HPLC回收率的计算公式
HPLC含量测定分析方法验证中数据可接受标准讨论
HPLC含量测定分析方法验证中数据可接受标准讨论在进行质量研究的过程中，一项重要的工作就是要对质量标准中所涉及到的分析方法进行方法学验证，以保证所用的分析方法确实能够用于在研药品的质量控制。
为规范对各种分析方法的验证要求，中国药典2005年版附录规定了分析方法验证的指导原则。
该指导原则对需要验证的分析方法及验证的具体指标做了比较详细的阐述。
但是文中未涉及各具体指标在验证时的可接受标准，国际上已颁布的指导原则中也未发现相关的要求。
另一方面，大多数药品研发单位在进行质量研究时，已逐步认识到分析方法验证的必要性与重要性，大都也在按照指导原则的要求进行分析方法验证，但验证完后却因没有一个明确的可接受标准，而难以判断该分析方法是否符合要求。
本文提出了在对HPLC含量测定方法进行验证时的可接受标准，供大家讨论。
1．准确度该指标主要是通过回收率来反映。
验证时一般要求分别配制浓度为80％、100％和120％的供试品溶液各三份，分别测定其含量，将实测值与理论值比较，计算回收率。
可接受的标准为：各浓度下的平均回收率均应在98.0%-102.0%之间，9个回收率数据的相对标准差（RSD）应不大于2.0%。
2．线性线性一般通过线性回归方程的形式来表示。
具体的验证方法为：在80％至120％的浓度范围内配制5份浓度不同的供试液，分别测定其主峰的面积，计算相应的含量。
以含量为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），进行线性回归分析。
可接受的标准为：回归线的相关系数（R）不得小于0.998，Y轴截距应在100％响应值的2％以内，响应因子的相对标准差应不大于2.0%。
3．精密度1）重复性配制6份相同浓度或分别配制浓度为80％、100％和120％的供试品溶液各三份的供试品溶液，由一个分析人员在尽可能相同的条件下进行测试，所得6份供试液含量的相对标准差应不大于2.0%。
2）中间精密度配制6份相同浓度的供试品溶液，分别由两个分析人员使用不同的仪器与试剂进行测试，所得12个含量数据的相对标准差应不大于2.0%。
高效液相色谱法同时测定食品中苯甲酸山梨酸脱氢乙酸的步骤
高效液相色谱法同时测定食品中苯甲酸山梨酸脱氢乙酸的步骤1 材料与方法：1.1仪器：(1)高效液相色谱仪(2)分析天平，(3)酸度计，(4)离心机，(5)振荡器，(6)超纯水仪；试剂：(1)苯甲酸，(2)山梨酸，(3)脱氢乙酸，(4)甲醇；提取试剂：(1)0.3%盐酸乙醇溶液,(2)0.02mol/L磷酸氢二钾溶液1.2标准溶液的配制精密称取苯甲酸，山梨酸，脱氢乙酸对照品各适量，加乙醇溶解，配制成1.0mg/ml 的标准储备溶液。
1.3色谱参数和条件（1）色谱柱：DIONEX Acclaim 120 C18(4.6*250mm,5μm)（2）流动相：甲醇—0.02mol/L磷酸氢二钾溶液（10:90）（3）流速：1.0ml/min（4）进样量：10μL（5）检测波长：230nm(苯甲酸，山梨酸)，293nm（脱氢乙酸）1.4样品处理1.4.1 固体样品（如熟肉制品.豆制品及糕点类）（1）称取捣碎混匀的样品5g ( 精确至0.01g ) 于具塞三角瓶中，（2）精密加入25ml提取溶剂，振荡1h后，于4℃放置24h ，（3）离心，取上清液3ml，用水定量稀释至10ml，离心，经0.45 μm滤膜过滤，（4）进液相色谱仪分析。
1.4.2 液体样品( 如冷冻饮品)（1）将样品于室温下解冻后，称取10g ( 精确至0.001g ) 于25ml 量瓶中，（2）用提取溶剂定容至刻度，混匀，于4℃放置24h ，（3）离心，取上清液3ml ，用水定量稀释至10ml，离心，经0.45μm滤膜过滤，（4）进液相色谱仪分析。
2数据处理2.1标准曲线与检出限精密量取标准储备溶液适量，用提取溶剂定量稀释制成每ml 中含0.1μg,0.5μg,1μg,4μg,8μg,12μg,16μg,20μg 的标准混合溶液，按前述色谱条件进行测定， 且每个浓度做两组平行试验，以浓度C(μg/ml)为横坐标，峰面积A 为纵坐标制作标准曲线；以浓度C(μg/ml) 对峰面积A 进行线性回归，按信噪比3，计算检出限2.2 精密度和方法回收率试验（1）精密度实验：取同一对照品溶液( 各浓度均为10μg/ml ) ，重复进样，测出各峰面积的 RSD 值。
色谱纯度HPLC分析方法验证报告样式
×××色谱纯度分析方法验证报告目录.............................................................................................................................................................................................. ×××色谱纯度分析方法验证报告批准----------------------------------------------------31. 验证目的 ---------------------------------------------------------------------------42. 