3种脱钙液对牙体牙周联合切片H-E染色效果的对比
三种关节组织脱钙液的应用比较
骨组 织脱 钙 技 术 是 病 理 实 验 室 常 用 技 术 之 一 ，直 接 关 系 到 骨 组 织 切 片 的制 备 和 观 察 。 大 鼠关 节 组织 制 片 的关 键 步骤 即是 脱 钙 ，其 直 接 影 响 到 制 片 的 成 败 。选 用 合 适 的脱 钙 液 进 行 脱 钙 ，既 能 较 快 达 到 脱 钙 目的便 于 切 片 ，又 不 破 坏 组 织 结 构 完 整 性 影 响 后 期 染 色 。 因此 制 备 病理诊 断 所 需要 的理 想 标 本 ，显 得 十分 必 要 。本研究 在 大 鼠关 节组 织石 蜡 制 片 实 验 中 ， 分 别用 Ｓｃｈｒｉｄｄｅ液 、５％ 甲盐酸 和 １５％ ＥＤＴＡ对 关 节 组织 进行 脱 钙 处 理后 制 片染 色 ，镜 下观 察 脱 钙 效果 及着 色 效果 ，从 中选 择 一种 较 为适 宜 的关 节组 织脱 钙方 法 。 ｌ 材料与方法 １．１ 标本 制备 选 取 大 鼠踝 关 节组织 标 本 ，共 计 ３Ｏ个 ，经 １２％ 中性 甲醛 液 固定 ４８ ｈ后备 用 。 １．２ 试 剂及 仪 器 所有 试剂 均 为 国产 分 析纯 。 ＣＨ３０光学 显 微 镜 ，奥 林 巴斯 株 式 会 社 ；ＬＥＩＣＡ ＴＰ１０２０组 织 自动脱 水机 ，德 国球 卡仪 器 有 限公 司 ；ＴＢ一７１８Ｅ生 物组 织 自动 包 埋 机 ，湖 北 泰 维 医疗科 技有 限责任 公 司 ；ＬＥＩＣＡ ＲＭ２３５轮转 切 片机 ，德 国球 卡仪器 有 限公 司 ；ＴＲ一１８０生 物组 织 自动染 色机 ，湖 北 泰 维 医疗 科 技 有 限责 任 公 司 。 １．３ 脱 钙 液 的 配 制 Ｓｃｈｒｉｄｄｅ液 ：２０ ｍ１浓 硝 酸 加 １００ ｍｌ １２％ 中性 甲醛 溶 液配 制 而成 。５％
不同脱钙方式观察牙髓组织切片的效果比较
齿。将 新鲜拔除 的 １４颗牙 齿分 为 两组 ， ８ 各组 数 目见
表 １
表 １ 两组牙齿依据牙位分类的数 目 颗
全 随机设计资料 的方差 分析。
２ 结 果
２ １ ２种 脱 钙 法 完 成 脱 钙 所 需 时 间 在 操 作 时 间 上 ．
ＥＴ Ｄ Ａ组 完成 脱钙 过程 要长 于 复合 酸组 ， 差异有 统 计
片观察 牙髓组 织学形态时 ， Ｄ Ａ脱钙液和 Ｐａ ｋ—Ｒ ｃｌ 脱钙 液所制切片均能取得 良好 的染色效果。 ＥＴ ｌ ｎ ｙｈｏ
【 关键词 】 脱钙技 术；石蜡切 片；Ｈ Ｅ染 色
在 牙体牙 髓研究 领域 ， 采用显微 镜观察 牙髓组 织 特 定染色切片为最常见 的研究 手段之 一 。由于 牙体硬 组 织内含有大量 的无 机盐 成分 ， 硬致 密 ， 碎难 切 ， 坚 易 而位 于牙体 中央 的牙髓 则 为柔软 的结 缔组织 ， 制 ｊ在 片过程 中易受挤 压 、 牵拉 而 变形 、 离甚 至脱 落流 失 ， 分 所 以牙体组织需 经脱钙处理才能制成较 薄的石蜡切 片 并获得满 意的染色效果 。传统研究主要通 过劈牙获取 牙髓 ， 即所谓 的劈牙取髓法 ， 关为群等 报 道劈牙取髓 虽然 简便 快速 ， 不适用 于需要 对牙髓 不 同部位进行 但
１１ 材料 来源和 实验 分组 ． ３
牙 齿 标本 取 自 ２１ ０ １年
月 广 东 省 口腔 医 院 因 治 疗 需 要 而 拔 除 ， 齿 发 育 牙
完 全 、 冠 完 整 、 见 充 填 物 及 明 显 龋 坏 或 微 裂 的 牙 牙 未
