无菌检查法方法验证(妥布霉素滴眼液)
中国药典2020版无菌检查法
中国药典2020版无菌检查法中国药典（2020版）是中华人民共和国国家药品监督管理局发布的一部重要药学法规，其中涵盖了药品质量控制的各个方面。
无菌检查法是药品生产过程中至关重要的环节之一，下面是相关参考内容（不包含链接）。
无菌检查是一种评估药品无菌状态的方法，对于注射剂、眼用制剂、口服液等非口服制剂等其它无菌制剂，都需要进行无菌检查。
1. 测试样品的选择：无菌检查的样品应根据药品特点进行选择。
例如，对于注射剂和眼用制剂，往往需要每种药品样品至少选择20个，对于其他制剂需要至少选择5个样品。
每个样品应从不同的批次中随机选择，以确保整个生产过程的无菌性。
2. 检查设备：无菌检查需要使用无菌操作台、无菌器具和应无菌化的培养基等设备。
检查设备要定期进行校验和维护，以保证其正常工作状态和准确性。
3. 环境要求：无菌检查需要在无菌环境下进行。
检查人员应穿戴无菌操作衣、戴无菌手套，确保检查操作不受外界微生物的污染。
4. 检查方法：常用的无菌检查方法包括培养法和观察法。
培养法是指将样品接种到培养基上进行培养，观察是否有微生物生长。
观察法是通过目视观察、显微镜观察等手段，直接检查样品中是否有微生物存在。
5. 结果判定：对于培养法，通常需要在相应的培养条件下培养一定的时间，观察培养基是否有菌落的生长。
如果培养基上有菌落，则说明样品不符合无菌要求。
对于观察法，检查结果应根据相关标准或规定进行判定。
6. 记录和报告：检查过程中应详细记录各项操作和结果，包括样品信息、检查方法、操作员等。
检查后，应根据相关规定填写相应的检查报告，并将报告保存备查。
无菌检查是确保药品质量和安全的重要环节，对于非口服制剂尤为重要。
药品生产企业应按照国家药典的要求，建立完善的无菌检查体系，进行规范化的检查操作和记录。
同时，应不断关注无菌检查技术的更新和发展，提高检查方法的准确性和可靠性，确保药品无菌状态的准确评估。
托百士(妥布霉素滴眼液)
【药品名称】商品名称：托百士通用名称：妥布霉素滴眼液英文名称：【成份】妥布霉素氨基脱氧α葡吡喃糖基(→)[二氨基三脱氧α核己吡喃糖基(→)]脱氧链霉胺文档来自于网络搜索【适应症】本品适用于外眼及附属器敏感菌株感染地局部抗感染治疗.应用妥布霉素时，应注意观察细菌感染地控制情况.【用法用量】.轻度及中度感染地患者，每日至次，每次取约长地药膏涂入患眼，病情缓解后减量..妥布霉素滴眼液可与眼膏联合使用，即白天滴用滴眼液，晚上使用眼膏.【不良反应】常见地不良反应为眼局部地毒副作用与过敏反应，如眼睑发痒与红肿、结膜红斑，发生率低于；局部应用其他氨基糖甙类抗生素也会出现这些不良反应.尚无应用妥布霉素出现其他不良反应地临床报道.但是如果将眼用妥布霉素眼膏与氨基糖甙类抗生素全身联合用药，就应注意监测血清中总地药物浓度.文档来自于网络搜索【禁忌】对本品及其他氨基糖苷类抗生素过敏者禁用.【注意事项】.肾功能不全、肝功能异常、前庭功能或听力减退者、失水、重症肌无力或帕金森病及老年患者慎用..交叉过敏：对一种氨基糖苷类抗生素如链霉素、庆大霉素过敏地患者，可能对本品过敏.若出现过敏反应，应立即停药..长期应用本品可能导致耐药菌过度生长，甚至引起真菌感染..若患者同时接受氨基糖苷类抗生素地全身用药，应监测本品及氨基糖苷类抗生素地血药浓度..保持瓶口周围地清洁，防止污染..对诊断地干扰：本品可能使丙氨酸氨基转移酶、门冬氨酸氨基转移酶、血清胆红素浓度及血清乳酸脱氢酶浓度地测定值增高；血钙、文档来自于网络搜索【特殊人群用药】儿童注意事项：由于本品具有潜在地肾毒性和耳毒性，故小儿慎用.妊娠与哺乳期注意事项：孕妇：对三种动物进行地生殖实验研究，应用妥布霉素，剂量为人体全身通常用药地倍，未出现生育力下降或胎儿损害.但目前尚无证据确凿地有关孕妇地临床研究报告，因此孕妇只有在确实必要时才可使用本品.