例、PCSK9以及N末端B型利钠肽原（NT-proBNP）水平均高于预后良好组，左心室射血分数（LVEF）低于预后良好组（P＜0.05）。
多因素Logistic回归分析显示，NYHA分级为Ⅳ级（OR=1.540，95%CI：1.150~2.063）以及PCSK9（OR=1.679，95%CI：1.132~2.489）、NT-proBNP（OR=1.383，95%CI：1.005~ 1.903）水平升高均是老年慢性心力衰竭患者预后不良的危险因素（P＜0.05）。
ROC曲线分析显示，PCSK9、NT-proBNP预测老年慢性心力衰竭患者近期不良心血管事件的曲线下面积为0.837（95%CI：0.755~0.919）、0.740（95%CI：0.635~0.845）。
PCSK9高表达组的不良心血管事件发生率为43.75%（28/64），明显高于PCSK9低表达组的19.35%（12/62），差异有统计学意义（χ2=8.650，P＜0.01）。
结论PCSK9的表达水平与老年慢性心力衰竭患者近期不良心血管事件的发生风险密切相关，且对患者近期不良心血管事件发生风险有较高的预测价值。
前蛋白转化酶枯草溶菌素9抑制剂：阿利库单抗的研究进展
前蛋白转化酶枯草溶菌素9抑制剂：阿利库单抗的研究进展苏婷;张盼晓(综述);王志禄(审校)【期刊名称】《心血管病学进展》【年(卷),期】2016(37)1【摘要】他汀类药物被认为是降低低密度脂蛋白胆固醇最有效的药物，从而降低心脑血管疾病的发病率和病死率。
然而，他汀类药物不耐受是限制其使用的一个重要原因，尤其是大剂量时。
随着前蛋白转化酶枯草溶菌素9的发现，血脂异常的调节有了一个新的方向。
阿利库单抗是一种靶向作用于枯草溶菌素9的人源性单克隆抗体，在一系列研究中显示出了良好的前景。
现就阿利库单抗的最新研究进展进行综述。
%Statins are the most effective medications presently available to reduce low-density lipoprotein cholesterol and decrease the mobility and mortality of cardiovascular and cerebrovascular disease .However , statin intolerance has been a major limitation in the use of st-atins, especially at higher doses .Following the discovery of proprotein convertase subtilisin kexin type 9(PCSK9), a new direction has been provided to regulate cholesterol metabolism.Alirocumab, which trade name is Praluent(SAR236553/REGN727),is a fully human mono-clonal antibody to PCSK9 and has shown good results in a serious ofresearch .The clinical trials research of alirocumab are reviewed in this paper .【总页数】4页(P78-81)【作者】苏婷;张盼晓(综述);王志禄(审校)【作者单位】兰州大学第一医院，甘肃兰州730000;兰州大学第一医院，甘肃兰州730000;兰州大学第一医院，甘肃兰州730000【正文语种】中文【中图分类】R972+6【相关文献】1.新型降胆固醇药物前蛋白转化酶枯草溶菌素9抑制剂的研究进展 [J], 张国瑞;张静;王立君;郭艺芳2.前蛋白转化酶枯草溶菌素9及其抑制剂的研究进展 [J], 陈丽;廉姜芳;周建庆3.前蛋白转化酶枯草溶菌素9抑制剂在心血管疾病中的研究进展 [J], 王雅玲;刘剑;张冬颖4.前蛋白转化酶枯草溶菌素9抑制剂对血脂代谢作用的研究进展 [J], 李乐;孙福成5.前蛋白转化酶枯草溶菌素9抑制剂在急性冠状动脉综合征患者中多维度作用探索的研究进展 [J], 袁静;徐承义;孙玉娟;邱令智;鄢华因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
前蛋白转化酶枯草溶菌素9抑制剂在降脂治疗中的应用及其对心血管的保护意义
前蛋白转化酶枯草溶菌素9抑制剂在降脂治疗中的应用及其对心血管的保护意义吕冬青;田雨苗;任毅;杨静【摘要】前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)是一种新发现的与胆固醇代谢密切相关的基因,其发生遗传变异是导致家族性高胆固醇血症发生的原因之一.低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)是动脉粥样硬化性心血管疾病(ASCVD)的独立危险因素,PCSK9基因突变使LDL-C水平升高,间接引起ASCVD患病风险的增加;此外,PCSK9还通过多条途径直接参与了ASCVD的发生发展.PCSK9抑制剂通过选择性作用于PCSK9靶点,达到降低血清LDL-C水平的目标,多项研究已证实其降胆固醇作用的有效性与安全性,同时可明确改善病人心血管预后.