流式细胞仪操作规程-SOP
流式细胞仪操作规程
流式细胞仪操作规程流式细胞仪是一种用于单个细胞分析的高通量仪器，广泛应用于生物医学研究、药物开发和临床诊断等领域。
为了确保流式细胞仪的正常运行和准确结果的获取，需要制定一套规范的操作规程。
以下是流式细胞仪操作规程的一些基本要点：一、实验前准备：1.确保流式细胞仪处于稳定状态，并将其连接到电源并打开电源。
2.检查仪器的液氮箱和压力容器，确保液氮和气源充足。
3.准备实验所需的标本样品和相应试剂。
4.检查流束对齐和测量准备：校准激光、确定流速、检查流束质量控制。
二、流式细胞仪样品制备：1.使用无菌技术制备样品，并严格遵循相关操作规范。
2.样品的准备应考虑到细胞的数量和稳定性，避免细胞聚集、损伤或死亡。
3.样品的制备应注意避免氧化和污染的发生，以确保结果的准确性。
三、样品装载和分析：1.使用无菌技术将样品加载到流式细胞仪中，并确保样品注射器和管道清洁和无气泡。
2.对于多个样本的分析，应注意正确的样品顺序和识别，以避免混淆。
3.设置合适的仪器参数和测量条件，例如流速、激发和发射光源、滤光片设置和增益调节等。
4.开始样品分析之前，应进行负空白检测和仪器的系统背景校正。
5.开始实验后，密切观察结果窗口，并根据需要进行相应的数据记录和保存。
四、实验后操作：1.实验结束后，关闭流式细胞仪和相关辅助设备，并进行正常关机程序。
2.将仪器和试剂的残留物清洁干净，并按照相关操作规范进行废弃物的处理。
3.维护仪器的常规保养，例如清洁仪器表面、更换滤光片、标定仪器等。
4.及时记录和整理实验数据，并进行必要的数据分析和结果解释。
五、安全注意事项：1.在操作过程中，应遵守相关的生物安全和化学安全规范，例如穿戴好实验室服装、戴手套、戴眼镜等。
2.对于辐射性或有毒性样品的操作，应采取额外的防护措施，例如使用密封容器、穿戴防护服等。
3.在使用激光和其他高能源光源时，注意防护眼睛和暴露部位，避免直接观察激光光源。
总结：流式细胞仪是一种复杂的仪器，需要严格的操作规范来确保实验结果的准确性和数据的可靠性。
流式日常操作SOP
流式日常操作SOP标本处理1（kappa/lambda ckappa/clambda cIgM）育：加入2mlPBS，37°孵育5min，离心1050（1300-1500）rpm 5min，弃上清，混匀细胞。
重复两次。
标本处理2（CD61 CD41a CD42b CD9 CD36）洗：加入2mlPBS，离心1050rpm （1300-1500）5min，弃上清，混匀细胞，重复两次。
细胞计数1 取2%冰醋酸190ul冰醋酸和10ul血在塑料管中混匀。
取10ul在计数板上。
2 计数时数上不数下，数左不数右。
3 加血量=1000*5/细胞计数（平时最大加160ul血）。
胞膜表面标记操作1 加样本2 加入3-5ul不同散射光谱荧光素标记的抗体，加PBS 0.5ml,充分混匀，置室温避光15min。
3 充分混匀细胞。
每管细胞中加入溶血素（1溶血素：9注射用水）2ml，（适量加，若加入后比较红则多加点，若液体比较清凉则少加点）置室温，避光10min。
4 离心1050（1300-1500）rpm 5min，弃上清，混匀细胞。
5 加入PBS 2ml ，离心1050rpm （1300-1500）5min ，弃上清，加0.5ml PBS后混匀，上机检测。
（如不太干净则过滤一下后再加3-5滴PBS以后上机）。
胞浆标记操作：BD破膜剂（AB液）（适用：KI-67 CyclinD1 TdT MPO c CD3 bcl-2 ZAP-70 c CD68 c IgM）1 按上述方法加膜标记抗体，孵育15min。
2 加100ul破膜剂A，室温避光孵育5min。
