流式细胞仪操作规程
流式细胞仪操作规程
流式细胞仪操作规程流式细胞仪是一种用于单个细胞分析的高通量仪器，广泛应用于生物医学研究、药物开发和临床诊断等领域。
为了确保流式细胞仪的正常运行和准确结果的获取，需要制定一套规范的操作规程。
以下是流式细胞仪操作规程的一些基本要点：一、实验前准备：1.确保流式细胞仪处于稳定状态，并将其连接到电源并打开电源。
2.检查仪器的液氮箱和压力容器，确保液氮和气源充足。
3.准备实验所需的标本样品和相应试剂。
4.检查流束对齐和测量准备：校准激光、确定流速、检查流束质量控制。
二、流式细胞仪样品制备：1.使用无菌技术制备样品，并严格遵循相关操作规范。
2.样品的准备应考虑到细胞的数量和稳定性，避免细胞聚集、损伤或死亡。
3.样品的制备应注意避免氧化和污染的发生，以确保结果的准确性。
三、样品装载和分析：1.使用无菌技术将样品加载到流式细胞仪中，并确保样品注射器和管道清洁和无气泡。
2.对于多个样本的分析，应注意正确的样品顺序和识别，以避免混淆。
3.设置合适的仪器参数和测量条件，例如流速、激发和发射光源、滤光片设置和增益调节等。
4.开始样品分析之前，应进行负空白检测和仪器的系统背景校正。
5.开始实验后，密切观察结果窗口，并根据需要进行相应的数据记录和保存。
四、实验后操作：1.实验结束后，关闭流式细胞仪和相关辅助设备，并进行正常关机程序。
2.将仪器和试剂的残留物清洁干净，并按照相关操作规范进行废弃物的处理。
3.维护仪器的常规保养，例如清洁仪器表面、更换滤光片、标定仪器等。
4.及时记录和整理实验数据，并进行必要的数据分析和结果解释。
五、安全注意事项：1.在操作过程中，应遵守相关的生物安全和化学安全规范，例如穿戴好实验室服装、戴手套、戴眼镜等。
2.对于辐射性或有毒性样品的操作，应采取额外的防护措施，例如使用密封容器、穿戴防护服等。
3.在使用激光和其他高能源光源时，注意防护眼睛和暴露部位，避免直接观察激光光源。
总结：流式细胞仪是一种复杂的仪器，需要严格的操作规范来确保实验结果的准确性和数据的可靠性。
流式细胞仪操作规程
FACSCalibur流式细胞仪操作规程一、编号：YQ0606二、标题：FACSCalibur流式细胞仪操作规程三、关键词：流式细胞仪操作规程四、目的：保证流式细胞仪的安全及有效操作五、背景知识：流式细胞术（Flow CytoMeter，FCM）是一种在功能水平上对单细胞或其他生物粒子进行定量分析和分选的检测手段，它可高速分析上万个细胞，并能同时从一个细胞中测得多个参数，与传统荧光镜检查相比，具有速度快、精度高、准确性好等优点，成为当代最先进的细胞定量分析技术。
六、原理待测细胞染色后制成单细胞悬液，用一定压力将待测样品压入流动室，不含细胞的磷酸缓冲液在高压下从鞘液管喷出，鞘液管入口方向与待测样品流成一定角度，这样鞘液就能够包绕着样品高速流动，组成一个圆形的流束，待测细胞在鞘液的包被下单行排列，依次通过检测区域。
流式细胞仪通常以激光作为发光源。
经过聚焦整形后的光束，垂直照射在样品流上，被荧光染色的细胞在激光束的照射下，产生散射光和激发荧光。
这两种信号同时被前向光电二极管和90°方向的光电倍增管接收。
光散射信号在前向小角度进行检测，这种信号基本上反映了细胞体积的大小；荧光信号的接受方向与激光束垂直，经过一系列双色性反射镜和带通滤光片的分离，形成多个不同波长的荧光信号。
这些荧光信号的强度代表了所测细胞膜表面抗原的强度或其核内物质的浓度，经光电倍增管接收后可转换为电信号，再通过A/D转换器，将连续的电信号转换为可被计算机识别的数字信号。
计算机把所测量到的各种信号进行计算机处理，将分析结果显示在计算机屏幕上，液可以打印出来，还可以数据文件的形式存储在硬盘上以备日后的查询或进一步分析。
检测数据的显示视测量参数的不同由多种形式可供选择。
单参数数据以直方图的形式表达，其X轴为测量强度，Y轴为细胞数目。
