血液学血细胞化学染色ppt课件

第三章
细胞化学染色技术
学习目标
1.掌握：细胞化学染色的基本步骤；铁染 色、过氧化物酶染色、酯酶染色、过碘 酸-希夫染色、碱性磷酸酶染色、酸性磷 酸酶染色的正常血细胞染色反应和临床 意义。
2.熟悉：细胞化学染色的概念和临床应用。 3.了解：细胞化学染色的原理和影响因素。
第一节
概述
一、概念 细胞化学染色是细胞学和化学相结合
五、研究对象
外周血和骨髓新鲜涂片单个细胞中的
化学物质：
酶类、脂类、糖类、铁、蛋白质、核酸等
第二节 常用细胞化学染色技术
➢ 铁染色 ➢ 过氧化物酶染色 ➢ 苏丹黑B染色 ➢ 酯酶染色 ➢ 过碘酸-希夫反应 ➢ 中性粒细胞碱性磷酸酶染色 ➢ 酸性磷酸酶染色
一、 铁 染 色 （ferric stain）
4. 非缺铁性贫血：溶贫、巨幼贫、再障、 白血病等，内外铁正常或增多。
5. 感染、肝硬化、慢性肾炎、血色病等： 外铁增多。
五、应用评价
铁染色是临床常用的一种细胞化学 染色，虽不如血浆铁蛋白敏感，但是反 映机体储存铁的金标准。 外铁：反映骨髓中铁的储存量； 内铁：反映骨髓中可利用的铁量。
二、过氧化物酶染色 （peroxidase,POX）
原理
酸性环境
铁 ＋亚铁氰化钾
亚铁氰化铁
普鲁士蓝 反应
(蓝色沉淀在含Fe部位)
骨髓小粒中的含Fe血黄素（细胞外铁） 骨髓中贮存铁
幼红细胞内的Fe（细胞内铁）
二、结果判断
1. 细胞外铁(骨髓小粒－含铁血黄素) 铁颗粒、铁小珠、铁团块
细胞外铁(低倍镜观察)
（－）：无颗粒 （＋）：有少量铁颗粒或偶见铁小珠 （＋＋）：有较多的铁颗粒或铁小珠 （＋＋＋）：有很多的铁颗粒、铁小珠
M：morphology I：immunology C：cytogenitics M：molecular biology 形态学分型：进行初步的诊断
免疫学分型：明确细胞种类
细胞遗传学分型：与疾病预后有关
分子生物学分型：提高到分子水平
四、基本步骤
1. 固定 （1）物理法：干燥、火焰 （2）化学法：
➢ 弱阳性 颗粒小，分布稀疏 ➢ 阳性 颗粒稍粗，分布较密集 ➢ 强阳性 颗粒粗大，密布于整个胞浆
POX结果判断
细胞质内有蓝黑色颗粒者为阳性 。
（－） 无颗粒沉着；（a）
（±） 颗粒细小 ，分布稀疏 ；（b）
（+） 颗粒较粗，局灶分布； （c）
（++） 颗粒粗大，分布较密， 占胞质 1/2~2/3 ；（d）
[O]↑
亚硝基铁氰化钠 联苯胺蓝（蓝色）
蓝色颗粒
（浆内酶部位）
二、ICSH推荐的三种方法
二氨基联苯胺法（DBA） 二盐酸联苯胺法 过氧化物酶氨基-甲基卡巴唑染色法
三、结果判断
在细胞质内出现金黄色颗粒为阳 性反应。（二氨基联苯胺法）
二氨基联苯胺法
二盐酸联苯胺法
二盐酸联苯胺法
【结果判断】
-、 ± 、+、++、+++、++++
和少数铁小块 （＋＋＋＋）：有极多铁颗粒、小珠和
很多铁小块，密集成堆。
2. 细胞内铁(中晚幼红细胞，油镜观察)
（1）分级(按铁颗粒数量的多少及大小)
细小颗粒：细沙样铁小粒，不易看清。
