流式细胞仪操作规程-SOPdoc资料
流式细胞仪操作规程
流式细胞仪操作规程流式细胞仪是一种用于单个细胞分析的高通量仪器，广泛应用于生物医学研究、药物开发和临床诊断等领域。
为了确保流式细胞仪的正常运行和准确结果的获取，需要制定一套规范的操作规程。
以下是流式细胞仪操作规程的一些基本要点：一、实验前准备：1.确保流式细胞仪处于稳定状态，并将其连接到电源并打开电源。
2.检查仪器的液氮箱和压力容器，确保液氮和气源充足。
3.准备实验所需的标本样品和相应试剂。
4.检查流束对齐和测量准备：校准激光、确定流速、检查流束质量控制。
二、流式细胞仪样品制备：1.使用无菌技术制备样品，并严格遵循相关操作规范。
2.样品的准备应考虑到细胞的数量和稳定性，避免细胞聚集、损伤或死亡。
3.样品的制备应注意避免氧化和污染的发生，以确保结果的准确性。
三、样品装载和分析：1.使用无菌技术将样品加载到流式细胞仪中，并确保样品注射器和管道清洁和无气泡。
2.对于多个样本的分析，应注意正确的样品顺序和识别，以避免混淆。
3.设置合适的仪器参数和测量条件，例如流速、激发和发射光源、滤光片设置和增益调节等。
4.开始样品分析之前，应进行负空白检测和仪器的系统背景校正。
5.开始实验后，密切观察结果窗口，并根据需要进行相应的数据记录和保存。
四、实验后操作：1.实验结束后，关闭流式细胞仪和相关辅助设备，并进行正常关机程序。
2.将仪器和试剂的残留物清洁干净，并按照相关操作规范进行废弃物的处理。
3.维护仪器的常规保养，例如清洁仪器表面、更换滤光片、标定仪器等。
4.及时记录和整理实验数据，并进行必要的数据分析和结果解释。
五、安全注意事项：1.在操作过程中，应遵守相关的生物安全和化学安全规范，例如穿戴好实验室服装、戴手套、戴眼镜等。
2.对于辐射性或有毒性样品的操作，应采取额外的防护措施，例如使用密封容器、穿戴防护服等。
3.在使用激光和其他高能源光源时，注意防护眼睛和暴露部位，避免直接观察激光光源。
总结：流式细胞仪是一种复杂的仪器，需要严格的操作规范来确保实验结果的准确性和数据的可靠性。
流式细胞仪操作规程
FACSCalibur流式细胞仪操作规程一、编号：YQ0606二、标题：FACSCalibur流式细胞仪操作规程三、关键词：流式细胞仪操作规程四、目的：保证流式细胞仪的安全及有效操作五、背景知识：流式细胞术（Flow CytoMeter，FCM）是一种在功能水平上对单细胞或其他生物粒子进行定量分析和分选的检测手段，它可高速分析上万个细胞，并能同时从一个细胞中测得多个参数，与传统荧光镜检查相比，具有速度快、精度高、准确性好等优点，成为当代最先进的细胞定量分析技术。
六、原理待测细胞染色后制成单细胞悬液，用一定压力将待测样品压入流动室，不含细胞的磷酸缓冲液在高压下从鞘液管喷出，鞘液管入口方向与待测样品流成一定角度，这样鞘液就能够包绕着样品高速流动，组成一个圆形的流束，待测细胞在鞘液的包被下单行排列，依次通过检测区域。
流式细胞仪通常以激光作为发光源。
经过聚焦整形后的光束，垂直照射在样品流上，被荧光染色的细胞在激光束的照射下，产生散射光和激发荧光。
这两种信号同时被前向光电二极管和90°方向的光电倍增管接收。
光散射信号在前向小角度进行检测，这种信号基本上反映了细胞体积的大小；荧光信号的接受方向与激光束垂直，经过一系列双色性反射镜和带通滤光片的分离，形成多个不同波长的荧光信号。
这些荧光信号的强度代表了所测细胞膜表面抗原的强度或其核内物质的浓度，经光电倍增管接收后可转换为电信号，再通过A/D转换器，将连续的电信号转换为可被计算机识别的数字信号。