一般来说，流式细胞仪坐标轴的分辨率有512或1024通道数，这视其模数转换器的分辨率而定。
对于双参数或多参数数据，既可以单独显示每个参数的直方图，也可以选择二维的三点图、等高线图、灰度图或三维立体视图。
流式细胞仪的日常操作规范
流式细胞仪的日常操作规范
一、仪器开/关机程序
1、开机程序
检查仪器鞘液桶和废液桶。
打开流式细胞仪。
气压阀置于加压位置，并排除管路中气泡。
打开电脑。
等待机器预热5—10分钟后可开始实验。
2、关机程序
用4ml10%漂白剂作样品，将样品支撑架置于旁位，以外管吸入2ml。
将样品支撑架置于中位，以HI RUN 5分钟，使内管吸入2ml。
将样品换成蒸馏水重复1-2步。
放置盛有1ml蒸馏水的试管于样品支撑架上。
选择Standby模式10分钟。
关闭电脑，再关掉仪器。
二、维护保养
1、每日保养
用蒸馏水作样品，将样品支架支撑置于旁路，以外管吸入2ml
将样品支撑架置于中位，以HI RUN 5分钟，使内管吸入2ml.
选择Standby模式10分钟。
关闭电脑，再关掉仪器。
2、每月保养
将10%漂白剂装入鞘液桶。
旁路鞘液过滤器,以防损害。
将盛有3ml10%漂白剂的试管置于样品支架上,以HI RUN 20-30分钟。
将鞘液和样品换成蒸馏水重复步骤。
流式细胞仪AccuriC6操作规程
流式细胞仪Accuri C6一、启动Accuri C6仪器①依次开仪器电源、电脑显示器及主机电源②5～10分钟后，双击电脑桌面“CFlow Plus”图标，进入仪器控制软件界面。
软件界面信号灯指示为黄色，显示仪器与电脑没有连接好；软件界面信号灯指示为绿色，显示仪器与电脑已连接好③检查仪器旁边四个液体容器，清空“Waste”桶中的废液，检查“Sheath”、“Cleanning fluid”、“Decontamination”三个桶中液体量是否满足实验要求，若存放时间超过1个月，则需要进行更换。
其中“Sheath”为超纯去离子水，“Cleanning fluid”有效氯离子为1％的次氯酸钠，“Decontamination”为细菌消毒液，1295µl杀菌液原液用超纯水定容250ml④载物台上放置空管，点击软件界面Instrument/Run backflush cycle，可以看见少许液体从进样针中流出来，作用为反冲，清除进样针中的残留物⑤在软件96孔板界面中任选1孔，载物台上放置1管去离子水，⑥选择运行速度为“High”，运行时间设置为10分钟，点击“Run”按钮运行10分钟自动停止。
该步骤的作用是：激光器预热，清晰管路⑦该孔收集数据后变为蓝色，鼠标选中该孔，点击“Delete Sample Data”，删除孔内数据，启动步骤完成，即可开始检测样品二、Accuri C6样品检测①将样品放置在载物台上，在软件96孔界面选择样品的位置，并命名②设置检测停止条件。
（1）无限制检测Run unlimited，手动点击停止；（2）收集多少个细胞后停止，在events框中填写；（3）收集多长时间停止，在min和sec框中填写；（4）收集多少体积停止，在µl框中填写③在Fluidics框设定进样速度，可选择慢速、中速和快速，或者在Custom框中手动设置进样速度④“Set Threshold”设定阈值，需要根据实验设定合适的阈值，阈值设置太低，背景荧光对目标细胞的荧光信号产生较大的干扰，阈值设置太高，无法有效检测目标细胞⑤“Set Color Compensation”设定颜色补偿，一般在数据处理分析过程中进行⑥点击“Run”按钮，开始样品检测三、样品检测过程中注意事项：①样品之间无需用去离子水冲洗，当完成所有样品检测时，必须运行Instrument/Cleanning fluid cycle清晰程序。
临床流式细胞仪系统安全操作及保养规程
临床流式细胞仪系统安全操作及保养规程1. 引言随着流式细胞仪在临床诊断、生物学研究等领域的应用日益广泛，为了保障操作人员和仪器设备的安全性，制定了一系列的操作规程和保养规程。
