人间变性淋巴瘤激酶(ALK)elisa试剂盒使用说明书
ALK基因断裂检测试剂盒(荧光原位杂交法)
正确
存（一般不超过两星期）；
将杂交后玻片置于-20℃避光保存。
观察时所选用的滤片组 不合适
使用正确滤片组观察探针荧光情况。 详情请咨询河南赛诺特生物技术有限公司技术服务部门。
碧云天 Human IgE ELISA Kit 产品说明书
Human IgE ELISA Kit产品编号 产品名称包装 PI479Human IgE ELISA Kit96次产品简介：碧云天的Human IgE ELISA Kit (Human IgE Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人总免疫球蛋白E 酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测人血清、血浆中的IgE 的ELISA 试剂盒。
本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。
多次重复检测结果表明，最小检出量为14.3ng/ml ，本试剂盒采用特异性抗体识别人IgE ，与IgG 、IgA 没有交叉反应性，板内、板间变异系数均小于10%。
免疫球蛋白E (IgE)只能在哺乳动物身上发现。
IgE 存在于血液中，是免疫系统抵御细菌和病毒等外来物质入侵的重要工具。
IgE 是一类具有δ链的亲同种细胞抗体，是参与过敏性鼻炎、过敏性哮喘和湿疹等发病机制调节的主要抗体。
IgE 是组胺和白三烯等肥大细胞释放抗炎剂水平的主要调剂者。
尽管只有少量IgE 在血液中，但它还负责触发严重过敏反应。
IgE 在I 型超敏反应中起作用，I 型超敏反应表现为各种过敏性疾病，如过敏性哮喘、大多数类型的鼻窦炎、过敏性鼻炎、食物过敏，以及某些类型的慢性荨麻疹和特应性皮炎。
此外，有足够证据证明IgE 还参与免疫系统对寄生虫入侵的反应，并增加与癌症发病有关的白血细胞数量。
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA 法(Sandwich ELISA)检测样品中人IgE 的浓度，其原理见图1。
人IgE 特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的人IgE 会与捕获抗体结合。
当加入辣根过氧化物酶标记人IgE 抗体后，辣根过氧化物酶标记人IgE 抗体与人IgE 结合，形成夹心的免疫复合物。
最后加入显色剂TMB 溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。
ALK的作用及其抑制剂的介绍
ALK最早是在间变性大细胞淋巴瘤（ALCL)的一个亚型中被发现的，因此定名
为间变性淋巴瘤激酶（anaplasticlymphoma kinase，ALK）。
随后，在发现非小细胞肺癌中有ALK基因重排之前，在弥漫性大B细胞淋巴瘤和炎症性肌纤维母细胞瘤（IMT）中分别发现了有多种类型的ALK基因重排，至此证明ALK是强力致癌驱动基因。
ALK Inhibitor（抑制剂）种类繁多，有Crizotinib，Alectinib 和TAE684等。
Crizotinib (PF-02341066)是一种有效的c-Met抑制剂，作用于人的c-Met激酶时，Ki为4 nM。
Alectinib (CH5424802)是一种有效的ALK抑制剂，IC50为1.9 nM，对L1196M 突变型敏感，作用于ALK比PF-02341066， NVP-TAE684和PHA-E429选择性高。
TAE684 (NVP-TAE684)是一种有效的，选择性的ALK抑制剂，IC50为3 nM，
作用于ALK比作用于InsR选择性高100倍。
ALK 在非小细胞肺癌中的表达
ALK 在非小细胞肺癌中的表达郝彦勇;李旭丹;郭黎黎;许仙花;邹玉凤【期刊名称】《中国实验诊断学》【年(卷),期】2015(000)005【总页数】3页(P833-834,835)【作者】郝彦勇;李旭丹;郭黎黎;许仙花;邹玉凤【作者单位】吉林省肿瘤医院，吉林长春 130012;长春市妇产医院;吉林省肿瘤医院，吉林长春 130012;吉林省肿瘤医院，吉林长春 130012;吉林省肿瘤医院，吉林长春 130012【正文语种】中文间变性淋巴瘤激酶(ALK)于1994年首先发现于间变性大细胞淋巴瘤中；EML4-ALK融合基因于2007年首次发现，是新兴的生物标记物和治疗靶标[1]。
我们检测了106例经手术切除的非小细胞肺癌组织标本，观察并分析ALK融合基因的表达情况以及阳性病例的临床病理特征。
1.1 材料随机抽取吉林省肿瘤医院2010年至2013年间经手术切除的非小细胞肺癌106例，年龄41-77岁，平均年龄58.8岁。
肿瘤组织常规取材，经10%中性福尔马林液充分固定，石蜡包埋后，4 μm切片，用于免疫组化及FISH染色。
1.2 试剂抗ALK(D5F3)兔单克隆抗体试剂，兔单克隆阴性对照Ig(Rabbit Monoclonal Negative Control Ig),OptiView DAB IHC检测试剂盒，OptiView 扩增试剂盒，均购自罗氏诊断产品(上海)有限公司。
Vysis ALK双色分离探针试剂盒。
1.3.1 HE常规切片染色，观察。
