三种染色方法在小鼠下颌第一磨牙牙根不同发育时期的染色效果比较

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Nfic在牙根发育中作用的研究

ｏｓｔｅｏｃａｌｃｉｎ（ＯＣＮ）ｗｅｒｅｔｅｓｔｅｄｉｎＷｔａｎｄＮｆｉｃ一一ｂｙｉｎｓｉｔｕｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ．ＲｅｓｕｌｔｓＴｈｅＮｉｆｃ一一ｍｏｕｓｅｗａｓａｂｌｅｔｏｏｆｒｍ
ｏｄｏｎｏｂｔｌｓｔａｓｗｅｒｅａｆｅｃｔｅｄｉｎｒｏｏｔｍｅｓｅｎｃｈｙｍｅｏｆＮｌｉｅ一一ｍｏｕｓｅ．ＡｔＰＮ２１．５．ｒｏｏｔｗａｓｖｅｒｙｓｈｏｒｔａｎｄｒｏｏｔｄｅｎｔｉｎｗａｓａｂｎｏｍａｒｌｉｎＮｉｌｅ一ｍｏｕｓｅ．ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＤＳＰＰａｎｄＯＣＮｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｉｎｈｅｔｍｅｓｅｎｃｈｙｍｅｆｏＷｔｍｏｌａｒｒｏｏｔａｔＰＮ７．５．ｂｕｔｎｏｔｉｎＮｉｆｃｍｕｔａｎｔｍｏｕｓｅ．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎＮｆｉｃ一一ｃｏｕｌｄｃａｕｓｅｔｈｅｂｎａｏｒｍａｌｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｏｆｏｄｏｎｔｏｂｌａｓｔｓａｎｄｔｈｅ
ｉｎｔｏｐａｒａｆｉｆｎ — ｅｍｂｅｄｅｄｓｅｒｉａｌｓｅｃｔｉｏｎｓｕｓｉｎｇｓｔａｎｄａｒｄｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓｆｏｒＨＥｓｔａｉｎｉｎｇ．Ｄｅｎｔｉｎｓｉａｌｏｐｈｏｓｐｈｏｐｒｏｔｉｏｎ（ＤＳＰＰ）ａｎｄ

ICR小鼠下颌第一磨牙牙胚发育的动态组织学观察

ICR小鼠下颌第一磨牙牙胚发育的动态组织学观察董宁;刘岩;张田田;阮建平【摘要】Objective This study aims to understand the characteristics of the time sequence of ICR mouse first mandibular molar tooth germ development through dynamic observation.Methods Tooth germ of Embryos (E11.5,E12.5,E13.5,E14.5,E15.5,E16.5,E17.5 and E18.5) and postnatal (PN1,PN2) mice were obtained.The heads (E11.5-E15.5) and mandibles (E16.5-PN2) of mice were dissected,fixed and embedded for serial sections and HE staining.All the results were assessed under light microscopy.Results The tooth germ underwent various development stages including the bud,cap and bell stages.Mouse odontogenesis was initiated at E11.5.Proliferation of oral epithelium formed the bud stage at E13.5.Then the cap stage was observed at E14.5-E15.5 and the bell stage was appeared beginning from E16.5.The pre-dentin was observed atPN1,as well as the dentin at PN2.Conclusions Establishing the regular development pattern of the first mandibular molar of ICR mice will provide a reliable basis for the future use in the specific tooth germ developmental research.%目的了解ICR小鼠下颌第一磨牙牙胚的发育时序特点,为使用小鼠研究牙齿发育机制和相关影响因素提供实验基础. 方法分别取E(胚胎)11.5、E12.5、E13.5、E14.5、E15.5、E16.5、E17.5和E18.5 d的胎鼠和PN(出生后)2 d的新生小鼠的头部或下颌骨,固定脱钙包埋后行连续切片,进行HE染色,在显微照相系统下进行观察记录,分析ICR小鼠磨牙牙胚发育的动态变化规律. 结果 E11.5 d为牙胚发育始动,E12.5 d牙胚向蕾状期过渡,E13.5 d进入蕾状期,帽状期为E14.5～E15.5 d,钟状期开始于E16.5 d,出生后2 d牙体硬组织开始逐渐形成.【期刊名称】《中国比较医学杂志》【年(卷),期】2017(027)004【总页数】6页(P63-68)【关键词】牙齿发育;ICR小鼠;下颌第一磨牙【作者】董宁;刘岩;张田田;阮建平【作者单位】陕西省颅颌面精准医学研究重点实验室,西安交通大学口腔医学院口腔预防科,西安,陕西 710004;陕西省颅颌面精准医学研究重点实验室,西安交通大学口腔医学院口腔预防科,西安,陕西 710004;陕西省颅颌面精准医学研究重点实验室,西安交通大学口腔医学院口腔预防科,西安,陕西 710004;陕西省颅颌面精准医学研究重点实验室,西安交通大学口腔医学院口腔预防科,西安,陕西 710004【正文语种】中文【中图分类】R-33牙齿的发育是外胚层来源的上皮细胞及颅神经脊来源的间充质细胞相互作用的结果，因此牙齿是研究上皮-间充质反应的重要器官模型之一，也是研究器官发育分子机制的一个经典模型系统[1]。