色谱纯度分析方法 -------------------------------------------------------------------42.1 仪器 ------------------------------------------------------------------------------42.2 试剂 ------------------------------------------------------------------------------42.3 标准品 ----------------------------------------------------------------------------42.4 色谱条件 --------------------------------------------------------------------------42.5 溶液配制 --------------------------------------------------------------------------52.6 进样操作 --------------------------------------------------------------------------53. 方法验证 ---------------------------------------------------------------------------63.1 专属性 ----------------------------------------------------------------------------63.2 系统适用性试验 --------------------------------------------------------------------93.3 精密度 ----------------------------------------------------------------------------93.4 线性及范围 ------------------------------------------------------------------------113.5 准确度 ----------------------------------------------------------------------------173.6 检测限及定量限 --------------------------------------------------------------------204．验证评价及结论 ---------------------------------------------------------------------215. 附件 -------------------------------------------------------------------------------21×××色谱纯度分析方法验证报告批准对本验证方案批准表示同意其验证项目和可接受标准、验证方法和本方案内的各种表格格式、内容。
高效液相色谱法测定食品中的食用合成色素——日落黄
高效液相色谱法测定食品中的食用合成色素——日落黄一实验部分一实验原理食品中人工合成着色素经聚酰胺吸附法，制备成水溶液，注入高效液相色谱仪，经过反相色谱分离，根据保留时间定性及峰面积比较进行定量。
二实验主要仪器和试剂1.仪器高效液相色谱仪，带紫外检测器、0.45um滤膜(1张)、0.5um滤膜（1）、分析天平、量筒1oml(1),250ml(1)、烧杯1000ml(1),300ml(3)、容量瓶250ml(5),5ml(1),100ml(1)、移液管5ml(1)、研钵(1)、温度计100℃（1）、滴管（1）、电磁炉（1）、G3垂融漏斗（孔径60ml）、PH试纸（1—14）试剂瓶1000ml(2)2药品乙酸（分析纯）、甲醇（色谱纯经0.5um滤膜过滤）、聚酰胺粉（尼龙6过200目筛）、氨水（分析纯）、甲酸（分析纯）、柠檬酸（分析纯）、无水乙醇（分析纯）、饱和硫酸钠、无离子水、0.2%硫酸钠、乙酸铵（分析纯）、合成着色标准溶液：日落黄三仪器工作条件高效液相色谱的工作条件：一般可在室温下进行，采用颗粒极细的固定相，柱内压降很大，流动相黏度很高，需采用高入口压，维持一定的流动相线速。
色谱柱：不锈钢柱流动相：甲醇+0.02 mol/L 乙酸铵溶液,梯度洗脱:甲醇+0.02 mol/L 乙酸铵溶液:甲醇20%，乙酸铵80%，0~5min; 甲醇35%，乙酸铵65%，5~11min:甲醇98%，乙酸铵2%，11~16min；甲醇98%，乙酸铵2%，16~17min；甲醇20%，乙酸铵80%，甲醇20%，乙酸铵80%，17~30min流速: 1.0 mL/min进样量：10ul紫外吸收检测器：适用于梯度洗脱，对流动相速度变化不敏感，流动相组成的变化对检测其响应几乎无影响，但是只有检测其所提供的波长下有较大吸收的分子才能进行检测，流动相的选择受一定限制，既具有一定紫外吸收的溶剂不能做流动相。
每种溶剂都有紫外的截止波长，当小于该截止波长的紫外光通过溶剂时，溶剂的透光率降至百分之十以下，因此监测器的工作波长不能小于溶剂的紫外戒子波长。
化药的回收率如何做
回收率包括绝对回收率和相对回收率。
绝对回收率考察的是经过样品处理后能用于分析的药物的比例。
因为不论是生物基质还是制剂辅料中的药物，经过样品处理都有一定的损失。
做为一个分析方法，绝对回收率一般要求大于50%才行。
它是在空白基质中定量加入药物，经处理后与标准品的比值。
标准品为流动相直接稀释而来，而不是同样品一样处理。
若一样，只是不加基质来处理，可能会有很多影响因素被此屏蔽掉。
如全部转移有机相时只转移了98%等。
也就因此失去了绝对回收率的考察初衷。
相对回收率严格来说有两种。
一种是回收试验法，一种是加样回收试验法。
前者是在空白基质中加入药品，标准曲线也是同此，这种测定用得较多，但有标准曲线重复测定的嫌疑。