文档来自于网络搜索哺乳期妇女：由于哺乳时可能会产生不良反应，建议根据临床权衡利弊，或者停止哺乳或者停止用药.老人注意事项：由于本品具有潜在地肾毒性和耳毒性，故老年患者慎用.【药物相互作用】未进行该项实验且无可靠参考文献.【药理作用】.体外实验显示妥布霉素对下列菌种有特殊疗效：葡萄球菌：金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌及对青霉素耐药地菌种.链球菌：组溶血性链球菌、非溶血性链球菌及肺炎链球菌，绿脓杆菌、大肠杆菌、肺炎杆菌、产气大肠杆菌、奇异变形杆菌（吲哚阴性）与吲哚阳性变形杆菌、流感嗜血杆菌与结膜炎嗜血杆菌、结膜炎摩拉克、( )、奈瑟菌属.文档来自于网络搜索. 细菌敏感性实验显示，对庆大霉素耐药地菌种，对妥布霉素仍然敏感.目前尚未发现对妥布霉素有耐药性地菌属，但长期使用可能会产生细菌地耐药性.文档来自于网络搜索【贮藏】密封保存.【批准文号】【生产企业】企业名称：. .生产地址：，，。
滴眼剂检验标准操作规程
检验方法
01
外观检查：观察滴眼剂的颜 色、透明度、气味等
02
理化检验：测量滴眼剂的 pH值、黏度、渗透压等
质量标准
1
2
3
4
5
滴眼剂的浓度： 符合规定要求
滴眼剂的纯度： 无杂质、无污 染
滴眼剂的生物相 容性：无刺激、
无过敏反应
滴眼剂的稳定 性：在规定时 间内保持稳定
滴眼剂的包装： 符合规定要求， 无破损、无污染
质量保证
01
原料质量：严格筛选原料供应商，
确保原料质量合格
02
生产过程：严格按照标准操作规程
变质
样品处理
01
样品接收：核对样品信息， 确保样品完整
02
样品预处理：去除包装， 将样品放入容器中
03
样品溶解：加入适量溶剂， 使样品充分溶解
04
样品过滤：使用滤纸或滤 膜过滤样品，去除杂质
05
样品稀释：根据检验要求， 将样品稀释至合适浓度
结果分析
01
滴眼剂的性状： 观察滴眼剂的 颜色、透明度、 气味等
02
滴眼剂的pH 值：测量滴眼 剂的pH值， 判断其是否符 合标准
03
滴眼剂的微生 物检测：检测 滴眼剂中的微 生物含量，判 断其是否符合 标准
04
滴眼剂的化学 成分检测：检 测滴眼剂中的 化学成分，判 断其是否符合 标准
05
滴眼剂的稳定 性检测：检测 滴眼剂在不同 条件下的稳定 性，判断其是 否符合标准
眼科专科技术常见操作方法
பைடு நூலகம்
涂眼药膏法
涂眼药膏法
【注意事项】 1、涂管状眼膏时，管口勿触及睫毛及睑缘，以免污染。 2、如用玻璃棒涂眼药膏，应先检查玻璃棒是否光滑，有无破损，以免损伤结膜和角膜。不要将睫毛随同玻璃棒卷入结膜囊，以免刺激引起不适。 3、做睑球分离时，先将药膏挤入结膜囊，再用玻璃棒在下穹窿部轻轻分离。 4、对角膜溃疡或眼球贯通伤患者操作手法要轻，忌按摩、按压眼球，以免造成角膜穿孔等严重后果。 5、眼睑闭合不全者，眼膏要均匀涂满角膜。 6、眼药水和药膏同时使用时，先滴眼药水后用眼膏。 7、指导患者闭眼休息，勿揉眼。 8、注意观察用药后的反应及用药后的效果，告知如有不适应及时通知医护人员。
眼科专科护理技术操作
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滴眼药水法
一、滴眼药水法 【目的】 1、眼部患者需要滴用眼药水或眼膏进行治疗。 2、滴用表面麻醉剂、缩瞳剂等进行眼科检查。 【用物】 治疗盘、眼药水、无菌棉签 【操作方法】 核对患者姓名、眼别、药名、剂量、浓度、时间、方法。 评估患者全身一般情况及眼部情况，了解合作程度。 向患者解释操作目的、方法、注意事项，取得配合。 洗手，戴口罩。
滴眼药水法
【患者取舒适坐位或仰卧位，头向后仰并向患侧倾斜，眼向上方注视。护士站在患者的头后或床旁。 6、左手持棉签擦去眼分泌物，换新棉签拉开患眼下睑，暴露下结膜囊。 7、右手持眼药水瓶，挤出1滴药水，距眼2-3cm处将药液滴入下穹窿结膜囊内，轻轻提起上睑皮肤，使药液在结膜囊内充分弥散。 8、用干棉签擦去眼周流出的药液，轻轻闭眼1-2分钟。 9、如果滴用散瞳或缩瞳眼液，应用干棉球压迫泪囊3-5分钟，尤其是儿童更应特别注意。 10、观察药物反应。 11、快速手消毒，再次核对，并签名。整理用物。