菌斑染色标准牙位及牙面

菌斑染色标准牙位及牙面
菌斑染色标准牙位及牙面有以下几种：
1. 上前牙区：这个区域可以观察到菌斑分布情况，同时也可以观察到患者口腔卫生情况，是菌斑染色显示效果最好的区域。

2. 下前牙区：下前牙区的菌斑染色效果仅次于上前牙区，同样可以观察到菌斑分布和口腔卫生情况。

3. 上下颌第一、二磨牙：这些牙齿的菌斑染色效果也比较好，但是相对于前牙区来说，观察难度可能会稍大一些。

4. 上下颌第一、二前磨牙：这些牙齿的菌斑染色效果也比较好，但是因为它们的位置比较靠后，观察起来可能会有一些困难。

需要注意的是，在进行菌斑染色时，应该按照医生的指导正确使用染色剂，避免误食或误咽，同时注意不要在短时间内反复进行菌斑染色，以免对牙齿造成损害。

Cdc42在小鼠磨牙牙胚发育过程中的表达

Cdc42在小鼠磨牙牙胚发育过程中的表达张文菲;李明伟;赵泽;相豆豆;田甜甜;孙雪飞;马亮;余擎【摘要】AIM:To study the expression changes of Cdc42 in the development of mouse molar. METHODS:The paraffin tissue sections ofthe molar and molar germ of mice were examined with HE and immunohis-tochemical methods from 14-,16-,18-day-old mouse embryos (E14,E16,E18),and 1 -,4-,and 14-day-old mice (D1 ,D4 and D14).RESULTS:The Cdc42 was expressed in the whole development progressof mouse molar germ, and showed different degrees of expression in the molar germ-forming cells and in the surrounding cells.with typical polarized distribution in the process ofodontoblast’maturation.CONCLUSION:Cdc42 is expressed play a role in the development of mouse molar.%目的：研究极性相关分子Cdc42（cell division cycle 42）在小鼠磨牙发育过程中的表达变化。

方法：取胚胎期14、16、18 d及出生后1、4、14 d的小鼠组织样本，经处理获得磨牙牙胚及牙的石蜡组织切片，用组织化学染色、组织免疫荧光法观察Cdc42在小鼠磨牙发育分化过程中的表达变化。

细胞牙骨质发育的组织形态学观察

细胞牙骨质发育的组织形态学观察于西佼;杜言梅;姜欢;杜毅【摘要】AIM:To observe the histological and cellular activity changes during cellular cementum develop-ment in BALB/c mice.METHODS:Post-natal 15, 19 and 25d BALB/c mice (8 in each group) were sacrificed and cellular cementum of mandibular first molar was taken.Cytokeratin 14( CK14 ) expression in epithelial cells of Hertwig′s epithelial root sheath( HERS) was examined by PV two-step immunohistological method.The morphology and distribution of epithelial cells and cellular cementum were examined by light and transmission electron microscope ( TEM) .Apoptosis was identified by the terminal deoxy-transferase ( TdT)-mediated dUTP-biotin nick end labeling ( TUNEL) method.RESULTS:During cellular cementogenesis, some cells were incorporated in the cementum and positive CK14 expression can be observed.Following the disintegration of HERS, cementum matrix was rapidly deposi-ted around cementoblasts.Epithelial cells and cementoblasts on the root surface were embedded as cementocytes. CONCLUSION:Epithelial cells from disintegrated HERS may directly participate in cellular cementogenesis.%目的：通过追踪观察小鼠细胞牙骨质发育过程中的组织形态和细胞活性改变，探讨源于上皮根鞘断裂的上皮性细胞是否参与细胞牙骨质的发育。