1.3.2 免疫组化的方法检测ALK蛋白的表达。
使用BenchMark XT自动切片染色仪，每轮实验设阳性对照一张，每例标本设阴性对照一张。
1.3.3 对于阳性病例，用FISH的方法复检，按照ALK探针试剂盒说明操作，荧光显微镜下观察。
1.3.4 结果判读①组织学诊断标准：参照2004版世界卫生组织编写的《肺、胸膜、胸腺及心脏肿瘤病理学和遗传学》诊断标准以及国际肺癌研究学会/美国胸科学会/欧洲呼吸学会(IASLC/ATS/ERS)于2011年2月公布的肺腺癌国际多学科分类标准[2]。
ALK阳性晚期非小细胞肺癌临床病理分析
ALK阳性晚期非小细胞肺癌临床病理分析谢强;陈群;林清华;钟爱虹;卢筠;廖胜祥;臧焕平【摘要】目的探讨间变性淋巴瘤激酶(anaplastic lymphoma kinase,ALK)在晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达,及其与临床特征、鉴别诊断、预后的关系.方法采用免疫组化法检测253例晚期NSCLC中ALK的表达,并对其中132例进行荧光PCR法验证.结果采用免疫组化法检测晚期NSCLC中ALK阳性率为20.95％(53/253).ALK阳性组中未吸烟者、腺癌的比例高于ALK阴性组(P＜0.05).132例进行荧光PCR验证,免疫组化与荧光PCR符合率随免疫组化阳性程度的增加而递增.结论免疫组化可作为ALK的筛查手段,提高ALK的检出率.荧光PCR检测对ALK阳性NSCLC的确诊具有重要意义.【期刊名称】《临床与实验病理学杂志》【年(卷),期】2014(030)010【总页数】4页(P1135-1138)【关键词】肺肿瘤;非小细胞肺癌;间变性淋巴瘤激酶;免疫组织化学;荧光PCR【作者】谢强;陈群;林清华;钟爱虹;卢筠;廖胜祥;臧焕平【作者单位】福州肺科医院肿瘤内科,福州350008;福州肺科医院肿瘤内科,福州350008;福州肺科医院病理科,福州350008;福州肺科医院肿瘤内科,福州350008;福州肺科医院肿瘤内科,福州350008;福州肺科医院肿瘤内科,福州350008;福州肺科医院肿瘤内科,福州350008【正文语种】中文【中图分类】R734.2随着医学的发展和进步，晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)已进入个体化治疗时代，其靶向治疗主要针对表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)基因突变及间变性淋巴瘤激酶(anaplastic lymphoma kinase, ALK)突变型肺癌，二者均具有明确的分子靶点、检测技术及在中国上市的靶向药物，临床疗效明显。
ELISA说明书翻译
实验步骤1. 开始ELISA 前一天，稀释包被抗体，取酶标板每孔加入100ul 包被抗体溶液，4 度过夜2. 使用前将所有试剂放置室温，强烈建议所有标准品和样品做复孔或三孔，各次检测均要求做标准曲线3. 洗涤液不少于300ul 洗板4 次，并在吸水纸上拍干板子，后续洗涤液同此4. 为了阻断非特异性结合和减少背景，每孔加200ul 样品稀释液5. 封板并在摇床上室温孵育1h6. 在上述期间，准备标准品稀释液和适当的样品稀释液（如必需）7. 标准品稀释：500 pg/ml, 250 pg/ml, 125 pg/ml,62.5 pg/ml, 31.25 pg/ml, 15.6 pg/ml, 7.8pg/ml 和0 pg/ml8. 如步骤3 洗板4 次9. 每孔加入100ul 标准品稀释液和样品到对应孔，如有需要可对样品进行稀释10. 封板并在摇床上室温孵育2h11. 如步骤3 洗板4 次12. 每孔加入100ul 已稀释的二抗，封板并在摇床上室温孵育1h13. 如步骤3 洗板4 次14. 每孔加入100ul稀释的HRP,封板并在摇床上室温孵育30min15. 如步骤3洗板5次，每次洗涤洗涤液浸泡30s至1min，有利于减少背景16. 每孔加入100UITMB显色液，并在摇床孵育15-30min，阳性孔将变为淡蓝色，此步无需封板17. 每孔加入100ul 终止液终止反应，阳性孔将由蓝色变为黄色18. 终止反应半小时内测定OD值（450nm）ELISA 实验基本原理基本原理1971 年Engvall 和Perlmann 发表了酶联免疫吸附剂测定（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA ）用于IgG定量测定的文章，使得1966年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法。
这一方法的基本原理是：①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。
儿童间变性淋巴瘤激酶阳性(ALK )间变性大细胞淋巴瘤临床路径(2019年版)
儿童间变性淋巴瘤激酶阳性（ALK+）间变性大细胞淋巴瘤临床路径（2019年版）一、儿童间变性淋巴瘤激酶阳性（ALK+）间变性大细胞淋巴瘤（ALCL）临床路径标准住院流程（一）适用对象第一诊断为无中枢神经系统（CNS）侵犯的间变性淋巴瘤（ICD-10：C85.705 M97141/3）激酶阳性（ALK+）儿童间变性大细胞淋巴瘤（ALCL）（ICD-10：C85.709 M97142/3）患者。