计算机把所测量到的各种信号进行计算机处理，将分析结果显示在计算机屏幕上，液可以打印出来，还可以数据文件的形式存储在硬盘上以备日后的查询或进一步分析。
检测数据的显示视测量参数的不同由多种形式可供选择。
单参数数据以直方图的形式表达，其X轴为测量强度，Y轴为细胞数目。
一般来说，流式细胞仪坐标轴的分辨率有512或1024通道数，这视其模数转换器的分辨率而定。
对于双参数或多参数数据，既可以单独显示每个参数的直方图，也可以选择二维的三点图、等高线图、灰度图或三维立体视图。
流式细胞仪操作规程-SOP
流式细胞仪操作规程目录1：淋巴细胞亚群测定及绝对计数2：活化淋巴细胞亚群、记忆T及纯真T的检测3：HLA-B27测定4：CD55／CD59测定5：干细胞检测和绝对计数6：白血病免疫分型测定7：淋巴细胞T细胞亚群细胞内因子IFN-γ/IL-4测定8：细胞周期分析9：活化血小板检测10：血小板抗体测定11：红细胞抗体测定12：粒细胞抗体测定淋巴细胞亚群测定(流式细胞仪)医院检验科操作规程文件号：200 年月日起实施第1版(共3页)本规程每2年复审一次复审日期：年月日复审人：规程编写者：审批者：批准日期：年月日文件分发部门和／或个人院档案室保管者：检验科主任：检验科实验室：淋巴细胞亚群测定方案（Protocol）1.选参数点击点击4色3色点击（命名，点击save）2.画图结果此图为CD45圈门如果做绝对计数，则填写Flow-Count的浓度选中cell/ul即可活化淋巴细胞亚群、记忆T及纯真T的测定HLA-B27测定现HLA-B27抗原表达与强直性脊柱炎有高度的相关性，超过90%的强直性脊柱炎患者HLA-B27抗原表达阳性，而正常人群中仅5-10%的认为阳性。
由于强直性脊柱炎症状与许多疾病相类似，临床上难以确诊，因此HLA-B27检测在疾病的诊断中具有重要意义，HLA-B27的检测是该疾病诊断和鉴别诊断中的一个重要指标。
方案（Protocol）1.选参数点击点击键入文件名，点击Save 2.画图结果1.positive (+)X-Mean=2.negative(-)X-Mean= X-Mean=CD55/CD59测定方法流式细胞仪(BeckmanCoulter，贝克曼库尔特)原理：双色直接免疫荧光法。
近年的研究表明，红细胞和白细胞膜上CD55和CD59分子的表达量和缺乏表达细胞的数量对PNH诊断和鉴别有重要意义。
血细胞(红细胞和白细胞)通过膜上的抗原分子与荧光素标记的CD55或CD59的多克隆结果: normal : abnormalv1.0 可编辑可修改干细胞检测和绝对计数v1.0 可编辑可修改方案（Protocol）同淋巴细胞亚群检测结果（Result）白血病免疫分型测定T细胞亚群细胞内因子IFN-γ/IL-4检测v1.0 可编辑可修改方案（Protocol）细胞周期分析方案（Protocol）1.选参数选择Cytometer Control点击Parameters后2.画图结果（Result）。
BD FACSCalibur流式细胞术标准操作规程
BD FACSCalibur流式细胞仪操作与维护程序目的：规范BD FACSCalibur流式细胞仪操作与维护程序，正确使用设备，保证实验顺利进行、操作人员人身安全和设备安全。
适用范围：本规程适用于BD FACSCalibur流式细胞仪的使用操作。
责任者：操作人员：负责按照本规程操作仪器设备，对仪器进行日常维护，并作使用记录。
保管人员：负责监管仪器操作是否符合规程，并对仪器进行定期维护、保养。
科室负责人：负责对仪器设备的综合管理。