第二种是在已知浓度样品中加入药物，来和标准曲线比，标准曲线也是在基质中加药物。
相对回收率主要考察准确度。
准确度系指用该方法测定的结果与真实值或认可的参考值之间接近的程度。
有时也称真实度。
一定的准确度为定量测定的必要条件，因此涉及到定量测定的检测项目均需要验证准确度，如含量测定、杂质定量试验等。
准确度应在规定的范围内建立，对于制剂一般以回收率试验来进行验证。
试验设计需考虑在规定范围内，制备3个不同浓度的试样，各测定3次，即测定9次，报告已知加入量的回收率（％）或测定结果平均值与真实值之差及其可信限。
1.含量测定原料药可用已知纯度的对照品或符合要求的原料药进行测定，或用本法所得结果与已建立准确度的另一方法测定的结果进行比较。
制剂可用含已知量被测物的各组分混合物进行测定。
如不能得到制剂的全部组分，可向制剂中加入已知量的被测物进行测定，必要时，与另一个已建立准确度的方法比较结果。
一般制剂的含量测定的回收率是向辅料中加入处方量80％、100%、120%已知含量的主药，按含量测定的方法测定。
溶出度测定方法的回收率按处方量50％、80％、100％加入主药进行测定。
2.杂质定量试验杂质的定量试验可向原料药或制剂中加入已知量杂质进行测定。
UHPLC－MS
基因毒性杂质研究专栏㊀基金项目:中国食品药品检定研究院关键技术研究基金(Ｎｏ.ＧＪＪＳ－２０２２－４－１)ꎻ＃同为第一作者ꎬ∗同为通信作者作者简介:黄海伟ꎬ男ꎬ副主任药师ꎬ研究方向:药品质量安全研究ꎬＥ－ｍａｉｌ:ｈｕａｎｇｈｗ＠ｎｉｆｄｃ.ｏｒｇ.ｃｎꎻ袁松ꎬ男ꎬ助理研究员ꎬ研究方向:化学药品质量控制研究ꎬＥ－ｍａｉｌ:ｙｕａｎｓｏｎｇ＠ｎｉｆｄｃ.ｏｒｇ.ｃｎ通信作者:刘阳ꎬ男ꎬ研究员ꎬ研究方向:药品质量安全研究ꎬＴｅｌ:０１０－５３８５１５７１ꎬＥ－ｍａｉｌ:ｙａｎｇｌｉｕ＠ｎｉｆｄｃ.ｏｒｇ.ｃｎꎻ张庆生ꎬ男ꎬ主任药师ꎬ研究方向:药品质量安全研究ꎬＴｅｌ:０１０－５３８５１３７５ꎬＥ－ｍａｉｌ:ｚｑｓ＠ｎｉｆｄｃ.ｏｒｇ.ｃｎＵＨＰＬＣ－ＭＳ/ＭＳ法测定盐酸普萘洛尔缓释片中基因毒性杂质Ｎ－亚硝基普萘洛尔黄海伟＃ꎬ袁松＃ꎬ张娜ꎬ张龙浩ꎬ刘阳∗ꎬ张庆生∗(中国食品药品检定研究院ꎬ国家药品监督管理局化学药品质量研究与评价重点实验室ꎬ北京１０２６２９)摘要:目的㊀建立盐酸普萘洛尔缓释片中基因毒性杂质Ｎ－亚硝基普萘洛尔的超高效液相色谱－串联质谱(ＵＨＰＬＣ－ＭＳ/ＭＳ)检测方法ꎮ方法㊀ＷａｔｅｒｓＡＣＱＵＩＴＹＵＰＬＣＣＳＨＴＭＣ１８色谱柱(３.０ｍｍˑ１５０ｍｍꎬ１.７μｍ)ꎬ１０ｍｍｏｌ Ｌ－１甲酸铵的水溶液(含０.１％甲酸)作为流动相Ａꎬ乙腈溶液(含０.１％甲酸)作为流动相Ｂꎬ梯度洗脱ꎬ流速为０.５ｍＬ ｍｉｎ－１ꎬ柱温为５０ħꎬ进样器温度为５ħꎬ进样体积为１０μＬꎬ采用多反应监测(ＭＲＭ)模式ꎬ对盐酸普萘洛尔缓释片中的Ｎ－亚硝基普萘洛尔进行定量检测ꎮ结果㊀Ｎ－亚硝基普萘洛尔在１~２０ｎｇ ｍＬ－１范围内具有良好的线性关系ꎮ低㊁中㊁高３个浓度的加样回收率(ｎ＝３)在９８.４％~１０３.２％之间ꎬＲＳＤɤ２.７％ꎮ检测限和定量限分别为０.０９ｎｇ ｍＬ－１和０.３ｎｇ ｍＬ－１ꎮ检出盐酸普萘洛尔缓释片中基因毒性杂质Ｎ－亚硝基普萘洛尔含量为１.８μｇ ｇ－１ꎮ结论㊀该方法灵敏度高㊁专属性强ꎬ可用于测定盐酸普萘洛尔缓释片中的Ｎ－亚硝基普萘洛尔ꎬ为盐酸普萘洛尔缓释片的质量控制提供参考ꎮ关键词:Ｎ－亚硝基普萘洛尔ꎻ基因毒杂质ꎻ盐酸普萘洛尔缓释片ꎻ含量测定ꎻ超高效液相色谱－串联质谱中图分类号:Ｒ９２７.１㊀文献标志码:Ａ㊀文章编号:２０９５－５３７５(２０２３)０７－０４８１－００４ｄｏｉ:１０.１３５０６/ｊ.ｃｎｋｉ.ｊｐｒ.２０２３.０７.００９ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｇｅｎｏｔｏｘｉｃｉｍｐｕｒｉｔｙＮ－ｎｉｔｒｏｓｏ－ｐｒｏｐｒａｎｏｌｏｌｉｎＰｒｏｐｒａｎｏｌｏｌＨｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅＳｕｓｔａｉｎｅｄ－ｒｅｌｅａｓｅＴａｂｌｅｔｓｂｙＵＨＰＬＣ－ＭＳ/ＭＳＨＵＡＮＧＨａｉｗｅｉ＃ꎬＹＵＡＮＳｏｎｇ＃ꎬＺＨＡＮＧＮａꎬＺＨＡＮＧＬｏｎｇｈａｏꎬＬＩＵＹａｎｇ∗ꎬＺＨＡＮＧＱｉｎｇｓｈｅｎｇ∗(ＮＭＰＡＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｆｏｒＱｕａｌｉｔｙＲｅｓｅａｒｃｈａｎｄＥｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆＣｈｅｍｉｃａｌＤｒｕｇｓꎬＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｆｏｒＦｏｏｄａｎｄＤｒｕｇＣｏｎｔｒｏｌꎬＢｅｉｊｉｎｇ１０２６２９ꎬＣｈｉｎａ)Ａｂｓｔｒａｃｔ:Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ㊀ＴｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｎＵＨＰＬＣ－ＭＳ/ＭＳｍｅｔｈｏｄｆｏｒｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆＮ－ｎｉｔｒｏｓｏ－ｐｒｏｐｒａｎｏｌｏｌｉｎＰｒｏｐ￣ｒａｎｏｌｏｌＨｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅＳｕｓｔａｉｎｅｄ－ｒｅｌｅａｓｅＴａｂｌｅｔｓ.