五种滴眼液无菌检查方法的建立
无菌检查法方法验证(妥布霉素滴眼液)
妥布霉素滴眼液无菌检查法方法验证一、验证目的根据中国药典2010年版（二部）附录XI H 无菌检查法方法验证，对妥布霉素滴眼液无菌检查方法进行验证，确定在设定的条件下能满足该产品的无菌检查需求，保证检验结果的可靠性。
二、供试品妥布霉素滴眼液规格：0.4ml/支。
批号：三、培养基硫乙醇酸盐流体培养基批号：中国药品生物制品检定所改良马丁培养基批号：中国药品生物制品检定所营养肉汤培养基批号：中国药品生物制品检定所改良马丁琼脂培养基批号：中国药品生物制品检定所营养琼脂培养基批号：中国药品生物制品检定所玫瑰红钠琼脂培养基批号：中国药品生物制品检定所营养琼脂对照培养基批号：中国药品生物制品检定所玫瑰红钠琼脂对照培养基批号：中国药品生物制品检定所四、试剂：蛋白胨批号：氯化钠（AR）批号：磷酸二氢钾（AR）批号：磷酸氢二钠（AR）批号：聚山梨酯80 批号：五、仪器HTY-2000A型集菌仪，一次性使用全封闭集菌培养器型号KDGB330批号20100602 均由杭州泰林生物技术设备有限公司。
立式压力蒸汽灭菌器：YXQ-LS-50SII，上海博讯实业有限公司医疗设备厂；霉菌培养箱：MJX-160B-Z型，上海博迅实业有限公司生化培养箱：MJX-160B-Z型，上海博迅实业有限公司电热恒温鼓风干燥箱：GZX-9076 MBE，上海博讯实业有限公司医疗设备厂百级超净工作台：SW-CJ-1F，苏州佳宝净化工程设备有限公司六、冲洗液pH7.0 无菌氯化钠蛋白胨缓冲液，自制，根据《中国药典》2010版二部附录XI H 稀释液，冲洗液配置方法：取磷酸二氢钾3.56g、磷酸氢二钠7.23g、氯化钠4.30g、蛋白胨1.0g，加水1000ml，微热溶解，滤清，分装，灭菌。
灭菌条件：121°C高压蒸汽灭菌20min。
七、缓冲液0.9%无菌氯化钠溶液，自制，根据《中国药典》2010版二部附录XIH 稀释液，冲洗液配置方法：取氯化钠9.0g，加水溶解使成1000ml，过滤，分装，灭菌。
滴眼剂检验标准操作规程
检验方法
01
外观检查：观察滴眼剂的颜 色、透明度、气味等
02
理化检验：测量滴眼剂的 pH值、黏度、渗透压等
质量标准
1
2
3
4
5
滴眼剂的浓度： 符合规定要求
滴眼剂的纯度： 无杂质、无污 染
滴眼剂的生物相 容性：无刺激、
无过敏反应
滴眼剂的稳定 性：在规定时 间内保持稳定
滴眼剂的包装： 符合规定要求， 无破损、无污染
质量保证
01
原料质量：严格筛选原料供应商，
确保原料质量合格
02
生产过程：严格按照标准操作规程
变质
样品处理
01
样品接收：核对样品信息， 确保样品完整
02
样品预处理：去除包装， 将样品放入容器中
03
样品溶解：加入适量溶剂， 使样品充分溶解
04
样品过滤：使用滤纸或滤 膜过滤样品，去除杂质
05
样品稀释：根据检验要求， 将样品稀释至合适浓度
结果分析
01
滴眼剂的性状： 观察滴眼剂的 颜色、透明度、 气味等
02
滴眼剂的pH 值：测量滴眼 剂的pH值， 判断其是否符 合标准
03
滴眼剂的微生 物检测：检测 滴眼剂中的微 生物含量，判 断其是否符合 标准
04
滴眼剂的化学 成分检测：检 测滴眼剂中的 化学成分，判 断其是否符合 标准
05
滴眼剂的稳定 性检测：检测 滴眼剂在不同 条件下的稳定 性，判断其是 否符合标准
氯霉素滴眼液无菌检查方法的研究
氯霉素滴眼液无菌检查方法的研究作者：董自艳戴翚来源：《中国实用医药》2015年第16期【摘要】目的建立氯霉素滴眼液的无菌检查方法。