3充分混匀细胞，每管细胞中加入1*溶血素2ml，置室温，避光10min，离心1050（1300-1500）rpm，弃上清。
混匀细胞。
4 加入50ul破膜剂B，胞浆抗体，室温避光孵育15min。
5 充分混匀细胞，加2ml PBS 混匀，离心1050rpm（1300-1500）5min，弃上清，加0.5mlPBS 后混匀，待上机。
临床流式细胞仪系统安全操作及保养规程
临床流式细胞仪系统安全操作及保养规程1. 引言随着流式细胞仪在临床诊断、生物学研究等领域的应用日益广泛，为了保障操作人员和仪器设备的安全性，制定了一系列的操作规程和保养规程。
本文档旨在介绍临床流式细胞仪系统的安全操作及保养规程，以确保仪器使用的高效性和安全性。
2. 安全操作规程2.1 实验室准备工作在进行流式细胞仪实验之前，需要进行以下准备工作：•清洁实验室环境，确保无杂物和化学品的泄漏。
•核实仪器设备的电源和气源是否连接正常。
•检查实验室的安全设备，包括灭火器和紧急停电开关等。
2.2 操作人员准备工作操作人员需要遵守以下准备工作：•穿戴符合要求的个人防护装备，包括实验室工作服、手套、安全眼镜等。
•对于某些特殊实验，如使用有毒试剂或放射性物质，需要进行专门的培训和认证。
2.3 流式细胞仪操作规程在进行流式细胞仪操作时，需要遵守以下规程：•仪器操作前必须启动后续操作计划，并对样本进行标记。
•根据实验需要，选择合适的仪器参数和染色剂。
•每次使用细胞仪之前，确保仪器已校准，包括流速、激光功率等参数。
•将需要运行的样本按要求装载到样本针筒中，避免气泡的产生。
•仔细调整仪器参数，如判定色彩的门限和探测器增益等。
•启动仪器运行后，及时监测仪器状态，确保实验顺利进行。
•操作结束后关闭仪器电源，并进行必要的数据保存和备份。
2.4 紧急情况处理在遇到紧急情况时，操作人员需要迅速采取以下措施：•紧急情况包括仪器故障、化学品泄漏等，首先要保证操作人员的人身安全。
•关闭仪器电源，切断气源和电源供应。
•立即向实验室主管或安全主管报告，并按照应急预案进行处理。
3. 保养规程为了确保流式细胞仪系统的正常运行和延长设备的使用寿命，需要按照以下保养规程进行操作：3.1 仪器日常保养•定期对仪器进行外部清洁，使用柔软的布擦拭仪器表面。
•检查仪器连接线是否松动，如有松动应及时进行固定。
•定期清理样本针筒和流体管道，避免堵塞。
3.2 激光器保养•激光器是流式细胞仪的核心部件，需要定期检查激光器的功率和稳定性。
CantoII SOP canto software
FACSCanto II 流式细胞仪操作规程
开机
1．打开稳压器。
2．开启计算机，开机密码：BDIS#1。
3．打开仪器主电源。
4．点开FACSCanto软件，登陆。
5．确保软件与流式细胞仪联机。
观察软件右下角：
6．观察status窗口，检查各种液体液面水平，如果需要的话，倒空废液桶，加满鞘液，清洗液和关机液。
7．从菜单上cytometer下选择液流开启(Fluidics startup)。
液流启动大约需7min。
同时仪器进行warm-up。
8．从菜单上cytometer下选择cleaning modes，其中依次进行以下操作：clean flow cell，degas flow cell，bubble filter purge，SIT flush （根据对话框提示选择是否上水）。
关机
1．在worklist中ID下依次填入rinse, clean，H2O。
同时准备rinse 液，clean液（有效氯终浓度为0.1%-0.5%），以及DI水。
2．在表格最前方指定rinse，上rinse液，点击run（绿色箭头），清洗5min。