（二）诊断依据根据WHO Classification of Tumours of Haematopoietic and Lymphoid Tissues 2008版，《诸福棠实用儿科学（第8版）》（人民卫生出版社，2015）。
1.体检：可有发热、皮肤软组织结节、淋巴结及肝脾大等。
2.病理诊断:病理活检根据WHO Classification of Tumours of Haematopoietic and Lymphoid Tissues 2008版分型诊断标准。
3.NPM-ALK（血，骨髓）:非NPM-ALK基因易位除外。
4.颈部及腹部超声，头、颈、胸腹（瘤灶部位最好为增强）CT/MR，如果为颅脑和脊髓部位瘤灶则需做相应部位MR。
（三）危险度分组标准1.A组：完全切除的I期。
2.B组：预后好的一组。
（1）无皮肤浸润。
（2）无纵隔受累。
（3）病理无淋巴组织细胞变异的证据，非小细胞变异亚型。
（4）骨髓无噬血现象，不合并噬血细胞综合征。
（5）非ALCL白血病阶段。
（6）骨髓和外周血NPM-ALK（-）。
3.C组：预后差的一组，包括以下特点的患者（1）皮肤活检证实有皮肤损害（不是I期）。
（2）有纵隔和（或）肺脏受累。
（3）病理有淋巴组织细胞变异，或为小细胞变异亚型。
（4）骨髓可见噬血现象，或合并噬血细胞综合征。
（5）ALCL白血病阶段。
（6）骨髓或外周血NPM-ALK（+）。
4.D组：有CNS受累的患者。
（四）选择治疗方案的依据根据《诸福棠实用儿科学（第8版）》（人民卫生出版社）。
间变性淋巴瘤激酶酪氨酸激酶抑制剂治疗晚期非小细胞肺癌中国专家建议2024版解读PPT课件
对于轻度不良反应，可通过调整药物剂量或对症治疗进行缓解。对于重度不良反应，应立即停药并采取相应 的治疗措施。
预防措施
在使用ALK抑制剂前，应对患者进行全面的评估，包括肝功能、肾功能、心电图等检查。同时，在治疗过程 中应密切监测患者的各项指标，及时发现并处理可能出现的不良反应。
05
专家观点与争议问题探讨
目的
制定针对ALK-TKI治疗晚期NSCLC的中国专家建议，为临床 医生提供规范化、个体化的治疗指导，改善患者生存质量。
国内外研究现状及发展趋势
01
国内研究现状
国内在ALK-TKI治疗晚期NSCLC领域已积累一定经验，多项临床研究证
实了其疗效和安全性，但仍存在诸多挑战和问题。
02
国外研究现状
国外在ALK-TKI治疗晚期NSCLC方面已取得显著进展，新型药物和联合
禁忌症
对于ALK阴性的非小细胞肺癌患者，或未经ALK检测的患者，不建议使用ALK抑制剂进行治疗。此外 ，对于妊娠期妇女和哺乳期妇女，也应避免使用此类药物。
治疗方案选择及调整策略
一线治疗方案
对于ALK阳性的非小细胞肺癌患者，一线治疗可选择克唑替尼、阿来替尼、塞瑞替尼等 ALK抑制剂进行治疗。
二线及后线治疗方案
不同ALK-TKIs药物之间在疗效和安全性方面存 在一定的差异，因此需要根据患者的具体情况 选择合适的药物进行治疗。
药物安全性及耐受性评估
ALK-TKIs药物的安全性及耐受性 良好，大多数患者能够耐受治疗
。
常见的不良反应包括恶心、呕吐 、腹泻、疲劳等，但多为轻度至 中度，且可通过调整药物剂量或
对症治疗进行缓解。
强调间变性淋巴瘤激酶酪氨酸 激酶抑制剂（ALK-TKIs）在晚 期非小细胞肺癌治疗中的重要
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人间变性淋巴瘤激酶()试剂盒使用说明书
规格：孔配置孔配置
标准品稀释液：×瓶
酶标试剂：×瓶（）×瓶（）
【人间变性淋巴瘤激酶()试剂盒】本试剂仅供研究使用
计算：
以标准物的浓度为横坐标，值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
试剂盒组成：
封板膜片（）片（）
说明书份
密封袋个
标准品：×瓶×瓶℃保存
酶标包被板: ××℃保存
样品稀释液×瓶×瓶℃保存
显色剂液: ×瓶×瓶℃保存
显色剂液: ×瓶×瓶℃保存
终止液: ×瓶×瓶℃保存
浓缩洗涤液:（×倍）×瓶（×倍）×瓶℃保存
实验原理：
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人间变性淋巴瘤激酶()水平。
用纯化的人间变性淋巴瘤激酶()抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入间变性淋巴瘤激酶()，再与标记的间变性淋巴瘤激酶()抗体结合，形成抗体抗原酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物显色。
在酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的间变性淋巴瘤激酶()呈正相关。
用酶标仪在波长下测定吸光度（值），通过标准曲线计算样品中人间变性淋巴瘤激酶()浓度。
目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中间变性淋巴瘤激酶()的含量。
服务承诺：
供货期：款到发货。
工作时间内免费的技术咨询和指导。
请来电咨询为客户提供来样检测服务，最大限度实验结果的有效性(免费代测)。
保存条件及有效期：
试剂盒保存：℃有效期：个月