方法无菌检查采用薄膜过滤法，冲洗液为0.1%蛋白胨溶液，冲洗量为400 ml/滤筒。
结果此法能有效消除抑菌成分的干扰，各试验菌生长良好。
结论经方法学验证，所建立的方法适用于氯霉素滴眼液的无菌检查。
【关键词】氯霉素；无菌检查；方法验证DOI：10.14163/ki.11-5547/r.2015.16.200【Abstract】 Objective To establish a sterility test method for chloramphenicol eye drops. Methods Membrane-filter procedure was applied for sterility test， with 0.1% peptone solution as flushing fluid and 400 ml/filter cartridge as flushing volume. Results This method could effectively eliminate interference by antibacterial components， with good growth of every test organisms. Conclusion Through methodology validation， this established method is suitable for sterility test in chloramphenicol eye drops.【Key words】 Chloramphenicol； Sterility test； Method validation氯霉素滴眼液用于治疗由大肠杆菌、流感嗜血杆菌、克雷伯菌属、金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌和其他敏感菌所致的眼部感染，如沙眼、结膜炎、角膜炎、眼睑缘炎等。
滴眼剂的无菌控制
滴眼剂的无菌控制2011年8月 湖北武汉张锦彪 Jack.zhang@ zhangjinbaio@2011-8-151滴眼剂的质量要求• 中国药典2010版附录I G眼用制剂系指直接用于眼部发挥治疗作用的无菌制剂。
滴眼剂系指由药物与适宜辅料制成的供滴入眼内的无菌液体制剂。
可分为水性或油性溶液、混悬液或乳状液。
• 一般质量控制项目含量 可见异物 pH 无菌 粒度2011-8-15装量 渗透压 黏度 沉降体积比2滴眼剂的组成• 内容物– 主药、辅料、溶剂等• 内包材– 瓶、塞、盖• 外包材和组件– 标签、纸盒、说明书、组件和纸箱等2011-8-153滴眼剂的生产工艺一般有三种工艺： 1. 药物性质稳定者：采用无菌过滤和灭菌工艺制备。
2. 主药不稳定者，全部采用无菌操作法制备。
3. 用于眼部手术或眼外伤的制剂，必须制成单计量剂型。
2011-8-154滴眼剂的生产工艺一种塑料瓶装水性滴眼剂的生产流程（塑料瓶由瓶体、内塞和盖组成）树脂原料 部件和设 备清洁消 毒 过滤器完 整性测试 前/后 原辅料加工成型 灌装 外观检查 过滤 0.22um脱包、清洁、 传递一般生产区称量内包装装量测试 扭矩测试C级溶液配制A/B级外包装 外观检查 泄漏测试 中间控制环氧乙烷或辐 射灭菌 澄明度检查 异物检查灭菌后内包装 容器 瓶、塞、盖过滤器 完整性 测试 前/后过滤 0.45um及 0.22um储罐 包装 外包材内包材检验2011-8-155影响滴眼剂的无菌质量要求的主要因素2011-8-156生产过程中的污染源• 