五种滴眼液无菌检查方法的建立
五种滴眼液无菌检查方法的建立p中国药典2010年版二部将滴眼液的微生物限度检查项目修订为无菌检查项目，根据中国药典2010年版二部的规定[1]，当建立药品的无菌检查方法时，应进行方法的验证，以证明所采用的方法适用于该药品的无菌检查。
为了保证五种滴眼液的无菌检查结果的可靠性，对五种滴眼液无菌检查方法进行了验证，建立了各品种的无菌检查方法。
1、资料与方法1.1 资料妥布霉素滴眼液，规格：（8ml：24mg）/支；批号：3100608；氯霉素滴眼液，规格：（5ml：12.5mg）/支；批号：3100607；色甘酸钠滴眼液，规格：（8ml：0.16g）/支；批号：3100609，；牛磺酸滴眼液，规格：（8ml：0.4g）/支；批号：3100119；马来酸噻吗洛尔滴眼液，规格：（5ml：12.5mg）/支；批号：3100310；样品来源：市售。
验证试验用菌种：大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉菌六种阳性对照试验菌，菌种都来源于中检所。
1.2 方法（1）菌液制备。
按中国药典2010年版二部附录XI H进行。
（2）供试液制备。
取样品至少60ml，都加置pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液450ml制成供试液，供三株阳性对照试验菌实验；另取同法制得的供试液进行另三株阳性对照试验菌实验。
（3）薄膜过滤法。
取一次性全封闭集菌三联培养器，先用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液少量润湿滤膜。
将供试液通过三联培养器，供试液全部过滤完毕后，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗，冲洗时充分振摇、荡洗筒壁，细菌每筒分别冲洗0ml、150ml、300ml、400ml，前四次每次冲洗50ml，以后每次冲洗100ml；真菌每筒分别冲洗0 ml、150ml，每次50ml，冲洗三次，在最后一次的冲洗液中加入小于100cfu的各阳性对照试验菌，过滤，每筒培养器中加入100ml相应的硫乙醇酸盐流体培养基或改良马丁培养基，作为试验筒。
全国硫酸妥布霉素注射液质量情况分析
2009年全国硫酸妥布霉素注射液质量情况分析李霞（重庆市药品检验所，重庆401121）摘要目的：考察2009年全国市场上生产、流通及使用各环节的硫酸妥布霉素注射液的质量。
方法：采用现行国家标准及一些探索性的研究方法对市场上的硫酸妥布霉素注射液的质量情况进行检查，同时考察评价现行标准对硫酸妥布霉素注射液质量的可控性。
结果：市场上的硫酸妥布霉素注射液质量一般，所有样品均未对杂质进行控制。
结论：硫酸妥布霉素注射液的质量控制需从源头上即妥布霉素原料的杂质控制上来进行，现行的标准无法有效控制硫酸妥布霉素注射液的质量，同时各企业生产的硫酸妥布霉素注射液的灭菌工艺水平有待提高。
关键词：妥布霉素注射液；质量考察；分析硫酸妥布霉素注射液最早收载于《中国药典》2000年版，2005年版《中国药典》收载规格为2ml:80mg，后增补1ml:40mg规格。
属氨基糖苷类抗生素，主要用于葡萄球菌和革兰氏阴性杆菌所致的感染。
2009年作为全国药品评价性抽验的品种，我所对全国范围内生产、流通及使用各环节所抽取到的该样品进行了质量分析考察，现将质量分析考察情况汇报如下：1总体情况本次抽验到的89批硫酸妥布霉素注射液国家所批的两个规格均涉及，涉及生产企业14家，包装均为玻璃安瓿，抽验区域除西藏外，覆盖了其余所有的省、自治区和直辖市。