Ｍｅｔｈｏｄｓ㊀ＴｈｅｓｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆＮ－ｎｉｔｒｏｓｏ－ｐｒｏｐｒａｎｏｌｏｌｗａｓｐｅｒｆｏｒｍｅｄｏｎａＷａｔｅｒｓＡＣＱＵＩＴＹＵＰＬＣＣＳＨＴＭＣ１８ｃｏｌｕｍｎ(１５０ｍｍˑ３.０ｍｍꎬ１.７μｍ)ｗｉｔｈ１０ｍｍｏｌ Ｌ－１ａｍｍｏｎｉｕｍｆｏｒｍａｔｅａｑｕｅｏｕｓｓｏ￣ｌｕｔｉｏｎ(ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ０.１％ｆｏｒｍｉｃａｃｉｄ)ａｓｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅＡａｎｄａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅｓｏｌｕｔｉｏｎ(ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ０.１％ｆｏｒｍｉｃａｃｉｄ)ａｓｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅＢｕｎｄｅｒａｇｒａｄｉｅｎｔｅｌｕｔｉｏｎａｔａｆｌｏｗｒａｔｅｏｆ０.５ｍＬ ｍｉｎ－１ａｎｄａｃｏｌｕｍｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｏｆ５０ħ.Ｍｕｌｔｉｐｌｅｒｅａｃｔｉｏｎｍｏｎｉ￣ｔｏｒｉｎｇ(ＭＲＭ)ｗａｓｐｅｒｆｏｒｍｅｄｏｎａｔｒｉｐｌｅｑｕａｄｒｕｐｏｌｅｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒｉｎｐｏｓｉｔｉｖｅｍｏｄｅ.Ｒｅｓｕｌｔｓ㊀Ｔｈｅｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎｃｕｒｖｅｓｗａｓｉｎｇｏｏｄｌｉｎｅａｒｉｔｙｉｎｔｈｅｒａｎｇｅｏｆ１~２０ｎｇ ｍＬ－１.Ｔｈｅｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓ(ｎ＝３)ａｔｌｏｗꎬｍｉｄｄｌｅａｎｄｈｉｇｈｓｐｉｋｅｄｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｗｅｒｅｗｉｔｈｉｎ９８.４％~１０３.２％ｗｉｔｈＲＳＤｕｎｄｅｒ２.７％.Ｔｈｅｌｉｍｉｔｏｆｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｓ０.０９ｎｇ ｍＬ－１ꎬａｎｄｔｈｅｌｉｍｉｔｏｆｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｗａｓ０.３ｎｇ ｍＬ－１.ＵｓｉｎｇｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｅｄｍｅｔｈｏｄꎬｗｅｄｅｔｅｃｔｅｄｔｈｅＮ－ｎｉｔｒｏｓｏ－ｐｒｏｐｒａｎｏｌｏｌｉｎＰｒｏｐｒａｎｏｌｏｌＨｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅＳｕｓ￣ｔａｉｎｅｄ－ｒｅｌｅａｓｅＴａｂｌｅｔｓｗａｓ１.８μｇ ｇ－１.Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ㊀ＴｈｅｍｅｔｈｏｄｗａｓｓｅｎｓｉｔｉｖｅａｎｄａｃｃｕｒａｔｅꎬｗｈｉｃｈｃａｎｂｅａｐｐｌｉｅｄｆｏｒｔｈｅｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｓｏｆＮ－ｎｉｔｒｏｓｏ－ｐｒｏｐｒａｎｏｌｏｌｉｎＰｒｏｐｒａｎｏｌｏｌＨｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅＳｕｓｔａｉｎｅｄ－ｒｅｌｅａｓｅＴａｂｌｅｔｓꎬｐｒｏｖｉｄｉｎｇｒｅｆｅｒｅｎｃｅｆｏｒｑｕａｌｉｔｙｃｏｎｔｒｏｌｏｆＰｒｏｐｒａｎｏｌｏｌＨｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅＳｕｓｔａｉｎｅｄＲｅｌｅａｓｅｔａｂｌｅｔｓ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ:Ｎ－ｎｉｔｒｏｓｏ－ｐｒｏｐｒａｎｏｌｏｌꎻＧｅｎｏｔｏｘｉｃｉｍｐｕｒｉｔｙꎻＰｒｏｐｒａｎｏｌｏｌｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅｅｘｔｅｎｄｅｄ－ｒｅｌｅａｓｅｔａｂｌｅｔｓꎻＡｓｓａｙꎻＵＨＰＬＣ－ＭＳ/ＭＳ㊀㊀盐酸普萘洛尔化学名称为１－异丙基－３－(１－萘氧基)－２－丙醇盐酸盐(见图１Ａ)ꎬ盐酸普萘洛尔为非选择性竞争抑制β受体阻滞剂[１]ꎬ临床上常用于高血压㊁心律失常和心绞痛的治疗[２－３]ꎮ２０２２年３月加拿大卫生部(ＨｅａｌｔｈＣａｎａｄａ)发布通告ꎬ辉瑞制药公司自愿召回６０㊁８０㊁１２０㊁１６０ｍｇ４种规格共２９批次盐酸普萘洛尔缓释胶囊ꎬ此次召回是因为在这些批次中检测出超过每天允许摄入量的Ｎ－亚硝基普萘洛尔(见图１Ｂ)[４－５]ꎮＮ－亚硝基类化合物具有直接或间接的致癌作用ꎬ长期小剂量接触或单次较大剂量接触都可能致癌[６－８]ꎬ亚硝胺类化合物是由于药物生产过程中发生了某些副反应而产生ꎮ自２０１８年缬沙坦中Ｎ－二甲基亚硝胺(ＮＤＭＡ)检出以来ꎬ又有Ｎ－二乙基亚硝胺(ＮＤＥＡ)㊁Ｎ－亚硝基－Ｎ－甲基－４－氨基丁酸(ＮＭＢＡ)等杂质陆续在药品中检出ꎬ国家药品监督管理局㊁美国食品药品监督管理局(ＦＤＡ)以及欧洲药品管理局(ＥＭＡ)都发布了有关药品中遗传毒性杂质控制策略㊁检测方法以及限度要求等指导原则ꎬ多个药品因Ｎ－亚硝基类化合物超出每日允许摄入量被召回[９－１１]ꎮ已报道的Ｎ－亚硝基类化合物主要分为两类ꎬ一类与药物本身结构无关ꎬ在药品生产过程中由残留溶剂等引入ꎬ例如ＮＤＭＡ㊁ＮＤＥＡ等ꎻ一类则直接与药物本身相关ꎬ通常是原料药中的仲胺结构与微量残留的亚硝酸盐反应生成相应的杂质[１２－１４]ꎮＮ－亚硝基普萘洛尔属于上述的第二类杂质ꎬ只在普萘洛尔相关制剂中被发现ꎮ目前尚无该基因毒性杂质检测及限度的相关报道ꎬ本文拟采用超高效液相色谱－串联质谱(ＵＨＰＬＣ－ＭＳ/ＭＳ)建立盐酸普萘洛尔缓释片中Ｎ－亚硝基普萘洛尔的检测方法ꎬ为盐酸普萘洛尔中遗传毒性杂质检查和质量控制提供参考依据ꎮ１㊀材料１.