１５ 统计 学方 法 ．
采 用 Ｓ Ｓ ３０统计 软件 进行 完 Ｐ Ｓ１．
比较 的研 究 实 验 。 现在 ， 着 脱 钙 技 术 的 成 熟 ， 过 脱 随 通
三种染色方法在小鼠下颌第一磨牙牙根不同发育时期的染色效果比较
三种染色方法在小鼠下颌第一磨牙牙根不同发育时期的染色效果比较蒋伟东;朱佩琪;周诺【摘要】目的比较3种染色方法在小鼠下颌第一磨牙牙根不同发育时期的染色效果,为选择合适的染色方法提供参考.方法选取出生后第5、7、14、21天的ICR 小鼠,制备小鼠下颌第一磨牙冠状切片,采用H-E染色、Masson染色法和Gomori 染色法进行组织形态学研究,比较染色结果 .结果在小鼠出生后第5天(PN5)至PN7为牙根发育起始阶段,H-E染色显示:成牙本质细胞、成釉细胞及上皮根鞘细胞形态最为清晰;Masson染色法显示:图片色彩鲜艳,牙釉质、牙本质及前期牙本质间层次分明;Gomori染色方法显示:细胞核呈单一的蓝黑色,但软、硬组织对比度不佳.从PN14小鼠牙齿开始萌出到PN21牙根发育基本完成阶段,H-E染色显示:成釉细胞、成牙本质细胞及牙周膜成纤维细胞形态最为清晰;Masson染色法显示:牙骨质与牙槽骨间的胶原纤维排列规则,牙槽骨形态清晰;而Gomori染色效果总体不佳.结论在小鼠下颌第一磨牙牙根不同发育时期,3种染色方法各有优势.H-E染色适用于各类细胞形态的观察,Masson染色适用于牙体硬组织及骨组织的观察,Gomori染色法总体效果不佳.【期刊名称】《同济大学学报（医学版）》【年(卷),期】2018(039)006【总页数】5页(P66-70)【关键词】牙根发育;上皮根鞘;H-E染色;Masson染色法;Gomori染色法【作者】蒋伟东;朱佩琪;周诺【作者单位】广西口腔颌面修复与重建研究自治区级重点实验室,广西南宁530021;广西颅颌面畸形临床医学研究中心,广西南宁530021;颌面外科疾病诊治研究重点实验室(广西高校重点实验室),广西南宁530021;广西口腔颌面修复与重建研究自治区级重点实验室,广西南宁530021;广西颅颌面畸形临床医学研究中心,广西南宁530021;颌面外科疾病诊治研究重点实验室(广西高校重点实验室),广西南宁530021;广西口腔颌面修复与重建研究自治区级重点实验室,广西南宁530021;广西颅颌面畸形临床医学研究中心,广西南宁530021;颌面外科疾病诊治研究重点实验室(广西高校重点实验室),广西南宁530021【正文语种】中文【中图分类】R781组织形态学染色方法有助于在微观下研究组织形态[1]，对牙根生长发育阶段的研究十分重要。
混合脱钙液与EDTA脱钙液对骨组织切片HE染色影响的分析
混合脱钙液与EDTA脱钙液对骨组织切片HE染色影响的分析吴拮;孙立国;赵成相;李静;郭国峰;吕荣【摘要】目的比较不同脱钙液对骨组织的脱钙能力的差异,探讨其对HE染色的影响.方法选取16例大鼠胫骨标本,运用两种常用的脱钙液(混合脱钙液和EDTA脱钙液)进行脱钙,比较其脱钙效果和对HE染色的影响.结果两种脱钙液对骨组织的脱钙能力、HE染色效果影响有显著区别.结论混合脱钙液时间最短,但切片和染色效果最差;EDTA脱钙液对骨组织损伤小,HE染色效果最好,但用时较长.【期刊名称】《医学信息》【年(卷),期】2017(030)026【总页数】2页(P180-181)【关键词】混合脱钙液;EDTA脱钙液;HE染色【作者】吴拮;孙立国;赵成相;李静;郭国峰;吕荣【作者单位】第四军医大学西京医院骨科研究所,陕西西安 710032;中国人民解放军天津疗养院,天津 300381;第四军医大学西京医院骨科研究所,陕西西安 710032;第四军医大学西京医院骨科研究所,陕西西安 710032;第四军医大学西京医院骨科研究所,陕西西安 710032;第四军医大学西京医院骨科研究所,陕西西安 710032【正文语种】中文【中图分类】R361骨组织是一种坚硬的结缔组织，由骨细胞和骨基质组成。