处方组成较为单一，基本上均为妥布霉素、亚硫酸氢钠（1个厂家为亚硫酸钠）、依地酸二钠（1个厂家未加）、硫酸。
生产所用妥布霉素原料基本上主要从三家原料生产企业购得：重庆大新药业股份有限公司、福建福抗药业股份有限公司、丽珠集团新北江制药公司。
从提供资料的11家企业来看，有10家企业的灭菌工艺采用100℃30min，1家企业为100-104℃15min，灭菌方式实际均为辅助灭菌。
2抽验样品标准执行情况抽验样品均执行《中国药典》2005年版二部质量标准，控制项目主要有性状、鉴别、pH值、颜色、无菌、细菌内毒素、可见异物、不溶性微粒、装量、含量，含量采用微生物效价法，贮存要求为：密闭，在凉暗处保存。
注射液无菌检查的方法学验证方案
注射液无菌检查方法（中国药典2010版）验证方案验证方案编号：2010•MEF•041•05•004起草单位(Composed by)：质检部(QC Department)起草人(Composer)：日期(Date)：审核人(Reviewed by QC)：日期(Date)：审核人(Reviewed by QA)：日期(Date)：批准人(Approved by)：日期(Date)：目录1. 验证目的2. 验证人员3. 验证依据及参考文件4. 仪器与设备5. 验证过程5.1 培养基及稀释液5.2 菌液的培养与制备5.3 方法验证试验6. 验证总结1. 验证目的：本试验是注射液的抑细菌、抑真菌活性及所用的无菌检查方法的可靠性进行验证，以确认该产品在该检验量、该检验条件下无抑菌活性或其抑菌活性已被充分消除至可以忽略。
即：保证所用的无菌检验方法能对该产品进行准确、可靠的检验。
2. 验证人员：验证小组组长：刘长宏验证小组副组长：宋芳良验证小组成员：曲晓燕、常西胜3. 验证依据及参考文件：验证依据：中华人民共和国药典2010版二部参考文件：2010年版中国药典无菌检查方法、验证操作学习班讲稿汇编（中国药品检验所）4. 仪器与设备XG1.DM-0.36B型机动门脉冲真空灭菌器细菌培养箱霉菌培养箱净化工作台5. 验证过程：5.1 培养基及稀释液5.1.1 培养基及稀释液的配制按“中国药典2010版二部附录Ⅺ H无菌检查法”中，有关规定配制本验证所需培养基:5.1.2培养基的适用性检验5.1.2.1 培养基无菌性检查从以上培养基及稀释液中，每批随机取5支（瓶），培养14天，应无菌生长。
结果记录：结论：5.1.2.2 培养基灵敏度检查取每管装量为12ml的硫乙醇酸盐流体培养基9支，分别接种小于100cfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌各2支，另1支不接种作为空白对照，培养3天，逐日观察结果。
妥布霉素地塞米松滴眼液的制备工艺及质量研究
２１ 处 方 妥布霉 素（ Ｃ ８ ３ Ｎ ０ ． 按 １Ｈ ７ ５ ９计 ）Ｏ ； 塞米 松 ３ｇ 地 （ Ｃ ２ ２ Ｆ ５计 ）０ ； 按 ２Ｈ ９ ０ １ｇ 吐温 ６ ０ ； ０１ｇ 甲基纤维 索 １０ ； ２ ｇ 苯
合《 中国药典》 的相关规定 。
３４ 含量测定 ．
扎氯铵 ｌ； ｇ 氯化钠 ８ ｇｐ ｏ ，Ｈ调节至 ５０～ ．， ． ６０ 注射用水加 至
上， 照粒度 和粒度分布测定法检查 ， 大于 ５ ７ ０ ｍ的粒 子不得
１０ ２— ０ ４ ２ ； ５ ７ ２ ００ ）妥布霉素原料 （ ３ 重庆大新药业股份有限公 司 ，６ ９ １ ； ０ ０ ２ ）地塞米松对照品（ 中国药 品生 物制品检定所 ，
１０ ２— ０ ３ ３ ； ０ １９ ２ ００ ）地塞米松原料 （ 浙江仙琚制药股份有限公
本 品为妥布霉素 与地 塞米松复 方配制而 成的混悬 制 剂 ，主要用 于对肾上腺皮质激素具有感受性的眼部疾患及
④ 加无菌注射用水至全量 ， 配制液无菌分装 即可 。
３ 质量 控 制 一
眼部表面细菌的感染， 术后抗炎预防感染等 。 国内有 山东齐