内容：1. 每日开机程序1.1 在气压阀减压的状态下检查鞘液桶，确认：1.1.1鞘液充满状态，约3L1.1.2盖紧盖子1.1.3安上金属挡板1.1.4管路畅通，无扭曲1.2. 检查废液桶，确认：1.2.1废液桶充满400ml漂白剂1.2.2管路畅通，无扭曲1.3打开流式细胞仪。
1.4打开电脑。
1.5气压阀置于加压位置，并排除管路中气泡。
1.6做Prime。
1.7等待机器预热5~10分钟后可开始试验。
2. 每日关机程序2.1 用3mlFACSClean洗液加入样品管中上样，将样品支撑架置于旁位，以外套管吸入1ml。
2.2 将样品支撑架置于中位，以HI RUN运行10分钟，使内管吸入约1ml。
2.3 将样品管换成蒸馏水重复1-2步。
2.4 放置盛有1ml蒸馏水的试管于样品支撑架上。
2.5 选择Standby模式10分钟，将激光冷却后可关掉主机。
2.6 退出所有应用软件，关闭电脑。
2.7 将流式细胞仪的压力阀置于减压状态。
3. 每月维护程序3.1 将FACSClean洗液1~2L装入鞘液桶。
3.2 旁路鞘液过滤器（过滤器上的快速接口从SANLINE FILTER端断开，将鞘液白色管路液路取下联到SANLINE FILTER端口），以防伤害。
3.3 将盛有3ml FACSClean洗液的试管置于样品支架上，以HI RUN 30分钟。
3.4 将鞘液和样品换成蒸馏水重复步骤3，以 HI RUN 60分钟。
流式细胞仪操作规程SOP
流式细胞仪操作规程目录１:淋巴细胞亚群测定及绝对计数２:活化淋巴细胞亚群、记忆T及纯真T得检测3:HLA-B２7测定4:CD55／CD5９测定5:干细胞检测与绝对计数６:白血病免疫分型测定7:淋巴细胞T细胞亚群细胞内因子IFＮ—γ/IL－４测定8:细胞周期分析９:活化血小板检测１０:血小板抗体测定11:红细胞抗体测定１2:粒细胞抗体测定淋巴细胞亚群测定(流式细胞仪)医院检验科操作规程文件号:200 年月日起实施第1版(共3页)本规程每2年复审一次复审日期: 年月日复审人:规程编写者:审批者:批准日期: 年月日文件分发部门与／或个人院档案室保管者:检验科主任:检验科实验室:淋巴细胞亚群测定方案(Protocｏl) １.选参数4色点击点击3色点击(命名,点击save) 2、画图结果此图为ＣD45圈门如果做绝对计数,则填写Flow-Count得浓度选中cｅｌl/ｕl即可方法流式细胞仪(BｅckmaｎCoulteｒ,贝克曼库尔特)原理:双／三色直接免疫荧光法、荧光素标记得各种单克隆抗体加入到全血中,与白细胞膜上相应得抗原结合,经过溶血、洗涤(与固定)等步骤后,在流式细胞仪上进行分析,从而得到相应各亚群得百分数。
活化淋巴细胞表面抗原为ＣD3+/CD25+与CD3＋/ＨLA—ＤR+、CD3+／CD45RＯ+就是记忆型Ｔ细胞、CD3+/CD45RA+就是纯真型T细胞、HLＡ-B２7测定点击点击键入文件名,点击Ｓavｅ2.画图结果１、positｉvｅ(+)X－Ｍean=１７、1 2.nｅgａｔｉve(—)X—Meaｎ=1.２X－Ｍeａｎ=５、8CＤ55/CD５9测定方案(Protｏcol)(同ＨLA—B2７)结果１、RBC: normal2。
ＲＢC: aｂnｏｒｍaｌ３。
WBC干细胞检测与绝对计数方案(Prｏtocol)同淋巴细胞亚群检测结果(Resｕlt)白血病免疫分型测定Ｔ细胞亚群细胞内因子IFN-γ/IL－4检测正常参考值Thｌ(IFN—γ):17、３9±5。
流式细胞仪SOP
一. 流式细胞术概述流式细胞术(Flow Cytometry, FCM)是七十年代发展起来的高科学技术,它集计算机技术、激光技术、流体力学、细胞化学、细胞免疫学于一体, 同时具有分析和分选细胞功能。