骨基质内含大量无机盐，质地坚硬，不能直接进行石蜡或冷冻切片，因此在制作病理切片过程中，常常需要经过脱钙处理，才能进行切染色[1]。
试验中脱钙过度或不足会影响染色效果，严重影响结果的判读，因此，脱钙时间和脱钙液的选择十分重要。
为了更好地了解脱钙技术对骨组织切片HE染色结果的影响，本文重点对比SD大鼠胫骨上段骨组织通过两种不同脱钙液的脱钙以及HE染色效果进行对比，现报告如下。
标本为第四军医大学西京医院骨科动物实验中心提供的大鼠8只。
取双侧胫骨上端16例标本，长约0.8 cm，用纱布包好随机标记为A组和B组，在10%中性福尔马林固定3 d，投入脱钙液中，A组为EDTA脱钙液，B组为混合脱钙液。
10％ EDTA、5％硝酸用于大鼠颞骨脱钙处理的效果对比观察
10％ EDTA、5％硝酸用于大鼠颞骨脱钙处理的效果对比观察卓洋;王巧;杨聪颖;陈昊;李爱民【摘要】目的观察并比较10％乙二胺四乙酸二钠(EDTA)和5％硝酸脱钙处理大鼠颞骨的效果.方法 SD大鼠10只,随机分为EDTA组和硝酸组,取出大鼠颞骨后分别置于10％ EDTA、5％硝酸脱钙液中进行脱钙处理.观察两组脱钙效果,记录脱钙时间,采用甲苯胺蓝染色进行颞骨组织形态学观察,采用免疫荧光双标染色检测α-tubulin蛋白、水通道蛋白1(AQPl).结果两组取材过程中,颅骨硬度适当,颞骨可轻松切下,无砂砾感,切下的颞骨无松散及组织脱落.硝酸组脱钙所需时间分别为(11.20±0.83)d、(26.20 ±2.38) min,两组相比,P＜0.05.EDTA组颞骨整体形态保持完好,蜗管、镫骨肌、岩动脉、神经元、雪旺细胞、郎飞结、神经干可清晰辨识;硝酸组颞骨整体结构保存较理想,神经元形态保持尚可,但存在骨质染色不均、雪旺细胞崩解、轴突肿胀、郎飞结消失现象.EDTA组颞骨脱钙后AQP1、α-tubulin蛋白定位准确,组织区分度高;硝酸组由于细胞膜中AQP1遭受破坏、位于微管内的α-tubulin蛋白漏出细胞,荧光消减明显,组织形态保持较差.结论 10％ EDTA和5％硝酸用于大鼠颞骨脱钙处理效果均较好,两种脱钙液均适用于普通病理及结构观察,若用于蛋白定量及定性方面研究,应首选10％ EDTA.【期刊名称】《山东医药》【年(卷),期】2016(056)031【总页数】3页(P43-45)【关键词】骨脱钙技术;乙二胺四乙酸二钠;硝酸;颞骨【作者】卓洋;王巧;杨聪颖;陈昊;李爱民【作者单位】徐州医学院附属连云港医院,江苏连云港222000;徐州医学院附属连云港医院,江苏连云港222000;徐州医学院附属连云港医院,江苏连云港222000;徐州医学院附属连云港医院,江苏连云港222000;徐州医学院附属连云港医院,江苏连云港222000【正文语种】中文【中图分类】R446.6颞骨参与构成头颅的侧部与颅底，其中穿行面神经、脑膜中动脉及分支，颞骨同时容纳听觉器官及其附属结构，颞骨骨折可造成上述结构损伤，引起相应并发症[1]。
临床病理检验中不同骨组织脱钙液效果的比较