微生物 微生物(Microorganisms) : 细菌 细菌(Bacteria)，真 ， 菌(Fungi)• • 具有生命和繁殖力的单个细胞结构, 其中包括致病菌 可通过高温灭菌，化学消毒，滤膜过滤来去除• 携带微粒的物质 (Particulate matter) : 粒子 (Particles)• 悬浮于空气或液体中的固体颗粒，大小用微米 (0.001mm) 计，可作为细菌生长的载体• 交叉感染 交叉感染(Cross-contamination): 化学物质 (Chemicals)• 通过人员或由于不彻底的清洗过程，将一种产品上的物质 带到另一种产品而造成的污染• 热源 热源(Pyrogen): 细菌内毒素 细菌内毒素(Bacterial endotoxin)• 某一类细菌产生的有毒化学大分子物质，可通过干热，超 滤，蒸馏等方法来去除2011-8-15 7无菌生产过程的人员影响控制80%以上的微生物污染来之于人员。
滴眼剂检验标准操作规程
滴眼剂检验标准操作规程1. 引言滴眼剂是一种常见的药物剂型，用于治疗眼部疾病和炎症。
为了确保滴眼剂的质量和安全性，需要进行严格的检验。
本操作规程旨在规范滴眼剂检验的流程和标准。
2. 仪器和试剂准备•电子天平：用于称量试剂和药物样品。
•显微镜：用于观察滴眼剂的颗粒和杂质。
•pH计：用于测定滴眼剂的pH值。
•试剂：纯水、酒精、盐酸、氢氧化钠等。
•标准品：用于校准仪器和验证方法的标准滴眼剂。
3. 检验项目和方法3.1 外观检查•目的：观察滴眼剂的外观特征，检查是否有异物、悬浮物、沉淀和颜色变化。
•方法：将滴眼剂取出少量，放在白色背景下观察，并用显微镜检查细节。
3.2 颗粒和杂质检查•目的：检查滴眼剂中是否含有颗粒和其他杂质物质。
•方法：取适量滴眼剂，用显微镜观察，并可以通过过滤或离心来收集颗粒和杂质进行进一步观察和分析。
3.3 pH值测定•目的：测定滴眼剂的酸碱性，判断是否符合规定范围。
•方法：取适量滴眼剂，用pH计测量其pH值，进行多次测量取平均值。
3.4 配方含量测定•目的：测定滴眼剂中活性成分的含量，判断是否符合规定要求。
•方法：依据药物配方，取适量滴眼剂，经过提取或稀释，用色谱等方法进行分析测定。
4. 检验记录和分析•检验人员应记录每个检验项目的结果和观察情况。
•对于不合格的滴眼剂，应进行进一步的分析和原因探究，确定是否可修复或需要重新制备。
5. 质量控制措施•建立滴眼剂检验结果的数据库，用于追溯和分析。
•检验人员应定期参加相关培训，保持技能和知识的更新。
•定期维护和校准仪器设备，确保其准确性和可靠性。
6. 结论滴眼剂检验标准操作规程是确保滴眼剂质量和安全性的重要工具。
通过严格按照规程执行滴眼剂的检验流程，可以保证滴眼剂的质量符合标准，并提高消费者的用药安全性。
同时，质量控制措施的落实也是持续改进滴眼剂质量的关键。
滴眼剂质量检查项目
滴眼剂质量检查项目
2010版药典第二部附录I G 眼用制剂
滴眼剂：系指由药物与适宜辅料制成的供滴入眼内的无菌液体制剂
中国药典规定，滴眼剂应符合下列要求：
（1）无菌：供角膜创伤或手术用的滴眼剂，必须无菌，以无菌操作法制成单剂量制剂，且不得加抑菌剂；其他用的滴眼剂，为多剂量滴眼剂必须加抑菌剂，不得检出绿脓杆菌和金黄色葡萄球菌。
（2）澄明度：应为澄明的溶液，要求比注射剂稍低；肉眼观察无玻璃屑、较大纤维和其他不溶性异物。
混悬液型滴眼剂不得有超过50μm直径的粒子，15μm以下的颗粒不得少于90%.