它不仅可测量细胞大小、内部颗粒的性状,还可检测细胞表面和细胞浆抗原、细胞内DNA、RNA含量等,可对群体细胞在单细胞水平上进行分析, 在短时间内检测分析大量细胞,并收集、储存和处理数据,进行多参数定量分析; 能够分类收集(分选)某一亚群细胞,分选纯度＞95%。
在血液学、免疫学、肿瘤学、药物学、分子生物学等学科广泛应用。
国内使用的流式细胞仪主要由美国BECKMAN- COULTER公司和Becton-Dickinson公司(简称B-D公司)两个厂家生产。
流式细胞仪主要有两型:临床型（又称小型机、台式机）和综合型（又称大型机、分析型）。
BECKMAN-COULTER 公司最新产品为EPICS ALTRA和EPICS XL/XL-MCL,BD公司最新产品为FACS Vantage 和FACS Calibur。
EPICS XL/XL-MCL和FACS Calibur是临床型;EPICS ALTRA和FACS Vantage是综合型，除具备检测分析功能外,还具有细胞分选功能,•多用于科学研究。
二.流式细胞仪主要技术指标1．流式细胞仪的分析速度：一般流式细胞仪每秒检测1000～5000个细胞,大型机可达每秒上万个细胞。
2．流式细胞仪的荧光检测灵敏度：一般能测出单个细胞上<600个荧光分子,两个细胞间的荧光差＞5%即可区分。
3．前向角散射（FSC）光检测灵敏度：前向角散射（FSC）反映被测细胞的大小,一般流式细胞仪能够测量到0.2μm～0.5μm。
4．流式细胞仪的分辨率：通常用变异系数CV值来表示，一般流式细胞仪能够达到<2.0%,这也是测量标本前用荧光微球调整仪器时要求必须达到的。
5．流式细胞仪的分选速度：一般流式细胞仪分选速度＞1000个/秒，分选细胞纯度可达99%以上。
流式细胞仪使用规范
流式细胞仪使用规范流式细胞仪（Flow Cytometer）是一种常用的细胞分析仪器，广泛应用于细胞学、免疫学、生物学、医学等领域。
流式细胞仪可以对细胞进行快速、准确的多参数分析，能够检测和分离不同细胞类型、测定细胞数量、评估细胞活性以及研究细胞表面标记物等。
为了保证流式细胞仪的正常使用，以下是一些流式细胞仪的使用规范和注意事项。
1.准备工作：a.检查仪器：确认仪器的状态，包括是否通电、通气、光源是否正常工作等。
b.清洁样品室：使用无菌纯水或适当的清洁剂擦拭样品室，确保没有杂物或污染物。
c.校准仪器：根据仪器规定进行标定和校准，确保仪器的准确性和稳定性。
2.样品准备：a.细胞处理：合理处理样品，保证单细胞悬浮状态。
可以通过胰酶消化、筛选等方法获取单细胞悬浮液。
b.细胞计数：使用合适的细胞计数仪进行细胞计数，计算出所需的细胞悬浮液浓度。
c.细胞染色：根据实验需求对样品进行适当的荧光染色或抗体标记，以便在流式细胞仪中检测和分析。
3.流式细胞仪操作：a.设置参数：根据实验设计和研究目的，设置合适的仪器参数，包括激光器选择、激发波长、检测波长、门控设置等。
b.样品加载：将样品注入流式细胞仪样品室，避免气泡的产生，并确保样品完整进入样品室。
c.数据采集：开始数据采集前，进行流式细胞仪的标定、峰位校正和峰间校正，以保证数据的准确性和可靠性。
d.数据分析：对采集到的数据进行分析和解读，根据实验要求选取合适的分析策略和软件进行数据处理。
4.清洁和保养：a.实验后清洁：实验结束后，及时清洁仪器，避免样品残留和交叉污染。
b.仪器维护：定期检查仪器的部件和附件，保证其正常工作。
如需要更换部件或常规维护，请按照厂家指南进行操作。
c.长时间停用：如果流式细胞仪长时间不使用，应按照厂家指南进行仪器的合理关闭和长期存储。
5.安全注意事项：a.避免直接接触激光线：在进行样品加载和设置参数时，避免接触激光线以避免损伤眼睛。