本研究就PCSK9基因、PCSK9抑制剂在降脂治疗中的应用及其对心血管的保护意义做一简要综述.【期刊名称】《中西医结合心脑血管病杂志》【年(卷),期】2019(017)011【总页数】5页(P1638-1642)【关键词】前蛋白转化酶枯草溶菌素9;前蛋白转化酶枯草溶菌素9抑制剂;高胆固醇血症;动脉粥样硬化性心血管疾病;低密度脂蛋白胆固醇【作者】吕冬青;田雨苗;任毅;杨静【作者单位】山西医科大学,太原 030001;山西医科大学,太原 030001;山西医科大学,太原 030001;山西医科大学第一医院;山西医科大学第一医院【正文语种】中文【中图分类】R589.2;R255前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)是一种与家族性高胆固醇血症密切相关的基因，其表达产物PCSK9蛋白可与低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)竞争性结合低密度脂蛋白受体(LDL-R)，促进受体降解，导致可与LDL-C结合的受体数目减少，从而影响胆固醇代谢，引发高胆固醇血症。
LDL-C作为心血管事件的独立危险因素与强有力预测因子，其水平的升高使病人发生血管事件的风险明显增加[1]。
随着人们对PCSK9基因突变所致高胆固醇血症的研究不断深入，也为降胆固醇治疗提供了新的思路。
前蛋白转化酶枯草溶菌素9在动脉粥样硬化中的作用
前蛋白转化酶枯草溶菌素9在动脉粥样硬化中的作用李娇;李广平【摘要】人类前蛋白转化酶枯草溶菌素9（PCSK9）是近年来新发现的一种与常染色体显性高胆固醇血症密切相关的基因，编码前蛋白转化酶 NARC-1。
PCSK9除了通过调节细胞表面低密度脂蛋白受体（LDLR）水平参与脂质代谢外，亦直接对血管壁细胞发挥毒性作用，从而在动脉粥样硬化的发生、发展中起重要作用。
因此，阐明 PCSK9在动脉粥样硬化发生中的作用及机制，对高胆固醇血症和动脉粥样硬化的临床药物应用具有重要意义。
【期刊名称】《临床荟萃》【年(卷),期】2015(000)003【总页数】4页(P341-344)【关键词】动脉粥样硬化;前蛋白转化酶类;受体,LDL【作者】李娇;李广平【作者单位】天津医科大学第二医院心脏科，天津 300211;天津医科大学第二医院心脏科，天津 300211【正文语种】中文【中图分类】R543.5动脉粥样硬化(athrosclerosis，AS)是许多重要血管事件的病理基础，目前是导致人类死亡的首要原因。
AS主要累及全身大中型动脉，使受阻动脉远端缺血而导致局部组织坏死。
动脉系统中最重要的是累及冠状动脉，使管腔狭窄血流减少，出现心肌缺血从而导致心绞痛、急性心肌梗死、心律失常和猝死等严重疾病。
人们对动脉粥样硬化的研究已有百余年的历史，有关学说甚多，较早的有脂质浸润学说、血流动力学学说、血栓学说、内膜损伤学说、中层平滑肌细胞增生学说及受体学说等。
然而近年来，随着有关学科及研究手段的不断发展，炎性反应学说及脂质代谢异常成为对动脉粥样硬化发生发展过程解释的较为全面的两种学说。
除此之外，细胞凋亡对动脉粥样硬化的进展也有着一定的促进作用。
常染色体显性高胆固醇血症(autosomal dominant hypercholesterolemia，ADH)是冠心病的独立危险因子，在人群中发病率较高，其特征为高水平的血清总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、腱黄瘤及过早发生的动脉粥样硬化。
前蛋白转化酶枯草溶菌素9的生物学功能_江璐
JIANG Lu，GONG Hui-Qin，LIU Lu-Shan*
（ Institute of Cardiovascular Disease，Key Laboratory for Arteriosclerosis of Hunan Province，University of South China，Hengyang 421001，Hunan，China）
Abstract Proprotein convertase subtilisin / kexin type 9 （ PCSK9 ） belongs to the proprotein convertase （ PC） family and is related to cholesterol metabolism as newly discovered. PCSK9 has been recently attracted increasing attention with regard to its biisease processes. Novel functions have been reported， such as participate in cell apoptosis， promote the development and regeneration of the liver，influence the development or differentiation of the nervous system，and associate with inflammatory processes and diabetes，etc. ，besides of the regulation of the low density lipoprotein receptor （ LDLR） in cholesterol metabolism. Key words proprotein convertase subtilisin / kexin type 9 （ PCSK9） ； cholesterol metabolism； apoptosis； inflammation； diabetes