3．取下rinse液，上clean液，清洗2min。
4．取下clean液，上DI水，清洗5min。
5．取下DI水。
6．从菜单Cytometer下，点击Fluidics shutdown。
7．运行完毕后，关掉仪器主电源。
8．退出软件。
关电脑。
流式细胞仪操作流程(单标)
流式细胞仪操作流程(单标)一、开机(务必按照此顺序开机)1、打开下面的小门，推上电源2、打开插线板电源开关3、开电脑4、打开流式细胞仪开关二、软件准备1、打开软件2、点击菜单栏的Cytometer，待流式细胞仪与电脑自动连接后会自动出现startup 和shutdown选项，点击startup，系统提示按确定。
（等待5～6min startup 完成后再继续）2、在出现的Browser栏中依次选择new folder——new experiment——new specimen——new tubes，按照实验组数给new specimen编号，按照每一组实验试管数给new tubes 编号。
3、在右边显示屏中拽出Global sheet，点击Dot Plot绘制散点图，点击Histogram绘制直方图。
以FITC单标抗体为例，首先绘制FSC-A为横坐标、SSC-A为纵坐标的散点图（图1），然后绘制以FITC-A为横坐标、SSC-A为纵坐标的散点图（图2），最后绘制以FITC-A为横坐标、count为纵坐标的直方图（图3）。
4、点击菜单栏中的populations，选择create statistics view。
三、上机操作1、将试管放置在流式细胞仪上，在左侧显示屏的Acquisition Dashboard中点击acquire data，此时流式细胞仪开始工作。
2、根据图1中细胞的位置，在Cytometer FACScanto 栏中的parameters标签中调节FSC和SSC的电压大小，使主群细胞在图1上处于居中的位置。
3、点击右侧显示屏的Polygon Gate按钮，在图1中选择要求测量的主群细胞，可见图1中出现P1，并且其中的细胞变成红色。
4、选择图2、图3，分别在左侧显示屏的Inspector-Dot Plot栏中点击P1的复选框，可见图2、3中的图象均变成红色，即要求细胞仪检测选定的细胞P1。
流式细胞仪操作规程SOP
流式细胞仪操作规程目录１:淋巴细胞亚群测定及绝对计数２:活化淋巴细胞亚群、记忆T及纯真T得检测3:HLA-B２7测定4:CD55／CD5９测定5:干细胞检测与绝对计数６:白血病免疫分型测定7:淋巴细胞T细胞亚群细胞内因子IFＮ—γ/IL－４测定8:细胞周期分析９:活化血小板检测１０:血小板抗体测定11:红细胞抗体测定１2:粒细胞抗体测定淋巴细胞亚群测定(流式细胞仪)医院检验科操作规程文件号:200 年月日起实施第1版(共3页)本规程每2年复审一次复审日期: 年月日复审人:规程编写者:审批者:批准日期: 年月日文件分发部门与／或个人院档案室保管者:检验科主任:检验科实验室:淋巴细胞亚群测定方案(Protocｏl) １.选参数4色点击点击3色点击(命名,点击save) 2、画图结果此图为ＣD45圈门如果做绝对计数,则填写Flow-Count得浓度选中cｅｌl/ｕl即可方法流式细胞仪(BｅckmaｎCoulteｒ,贝克曼库尔特)原理:双／三色直接免疫荧光法、荧光素标记得各种单克隆抗体加入到全血中,与白细胞膜上相应得抗原结合,经过溶血、洗涤(与固定)等步骤后,在流式细胞仪上进行分析,从而得到相应各亚群得百分数。