鲁制药厂生产的复方妥布霉素滴 眼液 ，其为一种先进的抗 生素和离 固醇激素的复合制剂 ，临床上应用 广泛 ，疗效显 著， 是一不可多得的优 良品种 。我们 亦研究开发该产 品， 现 简介其制备工艺及质量控制方法如下 ：
２ 处方筛选及制备 工艺［对主药水中溶解性 的考察 ； ． ２ ２ １ 润 湿剂吐温 ６ 、 ０ 增稠剂 甲基纤 维素 、 等渗调节 剂氯化钠 等用 量的筛选 ； 灭菌工艺条件 、 液 ｐ 溶 Ｈ值与制剂 稳定性关 系等
多方 面的考察与研究 ，最后 确定本品的制备工艺过程基本
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妥布霉素滴眼液无菌检查法方法验证
一、验证目的
根据中国药典2010年版（二部）附录XI H 无菌检查法方法验证，对妥布霉素滴眼液无菌检查方法进行验证，确定在设定的条件下能满足该产品的无菌检查需求，保证检验结果的可靠性。
二、供试品
妥布霉素滴眼液规格：0.4ml/支。
批号：
三、培养基
硫乙醇酸盐流体培养基批号：中国药品生物制品检定所改良马丁培养基批号：中国药品生物制品检定所营养肉汤培养基批号：中国药品生物制品检定所改良马丁琼脂培养基批号：中国药品生物制品检定所营养琼脂培养基批号：中国药品生物制品检定所玫瑰红钠琼脂培养基批号：中国药品生物制品检定所营养琼脂对照培养基批号：中国药品生物制品检定所玫瑰红钠琼脂对照培养基批号：中国药品生物制品检定所四、试剂：
蛋白胨批号：
氯化钠（AR）批号：
磷酸二氢钾（AR）批号：
磷酸氢二钠（AR）批号：
聚山梨酯80 批号：
五、仪器
HTY-2000A型集菌仪，一次性使用全封闭集菌培养器型号KDGB330
批号20100602 均由杭州泰林生物技术设备有限公司。
立式压力蒸汽灭菌器：YXQ-LS-50SII，上海博讯实业有限公司医疗设备厂；
霉菌培养箱：MJX-160B-Z型，上海博迅实业有限公司
生化培养箱：MJX-160B-Z型，上海博迅实业有限公司
电热恒温鼓风干燥箱：GZX-9076 MBE，上海博讯实业有限公司医疗设备厂百级超净工作台：SW-CJ-1F，苏州佳宝净化工程设备有限公司
六、冲洗液
pH7.0 无菌氯化钠蛋白胨缓冲液，自制，根据《中国药典》2010版二部附录XI H 稀释液，冲洗液配置方法：取磷酸二氢钾3.56g、磷酸氢二钠7.23g、氯化钠4.30g、蛋白胨1.0g，加水1000ml，微热溶解，滤清，分装，灭菌。
灭菌条件：121°C高压蒸汽灭菌20min。
七、缓冲液
0.9%无菌氯化钠溶液，自制，根据《中国药典》2010版二部附录XIH 稀释液，冲洗液配置方法：取氯化钠9.0g，加水溶解使成1000ml，过滤，分装，灭菌。
灭菌条件：121℃高压蒸汽灭菌20min。
八、菌种：
金黄色葡萄球菌【CMCC（B）26003】第代
大肠埃希菌【CMCC（B）44102】第代
枯草芽孢杆菌【CMCC（B）63501】第代
生孢梭菌【CMCC（B）64941】第代
白色念珠菌【CMCC（B）98001】第代
黑曲霉【CMCC（B）98003】第代
九、实验操作
1，菌液制备
1.1接种金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌的新鲜培养物至10ml
营养肉汤培养基中，置30-35°C培养18-24小时，分别取上述培养物1ml
加入9ml0.9%的无菌氯化钠溶液中，10倍递增稀释制成每1ml含菌数约
50-100CFU的菌悬液。
1.2接种生孢梭菌的新鲜培养物至12ml硫乙醇酸盐流体培养基中，30-35°C
培养18-24小时，取上述培养物1ml加入9ml0.9%的无菌氯化钠溶液中，10倍递增稀释制成每1ml含菌数约50-100CFU的菌悬液。
1.3接种白色念珠菌的新鲜培养物至10ml改良马丁培养基中，置23-28°C