出生后小鼠牙不同发育期DKK1表达的形态学特点及其意义

：ＴＡＢＳＴＲＡＣＴＯｂｅｃｔｉｖｅｏｓｔｕｄｔｈｅｅｘｒｅｓｓｉｏｎｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆＤｉｃｋｋｏｆ１（ＤＫＫ１）ｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｔｉｍｅａｎｄｓａｃｅｐｐｐｙｊ，ｄｕｒｉｎｔｏｏｔｈｄｅｖｅｌｏｍｅｎｔｏｆｔｈｅｏｓｔｎａｔａｌｍｉｃｅａｎｄｔｏｒｏｖｉｄｅｔｈｅｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌｂａｓｉｓｆｏｒｃｌａｒｉｆｉｎｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｇｐｐｐｙｇ：ＴＷｎｔｓｉｎａｌｉｎａｔｈｗａｉｎｒｅｕｌａｔｉｎｔｈｅｔｏｏｔｈｄｅｖｅｌｏｍｅｎｔ．ＭｅｔｈｏｄｓｈｅｏｓｔｎａｔａｌＫｕｎｍｉｎｍｉｃｅａｔｄａｓ０．５，ｇｇｐｙｇｇｐｐｇｙ，６．５，１２．５，１８．５，２４．５，ａｎｄ３０．５ｒｅｓｅｃｔｉｖｅｌａｆｔｅｒｂｉｒｔｈｗｅｒｅｓｅｌｅｃｔｅｄａｎｄｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｖａｒｉｏｕｓｒｏｕｓｂｔｉｍｅｐｙｇｐｙｔｈｒｅｅｉｎｅａｃｈｒｏｕ．Ｔｈｅｍｉｃｅｉｎｅａｃｈｒｏｕｗｅｒｅｓａｃｒｉｆｉｃｅｄａｎｄｔｈｅａｒａｆｆｉｎｓｅｃｔｉｏｎｓｏｆｍａｎｄｉｂｕｌａｒｂｏｎｅｉｎｃｌｕｄｉｎｇｐｇｐｐｇｔｈｅｆｉｒｓｔｍｏｌａｒｗｅｒｅｒｅａｒｅｄａｔｔｈｅｔｈｉｃｋｎｅｓｓｏｆ５μ ｍ，ｆｏｌｌｏｗｅｄｂＨＥｓｔａｉｎｉｎａｎｄｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌｓｔａｉｎｉｎｐｐｙｇｇ：Ａ，ｉｎｏｒｄｅｒｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｅｘｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆＤＫＫ１ｉｎｔｏｏｔｈｔｉｓｓｕｅａｎｄｅｒｉｏｄｏｎｔａｌｔｉｓｓｕｅ．Ｒｅｓｕｌｔｓｔ０．５ｄａｆｔｅｒｂｉｒｔｈｔｈｅｐｐｍａｎｄｉｂｕｌａｒｆｉｒｓｔｍｏｌａｒｔｏｏｔｈｅｒｍｗａｓｉｎｔｈｅｂｅｌｌｓｔａｅ．Ａｔ６．５ｄｔｈｅｅｎａｍｅｌｄｅｖｅｌｏｍｅｎｔｏｆｍａｎｄｉｂｕｌａｒｆｉｒｓｔｍｏｌａｒｇｇｐ［收稿日期］２１００１６１１－－［；吉林省卫计委青年科研基金资助课题（；吉林大学白基金项目］国家自然科学基金资助课题（８１４７０７６４）２０１５Ｑ００３））；吉林省科技厅科技发展计划项目资助课题（求恩计划项目资助课题（２０１５３２１２０１６０５２０１５６ＪＨ）［，男，山东省滨州市人，在读医学硕士，主要从事牙发育和牙周组织正畸改建方面的研究。作者简介］郭小凯（１９９０－）［，Ｅ－ｍ：０：ｈ）通信作者］胡敏，教授，博士研究生导师（Ｔ８８７９６０２３ｅｌ４３１ａｉｌｕｍｉｎｌｕ．ｅｄｕ．ｃｎ－＠ｊ

Abi3bp在小鼠下颌骨发育中的表达变化

Abi3bp在小鼠下颌骨发育中的表达变化林雨恒; 欧阳宁鹃; 赵闫; 卢陈佩; 代杰文; 沈国芳【期刊名称】《《口腔颌面外科杂志》》【年(卷),期】2018(028)001【总页数】4页(P10-13)【关键词】Abi3bp; 小鼠; 下颌骨; 表达变化【作者】林雨恒; 欧阳宁鹃; 赵闫; 卢陈佩; 代杰文; 沈国芳【作者单位】上海交通大学医学院附属第九人民医院口腔颅颌面科上海市口腔医学重点实验室上海 200011【正文语种】中文【中图分类】R782Abi3bp基因又称Tarsh，其在人类位于3q12.2染色体。