１㊀仪器㊀Ａｇｉｌｅｎｔ１２９０－６４７０液相色谱－串联三重四级杆质谱仪(美国Ａｇｉｌｅｎｔ公司)ꎬ配备电喷雾离子源(ＥＳＩ)和Ｍａｓｓｈｕｎｔｅｒ数据处理系统ꎻＸＰ２０５ＤＲ型电子分析天平(瑞士Ｍｅｔｔｌｅｒ公司)ꎬＭｉｌｌｉ－Ｑ超纯水纯化系统(美国Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ公司)ꎮ１.２㊀药物与试剂㊀甲醇(质谱级ꎬ美国ＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎ￣图１㊀盐酸普萘洛尔(Ａ)及Ｎ－亚硝酸普萘洛尔(Ｂ)的结构式ｔｉｆｉｃ公司)ꎬ乙腈(质谱级ꎬ美国Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ公司)ꎬ甲酸(质谱级ꎬ德国Ｍｅｒｃｋ公司)ꎬ甲酸铵(质谱级ꎬ美国ＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ公司)ꎬ水为超纯水ꎬＮ－亚硝基普萘洛尔对照品(批号:ＰＮ２０２２０３１２ꎬＰＥＲＩＤＡ公司ꎬ纯度９６.８％)ꎬ盐酸普萘洛尔缓释片(市场采购)ꎮ２㊀方法与结果２.１㊀溶液制备㊀２.１.１㊀标准曲线对照品溶液制备㊀精密称取Ｎ－亚硝基普萘洛尔对照品１０.４３ｍｇꎬ置１００ｍＬ量瓶中ꎬ加甲醇使溶解并稀释至刻度ꎬ摇匀ꎬ作为对照品储备液ꎮ精密量取对照品储备液０.１ｍＬꎬ置１００ｍＬ量瓶中ꎬ用甲醇稀释至刻度ꎬ摇匀ꎬ精密量取１.０㊁２.０㊁５.０㊁７.０㊁１０.０㊁１０.０ｍＬ上述溶液分别置１００㊁１００㊁１００㊁１００㊁１００㊁５０ｍＬ量瓶中ꎬ用甲醇稀释至刻度ꎬ摇匀ꎬ作为浓度分别约为１.０㊁２.０㊁５.０㊁７.０㊁１０.０㊁２０.０ｎｇ ｍＬ－１的系列线性溶液ꎮ２.１.２㊀供试品溶液制备㊀取本品１０片ꎬ精密称定ꎬ研细ꎬ混匀ꎬ精密称取约相当于盐酸普萘洛尔２０ｍｇ的细粉ꎬ置１５ｍＬ离心管中ꎬ精密加入甲醇５ｍＬꎬ涡旋３ｍｉｎꎬ滤过ꎬ取续滤液作为供试品溶液ꎮ２.２㊀色谱及质谱条件㊀２.２.１㊀色谱条件㊀采用ＷａｔｅｒｓＡＣＱＵＩＴＹＵＰＬＣＣＳＨＴＭＣ１８(１５０ｍｍˑ３.０ｍｍꎬ１.７μｍ)色谱柱ꎻ以１０ｍｍｏｌ Ｌ－１甲酸铵的水溶液(含０.１％甲酸)作为流动相Ａꎬ乙腈溶液(含０.１％甲酸)作为流动相Ｂꎬ梯度洗脱:０.０~５.０ｍｉｎꎬ５０％Ｂꎻ５.０~７.０ｍｉｎꎬ５０％Ｂң７０％Ｂꎻ７.０~９.０ｍｉｎꎬ７０％Ｂꎻ９.０~９.０ｍｉｎꎬ７０％Ｂң５０％Ｂꎻ９.０~１３.０ｍｉｎꎬ５０％Ｂꎻ流速为０.５ｍＬ ｍｉｎ－１ꎬ柱温为５０ħꎬ进样器温度为５ħꎬ进样体积为１０μＬꎮ２.２.２㊀质谱条件㊀采用电喷雾离子源(ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｙＩｏｎｉｚａｔｉｏｎＳｏｕｒｃｅꎬＥＳＩ)ꎬ正离子检测模式ꎬ干燥气温度为３００ħꎬ干燥气流量为６Ｌ ｍｉｎ－１ꎬ喷雾电压为３５ｐｓｉꎬ鞘气温度为３５０ħꎬ鞘气流量为１０Ｌ ｍｉｎ－１ꎬ毛细管电压为４５００Ｖꎮ采集方式为多反应监测(ＭｕｌｔｉｐｌｅｒｅａｃｔｉｏｎｍｏｎｉｔｏｒꎬＭＲＭ)模式ꎬ以ｍ/ｚ２８９.２ң７２.２作为定量离子对ꎬ碎裂电压为７８Ｖꎬ碰撞电压为１２Ｖꎬ以ｍ/ｚ２８９.２ң１４５.１作为定性离子对ꎬ碎裂电压为７８Ｖꎬ碰撞电压为１２Ｖꎮ２.３㊀方法学考察㊀２.３.１㊀专属性试验㊀取甲醇作为空白溶剂和 ２.１.１ 项下１ｎｇ ｍＬ－１的对照品溶液ꎬ分别进样ꎬ记录色谱图(见图２)ꎬ在所建立的色谱和质谱条件下ꎬＮ－亚硝基普萘洛尔的保留时间为６.７４ｍｉｎꎬ峰型良好ꎬ空白溶剂对检测无干扰ꎮＡ.甲醇溶液ꎻＢ.对照品溶液图２㊀甲醇和对照品溶液提取离子流色谱图２.３.２㊀检测限与定量限试验㊀取 ２.１.１ 项下１ｎｇ ｍＬ－１的线性溶液ꎬ以甲醇为稀释剂逐步稀释ꎬ分别在信噪比(Ｓ/Ｎ)为１０ʒ１和３ʒ１时作为定量限和检测限ꎬ测得Ｎ－亚硝基普萘洛尔的定量限和检测限分别为０.３㊁０.０９ｎｇ ｍＬ－１ꎮ２.３.３㊀线性关系考察㊀精密量取 ２.１.１ 项下系列线性溶液ꎬ进样检测ꎬ记录色谱图ꎮ以Ｎ－亚硝基普萘洛尔峰面积Ｙ为纵坐标ꎬ以质量浓度Ｘ(ｎｇ ｍＬ－１)为横坐标进行线性回归ꎬ得Ｎ－亚硝基普萘洛尔的线性回归方程为Ｙ＝２５６３.３８Ｘ－１６１.３８(ｒ＝０.９９９９)ꎬ结果表明在１.０１~２０.１９ｎｇ ｍＬ－１浓度范围内ꎬＮ－亚硝基普萘洛尔峰面积与质量浓度之间呈良好的线性关系ꎮ２.３.４㊀精密度和重复性试验㊀取 ２.１.１ 项下５.０ｎｇ ｍＬ－１的线性溶液连续进样６次ꎬ得Ｎ－亚硝基普萘洛尔峰面积的ＲＳＤ为１.１３％ꎬ结果表明系统精密度良好ꎮ取盐酸普萘洛尔缓释片ꎬ按 ２.１.２ 项下方法平行制备６份供试品溶液ꎬ进样检测ꎬ按标准曲线法计算Ｎ－亚硝基普萘洛尔含量ꎬ计算得６份供试品溶液中Ｎ－亚硝基普萘洛尔含量的ＲＳＤ为３.５８％ꎮ结果表明方法具有良好的重复性ꎮ２.３.５㊀稳定性试验㊀取 ２.１.１ 项下５.０ｎｇ ｍＬ－１的线性溶液ꎬ放置于进样盘ꎬ分别在０㊁８ｈ进样检测ꎬ结果Ｎ－亚硝基普萘洛尔峰面积的相对偏差为２.