流式细胞仪操作规程_SOP
BDFACSCalibur流式细胞术标准操作规程
BD FACSCalibur流式细胞仪操作与维护程序目的：规范BDFACSCalibur流式细胞仪操作与维护程序，正确使用设备，保证实验顺利进行、操作人员人身安全和设备安全。
适用范围：本规程适用于BD FACSCalibur流式细胞仪的使用操作。
责任者：操作人员：负责按照本规程操作仪器设备，对仪器进行日常维护，并作使用记录。
保管人员：负责监管仪器操作是否符合规程，并对仪器进行定期维护、保养。
科室负责人：负责对仪器设备的综合管理。
内容：1.每日开机程序1.1在气压阀减压的状态下检查鞘液桶，确认：1.1.1鞘液充满状态，约3L1.1.2盖紧盖子1.1.3安上金属挡板1.1.4管路畅通，无扭曲1.2.检查废液桶，确认：1.2.1废液桶充满400ml漂白剂1.2.2管路畅通，无扭曲1.3打开流式细胞仪。
1.4打开电脑。
1.5气压阀置于加压位置，并排除管路中气泡。
1.6做Prime。
1.7等待机器预热5~10分钟后可开始试验。
2.每日关机程序2.1用3mlFACSCIean洗液加入样品管中上样，将样品支撑架置于旁位，以外套管吸入1ml。
2.2将样品支撑架置于中位，以HI RUN运行10分钟，使内管吸入约1ml。
2.3将样品管换成蒸馏水重复1-2步。
2.4放置盛有1ml蒸馏水的试管于样品支撑架上。
2.5选择Standby模式10分钟，将激光冷却后可关掉主机。
2.6退出所有应用软件，关闭电脑。
2.7将流式细胞仪的压力阀置于减压状态。
3.每月维护程序3.1将FACSClean洗液1~2L装入鞘液桶。
3.2旁路鞘液过滤器（过滤器上的快速接口从SANLINEFILTER端断开，将鞘液白色管路液路取下联到SANLINE FILTER 端口），以防伤害。
3.3将盛有3ml FACSClean 洗液的试管置于样品支架上，以HI RUN 30 分钟。
3.4将鞘液和样品换成蒸馏水重复步骤3，以HI RUN 60 分钟。
3.5将鞘液桶装满鞘液，恢复过滤器。
流式细胞仪操作规程
流式细胞仪操作规程流式细胞仪是一种用于单个细胞分析的高通量仪器，广泛应用于生物医学研究、药物开发和临床诊断等领域。
为了确保流式细胞仪的正常运行和准确结果的获取，需要制定一套规范的操作规程。
以下是流式细胞仪操作规程的一些基本要点：一、实验前准备：1.确保流式细胞仪处于稳定状态，并将其连接到电源并打开电源。
2.检查仪器的液氮箱和压力容器，确保液氮和气源充足。
3.准备实验所需的标本样品和相应试剂。
4.检查流束对齐和测量准备：校准激光、确定流速、检查流束质量控制。
二、流式细胞仪样品制备：1.使用无菌技术制备样品，并严格遵循相关操作规范。
2.样品的准备应考虑到细胞的数量和稳定性，避免细胞聚集、损伤或死亡。
3.样品的制备应注意避免氧化和污染的发生，以确保结果的准确性。
三、样品装载和分析：1.使用无菌技术将样品加载到流式细胞仪中，并确保样品注射器和管道清洁和无气泡。
2.对于多个样本的分析，应注意正确的样品顺序和识别，以避免混淆。
3.设置合适的仪器参数和测量条件，例如流速、激发和发射光源、滤光片设置和增益调节等。
4.开始样品分析之前，应进行负空白检测和仪器的系统背景校正。
5.开始实验后，密切观察结果窗口，并根据需要进行相应的数据记录和保存。
四、实验后操作：1.实验结束后，关闭流式细胞仪和相关辅助设备，并进行正常关机程序。
2.将仪器和试剂的残留物清洁干净，并按照相关操作规范进行废弃物的处理。
3.维护仪器的常规保养，例如清洁仪器表面、更换滤光片、标定仪器等。
4.及时记录和整理实验数据，并进行必要的数据分析和结果解释。
五、安全注意事项：1.在操作过程中，应遵守相关的生物安全和化学安全规范，例如穿戴好实验室服装、戴手套、戴眼镜等。
2.对于辐射性或有毒性样品的操作，应采取额外的防护措施，例如使用密封容器、穿戴防护服等。
3.在使用激光和其他高能源光源时，注意防护眼睛和暴露部位，避免直接观察激光光源。
总结：流式细胞仪是一种复杂的仪器，需要严格的操作规范来确保实验结果的准确性和数据的可靠性。
流式细胞仪的使用程序
流式细胞仪的使用程序------血液病实验诊断中心一.开机程序1.检查稳压器电源,打开电源,稳定5分钟。
2.打开储液箱,倒掉废液, 并在废液桶中加入400ml漂白水原液。