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·实验研究·［文章编号］1007-3949（2011）19-03-0192-05枯草溶菌素转换酶9siRNA抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的THP-1源性巨噬细胞炎症因子表达唐志晗，江璐，任重，刘录山，姜志胜（南华大学心血管疾病研究所动脉硬化学湖南省重点实验室，湖南省衡阳市421001）［关键词］枯草溶菌素转换酶9；巨噬细胞；炎症因子［摘要］目的观察枯草溶菌素转化酶9siRNA对氧化型低密度脂蛋白诱导的THP-1源性巨噬细胞炎症因子表达的影响。
方法应用Lipofectamine2000分别转染80nmol/L浓度枯草溶菌素转化酶9siRNAs进THP-1源性巨噬细胞中，作用24h后加入80mg/L氧化型低密度脂蛋白处理24h，采用逆转录聚合酶链反应检测白细胞介素1α、白细胞介素6和肿瘤坏死因子αmRNA的表达。
结果80mg/L氧化型低密度脂蛋白刺激THP-1源性巨噬细胞24h后，白细胞介素1α、白细胞介素6和肿瘤坏死因子-αmRNA的表达明显增加（P＜0.05），而枯草溶菌素转化酶9siRNA转染组THP-1源性巨噬细胞白细胞介素1α、白细胞介素6和肿瘤坏死因子αmRNA的表达相对于氧化型低密度脂蛋白组明显降低（P＜0.05）。
结论枯草溶菌素转化酶9siRNA能够抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的THP-1源性巨噬细胞炎症因子表达，枯草溶菌素转化酶9可能参与了炎症反应的调节。
［中图分类号］R363［文献标识码］AProprotein Convertase Subtilisin/Kexin9siRNA Repressed Inflammation Factor Ex-pression of THP-1Macrophage Cells Induced by Oxidized Low Density Lipoprotein TANG Zhi-Han，JIANG Lu，REN Zhong，LIU Lu-Shan，and JIANG Zhi-Sheng（Institute of Cardiovascular Disease，Key Laboratory for Arteriosclerology of Hunan Province，University of South China，Hengyang，Hunan421001，China）［KEY WORDS］Proprotein Convertase Subtilisin/Kexin9；Macrophage；Inflammation Factor［ABSTRACT］Aim To investigate the effect of proprotein convertase subtilisin/kexin9（PCSK9）siRNA on inflam-matory factor expression in oxidized low density lipoprotein（ox-LDL）induced THP-1macrophage cells．MethodsThe siRNAs for PCSK9were designed and synthesized，then THP-1macrophages were transfected with80nmol/L PCSK9 siRNA by positive ion liposome Lipofectamine2000for24h and then a high level of ox-LDL（80mg/L）for an additional 24h．Reverse transcription polymerase chain reaction（RT-PCR）was conducted to detect interleukin-1α（IL-1α）mR-NA，interleukin-6（IL-6）mRNA and tumor necrosis factor-α（TNF-α）mRNA．Results Ox-LDL increased IL-1αmRNA，IL-6mRNA and TNF-αmRNA expression．The expression of IL-1αmRNA，IL-6mRNA and TNF-αmRNA in the macrophage pretreated with PCSK9siRNA was decreased significantly，in comparison with ox-LDL-treated group（P＜0.05）．Conclusion PCSK9siRNA can repress inflammation factor expression of THP-1macrophage cells induced byox-LDL．PCSK9may be involved in adjustment for inflammation．近年来，大量的研究表明动脉粥样硬化（ather-osclerosis，As）是一种慢性炎症性疾病。