９６％ꎬ结果表明５ħ条件下对照品溶液在８ｈ内稳定ꎻ取 ２.３.４ 项下１份重复性试验供试溶液ꎬ放置于进样盘ꎬ分别在０㊁２㊁５㊁７ｈ进样检测ꎮ结果Ｎ－亚硝基普萘洛尔峰面积的ＲＳＤ(ｎ＝４)为２.６６％ꎬ结果表明５ħ条件下供试品溶液在７ｈ内稳定ꎮ２.３.６㊀提取效率试验㊀取盐酸普萘洛尔缓释片ꎬ按 ２.１.２ 项下方法平行制备２份供试品溶液ꎬ其中１份涡旋３ｍｉｎꎬ另一份涡旋１０ｍｉｎꎬ进样检测ꎬ按标准曲线法计算Ｎ－亚硝基普萘洛尔含量ꎬ计算得２份供试品溶液中Ｎ－亚硝基普萘洛尔含量相对标对偏差为３.７７％ꎮ结果表明涡旋３ｍｉｎ可提取完全ꎮ２.３.７㊀回收率试验㊀取盐酸普萘洛尔缓释片ꎬ精密称定ꎬ研细ꎬ混匀ꎬ精密称取细粉约５７ｍｇ(约相当于盐酸普萘洛尔２０ｍｇ)ꎬ置１５ｍＬ离心管中ꎬ精密加入 ２.１.１ 项下１０ｎｇ ｍＬ－１(高浓度)㊁５ｎｇ ｍＬ－１(中浓度)㊁２ｎｇ ｍＬ－１(低浓度)的线性溶液５ｍＬꎬ涡旋３ｍｉｎꎬ滤过ꎬ取续滤液作为回收率溶液ꎬ每个浓度点平行制备３份ꎬ进样检测ꎬ结果见表１ꎬ低㊁中㊁高浓度点的回收率分别为９８.４％(ＲＳＤ２.７％ꎬｎ＝３)㊁１０１.６％(ＲＳＤ１.１％ꎬｎ＝３)㊁１０３.２％(ＲＳＤ１.５％ꎬｎ＝３)ꎬ结果表明回收率良好ꎮ表１㊀加样回收率结果编号加入量检测量本底回收率平均回收ＲＳＤ５２６.１０６１.７４３５.１８１０１.７６１０１.６１.１２.４㊀样品测定㊀按 ２.１ 项下制备盐酸普萘洛尔缓释片供试品溶液ꎬ照 ２.２ 项下条件进样检测ꎬ记录色谱图ꎬ以峰面积按标准曲线法计算供试品溶液中Ｎ－亚硝基普萘洛尔的含量ꎬ测得盐酸普萘洛尔缓释片中Ｎ－亚硝基普萘洛尔含量为１.８μｇ ｇ－１ꎮ３㊀讨论由于盐酸普萘洛尔供试品溶液浓度较高ꎬ普萘洛尔峰与Ｎ－亚硝基普萘洛尔峰需要达到较大的分离度ꎬ才能将普萘洛尔峰切入废液不至于干扰杂质的检测ꎬ所以首先对不同类型的色谱柱进行了考察ꎬ最终选用ＷａｔｅｒｓＡＣＱＵＩＴＹＵＰＬＣＣＳＨＴＭＣ１８色谱柱ꎬＮ－亚硝基普萘洛尔峰型良好ꎬ且可与普萘洛尔峰完全分离ꎬ但两者洗脱时间较长ꎬ为提高实验效率在此基础上对色谱条件进行优化ꎬ增加有机相比例以缩短分析时间ꎻ不同流动相系统对色谱保留和杂质的质谱响应影响非常大ꎬ对流动相系统进行了考察ꎬ当采用乙腈为流动相时体系ꎬＮ－亚硝基普萘洛尔出峰较快ꎬ且质谱响应增强ꎬ可满足分析的分离度要求ꎮ前期的试验显示Ｎ－亚硝基普萘洛尔在甲醇中易溶ꎬ在乙腈中微溶ꎬ以甲醇－水作为溶剂为较优选择ꎬ但缓释片加极少量水后即成凝胶状无法进样检测ꎬ为保证提取完全和样品检测的准确性ꎬ选择了以甲醇作为溶剂ꎬ以甲醇作为溶剂时ꎬ存在一定的溶剂效应ꎬＮ－亚硝基普萘洛尔峰前沿ꎬ峰形变宽ꎬ灵敏度降低ꎬ为此ꎬ采用较大内径的色谱柱ꎬ并增加进样体积至１０μＬꎬ即可满足Ｎ－亚硝基普萘洛尔检测灵敏度的要求ꎮ目前未见Ｎ－亚硝基普萘洛尔的毒理学数据ꎬ暂无明确控制限度ꎬ提示药品研发生产㊁相关科研机构应对杂质进行深入的毒理研究以建立合理的控制限度ꎬ保障用药安全ꎮ４㊀结论本研究建立了盐酸普萘洛尔缓释片中Ｎ－亚硝基普萘洛尔的ＵＨＰＬＣ－ＭＳ/ＭＳ检测方法ꎬ并进行了相关方法学验证ꎬ结果表明ꎬ所建立的方法具有良好的专属性㊁灵敏度和准确度ꎬ可准确测定盐酸普萘洛尔缓释片中潜在的Ｎ－亚硝基普萘洛尔的含量ꎬ有助于盐酸普萘洛尔缓释片的市场监管ꎬ保障药品质量安全ꎮ参考文献:[１]㊀ＧＲＥＣＯＡꎬＤᶄＥＲＭＥＡＭꎬＧＡＬＬＡＲＡＴＩＢＺꎬｅｔａｌ.Ａｆｕｒ￣ｔｈｅｒｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅｏｆｐｒｏｐｒａｎｏｌｏｌｆｏｒｓｅｖｅｒｅｉｎｆａｎｔｉｌｅｈｅｍａｎ￣ｇｉｏｍａｓｏｆｔｈｅｆａｃｅ:ａｎｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎａｌｓｔｕｄｙ[Ｊ].ＤｅｒｍａｔｏｌＴ￣ｈｅｒꎬ２０１４ꎬ２７(４):１９８－２０２.[２]ＣＨＯＢＡＮＩＡＮＡＶꎬＢＡＫＲＩＳＧＬꎬＢＬＡＣＫＨＲꎬｅｔａｌ.ＴｈｅｓｅｖｅｎｔｈｒｅｐｏｒｔｏｆｔｈｅＪｏｉｎｔｎａｔｉｏｎａｌｃｏｍｍｉｔｔｅｅｏｎｐｒｅｖｅｎ￣ｔｉｏｎꎬｄｅｔｅｃｔｉｏｎꎬｅｖａｌｕａｔｉｏｎꎬａｎｄｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｈｉｇｈｂｌｏｏｄｐｒｅｓｓｕｒｅ－ＴｈｅＪＮＣ７ｒｅｐｏｒｔ[Ｊ].ＪＡＭＡꎬ２００３ꎬ２８９(１９):２５６０－２５７２.[３]汪传辉.普萘洛尔在临床上的合理应用[Ｊ].中国药业ꎬ１９９７(１０):２７－２８.[４]ＨｅａｌｔｈＣａｎａｄａ.Ｐｆｉｚｅｒｒｅｃａｌｌｓｄｅｒａｌ－ＬＡ(ＰｒｏｐｒａｎｏｌｏｌＨｙｄｒｏ￣ｃｈｌｏｒｉｄｅ)ｃａｐｓｕｌｅｓｄｕｅｔｏａｎｉｔｒｏｓａｍｉｎｅｉｍｐｕｒｉｔｙ[Ｊ/ＯＬ].[２０２１－０３－０１].ｈｔｔｐｓ://ｒｅｃａｌｌｓ－ｒａｐｐｅｌｓ.ｃａｎａｄａ.ｃａ/ｅｎ/ａｌｅｒｔ－ｒｅｃａｌｌ/ｐｆｉｚｅｒ－ｒｅｃａｌｌｓ－ｉｎｄｅｒａｌ－ｐｒｏｐｒａｎｏｌｏｌ－ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ－ｃａｐｓｕｌｅｓ－ｄｕｅ－ｎｉｔｒｏｓａｍｉｎｅ－ｉｍｐｕｒｉｔｙ＃ｗｂ－ａｕｔｏ－２. [５]ＨｅａｌｔｈＣａｎａｄａ.Ｉｎｄｅｒａｌ－ＬＡ:ＮｉｔｒｏｓａｍｉｎｅＩｍｐｕｒｉｔｙ[Ｊ/ＯＬ].[２０２１－０３－０２].ｈｔｔｐｓ://ｒｅｃａｌｌｓ－ｒａｐｐｅｌｓ.ｃａｎａｄａ.ｃａ/ｅｎ/ａｌｅｒｔ－ｒｅｃａｌｌ/ｉｎｄｅｒａｌ－ｎｉｔｒｏｓａｍｉｎｅ－ｉｍｐｕｒｉｔｙ. [６]ＡＮＤＲＺＥＪＥＷＳＫＩＰꎬＫＡＳＰＲＺＹＫ－ＨＯＲＤＥＲＮＢꎬＮＡＷＲＯＣＫＩＪ.