打开压力阀,取出鞘液桶,将鞘液桶加至4/5满(一般可用三蒸水,做分选必须用PBS 或FACSFlow),合上压力阀。
确实盖紧桶盖,检查所有管路是否妥善安置。
3.将FACSCalibur开关打开,此时仪器功能控制钮的显示应是STANDBY,预热5-10分钟。
排出过滤器内的气泡。
4.如果需要打印,打开打印机电源。
5.打开电脑,等待屏幕显示出标准的苹果标志。
6.执行仪器PRIME功能一次,以排除Flow cell中的气泡。
7.分析样品时,先用FACAFlow 或PBS进行HIGH RUN约2分钟。
做过分选后,每次开机后需冲洗管道:向分选装置上装上两个50ml离心管,不接通浓缩系统,摁下右下角白色按钮开始冲洗。
待自动停止后接通浓缩装置,同上法冲洗一次。
二.预设获取模式文件(Acquisition Template Files)1.从苹果标志中选择CELLQuest见一个新视窗,可利用此视窗编辑一个获取模式文件。
2.选取屏幕左列绘图工具中的Dot plot,绘出一个或多个Dot Plots(点图)。
从Dot Plot对话框中选取Acquisition作为图形资料来源,并确定适当的x 轴和y轴参数。
3.选取屏幕左列绘图工具中的Histogram,同上法可绘出Histogram(直方图)。
4.将此视窗命名后储存于FACStation G3\BD Applications \CELLQuestFolder \EXP文件夹中,下次进行相同实验时可直接调用。
. 本计算机中已设定两个模式文件:ACQ和EXP,储存于FACStation G3\BD Applications \CELLQuest \EXP文件夹中,ACQ用于细胞DNA检测, EXP用于细胞表面标志分析。
cytoflex操作规程
cytoflex操作规程CytoFLEX流式细胞分析仪是一种高性能、多参数流式细胞仪，广泛应用于细胞分析、免疫学研究、荧光染色等领域。
为了保证操作安全和数据准确性，以下是CytoFLEX 操作规程。
1. 开机准备a. 检查仪器电源是否插入正确，打开电源开关。
b. 检查电脑是否连接到CytoFLEX流式细胞分析仪。
c. 启动分析软件，如CytExpert。
d. 检查流式细胞分析仪的滤光片配置是否正确。
2. 设定仪器参数a. 在主界面上选择“Acquisition”进行实验参数设置。
b. 选择合适的波长和功率来激发和检测样品中的荧光染料。
c. 根据样品类型和实验要求，设置正确的流速和取样量。
3. 样品制备a. 根据实验要求，选择合适的细胞悬液和染色方法。
b. 遵循标准的样品制备过程，包括细胞计数、离心和悬浮液的制备。
c. 样品处理过程中要保持无菌条件，避免污染和细胞损伤。
4. 样品加载a. 在样品管中加入合适的染料和细胞悬液。
注意避免气泡的产生。
b. 将样品管放入样品架中，确保样品管与固定夹密封紧密。
5. 调节仪器设置a. 使用设置好的仪器参数进行样品调试。
b. 如有需要，调整观察点、光强和阈值，以获得最佳的数据。
6. 开始实验a. 点击软件界面上的“Acquisition”按钮，开始采集样品数据。
b. 实时监控样品流速和染料发光情况，如有异常情况要及时停止实验检查。
7. 数据保存和分析a. 实验完成后，保存数据文件到指定的位置。
b. 使用分析软件对采集到的数据进行后续分析和图表绘制。
8. 清洁和关机a. 关闭采集软件和电脑。
b. 使用清洁剂和纸巾擦拭仪器外壳、玻璃仪器件和样品台面。
c. 关闭CytoFLEX流式细胞分析仪的电源开关。
以上是CytoFLEX操作的基本规程，用户在使用时要按照操作要求仔细操作，确保数据的准确性和仪器的正常运行，同时在实验过程中遵循实验安全规范，确保操作的安全性。
流式细胞仪操作流程(单标)
流式细胞仪操作流程(单标)一、开机(务必按照此顺序开机)1、打开下面的小门，推上电源2、打开插线板电源开关3、开电脑4、打开流式细胞仪开关二、软件准备1、打开软件2、点击菜单栏的Cytometer，待流式细胞仪与电脑自动连接后会自动出现startup 和shutdown选项，点击startup，系统提示按确定。
（等待5～6min startup 完成后再继续）2、在出现的Browser栏中依次选择new folder——new experiment——new specimen——new tubes，按照实验组数给new specimen编号，按照每一组实验试管数给new tubes 编号。