本文档旨在介绍临床流式细胞仪系统的安全操作及保养规程，以确保仪器使用的高效性和安全性。
2. 安全操作规程2.1 实验室准备工作在进行流式细胞仪实验之前，需要进行以下准备工作：•清洁实验室环境，确保无杂物和化学品的泄漏。
•核实仪器设备的电源和气源是否连接正常。
•检查实验室的安全设备，包括灭火器和紧急停电开关等。
2.2 操作人员准备工作操作人员需要遵守以下准备工作：•穿戴符合要求的个人防护装备，包括实验室工作服、手套、安全眼镜等。
•对于某些特殊实验，如使用有毒试剂或放射性物质，需要进行专门的培训和认证。
2.3 流式细胞仪操作规程在进行流式细胞仪操作时，需要遵守以下规程：•仪器操作前必须启动后续操作计划，并对样本进行标记。
•根据实验需要，选择合适的仪器参数和染色剂。
•每次使用细胞仪之前，确保仪器已校准，包括流速、激光功率等参数。
•将需要运行的样本按要求装载到样本针筒中，避免气泡的产生。
•仔细调整仪器参数，如判定色彩的门限和探测器增益等。
•启动仪器运行后，及时监测仪器状态，确保实验顺利进行。
•操作结束后关闭仪器电源，并进行必要的数据保存和备份。
2.4 紧急情况处理在遇到紧急情况时，操作人员需要迅速采取以下措施：•紧急情况包括仪器故障、化学品泄漏等，首先要保证操作人员的人身安全。
•关闭仪器电源，切断气源和电源供应。
•立即向实验室主管或安全主管报告，并按照应急预案进行处理。
3. 保养规程为了确保流式细胞仪系统的正常运行和延长设备的使用寿命，需要按照以下保养规程进行操作：3.1 仪器日常保养•定期对仪器进行外部清洁，使用柔软的布擦拭仪器表面。
•检查仪器连接线是否松动，如有松动应及时进行固定。
•定期清理样本针筒和流体管道，避免堵塞。
3.2 激光器保养•激光器是流式细胞仪的核心部件，需要定期检查激光器的功率和稳定性。
流式细胞术操作规程
流式细胞术操作规程
《流式细胞术操作规程》
流式细胞术是一种用于研究细胞表型和功能的重要技术。
在进行流式细胞术时，操作规程的严谨性和标准化是非常重要的。
以下是流式细胞术操作规程的一般步骤：
1. 样品准备：首先，需要准备好待测的细胞样品。
这包括细胞的培养和收集，以及必要的处理和染色。
2. 仪器准备：在进行流式细胞术之前，需要确保流式细胞术仪器的正常运行。
这包括检查流式细胞仪和细胞分选仪的通电和冷却系统，以及其它相关设备的准备。
3. 校准仪器：在进行流式细胞术之前，需要对流式细胞仪进行校准，以确保其准确测量样品中细胞的特定参数。
4. 样品测量：将准备好的细胞样品加入流式细胞仪，并进行测量。
测量完毕后，需要对数据进行分析和记录。
5. 数据分析：对测量得到的数据进行分析，包括确定细胞的表型和功能，以及对其它相关参数进行分析和比较。
6. 结果解释：根据数据分析的结果，进行结果的解释和报道，并对相关实验现象进行讨论和总结。
在进行流式细胞术时，需要严格遵守操作规程，以确保实验结果的准确性和可靠性。
此外，对于一些特殊的实验操作，可能
还需要根据具体情况进行相应的调整和改进。
流式细胞术的操作规程是一个很重要的研究工具，它可以帮助研究人员进行高效、准确的实验，从而为科学研究和医学诊断提供更为可靠的数据和方法。
cytoflex操作规程
cytoflex操作规程CytoFLEX流式细胞分析仪是一种高性能、多参数流式细胞仪，广泛应用于细胞分析、免疫学研究、荧光染色等领域。
为了保证操作安全和数据准确性，以下是CytoFLEX 操作规程。
1. 开机准备a. 检查仪器电源是否插入正确，打开电源开关。
b. 检查电脑是否连接到CytoFLEX流式细胞分析仪。
c. 启动分析软件，如CytExpert。
d. 检查流式细胞分析仪的滤光片配置是否正确。
2. 设定仪器参数a. 在主界面上选择“Acquisition”进行实验参数设置。
b. 选择合适的波长和功率来激发和检测样品中的荧光染料。
c. 根据样品类型和实验要求，设置正确的流速和取样量。