临床病理检验中不同骨组织脱钙液效果的比较李玉莲;徐晓艳【摘要】目的对两种脱钙方法进行比较,获得简单、便捷、快速适用于临床病理制片的脱钙方法. 方法观察两种脱钙液:5％硝酸脱钙液(硝酸5ml加入95 ml蒸馏水)和快速脱钙液(含36％-38％盐酸8ml、冰醋酸5ml、水杨酸10 g、蒸馏水87ml),在常温及微波条件下对骨组织脱钙及HE切片染色效果的影响. 结果常温条件下,5％硝酸使组织结构有些破坏,染色效果不佳.微波条件下,使用快速脱钙液对骨组织结构损伤小,染色效果佳,适合于临床病理的骨组织制片. 结论标本经快速脱钙液处理后,其切片质量大大提高并远远优于普通脱钙液.【期刊名称】《山西医科大学学报》【年(卷),期】2014(045)010【总页数】3页(P996-997,1004)【关键词】骨组织;脱钙液;HE切片【作者】李玉莲;徐晓艳【作者单位】内蒙古医科大学病理学教研室,呼和浩特010059;内蒙古医科大学第一附属医院病理科;内蒙古医科大学病理学教研室,呼和浩特010059;内蒙古医科大学第一附属医院病理科【正文语种】中文【中图分类】R361.2含有骨质的肿瘤，钙化组织及骨髓穿刺组织都很坚硬，要想制成几微米的漂亮HE 切片是很困难的。
脱钙液是决定骨骼、牙齿、病理性钙化或骨化组织切片质量、染色效果的关键技术之一。
目前使用的脱钙液大多数是无机强酸类制剂，虽然脱钙效果好，但造成组织形态，特别是细胞结构的破坏。
因此，在本实验中我们选择了传统的脱钙液和快速脱钙液两种脱钙液进行比较，进而寻找一种更适合于骨组织脱钙的方法。
研究中发现快速脱钙液在不破坏组织结构及影响染色的同时，它可促进脱钙并加快脱钙速度，防止纤维性组织过度膨胀，并且保证了切片的质量，现报道如下。
1 材料与方法1.1 材料收集内蒙古医科大学附属医院2009-2011年手术切除的骨肿瘤、病变骨及骨髓穿刺病人标本共40例。
根据标本的不同将骨组织取成体积为1.5 cm×1.5 cm×0.5 cm的薄片(骨髓一般直径均为0.1 cm)，放入10%中性福尔马林固定24 h，用于脱钙实验。
不同脱钙液对牙齿牙周联合石蜡切片HE染色的影响
不同脱钙液对牙齿牙周联合石蜡切片HE染色的影响【摘要】目的探讨不同脱钙液对牙齿牙周联合切片HE染色质量的影响。
方法选用10%乙二胺四乙酸钠(EDTA)、复合酸(Plank-Rychlo脱钙液)和5%硝酸3种不同的脱钙液,分成A、B、C 3组用于犬和大鼠牙齿牙周组织联合石蜡切片脱钙,通过记录脱钙时间,观察HE染色效果,评价室温下(20℃～28℃)不同脱钙液对切片制作的影响。
结果A组脱钙液所制切片染色效果良好,但脱钙速度缓慢,所需时间较长;B组脱钙液脱钙速度快,所制切片染色好;C组脱钙液所制切片的染色强度和对比度均不如前两种脱钙液。
结论在制作牙齿牙周联合切片时,EDTA 脱钙液和Plank-Rychlo脱钙液所制切片均能取得良好的染色效果,但EDTA脱钙液脱钙周期过长;Plank-Rychlo脱钙液脱钙均匀,速度快,更适合于临床速检工作;硝酸脱钙液组染色效果较差。