【人间变性淋巴瘤激酶()试剂盒】样本处理及要求：
.血清：室温血液自然凝固分钟，离心分钟左右（转分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
.血浆：应根据标本的要求选择或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合分钟后，离心分钟左右（转分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
.尿液：用无菌管收集，离心分钟左右（转分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心分钟左右（转分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用（）稀释细胞悬液，细胞浓度达到万左右。
通过反复冻融，以
使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心分钟左右（转分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
.组织标本：切割标本后，称取重量。
加入一定量的，。
用液氮迅速冷冻保存备用。
标本融化后仍然保持℃的温度。
加入一定量的（），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。
离心分钟左右（转分）。
仔细收集上清。
分装后一份待检测，其余冷冻备用。
. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于℃保存，但应避免反复冻融.
. 不能检测含的样品，因抑制辣根过氧化物酶的（）活性。
操作步骤
标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔孔，在第一、第二孔中分别加标准品μ，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液μ，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取μ分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液μ，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取μ弃掉，再各取μ分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取μ分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液μ，混匀后从第七、第八孔中分别取μ加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液μ，混匀后从第九第十孔中各取μ弃掉。
（稀释后各孔加样量都为μ，浓度分别为，，，，）。
加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。
在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液μ，然后再加待测样品μ（样品最终稀释度为倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
温育：用封板膜封板后置℃温育分钟。
配液：将（的倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水（的倍）倍稀释后备用。
洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置秒后弃去，如此重复次，拍干。
加酶：每孔加入酶标试剂μ，空白孔除外。
温育：操作同。
洗涤：操作同。
显色：每孔先加入显色剂μ，再加入显色剂μ，轻轻震荡混匀，℃避光显色分钟.
终止：每孔加终止液μ，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
测定：以空白空调零，波长依序测量各孔的吸光度（值）。
测定应在加终止液后分钟以内进行。
【人间变性淋巴瘤激酶()试剂盒】注意事项：
试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。
一次加样时间最好控制在分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。
如标本中待测物质含量过高（样本值大于标准品孔第一孔的值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（××）。
封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
底物请避光保存。
严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
本试剂不同批号组分不得混用。
. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
试剂盒性能：
.样品线性回归与预期浓度相关系数值为以上。
.批内与批见应分别小于和
检测范围：。