ＴｈｅｈａｚａｒｄｏｆＮ－ｎｉｔｒｏｓｏｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ(ＮＤＭＡ)ｆｏｒｍａｔｉｏｎｄｕｒｉｎｇｗａｔｅｒｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎｗｉｔｈｓｔｒｏｎｇｏｘｉｄａｎｔｓ[Ｊ].Ｄｅｓａｌｉｎａｔｉｏｎꎬ２００５ꎬ１７６(１/２/３):３７－４５. [７]ＳＥＮＴＨＯＮＧＰꎬＢＯＲＩＢＯＯＮＵ.Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆｏｃｃｕｐａｔｉｏｎａｌｅｘｐｏｓｕｒｅｔｏｎｉｔｒｏｓａｍｉｎｅꎬｃａｒｂｏｎｂｌａｃｋａｎｄｄｕｓｔｉｎｒｕｂｂｅｒｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇｉｎｄｕｓｔｒｙ[Ｊ].ＩｎｔＪＯｃｃｕｐＥｎｖｉｒｏｎＭｅｄꎬ２０１７ꎬ８(３):１８１－１８３.[８]ＰＲＥＵＳＳＭＡＮＮＲ.ＣａｒｃｉｎｏｇｅｎｉｃＮ－ｎｉｔｒｏｓｏｃｏｍｐｏｕｎｄｓａｎｄｔｈｅｉｒｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ[Ｊ].Ｎａｔｕｒｗｉｓｓｅｎｓｃｈａｆｔｅｎꎬ１９８４ꎬ７１(１):２５－３０.[９]ＦＤＡ.ＬｕｐｉｎＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓꎬＩｎｃ.ＩｓｓｕｅｓＶｏｌｕｎｔａｒｉｌｙＮａｔｉｏｎｗｉｄｅＲｅｃａｌｌｏｆＯｎｅＬｏｔｏｆＭｅｔｆｏｒｍｉｎＨｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅＥｘｔｅｎｄｅｄ－ＲｅｌｅａｓｅＴａｂｌｅｔｓＵＳＰꎬ５００ｍｇＤｕｅｔｏｔｈｅＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＮ－Ｎｉｔｒｏｓｏｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ(ＮＤＭＡ)[Ｊ/ＯＬ].[２０２０－０６－１１].ｈｔｔｐｓ://ｗｗｗ.ｐｒｎｅｗｓｗｉｒｅ.ｃｏｍ/ｎｅｗｓ－ｒｅｌｅａｓｅｓ/ｌｕｐｉｎ－ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ－ｉｎｃ－ｉｓｓｕｅｓ－ｖｏｌｕｎｔａｒｉｌｙ－ｎａｔｉｏｎｗｉｄｅ－ｒｅｃａｌｌ－ｏｆ－ｏｎｅ－ｌｏｔ－ｏｆ－ｍｅｔｆｏｒｍｉｎ－ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ－ｅｘｔｅｎｄｅｄ－ｒｅｌｅａｓｅ－ｔａｂｌｅｔｓ－ｕｓｐ－５００ｍｇ－ｄｕｅ－ｔｏ－ｔｈｅ－ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ－ｏｆ－ｎ－ｎｉ￣ｔｒｏｓｏｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ－ｎｄｍａ－３０１０７４１８９.ｈｔｍｌ.[１０]ＨｅａｌｔｈＣａｎａｄａ.ＡｕｒｏＰｈａｒｍａＩｎｃ.ｖｏｌｕｎｔａｒｉｌｙｒｅｃａｌｌｓｏｎｅｌｏｔｏｆＡｕｒｏ－ＩｒｂｅｓａｒｔａｎＨＣＴｔａｂｌｅｔｓｂｅｃａｕｓｅｏｆｎｉｔｒｏｓａｍｉｎｅｉｍｐｕｒｉｔｙ[Ｊ/ＯＬ].[２０１９－０４－１８].ＡｕｒｏＰｈａｒｍａＩｎｃ.ｖｏｌ￣ｕｎｔａｒｉｌｙｒｅｃａｌｌｓｏｎｅｌｏｔｏｆＡｕｒｏ－ＩｒｂｅｓａｒｔａｎＨＣＴｔａｂｌｅｔｓｂｅｃａｕｓｅｏｆｎｉｔｒｏｓａｍｉｎｅｉｍｐｕｒｉｔｙ－Ｃａｎａｄａ.ｃａ.[１１]ＦＤＡ.ＰｆｉｚｅｒＩｓｓｕｅｓａＶｏｌｕｎｔａｒｙＮａｔｉｏｎｗｉｄｅＲｅｃａｌｌｆｏｒＴｗｅｌｖｅＬｏｔｓｏｆＣＨＡＮＴＩＸ(Ｖａｒｅｎｉｃｌｉｎｅ)ＴａｂｌｅｔｓＤｕｅｔｏＮ－ＮｉｔｒｏｓｏＶａｒｅｎｉｃｌｉｎｅＣｏｎｔｅｎｔ[Ｊ/ＯＬ].[２０２１－０７－１９].ｈｔ￣ｔｐｓ://ｗｗｗ.ｆｄａ.ｇｏｖ/ｓａｆｅｔｙ/ｒｅｃａｌｌｓ－ｍａｒｋｅｔ－ｗｉｔｈｄｒａｗａｌｓ－ｓａｆｅｔｙ－ａｌｅｒｔｓ/ｐｆｉｚｅｒ－ｉｓｓｕｅｓ－ｖｏｌｕｎｔａｒｙ－ｎａｔｉｏｎｗｉｄｅ－ｒｅｃａｌｌ－ｔｗｅｌｖｅ－ｌｏｔｓ－ｃｈａｎｔｉｘｒ－ｖａｒｅｎｉｃｌｉｎｅ－ｔａｂｌｅｔｓ－ｄｕｅ－ｎ－ｎｉｔｒｏｓｏ. [１２]ＫＡＯＹＴꎬＷＡＮＧＳＦꎬＷＵＭＨ.ｅｔａｌ.Ａｓｕｂｓｔｒｕｃｔｕｒｅ－ｂａｓｅｄｓｃｒｅｅｎｉｎｇａｐｐｒｏａｃｈｔｏｕｎｃｏｖｅｒＮ－ｎｉｔｒｏｓａｍｉｎｅｓｉｎｄｒｕｇｓｕｂ￣ｓｔａｎｃｅｓ[Ｊ].ＪＦｏｏｄＤｒｕｇＡｎａｌꎬ２０２２ꎬ３０(１):１５０－１６２. [１３]ＢＯＤＩＮＴꎬＶＯＲＡＳＩＴＶ.ＮｉｔｒｏｓａｍｉｎｅＣｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎｉｎＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ:ＴｈｒｅａｔꎬＩｍｐａｃｔꎬａｎｄＣｏｎｔｒｏｌ[Ｊ].ＪＰｈａｒｍＳｃｉꎬ２０２１ꎬ１１０(９):３１１８－３１２８.[１４]ＳＯＮＡＬＩＳＢ.Ｃｒｉｔｉｃａｌａｎａｌｙｓｉｓｏｆｄｒｕｇｐｒｏｄｕｃｔｒｅｃａｌｌｓｄｕｅｔｏｎｉｔｒｏｓａｍｉｎｅｉｍｐｕｒｉｔｉｅｓ[Ｊ].ＪＭｅｄＣｈｅｍꎬ２０２１ꎬ６４(６):２９２３－２９３６.(收稿日期:２０２３－０２－２５)。
含量测定