3、在右边显示屏中拽出Global sheet，点击Dot Plot绘制散点图，点击Histogram绘制直方图。
以FITC单标抗体为例，首先绘制FSC-A为横坐标、SSC-A为纵坐标的散点图（图1），然后绘制以FITC-A为横坐标、SSC-A为纵坐标的散点图（图2），最后绘制以FITC-A为横坐标、count为纵坐标的直方图（图3）。
4、点击菜单栏中的populations，选择create statistics view。
三、上机操作1、将试管放置在流式细胞仪上，在左侧显示屏的Acquisition Dashboard中点击acquire data，此时流式细胞仪开始工作。
2、根据图1中细胞的位置，在Cytometer FACScanto 栏中的parameters标签中调节FSC和SSC的电压大小，使主群细胞在图1上处于居中的位置。
3、点击右侧显示屏的Polygon Gate按钮，在图1中选择要求测量的主群细胞，可见图1中出现P1，并且其中的细胞变成红色。
4、选择图2、图3，分别在左侧显示屏的Inspector-Dot Plot栏中点击P1的复选框，可见图2、3中的图象均变成红色，即要求细胞仪检测选定的细胞P1。
流式细胞仪操作规程
流式细胞仪的使用程序分子病毒实验室一．开机程序1．检查稳压器电源，打开电源，稳定 5 分钟。
2.打开储液箱，倒掉废液，并在废液桶中加入400ml漂白水原液。
打开压力阀，取出鞘液桶，将鞘液桶加至 4/5 满（一般可用三蒸水，做分选必须用PBS或FACSFIow），合上压力阀。
确实盖紧桶盖，检查所有管路是否妥善安置。
3.将 FACSCalibur 开关打开，此时仪器功能控制钮的显示应是 STANDBY，预热5-10分钟。
排出过滤器内的气泡。
4.如果需要打印，打开打印机电源。
5.打开电脑 , 等待屏幕显示出标准的苹果标志。
6.执行仪器 PRIME 功能一次，以排除 Flow cell 中的气泡。
7.分析样品时，先用 FACAFIow或PBS进行HIGH RUN约2分钟。
做过分选后，每次开机后需冲洗管道：向分选装置上装上两个 50ml 离心管，不接通浓缩系统，摁下右下角白色按钮开始冲洗。
待自动停止后接通浓缩装置，同上法冲洗一次。
预设获取模式文件(Acquisition Template Files)从苹果标志中选择CELLQuest见一个新视窗，可利用此视窗编辑一个1.获取模式文件。
2.选取屏幕左列绘图工具中的Dot plot，绘出一个或多个Dot Plots（点图）。
从Dot Plot对话框中选取Acquisition作为图形资料来源，并确定适当的 x 轴和y 轴参数。
3.选取屏幕左列绘图工具中的 Histogram，同上法可绘出 Histogram （直方图）。
4.将此视窗命名后储存于FACStation G3\BD Applications \CELLQuestFolder \EXP文件夹中，下次进行相同实验时可直接调用。
. 本计算机中已设定两个模式文件：ACQ和EXP，储存于FACStationG3\BD Applications \CELLQuest \EXP 文件夹中，ACQ 用于细胞 DNA 检测， EXP用于细胞表面标志分析。
流式细胞仪操作规程SOP
流式细胞仪操作规程目录１:淋巴细胞亚群测定及绝对计数２:活化淋巴细胞亚群、记忆T及纯真T得检测3:HLA-B２7测定4:CD55／CD5９测定5:干细胞检测与绝对计数６:白血病免疫分型测定7:淋巴细胞T细胞亚群细胞内因子IFＮ—γ/IL－４测定8:细胞周期分析９:活化血小板检测１０:血小板抗体测定11:红细胞抗体测定１2:粒细胞抗体测定淋巴细胞亚群测定(流式细胞仪)医院检验科操作规程文件号:200 年月日起实施第1版(共3页)本规程每2年复审一次复审日期: 年月日复审人:规程编写者:审批者:批准日期: 年月日文件分发部门与／或个人院档案室保管者:检验科主任:检验科实验室:淋巴细胞亚群测定方案(Protocｏl) １.选参数4色点击点击3色点击(命名,点击save) 2、画图结果此图为ＣD45圈门如果做绝对计数,则填写Flow-Count得浓度选中cｅｌl/ｕl即可方法流式细胞仪(BｅckmaｎCoulteｒ,贝克曼库尔特)原理:双／三色直接免疫荧光法、荧光素标记得各种单克隆抗体加入到全血中,与白细胞膜上相应得抗原结合,经过溶血、洗涤(与固定)等步骤后,在流式细胞仪上进行分析,从而得到相应各亚群得百分数。