（3）pH：应为之间，pH不当可引起刺激性，增加泪液的分泌，导致药物流失，甚至损伤角膜。
（4）渗透压：应尽量与泪液相近，但一般能适应相当于浓度为的氯化钠溶液。
；
（5）稳定性：应具有一定的稳定性，可加入适宜的稳定剂以保证在使用期限内的稳定。
（6）粘度：以为宜，适当大的粘度使滴眼液在眼内停留时间延长，并减少刺激性。
除规定外，眼用剂应进行以下相应检查
1.可见异物
2.粒度
3.沉降体积比
4.金属性异物
$
5.重量差异
6.装量
7.渗透压摩尔浓度
8.无菌。
药剂学 滴眼剂制备
教学目标掌握滴眼剂的种类和质量要求；掌握滴眼剂常用附加剂的种类及选用。
学会滴眼剂的容器及附件的处理、药液配制、灌装、质量检查。
学会典型滴眼剂的处方及工艺分析例1 氯霉素滴眼液氯霉素0.25g 氯化钠0.9g 尼泊金甲酯0.023g 尼泊金丙脂0.011g 注射用水加至100ml制法：取尼泊金甲酯、丙脂，加沸注射用水溶解，于60°时溶入氯霉素和氯化钠，过滤，加注射用水至足量，灌装，100°C，30min灭菌。
本品用于治疗沙眼、急慢性结膜炎、眼睑缘炎、麦粒肿、角膜炎等。
例二醋酸可的松滴眼液（混悬液）处方：醋酸可的松（微晶） 5.0g 吐温80 0.8g硝酸苯汞0.02g 硼酸20.0g羧甲基纤维素钠 2.0g 注射用水加至1000ml制法：取硝酸苯汞溶于处方量50%的注射用水，加热至40~50℃，加入硼酸、吐温80使溶解，3号垂熔漏斗过滤待用；另将羧甲基纤维素钠溶于处方量30%的注射用水，用垫有200目尼龙布的布氏漏斗过滤，加热至80~90℃，加醋酸可的松微晶搅拌，保温30min，冷至40~50℃，与硝酸苯汞等溶液合并，加注射用水至足量，200目尼龙筛过滤两次，分装，封口，100℃流通蒸汽灭菌30min.本品用于治疗急性和亚急性虹膜炎、交感性眼炎、小泡性角膜炎、角膜炎等滴眼剂的附加剂PH值调节剂渗透压调节剂抑菌剂粘度的调整稳定剂、增溶剂、助溶剂滴眼剂的质量要求（1）pH（耐受pH5.0—9.0）（2）渗透压（适应相当于0.6—1.5%氯化钠）（3）无菌（4）可见异物（混悬剂颗粒细度检查，15以90%，50微米的不得超过10%）（5）粘度（合适4.0—5.0cpa .s)（6）稳定性滴眼剂的制备遵循注射剂生产要求。
不耐热药物，采用无菌操作法。
用于眼部手术或眼外伤的制剂，应制成单剂量包装如安瓿剂，并按安瓿生产工艺进行。
洗眼液用输液包装，按输液工艺处理。
1.容器及附件处理。
2.配制与过滤；3.无菌灌装（减压灌注）；4.质检；5.印字包装拓展视野在无菌条件下制备成品中应不得检出金黄色葡萄菌和铜绿假单胞菌符合药典无菌检查的规定其他灭菌与无菌制剂海绵剂亲水性胶体溶液，经冷冻或其他方法处理后制得得质轻、疏松、坚韧而又具有极强的吸湿性能的海绵状固体灭菌制剂体内植入制剂手术用制剂溃疡烧伤及外伤用溶液剂、软膏剂、气雾剂、粉雾剂、海绵剂等。
复方硫酸锌滴眼液无菌检查方法的建立
滴 眼剂 、洗 眼剂 、眼膏剂 、眼用注射剂 以及眼用膜剂和 接触 眼镜等 。
倍 依次稀释 至浓度约为 １ ０ － １ ０ ０ ｃ ｆ ｕ ／ ｍ Ｌ ，取 经培养５ ￣ ７ ｄ 的黑曲霉改 良 马 丁琼 脂斜面培养 物 ，加 入含０ ． ０ ５ ％（ ｍ Ｌ ／ ｍ Ｌ ） 聚山梨酯 ８ Ｏ 的０ ． ９ ％无菌氯 化钠溶液５ ｍ Ｌ ，将 孢子洗下 ，摇匀 ，吸取 ｌ ｍＬ 至无菌试管 中 ，用含 ０ ． ０ ５ ％（ ｒ ｎ Ｌ ／ ｍ Ｌ ） 聚 山梨酯８ ０ 的０ ． ９ ％ 无 菌氯 化钠溶液 ｌ Ｏ 倍稀 释至浓度约为 １ ０ － － － １ ０ ０ ｃ ｆ ｕ ／ ｍ Ｌ ，备用 。 ２ ． ２方法验证