人Abi3bp编码的蛋白质由1 075个氨基酸组成，相对分子量约为118 642 Da。

Abi3bp广泛表达于骨髓、大脑、心脏和肺等正常组织中，其在调控细胞的衰老、抑制肿瘤的发生、调控间充质干细胞及心肌祖细胞生物学行为等方面具有重要作用。

Abi3bp蛋白含有III 型纤连蛋白结构域，这种结构能够促进细胞黏附以及组装形成细胞外基质。

以往研究表明，Abi3bp与大骨关节病的发生密切相关，但其对下颌骨的作用研究尚未见报道。

下颌骨作为全身骨骼发育中较为特殊的组织，主要是通过颅神经嵴细胞迁移至第一鳃弓组织后进一步增殖、分化，通过膜内成骨及软骨内成骨分别形成下颌体以及下颌支[1]。

本研究通过免疫组织化学方法，观察了Aabi3bp蛋白在小鼠下颌骨发育过程中的表达特点，为进一步探究其在口腔颌面部发育过程中可能发挥的调控作用提供基础。

1 材料和方法1.1 实验动物与标本8～10周龄C57BL/6J成年雌鼠10只、雄鼠5只，饲养于SPF级动物房（上海交通大学医学院附属第九人民医院动物实验中心），体重27～30 g（平均体质量为29.10 g）。

雌雄小鼠按2:1合笼，以阴道栓出现的当日中午定为胚胎发育的第0.5天（简写为E0.5），新生小鼠鼠龄以出生当日中午定为出生后0.5 d（简写为P0.5）。

取胚胎第 14.5、18.5 天小鼠（简写为 E14.5、E18.5）各 3 只，出生后第 1、14、28 天小鼠（简写为 P1、P14、P28）各 3只，断颈法处死小鼠，分离小鼠头部用以制备下颌骨标本。

1_25二羟维生素D3在小鼠下颌骨矿化作用机制研究

［文章编号］1674-8603（2011）03-0131-061，25二羟维生素D3在小鼠下颌骨矿化作用机制研究刘洪1，丁风云1，颜成东1，管铨成1，郑阳玉2*（1．盐城卫生职业技术学院，江苏盐城224005；2．南京医科大学口腔医学研究所，江苏南京210029）［摘要］目的：探讨1，25二羟维生素D3（1，25（OH ）2D 3）在小鼠下颌骨矿化中的作用机制。

方法：利用组织学、免疫组织化学和实时定量RT-PCR 比较分析了6周龄野生型和1α羟化酶基因敲除（1α（OH ）ase -/-）小鼠下颌骨矿化的差异。

结果：与野生型小鼠相比，1α（OH ）ase -/-小鼠的类骨质的比例明显增加，骨钙素（osteocalcin ，OCN ）在下颌骨沉积面积和在成骨细胞表达水平均明显降低，碱性磷酸酶（ALP ）在下颌骨成骨细胞的活性和表达水平明显降低，而Biglycan 在下颌骨的沉积面积和在成骨细胞表达水平则明显增加。

结论：1，25（OH ）2D 3通过调节OCN 、ALP 和Biglycan 的基因表达水平和蛋白质沉积水平促进小鼠下颌骨的矿化。

［关键词］1，25二羟维生素D 3；1α羟化酶基因敲除；下颌骨矿化［中图分类号］R349．6［文献标识码］A［doi ］10．3969/j．issn．1674-8603．2011．03．005The research of mechanism of 1，25（OH ）2D 3in the mandible mineralization of miceLIU Hong 1，DING Feng-yun 1，YAN Cheng-dong 1，GUAN Quan-cheng 1，ZHENG Yang-yu 2．（1．Yancheng Health Vocational ＆Technical College ，Yancheng 224005，China ；2．Insititute of Stomatology ，School of Stomatology ，Nanjing Medical University ，Nanjing 210029，China ）Corresponding author ：ZHENG Yang-yu ，Email ：yangyu_zheng@yahoo．com．cn ，Tel ：0086-25-86862843［Abstract ］Objective ：To determine the role of 1，25（OH ）2D 3in mandible mineralization of mice．Methods ：The differences of the mandible mineralization between the wild-type and 1-α-hydroxylase gene knockout mice at 6weeks old were assessed by histology ，im-munohistochemistry and real-time RT-PCR．Results ：The ratio of osteoid volume was increased significantly ，the deposition of osteocalcin （OCN ）in mandible and the expressions of osteocalcin in the osteoblasts were reduced significantly ，the active and the expression of al-kaline phosphatase （ALP ）in osteoblasts were also reduced significantly in 1-α-hydroxylase gene knockout mice compared to that in the wild-type littermate．But the deposition of Biglycan in the mandible and the expression of Biglycan in the osteoblasts were increased in 1-α-hydroxylase gene knockout mice．Conclusions ：These results suggest that 1，25（OH ）2D 3promote mineralization of mandible of mice by regulating OCN ，ALP and Biglycan genes expression and protein deposition．［Key words ］1，25（OH ）2D 3；1-α-hydroxylase gene knockout ；Mandible mineralization 基金项目：盐城市医学科技发展计划项目资助（YK2010112）*通信作者：郑阳玉Tel ：（025）86862843Email ：yangyu zheng@yahoo．com．cn1，25二羟维生素D3（1，25（OH ）2D 3）作为维生素D3的活性形式，不仅能够调节血液中钙、磷的水平，还对全身骨骼的矿化起重要的作用。