3. 样品制备a. 根据实验要求，选择合适的细胞悬液和染色方法。
b. 遵循标准的样品制备过程，包括细胞计数、离心和悬浮液的制备。
c. 样品处理过程中要保持无菌条件，避免污染和细胞损伤。
4. 样品加载a. 在样品管中加入合适的染料和细胞悬液。
注意避免气泡的产生。
b. 将样品管放入样品架中，确保样品管与固定夹密封紧密。
5. 调节仪器设置a. 使用设置好的仪器参数进行样品调试。
b. 如有需要，调整观察点、光强和阈值，以获得最佳的数据。
6. 开始实验a. 点击软件界面上的“Acquisition”按钮，开始采集样品数据。
b. 实时监控样品流速和染料发光情况，如有异常情况要及时停止实验检查。
7. 数据保存和分析a. 实验完成后，保存数据文件到指定的位置。
b. 使用分析软件对采集到的数据进行后续分析和图表绘制。
8. 清洁和关机a. 关闭采集软件和电脑。
b. 使用清洁剂和纸巾擦拭仪器外壳、玻璃仪器件和样品台面。
c. 关闭CytoFLEX流式细胞分析仪的电源开关。
以上是CytoFLEX操作的基本规程，用户在使用时要按照操作要求仔细操作，确保数据的准确性和仪器的正常运行，同时在实验过程中遵循实验安全规范，确保操作的安全性。
facs技术操作规程
facs技术操作规程
《FACS技术操作规程》
流式细胞仪（FACS）是一种用于细胞分析和分选的高级仪器。
它可以分析、计数和分选细胞，对于细胞学和免疫学研究非常重要。
在使用FACS技术时，操作规程非常重要，可以确保实验的准确性和可重复性。
首先，操作人员需要准备好实验所需的样本和试剂。
样本可以是细胞悬液或者组织细胞悬液，而试剂包括细胞染色剂、抗体等。
在进行实验前，要确保所有试剂和仪器都是干净的，并且符合实验要求。
其次，需要根据实验设计设置FACS仪器。
这包括设置激光器的参数、选择合适的滤光片和检测通道，以及校准仪器。
合理的仪器设置可以确保后续实验的准确性。
接下来，操作人员需要将样本加入到流式细胞仪中进行分析。
在分析过程中，要确保样本被均匀地分散，并且避免气泡的产生。
此外，要根据实验目的选择合适的参数进行数据采集。
最后，如果需要进行细胞的分选，操作人员需要进行细胞的标记和排序。
细胞标记可以使用荧光染料或者特定的抗体，而排序可以根据细胞的特定荧光信号进行。
在进行分选时，要确保细胞的纯度和活性。
总之，FACS技术操作规程对于实验的成功至关重要。
遵循规
程可以确保实验结果的准确性和可重复性，同时也可以降低实验中的操作失误。
因此，操作人员在使用FACS技术时应该严格遵守相关规程，并按照标准操作步骤进行操作。
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流式细胞仪的使用程序
分子病毒实验室
一．开机程序
1．检查稳压器电源，打开电源，稳定 5 分钟。
2.打开储液箱，倒掉废液，并在废液桶中加入400ml漂白水原液。
打开压力阀，
取出鞘液桶，将鞘液桶加至 4/5 满（一般可用三蒸水，做分选必须用PBS或FACSFIow），合上压力阀。
确实盖紧桶盖，检查所有管路是否妥善安置。
3.将 FACSCalibur 开关打开，此时仪器功能控制钮的显示应是 STANDBY，预热5-
10分钟。
排出过滤器内的气泡。
4.如果需要打印，打开打印机电源。
5.打开电脑 , 等待屏幕显示出标准的苹果标志。
6.执行仪器 PRIME 功能一次，以排除 Flow cell 中的气泡。
7.分析样品时，先用 FACAFIow或PBS进行HIGH RUN约2分钟。
做过分选后，每次开机后需冲洗管道：向分选装置上装上两个 50ml 离心管，不接通浓缩系统，摁下右下角白色按钮开始冲洗。
待自动停止后接通浓缩装置，同上法冲洗一次。
预设获取模式文件(Acquisition Template Files)
从苹果标志中选择CELLQuest见一个新视窗，可利用此视窗编辑一个
1.