培养24-48小时，取上述培养物1ml加入9ml0.9%的无菌氯化钠溶液中，10倍递增稀释制成每1ml含菌数约50-100CFU的菌悬液。
1.4接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基中，置23-28°C培
养5-7天，使大量孢子的形成。
用5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的
0.9%的无菌氯化钠溶液将孢子洗脱，用接种环将菌苔刮下，振摇后用无
菌吸管吸取菌液加入蒙有纱布的无菌试管中作为原液。
取1ml原液加入
含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的9ml0.9%的无菌氯化钠溶液中，制成每
1ml含孢子数约50-100CFU的孢子悬液。
2，菌落计数
分别取上述制备的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌菌液各1ml加入无菌平板，平行2份，与营养琼脂培养基混匀后倒置于33-35℃培养48-72小时计数，取生孢梭菌菌液1ml加入硫乙醇酸盐流体培养基中，密闭后置于培养箱33-35℃培养24-48小时计数，取白色念珠菌、黑曲霉菌液各1ml加入无菌平板，平行2份，与玫瑰红钠琼脂培养基混匀后倒置于23-25℃培养72小时计数，结果如表1
表1
结论：
3，计数培养基的适用性检查
用相应的对照培养基代替上述营养琼脂培养基，玫瑰红钠琼脂培养基进行上述计数实验（除生孢梭菌），其结果如表2
结论：
4，培养基的无菌性检查
分别取经过121℃，,20min湿热灭菌后的硫乙醇酸盐流体培养基和改良马丁培养基各100ml置于集菌培养器中培养14天，另取灭菌后的硫乙醇酸盐流体培养基和改良马丁培养基各100ml分别加入50-100CFU的金黄色葡萄球菌和白色念珠菌置于培养器中培养14天作为阳性对照，逐日观察结果。
并做如表3
5，供试品取样量
一次验证试验取样60支（四次试验取样240支），每30支用100ml的pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液溶解，作为一组。
6，验证试验----薄膜过滤法
6.1实验组：
（1）安装KDGB 330集菌培养器，用50ml pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液润湿滤膜。
（2）过滤一组供试液，使每一滤筒即每张滤膜上的药载量为10支。
（3）两付KDGB330集菌培养器（六个滤筒）作为一个梯度，共准备四个梯度即八付集菌培养器，每个梯度分别用相对应的100ml，200ml，300ml，400ml 的pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液冲洗，调节泵速100rpm，边冲洗边振摇。
（4）分别在相应的细菌培养器内加入100ml硫乙醇酸盐流体培养基，在相应的真菌培养器内加入100ml改良马丁培养基。
（5）分别用1ml的无菌注射器抽取小于100CFU的金黄色葡萄球菌的菌悬液1ml、大肠埃希菌的菌悬液1ml、枯草芽孢杆菌的菌悬液1ml、生孢梭菌的菌悬液1ml分别加入到硫乙醇酸盐流体培养基中，抽取白色念珠菌的菌悬液1ml、黑曲霉的菌悬液加入到改良马丁培养基中。
6.2对照组：
取KDGB330集菌培养器二付，其中4个滤筒分别加入100ml硫乙醇酸盐流体培养基，再依次加入1ml的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌的菌悬液。
2个滤筒加入100ml改良马丁培养基，并分别加入1ml的白色念珠菌、黑曲霉的菌悬液。
细菌于30-35°C培养3天，真菌于23-28°C培养5天。
每天观察并记录实验结果。
其结果见表4
表4
十、结论：。