活化淋巴细胞表面抗原为ＣD3+/CD25+与CD3＋/ＨLA—ＤR+、CD3+／CD45RＯ+就是记忆型Ｔ细胞、CD3+/CD45RA+就是纯真型T细胞、HLＡ-B２7测定点击点击键入文件名,点击Ｓavｅ2.画图结果１、positｉvｅ(+)X－Ｍean=１７、1 2.nｅgａｔｉve(—)X—Meaｎ=1.２X－Ｍeａｎ=５、8CＤ55/CD５9测定方案(Protｏcol)(同ＨLA—B2７)结果１、RBC: normal2。
ＲＢC: aｂnｏｒｍaｌ３。
WBC干细胞检测与绝对计数方案(Prｏtocol)同淋巴细胞亚群检测结果(Resｕlt)白血病免疫分型测定Ｔ细胞亚群细胞内因子IFN-γ/IL－4检测正常参考值Thｌ(IFN—γ):17、３9±5。
流式细胞术操作规程
流式细胞术操作规程流式细胞术是一种常用的细胞分析技术，它可以用来检测和分析细胞表面标记物、细胞数量、细胞分布等信息。
以下是一份流式细胞术操作规程，详细介绍了该技术的操作步骤和注意事项。
一、实验前准备1. 准备所需的实验材料，包括流式细胞仪、标记抗体、孵育培养基、样本组织、显微镜片等。
2. 检查流式细胞仪的功能是否正常，确认仪器能够正常运行。
3. 清洁实验台面，确保操作环境干净整洁。
4. 准备所需的试剂和溶液，如PBS缓冲液、抗体染色溶液等。
二、样本处理1. 准备样本组织，将其转移到离心管中，并添加适量的孵育培养基使其完全浸泡。
2. 使用离心机将样本离心，去除上清液。
3. 重悬样本，将其转移到离心管中，并加入足够的PBS缓冲液进行洗涤。
4. 重复洗涤过程，直到样本完全洗净。
三、标记抗体染色1. 取出经过洗涤的样本，将其转移到离心管中，并加入足够的标记抗体溶液。
2. 在黑暗条件下孵育样本，使其与标记抗体充分结合。
3. 静置反应15-30分钟，确保充分染色。
4. 在光线和温度适宜的条件下冰冻样本，避免抗体的结合。
5. 根据实验需求，可以选择单标记或多标记抗体。
四、样本准备1. 取出经过标记抗体染色的样本，将其转移到离心管中，并加入足够的PBS缓冲液进行洗涤。
2. 将样本离心并去除上清液。
3. 重悬样本，并根据实验需要加入适量的PBS缓冲液进行稀释。
4. 检查样本的细胞数目和活性是否符合实验要求，如有必要，可以使用显微镜进行观察和计数。
五、流式分析1. 打开流式细胞仪，并确认仪器的设置和参数是否符合实验要求。
2. 调整仪器的流速和灵敏度，使其适应样本的特性。
3. 将样本转移至流式细胞仪的样本管中。
4. 开始流式细胞分析，记录并保存实验数据。
5. 根据实验需要，可以进行不同的数据分析和处理，包括细胞分布、细胞数量、表面标记物的表达等。
六、实验后处理1. 关闭仪器，清洁工作台和操作区域。
2. 处理和储存实验数据，可以使用相应的图像科学软件进行数据处理和结果分析。
流式细胞仪使用规范
流式细胞仪使用规范流式细胞仪（Flow Cytometer）是一种常用的细胞分析仪器，广泛应用于细胞学、免疫学、生物学、医学等领域。
流式细胞仪可以对细胞进行快速、准确的多参数分析，能够检测和分离不同细胞类型、测定细胞数量、评估细胞活性以及研究细胞表面标记物等。
为了保证流式细胞仪的正常使用，以下是一些流式细胞仪的使用规范和注意事项。
1.准备工作：a.检查仪器：确认仪器的状态，包括是否通电、通气、光源是否正常工作等。
b.清洁样品室：使用无菌纯水或适当的清洁剂擦拭样品室，确保没有杂物或污染物。
c.校准仪器：根据仪器规定进行标定和校准，确保仪器的准确性和稳定性。
2.样品准备：a.细胞处理：合理处理样品，保证单细胞悬浮状态。
可以通过胰酶消化、筛选等方法获取单细胞悬浮液。
b.细胞计数：使用合适的细胞计数仪进行细胞计数，计算出所需的细胞悬浮液浓度。
c.细胞染色：根据实验需求对样品进行适当的荧光染色或抗体标记，以便在流式细胞仪中检测和分析。