粗大颗粒：很容易看清的颗粒。
（2）阳性率
ห้องสมุดไป่ตู้
观察100个中晚幼红细胞，计算出铁
粒幼红细胞的百分比。
【结果判断】
幼红细胞核染色为鲜红色,铁粒呈蓝 绿色。
四、临床意义
铁染色是评估铁缺乏最实用的方法，是 反映储存铁的金标准，是临床应用最广 泛的细胞化学染色之一。
1. 缺铁性贫血： 外铁（－），内铁<10%； 治疗有效后，内外铁 。 2. 铁粒幼细胞性贫血： 外铁；内铁阳性率，环形铁粒幼 红细胞增多，可见粗颗粒的Ⅲ、Ⅳ型 铁粒幼红细胞。
3. MDS-RAS：内外铁增多，环形铁粒 幼红细胞>15%。
（+++） 颗粒粗大，呈团块分布 ；（e）
环形铁粒幼红细胞(ringed sideroblast) 幼红细胞胞质内铁颗粒>6个，围绕 核周2/3以上者。
绿色箭头示：环形铁粒幼红细胞；蓝色箭头示：铁粒红细胞
三、参考范围
1. 细胞外铁： （ + ） ~（ ++ ） 2. 细胞内铁：铁粒幼红细胞阳性率大约
12~44%， I~II型（ I型为主），无Ⅲ 型、Ⅳ型、环形铁粒幼红细胞及铁粒 红细胞。
细胞内铁(油镜观察幼红细胞)
Ⅰ型：1～2个小铁颗粒； Ⅱ型： 3～5个小铁颗粒； Ⅲ型： 6～10个小铁颗粒或1～4个大颗粒； Ⅳ型： 10个以上小铁颗粒或5个以上大颗粒。
铁粒幼红细胞(sideroblast)： 胞质中出现蓝色铁颗粒的幼红细胞。
铁粒红细胞(siderocyte)： 胞质中出现蓝色铁颗粒的成熟红细胞。
而形成的一门科学。它以细胞形态学为 基础，结合运用化学反应的原理对血细 胞内的各种化学成分(酶类/脂类/糖类/铁 /蛋白质/核酸等)作定性、定位、半定量 分析的方法。
要求：
血细胞化学染色的基本要求是在原位显 示细胞成分和结构，反应产物应是有色 沉淀物，具有一定的稳定性。
血细胞化学染色可显示糖原、脂类、酶 、蛋白质等。
二、必要性
从形态学观察，存在较多的主观性； 有些原始细胞形态较相似，难以鉴别； 结合细胞化学染色，提高疾病的诊断率。
三、临床应用
1. 辅助判断急性白血病的细胞类型 2. 辅助血液系统疾病的诊断和鉴别
诊断 3. 观察疾病的疗效和预后 4. 疾病发病机制的探讨
白血病的诊断：MICM分型
一、原 理
粒细胞和部分单核细胞的溶酶体颗粒中含 有过氧化物酶(POX)，它可分解H2O2释放出新生 态的氧，后者氧化二氨基联苯胺，形成金黄色不 溶性沉淀，定位于胞质内酶所在的活性部位。
二甲基联苯胺法（DAB）原理
【原理】
四甲基联苯胺 （无色）
过氧化氢 POX 新生态氧
（基质中） 粒、单核 细胞胞浆
A、蒸气固定：甲醛 B、液体固定：甲醛、乙醇、甲醇、丙酮。
2. 显示：有色沉淀反应
（1）偶氮偶联法：酯酶染色 （2）联苯胺法：POX （3）普鲁士蓝反应：Fe （4）希夫反应：PAS （5）金属沉淀法：NAP （6）物理显色法：SBB
3. 复染：使各种细胞能显示出来
铁染色----中性红、伊红 PAS-------甲基绿 核：中性红、甲基绿、沙黄等。 浆：伊红、刚果红、光绿等。