８ ８ ・实验研 究 ・
版社， ２ ０ ０ ４ ： ４ ６ ７ — ４ ６ ８ ．
Ｊ ｕ ｌ ｙ ２ ０ １ ３ ， Ｖ ｏ １ ． １ １ ， Ｎ ｏ ． ２ ］ ． 实 用医药 杂志 ， ２ ０ ０ ２ ， １ ９ （ ３ ） ： ５ ３ — ５ ６ ．
３ ～ ５ ｄ ，逐 日观察 。 表１ 试验 组 与阳性对 照 组微 生物 生 长情 况
复 方 硫酸 锌 滴 眼 液 （ 哈尔 滨 医 科 大学 附属 第 一 医 院 ，批 号 ：
２ ０ １ ０ １ １ ２ ３ ，２ ０ １ ０ １ １ ２ ４ ，２ ０ １ ０ １ １ ２ ５ 规格 ：５ ｍ Ｌ ／ 支 ）。
复方硫 酸锌 滴眼液无 菌检查方法 的建立
王 瑛 杨 利 红
（ 黑龙江省食 品药 品检验检测所 ，黑龙江 哈尔滨 １ ５ ０ ０ ０ １ ）
【 摘 要】 目的 建 立 复方硫 酸锌 滴 眼液 的无 菌检 查方 法 。 方法 按 照 《 中 国药典》２ ０ １ ０年版 附录的要 求 ，采 用薄膜 过 滤法 ，通过 接种 ６ 株阳 结果 ６ 株 阳性 代表 菌株 在试验 组 与 阳性 对 照组均 生 长 良好 。结论 本法可 消除 复方 性 代表 茵进行 方 法 学验 证 ，冲洗 液 用量 为每 筒 ３ ０ ０ ｍＬ 。 硫 酸锌 滴 眼液 的抑 茵作 用，适 用于 该制 剂的 无菌检 查 。
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五种滴眼液无菌检查方法的建立
p中国药典2010年版二部将滴眼液的微生物限度检查项目修订为无菌检查项目，根据中国药典2010年版二部的规定[1]，当建立药品的无菌检查方法时，应进行方法的验证，以证明所采用的方法适用于该药品的无菌检查。
为了保证五种滴眼液的无菌检查结果的可靠性，对五种滴眼液无菌检查方法进行了验证，建立了各品种的无菌检查方法。
1、资料与方法
1.1 资料
妥布霉素滴眼液，规格：（8ml：24mg）/支；批号：3100608；氯霉素滴眼液，规格：（5ml：12.5mg）/支；批号：3100607；色甘酸钠滴眼液，规格：（8ml：0.16g）/支；批号：3100609，；牛磺酸滴眼液，规格：（8ml：0.4g）/支；批号：3100119；马来酸噻吗洛尔滴眼液，规格：（5ml：12.5mg）/支；批号：3100310；样品来源：市售。
验证试验用菌种：大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉菌六种阳性对照试验菌，菌种都来源于中检所。
1.2 方法
（1）菌液制备。
按中国药典2010年版二部附录XI H进行。
（2）供试液制备。
取样品至少60ml，都加置pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液450ml制成供试液，供三株阳性对照试验菌实验；另取同法制得的供试液进行另三株阳性对照试验菌实验。
（3）薄膜过滤法。
取一次性全封闭集菌三联培养器，先用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液少量润湿滤膜。