活化淋巴细胞表面抗原为ＣD3+/CD25+与CD3＋/ＨLA—ＤR+、CD3+／CD45RＯ+就是记忆型Ｔ细胞、CD3+/CD45RA+就是纯真型T细胞、HLＡ-B２7测定点击点击键入文件名,点击Ｓavｅ2.画图结果１、positｉvｅ(+)X－Ｍean=１７、1 2.nｅgａｔｉve(—)X—Meaｎ=1.２X－Ｍeａｎ=５、8CＤ55/CD５9测定方案(Protｏcol)(同ＨLA—B2７)结果１、RBC: normal2。
ＲＢC: aｂnｏｒｍaｌ３。
WBC干细胞检测与绝对计数方案(Prｏtocol)同淋巴细胞亚群检测结果(Resｕlt)白血病免疫分型测定Ｔ细胞亚群细胞内因子IFN-γ/IL－4检测正常参考值Thｌ(IFN—γ):17、３9±5。
流式细胞仪SOP
一. 流式细胞术概述流式细胞术(Flow Cytometry, FCM)是七十年代发展起来的高科学技术,它集计算机技术、激光技术、流体力学、细胞化学、细胞免疫学于一体, 同时具有分析和分选细胞功能。
它不仅可测量细胞大小、内部颗粒的性状,还可检测细胞表面和细胞浆抗原、细胞内DNA、RNA含量等,可对群体细胞在单细胞水平上进行分析, 在短时间内检测分析大量细胞,并收集、储存和处理数据,进行多参数定量分析; 能够分类收集(分选)某一亚群细胞,分选纯度＞95%。
在血液学、免疫学、肿瘤学、药物学、分子生物学等学科广泛应用。
国内使用的流式细胞仪主要由美国BECKMAN- COULTER公司和Becton-Dickinson公司(简称B-D公司)两个厂家生产。
流式细胞仪主要有两型:临床型（又称小型机、台式机）和综合型（又称大型机、分析型）。
BECKMAN-COULTER 公司最新产品为EPICS ALTRA和EPICS XL/XL-MCL,BD公司最新产品为FACS Vantage 和FACS Calibur。
EPICS XL/XL-MCL和FACS Calibur是临床型;EPICS ALTRA和FACS Vantage是综合型，除具备检测分析功能外,还具有细胞分选功能,•多用于科学研究。
二.流式细胞仪主要技术指标1．流式细胞仪的分析速度：一般流式细胞仪每秒检测1000～5000个细胞,大型机可达每秒上万个细胞。
2．流式细胞仪的荧光检测灵敏度：一般能测出单个细胞上<600个荧光分子,两个细胞间的荧光差＞5%即可区分。
3．前向角散射（FSC）光检测灵敏度：前向角散射（FSC）反映被测细胞的大小,一般流式细胞仪能够测量到0.2μm～0.5μm。
4．流式细胞仪的分辨率：通常用变异系数CV值来表示，一般流式细胞仪能够达到<2.0%,这也是测量标本前用荧光微球调整仪器时要求必须达到的。
5．流式细胞仪的分选速度：一般流式细胞仪分选速度＞1000个/秒，分选细胞纯度可达99%以上。
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流式细胞仪操作规程目录
1：淋巴细胞亚群测定及绝对计数
2：活化淋巴细胞亚群、记忆T及纯真T的检测
3：HLA-B27测定
4：CD55／CD59测定
5：干细胞检测和绝对计数
6：白血病免疫分型测定
7：淋巴细胞T细胞亚群细胞内因子IFN-γ/IL-4测定8：细胞周期分析
9：活化血小板检测
10：血小板抗体测定
11：红细胞抗体测定
12：粒细胞抗体测定
淋巴细胞亚群测定
(流式细胞仪)
医院检验科
操作规程文件号：
200 年月日起实施
第1版
(共3页)
本规程每2年复审一次
复审日期：年月日
复审人：
规程编写者：
审批者：
批准日期：年月日
文件分发部门和／或个人
院档案室保管者：
检验科主任：
检验科实验室：
淋巴细胞亚群测定
点击
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3色
点击
（命名，点击save）画图
此图为CD45圈门
填写Flow-Count的浓度
活化淋巴细胞亚群、记忆T及纯真T的测定
HLA-B27测定
点击
点击
X-Mean=17.1 negative(-)
X-Mean=1.2 X-Mean=5.8
CD55/CD59测定
2.RBC: abnormal
干细胞检测和绝对计数
白血病免疫分型测定
T细胞亚群细胞内因子IFN-γ/IL-4检测
细胞周期分析
2.画图
血小板膜表面抗体测定
红细胞膜蛋白结构测定（红细胞抗体）
粒细胞抗体测定。