b.使用无菌操作：在样品加载和处理过程中，使用无菌操作和材料，避免细菌污染和交叉感染。
流式细胞仪使用规程
流式细胞仪使用程序1.目的规范流式细胞仪的相关使用操作、以及维护操作。
2.适用范围适用于本实验室使用流式细胞仪。
3.职责操作人员应熟练掌握并自觉遵守本标准操作程序。
如需获得更多信息，请参阅该仪器用户手册。
4.支持性文件流式细胞仪使用说明书。
5.操作规程5.1仪器开/关机程序5.1.1开机程序5.1.1.1 检查仪器鞘液桶和废液桶。
5.1.1.2 打开流式细胞仪。
5.1.1.3 气压阀置于加压位置，并排除管路中气泡。
5.1.1.4 打开电脑。
5.1.1.5 等待机器预热5—10分钟后可开始实验。
5.1.2关机程序5.1.2.1 用4ml10%漂白剂作样品，将样品支撑架置于旁位，以外管吸入2ml。
5.1.2.2 将样品支撑架置于中位，以HI RUN 5分钟，使内管吸入2ml。
5.1.2.3 将样品换成蒸馏水重复1-2步。
5.1.2.4 放置盛有1ml蒸馏水的试管于样品支撑架上。
5.1.2.5 选择Standby模式10分钟。
5.1.2.6 关闭电脑，再关掉仪器。
5.2仪器校验和分析参数设置程序（FACSComp操作程序）5.2.1CaliBRITE Beads 的准备5.2.1.1 在装有1ml鞘液的FALCON管加一滴充分混匀CaliBRITE Beads，并标上unlabeled；若配有双激光做四色，则须在unlabeled管中再加一滴APC-beads；5.2.1.2 在另一装有3ml鞘液的FALCON管加入unlabeled-、FITC-、PE-、PerCP-、和APC-beads（若做四色）各一滴，混匀，在管壁上标上mixed（PerCP不很稳定，最好在上机前加入）；5.2.1.3 避光放置，准备上机。
5.2.2软件环境的设置5.2.2.1 从苹果菜单进入，选择FACSComp软件；5.2.2.2 在Sign In视窗中填入下列信息：操作者、机构、实验室主任（操作者是必须填入的，计算机将保存这些信息），点击Accept；5.2.2.3 进入Set Up视窗，在Assay Selection中，选择你需要的Assay：Lyse/Wash、Lyse/No Wash或HLA-B27 Calib；在CaliBRITE Beads Lot Ids中，根据每一种beads所对应的编码输入Lot ID；在Automatic Saving Options中，你可以选择自动保存或不保存Summary Report，你可以通过单击Location来更改文件名以及保存的位置；最后在Set Up视窗的右下角点击Run。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
流式细胞仪操作规程-
S O P
流式细胞仪操作规程目录
1：淋巴细胞亚群测定及绝对计数
2：活化淋巴细胞亚群、记忆T及纯真T的检测
3：HLA-B27测定
4：CD55／CD59测定
5：干细胞检测和绝对计数
6：白血病免疫分型测定
7：淋巴细胞T细胞亚群细胞内因子IFN-γ/IL-4测定8：细胞周期分析
9：活化血小板检测
10：血小板抗体测定
11：红细胞抗体测定
12：粒细胞抗体测定
淋巴细胞亚群测定
(流式细胞仪)
医院检验科
操作规程文件号：
200 年月日起实施
第1版
(共3页)
本规程每2年复审一次
复审日期：年月日
复审人：
规程编写者：
审批者：
批准日期：年月日
文件分发部门和／或个人
院档案室保管者：
检验科主任：
检验科实验室：
淋巴细胞亚群测定