获取模式文件。
2.选取屏幕左列绘图工具中的Dot plot，绘出一个或多个Dot Plots（点图）。
从
Dot Plot对话框中选取Acquisition作为图形资料来源，并确定适当的 x 轴和y 轴参数。
3.选取屏幕左列绘图工具中的 Histogram，同上法可绘出 Histogram （直方
图）。
4.将此视窗命名后储存于FACStation G3\BD Applications \CELLQuest
Folder \EXP文件夹中，下次进行相同实验时可直接调用。
. 本计算机中已设定两个模式文件：ACQ和EXP，储存于FACStation
G3\BD Applications \CELLQuest \EXP 文件夹中，ACQ 用于细胞 DNA 检测， EXP
用于细胞表面标志分析。
三.用CELLQuest进行仪器的设定和调整
1.从苹果画面中选取 CELLQuest，进入CELLQuest后在File指令栏中打开合适的
获取模式文件。
2.从屏幕上方 Acquire指令栏中，选取Connect to Cytomete（（快捷键：
+ B）进行电脑和仪器的连机。
将出现的 Acquisiton Control对话框移至合适位置。
3.从 Cytometer指令栏中，开启 Detectors/Amps、Threshold、Compensation
Status等四个对话框，并将它们移至屏幕右方，以便获取数据时随时调整
获取条件。
也可以用+1，2, 3, 4获得此四个对话框。
4.在Detectors/Amps对话框中，先为每个参数选择适当的倍增模式（amplifier
mode）:线性模式Lin或对数模式Log。
一般进行细胞表面抗原分析如分析外周血的淋巴细胞亚群时，FSC和SSC多以线性模式Lin测量，且DDM Param选择FL2，而FL1, FL2与FL3则以对数模式Log测量；分析细胞DNA含量时，FSC, SSC, FL1，FL2，FL3皆以Lin进行测量，且 DDM Param选择 FL2;分析血小板表
型时，FSC, SSC, FL1 , FL2, FL3 等均以 Log 进行测量。
5．放上待检测的样品，将流式细胞仪设定于 RUN ，流速可在 HIGH 或LOW 上。
6．在 Acquisiton Control 对话框中，选取 Acquire ，开始获取细胞。
在以下
的仪器调整过程中随时选取 Pause， Restart 以观察调整效果。
未完全调整好之前不要去掉 SETUP 前的“ ”。
7.在Detectors/Amps对话框中，调整FSC和SSC探测器中的信号倍增度： PMT
voltages （粗调）与 Amp Gai ns （细调），使样品信号出现在 FSC-SSC 点图内,且三群细胞合理分布。
8.在 Threshold 对话框中选择适当的参数设定 Threshold，并调整 Threshold
的高低，以减少噪音信号（细胞碎片）。
一般做细胞表型时用FSC —H而做DNA 时用FL2 — H。
Threshold并不影响检测器对信号的获取，但可改善画面质量。
9.从屏幕左列绘图工具中选取 Region （区域），并在靶细胞周围设定区域线，即
通常所说的门。
圈定合适的细胞群可使仪器调整更为容易。
10.在Detectors/Amps对话框中，调整荧光检测器（FL1, FL2, FL3, FL4等）的倍
增程度。
根据所用的荧光阴性对照样品调整细胞群，使之分布在正确的区域内。
11.在Compensation对话框中，根据所用的调补偿用标准荧光样品调整双色（或多
色）荧光染色所需的荧光补偿。
比如应该为 FL1+ FL2- 的细胞群却分布在FL1 + FL2 +区域内，则需调大FL2 — ?% FL1中的“？”并从 FL1-FL2 点图中观察新的调整是否恰当