动脉粥样硬化病变中不仅还有大量的脂质，而且有大量的炎症细胞浸润，并以单核/巨噬细胞和淋巴细胞的集聚为特征。
动脉粥样硬化发生、发展中，这些炎症细胞可分泌大量的炎性因子，参与调节细胞的增殖或凋［收稿日期］2011-03-18［基金项目］湖南省应用基础研究计划重点项目（2008FJ2006）；湖南省科技厅计划项目（2009TP4057-2，2010TP4008-2）；湖南省教育厅重点科研项目（10A105）及湖南省高校科技创新团队支持计划资助［作者简介］唐志晗，硕士，讲师，研究方向为动脉粥样硬化发病机制与防治，E-mail为tangzhihan98@。
通讯作者刘录山，博士，硕士研究生导师，教授，E-mail为liuls2000@。
姜志胜，博士，博士研究生导师，教授，研究方向为动脉粥样硬化发病机制与防治，E-mail为zsjiang2005@。
亡、细胞外基质的合成或降解以及血管的重塑等过程［1］。
枯草溶菌素转换酶9（proprotein convertase subtilisin/kexin9，PCSK9）是2003年应用生物信息学方法和DNA微阵列技术发现的一个与血液胆固醇代谢调节相关的基因，除在胆固醇代谢方面起作用外，PCSK9还与细胞凋亡和分化再生相关［2］。
我们前期研究发现PCSK9在兔主动脉粥样硬化斑块以及THP-1源性巨噬细胞中有表达［3，4］，并合成筛选了有效的PCSK9siRNA［5］。
但PCSK9在动脉粥样硬化中究竟扮演何种角色尚不清楚。
本研究旨在观察PCSK9siRNA对氧化型低密度脂蛋白（oxidized low density lipoprotein，ox-LDL）诱导THP-1源性巨噬细胞炎症因子表达的影响，为阐明PCSK9在动脉粥样硬化中的作用提供实验依据。
1材料与方法1.1细胞与试剂THP-1细胞购自中国科学院上海细胞生物所细胞中心；RPMI-1640培养基为Gibco产品；ox-LDL购自广州中山大学；Lipofectamine2000脂质体转染试剂购自广州英韦创津公司；siRNA由广州市锐博生物科技有限公司合成；Trizol试剂盒购自广州东盛生物技术有限公司；逆转录试剂盒购自Fermentas公司；白细胞介素1（interleukin-1，IL-1）、白细胞介素6（interleukin-6，IL-6）及肿瘤坏死因子α（tumor necro-sis factor-α，TNF-α）引物序列由上海生工生物工程有限公司合成。
其他试剂均为国产分析纯。
1.2细胞培养THP-1细胞用含有10%小牛血清RPMI1640培养液，在37ħ、5%CO2培养箱中静置培养。
培养基中加HEPES10mmol/L，在每次实验前用160 nmol/L佛波酯孵育24h，使其诱导分化成巨噬细胞。
1.3枯草溶菌素转换酶9siRNA设计制备及转染细胞参照我们以前方法［5］，在GenBank中查到人PCSK9mRNA序列（编号NM_174936），并设计PC-SK9siRNA，其序列经序列相似性软件比对不与任何已知基因有同源性，PCSK9siRNA由广州锐博生物科技有限公司合成并进行荧光标记，PCSK9siR-NA正义链：5'-GGCAGAGACUGAUCCACUU dTdT-3'，反义链：3'-dTdT CCGUCUCUGACUAGGUGAA-5'；阴性对照siRNA由该公司提供。
siRNA成品为已退火的冻干粉，使用前用稀释缓冲液将其溶解成20μmol/L的工作母液。
所有siRNA均经过变性和非变性聚丙酰胺凝胶电泳纯化，去除未配对单链。
根据我们前期筛选的有效浓度［5］，应用Lipo-fectamine2000转染80nmol/L浓度PCSK9siRNAs 进THP-1源性巨噬细胞中。
1.4荧光显微镜检测siRNA的转染效率在转染FAM-siRNA6h后，先用磷酸盐缓冲液（phosphate buffered solution，PBS）洗涤细胞1 2次，洗脱残留在培养基或细胞表面的FAM-siRNA，减少背景干扰。
荧光显微镜观察，成功转染的细胞可看到FAM绿色荧光散在分布于细胞质中。
1.5逆转录－聚合酶链反应分析白细胞介素1、白细胞介素6及肿瘤坏死因子α表达根据我们前期PCSK9siRNA有效浓度筛选结果［5］，选取80nmol/L浓度PCSK9siRNA转染THP-1源性巨噬细胞24h后，ox-LDL处理24h。
设置空白对照组（未加ox-LDL），阴性转染组（未加ox-LDL），80mg/L ox-LDL处理组，80nmol/L siRNA+ 80mg/L ox-LDL处理组。
按Trizol试剂盒说明书提取总RNA，逆转录成cDNA，再进行聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）循环扩增。
IL-1α的引物序列：上游5'-AGTAGCAACCAACGGGAA-3'，下游5'-CATCTTGGGCAGTCACATA-3'，PCR扩增产物长度为374bp。
IL-6的引物序列：上游5'-ACATTTGCCGAAGAGCC-3'，下游5'-GTAGTGAG-GAACAAG-CCAGAG-3'，PCR扩增产物长度为234 bp。
TNF-α的引物序列：上游5'-CTGCCTGCTG-CACTTTGGAG-3'，下游5'-TGGTAGGAGACGGCGA-TGC-3'，PCR扩增产物长度为348bp。