-相当于标示量%的计算公式片剂：V ×F ×T/W ×平均片重/标示量×100%针剂： V ×F ×T/W/标示量（g/ml ） ×100%-以重量/片计的计算公式：V ×F ×T/W ×平均片重=重量/片例1司可巴比妥钠胶囊含量测定：精密称取内容物0.1385g ，置碘量瓶中，加水10mL ，振摇使溶解，精密加溴滴定液（0.05mol/L ）25 mL ，再加盐酸5 mL ，立即密塞并振摇1分钟，暗处静置15分钟后，加碘化钾试液10 mL ，立即密塞，摇匀，用硫代硫酸钠滴定液（0.1mol/L ，F=0.992）滴定，至近终点时加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正。
已知：样品消耗硫代硫酸钠滴定液（0.1mol/L ）17.05 mL ，空白试验消耗25.22mL ，每1mL 溴滴定液（0.05mol/L ）相当于13.01mg 的司可巴比妥钠。
计算本品相当于标示量的百分含量（规格0.1g ，20粒胶囊内容物重2.7506 g ）？ (p.90－生成物滴定法)司可巴比妥钠的滴定度计算1摩尔司可巴比妥钠与1摩尔溴相当T=MA ×mB ×a/b ＝260.2×0.05×1/1＝13.01mg/ml 计算：(25.22－ 17.05)× 13.01×0.992× 2.7506 /0.1385× 0.1× 1000× 20例2精密量取维生素C 注射液4mL （相当于维生素C 0.2g ），加水15mL 与丙酮2mL ，摇匀，放置5分钟，加稀醋酸4mL 与淀粉指示液1mL ，用碘滴定液(0.05mol/L)滴定至溶液显蓝色，并持续30秒钟不退。
已知：注射液规格2mL:0.1g ，消耗0.05mol/L 碘滴定液（F=1.005）22.45mL ，维生素C 的分子量为176.12，问：♦ （1）丙酮和稀醋酸分别起什么作用？C ？1摩尔维生素C 与1摩尔碘相当T ＝0.05×176.12×1/1♦ （3）求本品相当于标示量的百分含量？二、光谱分析（一）、UV 法1、标准对照法（一点法）–A样/A标= C样/C标，–样品%= A样/A标×C标×F/W×100%–F=稀释倍数–W=取样量2、百分吸收系数法（A= E1%cm×C×L）–C% = A / E1%cm–样品% = A / E1%cm ×F/W– F = 稀释倍数和浓度换算因子–W = 取样量3、标准曲线法（y=bx＋a）–由标准曲线或回归方程求出C样，再根据F，W求出样品%。
盐酸吡格列酮片含量测定方法学的研究
盐酸吡格列酮片含量测定方法学的研究庄文斌;曾晨笛;杨爱群;肖文豪;陈吉生【摘要】目的开发简单、快速、经济及灵敏度高的测定盐酸吡格列酮片含量的方法学.方法使用HPLC法,采用甲醇-水(80:20)为流动相,流速为1.0 ml/min,检测波长为224 nm.结果盐酸吡格列酮片在10～100 μg/ml范围内线性良好;样品溶液至少在24 h内稳定;精密度RSD=0.36%;最低检测限为0.08 μg;平均回收率为98.9%,RSD=0.56%.结论将有机相中的乙腈换成甲醇,不但能够准确且便捷的测定出盐酸吡格列酮片的含量,还能节约成本,减少对人体健康的危害.【期刊名称】《中国现代药物应用》【年(卷),期】2010(004)013【总页数】2页(P10-11)【关键词】盐酸吡格列酮;高效液相色谱法;含量测定【作者】庄文斌;曾晨笛;杨爱群;肖文豪;陈吉生【作者单位】510080,广东药学院附属第一医院;广东药学院;510080,广东药学院附属第一医院;510080,广东药学院附属第一医院;510080,广东药学院附属第一医院【正文语种】中文盐酸吡格列酮是目前最新的噻唑烷二酮类药物，近年来，随着越来越多人对盐酸吡格列酮的研究，其制剂开发、含量测定方法学也逐渐有报道，但由于中国药典2005版和2010版，均无收录盐酸吡格列酮，查阅文献，关于盐酸吡格列酮片含量测定方法，采用流动相的有机相大多数为乙腈，由于乙腈价格昂贵、对人体的毒性较大［1］。
为有效控制其质量标准，本文通过方法学摸索，开发出简单、快速、经济、低毒及灵敏度高的测定盐酸吡格列酮片含量的方法，为进一步开发盐酸吡格列酮新的制剂提供质量控制参考。
1 仪器与试剂仪器:Waters高效液相色谱系统(沃特Water科技上海有限公司):1525泵，2487可变波长紫外检测器，Breeze色谱工作站。
盐酸吡格列酮对照品(中国药品生物制品检定所，批号:100634－200401);盐酸吡格列酮片(15 mg/片，日本武田药品工业株式会社，分装批号:070401;081101;090101);试剂:甲醇为色谱纯;乙醇、氨水均为分析纯。
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HPLC回收率的计算公式
HPLC回收率是指在高效液相色谱（HPLC）分离过程中，目标化合物实际回收的比例，通常用于评价HPLC分离方法的准确性及可重复性。
具体计算公式如下：
HPLC回收率（%）=（目标化合物实际回收量÷ 标准物质加入量）× 100%
其中，“目标化合物实际回收量”指通过HPLC分离后，从溶液
中实际采集到目标化合物的总量；“标准物质加入量”是指在HPLC分
离前，向待测样品中加入已知浓度的标准物质（如标准溶液），用于
判断分析过程中误差的大小。
以分离苯乙酮为例，假设我们向样品中加入了20μg的苯乙酮标
准溶液，并通过HPLC分离得到了实际回收量为16μg，那么计算HPLC
回收率的公式如下：
HPLC回收率（%）=（16μg ÷ 20μg）×100% = 80%
通过计算可知，苯乙酮在该HPLC分离方法下的回收率为80%。
需要注意的是，HPLC回收率并非存在绝对标准，其计算结果也受到多方面因素的影响，如试剂的纯度、实验操作技巧、仪器精度等。
因此，在使用HPLC回收率时应结合实验条件和结果进行综合评估。