12.在 Status对话框中可见：Laser Power正常值一Run/Ready 为 14.7mW，
Standby为 5mW； Laser current正常值为 6Amps 左右。
13.调整好的仪器设定可在In strume nt Sett ings对话框中储存，下次进行相同
实验时可调出使用，届时只需微调即可。
. 本计算机中已有三个名叫储存于 FACStation G3 \BD Applications
\CELLQuest Folder \IMM-InstrSettings 及 FACStation G3 \BD Files
\Instrument Settings Files \CalibFile 和 Mast-Cell-Set 的参数文件，前二者可用于分析人白细胞，后者用于分析小鼠肥大细胞。
四．通过预设的获取模式文件进行样品分析
1．从苹果标志中选择 CELLQUEST ，新视窗出现后从 File 指令栏中选择 Open，打开预设的获取模式文件。
2.从屏幕上方Acquire指令栏中，选取 Connect to Cytometer进行电脑和仪器的
连机。
将出现的 Acquisiton Control 对话框移至合适位置。
3.从Cytometer指令栏中选取In strume nt Sett in gs,在其对话框中选择 Ope n
以调出以前存储的相同实验的仪器设定，按 Set 确定。
4.在 Acquire 指令栏中,选择 Acquisition&Storage 决定储存的细胞数,参数, 信
号道数。
其中 Resolution 在做细胞表面标志时选择 256,做 DNA 时选择 1024。
Parameter Saved…则根据不同的检测对象选择不同的参数。
5.在 Acquire指令栏中，选择 Parameter Description，以决定文件存储位置
(folder),文件名称(file)，样品代号以及各种参数的标记(panel),即安排tube1, 2, 3…的检测参数。
一般本仪器获取的数据按照检测对象的不同分别储存于
FACStation G3\BD Applications \CELLQuest \IMM 和 DNA 文件夹中。
文件根据日期命名。
6.在Cytometer指令栏中，选择Counters,将此对话框移至合适位置，以便于
随时观察events计数。
7.将样品试管放至检测区,在 Acquire Control 对话框中选取 Acquire 以启动样
品分析测定。
8.微调仪器设定,待细胞群分布合适后选择 Acquire Control 对话框中 Pause,
Abort,去除Setup前的“”开始正式获取信号，存储数据。
9．当一定数目的细胞被测定后，获取会自动停止，并会自动存储数据。
重复
步骤 7，继续分析下一个样品，直到所有的样品数据分析完毕。
. 当所有样品分析分析完毕，即换上三蒸水，并将流式细胞仪置于“STANDBY ”状态，以保护激光管。
五．关机程序：
1．从 File 中选择 Quit, 退出软件，选择 Don't Save 至苹果屏幕。
2.用4ml 1： 10稀释的漂白水作样品，将样品置于旁位(vacuum is on),以外管吸
去约2ml，在将样品架置于中位(vacuum is off),再HIGH RUN 5分钟(内管吸去2ml)。
3.改用三蒸水 4ml 作样品 ,同上处理。
4.按 Prime 三次。
5.此时仪器自动转为 STANDBY 状态，换 2ml 三蒸水。
必须在仪器处于
“STANDBY ”状态10分钟后再依次关掉计算机、打印机、主机、稳压电源，以延长激光管寿命，并确保应用软件的正常运行。
6.填写使用登记表。