流式细胞仪操作规程-SOP

流式细胞仪操作规程目录
1：淋巴细胞亚群测定及绝对计数
2：活化淋巴细胞亚群、记忆T及纯真T的检测
3：HLA-B27测定
4：CD55／CD59测定
5：干细胞检测和绝对计数
6：白血病免疫分型测定
7：淋巴细胞T细胞亚群细胞内因子IFN-γ/IL-4测定]
8：细胞周期分析
9：活化血小板检测
10：血小板抗体测定
11：红细胞抗体测定
12：粒细胞抗体测定
，
淋巴细胞亚群测定
(流式细胞仪)
医院检验科
操作规程文件号：
200 年月日起实施
第1版
(共3页)
本规程每2年复审一次
复审日期：年月日
)
复审人：
规程编写者：
审批者：
批准日期：年月日
文件分发部门和／或个人
院档案室保管者：
检验科主任：
检验科实验室：
\
淋巴细胞亚群测定
方案（Protocol）
1.选参数
点击
点击
4色
·
3色
点击
`
（命名，点击save）2.画图
结果
：
此图为CD45圈门
如果做绝对计数，则
填写Flow-Count的浓度
选中cell/ul即可
$
—
活化淋巴细胞亚群、记忆T及纯真T的测定
HLA-B27测定
方案（Protocol）
1.选参数
点击
！
{
键入文件名，点击Save 2.画图
结果
1.positive (+)
/
X-Mean=
2.negative(-)
X-Mean= X-Mean=
CD55/CD59测定
方法
流式细胞仪(BeckmanCoulter，贝克曼库尔特)
原理：
双色直接免疫荧光法。

近年的研究表明，红细胞和白细胞膜上CD55和CD59分子的表达量和缺乏表达细胞的数量对PNH诊断和鉴别有重要意义。

血细胞(红细胞和白细胞)通过膜上的抗原分子与荧光素标记的CD55或CD59的多克隆抗体结合。

用流式细胞仪检测CD55或CD59表达阳性细胞百分数。

、
方案（Protocol）(同HLA-B27)
|
结果
: normal
: abnormal
、<
干细胞检测和绝对计数
…
方案（Protocol）
同淋巴细胞亚群检测结果（Result）
《
!
白血病免疫分型测定
-
T细胞亚群细胞内因子IFN-γ/IL-4检测
操作性能
精密度批内五次重复CV<2％
正常参考值
Thl(IFN-γ)：±% Th2(IL-4)：±%
ThO ：±%
临床意义
^
淋巴细胞均分泌多种细胞因子：Thl细胞主要分泌IL-2，IL-12，IFN-γ和TNF-b ／a等，Th2细胞主要分泌IL-4．IL-5．IL-6，IFN-γ为Thl最特异分泌的细胞因子，IL-4为Th2最特异分泌的细胞因子，所以可根据分泌的细胞因子来区分Thl与Th2。

Thl为IFN-γ+，Th2为IL-4+。

静息状态(人的正常生理状态、即未受到任何刺激下Th0分化为Thl和Th2的能力非常弱，在外周血中仅含有极少量的Thl和Th2细胞，这时我们所能检测的胞内的IFN-γ和IL-4也微乎其微。

当Th细胞受到外界因素，如刺激素、病原体等刺激，其中Th0即会向Thl或Th2大量分化，此时我们检测到的IFN-γ和IL-4也较多。

本实验的检测实际上是检测Th细胞对刺激素刺激的反应能力。

方案（Protocol）
（
细胞周期分析
方法
流式细胞仪(BeckmanCoulter，贝克曼库尔特)
方案（Protocol）
1.选参数
选择Cytometer Control点击Parameters后
】
2.画图
—
结果（Result）
、
血小板膜表面抗体测定
参考值
IgA<% IgG<%
IgM<% IgD<%
临床意义
!
为免疫性血小板减少性紫癜(ITP)诊断、治疗、预后估计的重要指标，在ITP、胶原性疾病时升高。

方案（Protocol）
红细胞膜蛋白结构测定
（红细胞抗体）
方法
流式细胞仪(BeckmanCoulter，贝克曼库尔特)
原理：
直接免疫荧光法。

FITC标记的各型多克隆抗体，加到全血中，与红细胞膜上的相应的IgG-Fc片段结合，经过洗涤(和固定)等步骤后，在流式细胞仪上进行分析。