【关键词】脱钙;牙齿;牙周组织;石蜡切片;HE染色【Abstract】Objective To investigate the effect of different decalcifying fluid on HE color of teeth and periodontal tissue united sections.Methods 10%EDTA decalcifying fluid, mixed acid(Plank-Rychlo)and 5% nitric acid were divided into three groups: group A, group B and Group C, which were used to decalcify the united paraffin sections of tooth and periodontal tissue from dogs and rats. The effect of three kinds of decalcifying fluid on manufacture of united sections was evaluated at room temperature(20℃~28℃)by decalcification time and HE staining quality.Results Group A had a good effect of HE staining, but its decalcification time was too long. Group B had either high speed decalcification or high staining quality.Group C was the last choice with the regard of poor staining intensity and contrast.ConclusionEDTA decalcifying fluid and Plank-Rychlo decalcifying fluid can get a favorable staining effect, but has a long decalcification period,Plank-Rychlo decalcifying fluid is more suited to clinical quick examination due to well-distributed and high speed decalcification. Nitric acid decalcifying fluid has a poor staining effect.【Key words】Decalcification;Tooth;Periodontal tissue;Paraffin section;Hematoxylin/eosin staining在涉及口腔组织病理的研究中,需要制作牙齿牙周组织联合切片进行诊断、观察和对比分析,但由于牙齿是全身硬度最高的组织,特别是牙釉质,其无机物成分羟基磷灰石[Ca10(PO4)6(OH)2] 含量占97%,硬度与石英相似;牙本质、牙骨质及牙槽骨坚硬致密、易碎难切,而牙髓、牙龈、牙周膜等软组织在切片过程中易受挤压、牵拉、分离变形甚至脱落。
三种脱钙液对骨组织脱钙后切片染色效果分析
顺利制 出一张质量较好的组织切片并非 易事 ， 本要 求是切 基
片 完整 ， 色后 各 种 骨 细 胞 的 细 胞 核 及胞 浆 清 晰 ， 胞 外 胶 染 细
原对 比度好 。 目前使用的脱钙方法有很 多种 ， 以分 为酸类 可 脱钙液 、 螯合剂脱钙液、 电解法脱钙液等 。
右， 辐射 ５ｍｎ测量脱钙液的温度（ （ ， ｉ， ＜６℃）间隙 ３ｍｎ ） ｉ 。用同
钙的效果 （ ２ 。 表 ）
表 ２ 三种 脱 钙 液 不 同 时 间效 果分 析