将供试液通过三联培养器，供试液全部过滤完毕后，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗，冲洗时充分振摇、荡洗筒壁，细菌每筒分别冲洗0ml、150ml、300ml、400ml，前四次每次冲洗50ml，以后每次冲洗100ml；真菌每筒分别冲洗0 ml、150ml，每次50ml，冲洗三次，在最后一次的冲洗液中加入小于100cfu的各阳性对照试验菌，过滤，每筒培养器中加入100ml相应的硫乙醇酸盐流体培养基或改良马丁培养基，作为试验筒。
另取已湿润的全封闭集菌培养器加入等量的相应培养基和阳性对照试验菌，作为阳性对照筒。
再取两联全封闭集菌培养器，取相应的的溶剂和稀释剂同法操作，但不加入阳性对照菌，作为阴性对照筒。
按规定温度培养3～5天，观察不同冲洗量对6株阳性对照试验菌的影响。
2、结果
逐天观察6株阳性对照试验菌在其相应的各培养基管中的生长情况，马来酸噻吗洛尔滴眼液、牛磺酸滴眼液、色甘酸钠滴眼液各试验筒冲洗150ml，6株阳性对照试验菌都生长良好；冲洗0ml，有个别阳性对照试验菌生长缓慢。
妥布霉素滴眼液、氯霉素滴眼液各细菌试验筒分别冲洗400ml、300ml，真菌各试验筒冲洗150ml，6株阳性对照试验菌都生长良好；妥布霉素滴眼液细菌试验筒冲洗300ml，枯草芽孢杆菌生长极弱，表明妥布霉素对枯草芽孢杆菌较敏感，此试验条件下对枯草芽孢杆菌有抑菌作用；氯霉素滴眼液细菌试验筒冲洗150ml，枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌生长极弱，表明氯霉素对枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌有抑菌作用。
因此马来酸噻吗洛尔滴眼液、牛磺酸滴眼液、色甘酸钠滴眼液需氧菌、厌氧菌、真菌分别以150ml/筒的冲洗量检查；氯霉素滴眼液、妥布霉素
滴眼液需氧菌、厌氧菌分别以300ml/筒、400ml/筒，真菌分别以150ml/筒冲洗量检查，采用上述方法对其样品进行无菌检查，结果都符合规定。
3、讨论
五种滴眼液对真菌几无抑制作用，但由于滴眼液中含有羟苯乙酯、硫柳汞或苯扎溴铵等防腐剂，因此白色念珠菌及黑曲霉菌验证也要进行适当的冲洗，才能保证对其无抑菌作用。
玻璃酸钠（透明质酸钠）对眼部的刺激性小，能增加滴眼液的运动黏度，延长药物在泪液中的滞留时间，提高药物的疗效。
大部分的滴眼液品种中都含有玻璃酸钠，无菌检查方法采用薄膜过滤法时，为利于样品过滤，减小滤膜对样品中药物的吸附特别是有抑菌或杀菌作用的药物如抗生素，要尽量减小供试液的黏度，因此比较了样品60ml分别加置pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液0ml、100ml、250ml、450ml制成供试液，薄膜过滤，试验结果表明取样品溶液直接过滤，样品溶液本身的黏度大，过滤速度缓慢，冲洗次数及冲洗量明显增加，才能保证得到较好的冲洗效果；稀释剂pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液250ml、450ml制成的供试液，溶液黏度小，过滤速度快些，冲洗量也适当。
参考文献
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）[S].北京：中国医药科技出版社，2010，附录：103～107.。