方案（Protocol）1.选参数
4色点击
点击
3色
点击
（命名，点击save）2.画图
结果
此图为CD45圈门
如果做绝对计数，则
填写Flow-Count的浓
选中cell/ul即可
活化淋巴细胞亚群、记忆T及纯真T的测定
HLA-B27测定
方案（Protocol）
1.选参数
点击
点击
键入文件名，点击Save 2.画图
1.positive (+)
X-Mean=17.1
2.negative(-)
X-Mean=1.2 X-Mean=5.8
CD55/CD59测定
方案（Protocol）(同HLA-B27)
结果
1.RBC: normal
2.RBC: abnormal
3.WBC
干细胞检测和绝对计数
方案（Protocol）
同淋巴细胞亚群检测结果（Result）
白血病免疫分型测定
T细胞亚群细胞内因子IFN-γ/IL-4检测
方案（Protocol）
细胞周期分析
方案（Protocol）
1.选参数
选择Cytometer Control点击Parameters后
2.画图
结果（Result）
血小板膜表面抗体测定
仪器
BeckmanCoulter EPICS XL/FC500/Altra
操作：
富集血小板法：
1）800r/min*15min,取上清，
2）加4－5ml鞘液，2000r/min*3min,弃上清，重复一次。
3) 分别向试管中加入准备好的10u1含血小板的PBS（血小板的量约为106）
（血小板若在正常范围，稀释到原量直接取10u1。
）。
4) 分别向已编好号的试管中依次加入一抗和二抗（设对照）
5)混匀，避光，室温孵育20-30分钟
6)洗或不洗，上机测样
全血法：
1）加4－5ml鞘液，1500r/min*15min,弃上清，后同上3）－6）
报告结果
报告百分数
操作性能
精密度批内五次重复CV<2％
参考值
IgA<2.98% IgG<3.04%
IgM<3.0% IgD<2.91%
临床意义
为免疫性血小板减少性紫癜(ITP)诊断、治疗、预后估计的重要指标，在ITP、胶原性疾病时升高。
方案（Protocol）
红细胞膜蛋白结构测定
（红细胞抗体）
BeckmanCoulter EPICS XL/FC500/Altra
操作：
1) 分别向试管中加入混匀的100u1抗凝血（1：200稀释后）。
2) 按照要求，分别向已编好号的试管中依次加入一抗和二抗（设对照）
3)混匀，避光，室温孵育20-30分钟
4)上机测样
报告结果
报告百分数
操作性能
精密度批内五次重复CV<2％
参考值
IgA<2.78% IgG<2.98%
IgM<2.52% IgD<2.88%
临床意义
自身溶血性贫血的分型诊断
方案（Protocol）
粒细胞抗体测定
操作：
1) 溶血：a. OptiLyse C(按说明书步骤溶血)
b. 使用COULTER Q—PREP制备系统
开机---显示READY灯亮---选择35SEC灯亮---开门---放入试
管关门---自动进行溶血---显示READY灯亮---开门---取出试
管---再进行下一个样品测定。
（*溶血前确认A/B/C管路充满并能打出液体）
2) 分别向试管中加入经溶血处理得样本100u1。
3) 分别向已编好号的试管中依次加入一抗和二抗（设对照）
4)混匀，避光，室温孵育20-30分钟，洗涤离心
5)上机测样
报告结果
报告百分数
操作性能
精密度批内五次重复CV<2％
参考值
IgA<2.68% IgG<2.66%
IgM<2.49% IgD<3.4%
临床意义
白细胞减少症的分型诊断，大多数白细胞减少症患者抗体为阳性
方案（Protocol）。