ＬｉＡ Ｐ０ ｅ ａＳ ３（ 自动脱水机 ；４ Ｌ ＩＡ全 自动包埋机 ；５ 东 ｃ ￣全 （ ）ＥＣ （） 方 一Ａ型恒温干燥箱 ；６ Ｏｙ ｐｓ （ ） ｌ ａ 显微 镜及 Ｃ ＩＳ图像 分析 ｍ ＭＡ 仪 ；７Ｒ ｎｓｅｇＣ （） ｏｇｈｎＢ Ｄ一１５ ６０冰箱 ；８ Ｎ一６０ （） ８３自动 温度控 制漂 片烤片仪。
２０ｍ ， ０ ｌ盐酸 ８ ５｜ ， ． Ｔ 甲酸 ５ｎ Ｉ ２ １％ 甲醛 ＋５ １ ｌ ｄ （ ）０ ％硝 酸液 ：
４ ％ 甲醛 ，５ ０ ６ ％硝 酸 ，０ ｌ 馏 水 ；３ Ｅ Ｔ 中性 液 ： Ｄ Ａ １０ｍ 蒸 （ ）Ｄ Ａ ＥＴ １ ， 馏 水 １０ｍ ， Ｎ Ｏ ０ｇ蒸 ０ ｌ加 ａ Ｈ搅 拌 溶 解 后 ， １ ｏ Ｌ的 Ｈ Ｉ 用 ０ｍ ｌ ／ Ｃ 调ｐ Ｈ为 ７ ０ 然后 加 ４ 甲醛 ｌ ｒ 。 ．， ％ ５ｎ ｌ １ １３ 仪 器 ．． （ ）ｉ ０微 波 炉 ；２ Ｌｉ Ｒ ２３ 片 机 ；３ １ｒ ２ ｐ （ ）ｅ ａ Ｍ １５切 ｃ （）
３ 讨 论
１２２ 脱钙方法 ．．
见表 １ 。
骨组 织分别按 以下方 法脱钙 ， 脱钙 时间
表 １ 三种 脱 钙 方 法 脱 钙 时 间表
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3种脱钙液对牙体牙周联合切片H-E染色效果的对比
姚丽艳;赵伟;吕红兵
【期刊名称】《福建医科大学学报》
【年(卷),期】2006(040)003
【摘要】目的对不同脱钙液在牙体牙周联合组织H-E染色切片的效果进行比较,并初步探讨了乙二胺四乙酸二钠(EDTA)-微波技术在牙体牙周联合组织切片脱钙过程中的应用. 方法取成年健康Beagle犬下颌骨牙体牙周联合组织做为标本,采用10%硝酸溶液、Krinstensen's液、EDTA-微波辐射3种不同的脱钙方法进行脱钙,在完成组织脱钙后进行H-E染色,并在显微镜下观察组织结构及染色效果. 结果 EDTA-微波辐射完成组织脱钙约需53 h,H-E染色效果良好,牙髓细胞、成牙本质细胞、牙周膜细胞和牙本质小管组织结构清晰;Krinstensen's液完成组织脱钙约需1 500 h,H-E染色效果较好,组织结构较清晰;10%硝酸溶液完成组织脱钙约需360 h,H-E 染色对比度差,组织结构模糊不清. 结论应用EDTA-微波辐射技术能在相对较短的时间内完成牙体牙周联合组织的脱钙,并在H-E染色切片中较好地保存了牙体牙周组织的结构.
【总页数】4页(P298-301)
【作者】姚丽艳;赵伟;吕红兵
【作者单位】福建医科大学附属口腔医院,福州,350002;福建医科大学附属口腔医院,福州,350002;福建医科大学附属口腔医院,福州,350002
【正文语种】中文
【中图分类】R454.1;R780.2
【相关文献】
1.不同脱钙液对牙齿牙周联合石蜡切片HE染色的影响 [J], 潘利锋;吴旭;夏建军;毛成毅
2.甲酸脱钙液的浓度对骨组织脱钙后切片染色效果的研究 [J], 黄勋福;韩福兰;吴燕杏;房惠琼;李启明;毛荣军
3.三种脱钙液对骨组织脱钙后切片染色效果分析 [J], 连丽琴;夏凌志;钟惠霞
4.不同脱钙液对骨髓组织切片HE染色效果的对比研究 [J], 兰淼;巩丽;李艳红;张伟;朱少君;姚丽;韩秀娟;张力
5.甲酸脱钙液的浓度对骨组织脱钙后切片染色效果的研究 [J], 黄勋福; 韩福兰; 吴燕杏; 房惠琼; 李启明; 毛荣军
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