3.流式细胞仪操作：a.设置参数：根据实验设计和研究目的，设置合适的仪器参数，包括激光器选择、激发波长、检测波长、门控设置等。
b.样品加载：将样品注入流式细胞仪样品室，避免气泡的产生，并确保样品完整进入样品室。
c.数据采集：开始数据采集前，进行流式细胞仪的标定、峰位校正和峰间校正，以保证数据的准确性和可靠性。
d.数据分析：对采集到的数据进行分析和解读，根据实验要求选取合适的分析策略和软件进行数据处理。
4.清洁和保养：a.实验后清洁：实验结束后，及时清洁仪器，避免样品残留和交叉污染。
b.仪器维护：定期检查仪器的部件和附件，保证其正常工作。
如需要更换部件或常规维护，请按照厂家指南进行操作。
c.长时间停用：如果流式细胞仪长时间不使用，应按照厂家指南进行仪器的合理关闭和长期存储。
5.安全注意事项：a.避免直接接触激光线：在进行样品加载和设置参数时，避免接触激光线以避免损伤眼睛。
b.使用无菌操作：在样品加载和处理过程中，使用无菌操作和材料，避免细菌污染和交叉感染。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
流式细胞仪操作规程目录
1：淋巴细胞亚群测定及绝对计数
2：活化淋巴细胞亚群、记忆T及纯真T的检测
3：HLA-B27测定
4：CD55／CD59测定
5：干细胞检测和绝对计数
6：白血病免疫分型测定
7：淋巴细胞T细胞亚群细胞内因子IFN-γ/IL-4测定8：细胞周期分析
9：活化血小板检测
10：血小板抗体测定
11：红细胞抗体测定
12：粒细胞抗体测定
淋巴细胞亚群测定
(流式细胞仪)
医院检验科
操作规程文件号：
200 年月日起实施
第1版
(共3页)
本规程每2年复审一次
复审日期：年月日
复审人：
规程编写者：
审批者：
批准日期：年月日
文件分发部门和／或个人
院档案室保管者：
检验科主任：
检验科实验室：
淋巴细胞亚群测定
方案（Protocol）
1.选参数
点击
点击
4色
3色
点击
（命名，点击save）2.画图
结果
此图为CD45圈门
如果做绝对计数，则
填写Flow-Count的浓
选中cell/ul即可
活化淋巴细胞亚群、记忆T及纯真T的测定
HLA-B27测定
方案（Protocol）
1.选参数
点击
点击
键入文件名，点击Save 2.画图
结果
1.positive (+)
X-Mean= 2.negative(-)
X-Mean= X-Mean=
CD55/CD59测定
方案（Protocol）(同HLA-B27)
结果
: normal
: abnormal
干细胞检测和绝对计数
方案（Protocol）同淋巴细胞亚群检测结果（Result）
白血病免疫分型测定
T细胞亚群细胞内因子IFN-γ/IL-4检测
细胞受到外界因素，如刺激素、病原体等刺激，其中Th0即会向Thl或Th2大量分化，此时我们检测到的IFN-γ和IL-4也较多。
本实验的检测实际上是检测Th细胞对刺激素刺激的反应能力。
方案（Protocol）
细胞周期分析
方案（Protocol）
1.选参数
选择Cytometer Control点击Parameters后
2.画图
结果（Result）
血小板膜表面抗体测定
IgA<% IgG<%
IgM<% IgD<%
临床意义
为免疫性血小板减少性紫癜(ITP)诊断、治疗、预后估计的重要指标，在ITP、胶原性疾病时升高。
方案（Protocol）
红细胞膜蛋白结构测定
（红细胞抗体）
方法
流式细胞仪(BeckmanCoulter，贝克曼库尔特)
原理：
直接免疫荧光法。
FITC标记的各型多克隆抗体，加到全血中，与红细胞膜上的相应的IgG-Fc片段结合，经过洗涤(和固定)等步骤后，在流式细胞仪上进行分析。