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三种染色方法在小鼠下颌第一磨牙牙根不同发育时期的染色效果比较蒋伟东;朱佩琪;周诺【摘要】目的比较3种染色方法在小鼠下颌第一磨牙牙根不同发育时期的染色效果,为选择合适的染色方法提供参考.方法选取出生后第5、7、14、21天的ICR 小鼠,制备小鼠下颌第一磨牙冠状切片,采用H-E染色、Masson染色法和Gomori 染色法进行组织形态学研究,比较染色结果 .结果在小鼠出生后第5天(PN5)至PN7为牙根发育起始阶段,H-E染色显示:成牙本质细胞、成釉细胞及上皮根鞘细胞形态最为清晰;Masson染色法显示:图片色彩鲜艳,牙釉质、牙本质及前期牙本质间层次分明;Gomori染色方法显示:细胞核呈单一的蓝黑色,但软、硬组织对比度不佳.从PN14小鼠牙齿开始萌出到PN21牙根发育基本完成阶段,H-E染色显示:成釉细胞、成牙本质细胞及牙周膜成纤维细胞形态最为清晰;Masson染色法显示:牙骨质与牙槽骨间的胶原纤维排列规则,牙槽骨形态清晰;而Gomori染色效果总体不佳.结论在小鼠下颌第一磨牙牙根不同发育时期,3种染色方法各有优势.H-E染色适用于各类细胞形态的观察,Masson染色适用于牙体硬组织及骨组织的观察,Gomori染色法总体效果不佳.【期刊名称】《同济大学学报（医学版）》【年(卷),期】2018(039)006【总页数】5页(P66-70)【关键词】牙根发育;上皮根鞘;H-E染色;Masson染色法;Gomori染色法【作者】蒋伟东;朱佩琪;周诺【作者单位】广西口腔颌面修复与重建研究自治区级重点实验室,广西南宁530021;广西颅颌面畸形临床医学研究中心,广西南宁530021;颌面外科疾病诊治研究重点实验室(广西高校重点实验室),广西南宁530021;广西口腔颌面修复与重建研究自治区级重点实验室,广西南宁530021;广西颅颌面畸形临床医学研究中心,广西南宁530021;颌面外科疾病诊治研究重点实验室(广西高校重点实验室),广西南宁530021;广西口腔颌面修复与重建研究自治区级重点实验室,广西南宁530021;广西颅颌面畸形临床医学研究中心,广西南宁530021;颌面外科疾病诊治研究重点实验室(广西高校重点实验室),广西南宁530021【正文语种】中文【中图分类】R781组织形态学染色方法有助于在微观下研究组织形态[1]，对牙根生长发育阶段的研究十分重要。

目前，最常用的染色方法是H-E染色，该染色方法技术成熟，已广泛应用于组织学研究中，但其在运用过程中仍有缺陷，如对组织间隙的染色弱、H-E试剂容易产生沉淀而影响染色结果等[2]。

除H-E染色外，Masson染色法及Gomori染色等方法也广泛应用于组织学的研究，其中Masson染色法常用于胶原纤维及骨组织的染色[3-5]，而Gomori染色法能将口腔组织染成对比鲜明的红绿色[6]。

小鼠下颌第一磨牙牙根从出生后第5天(PN5)开始发育，到出生后第21天(PN21)牙根发育基本完成，在这一过程中，牙根及其相关牙周组织发生了一系列的变化[7]。

为了更好的观察到其细致精确的组织学改变，此次研究选取处于牙根不同发育时期的ICR小鼠下颌第一磨牙作为研究对象，采用上述3种染色方法染色，比较其在牙体硬组织、牙周膜胶原纤维、牙槽骨等组织的染色效果，为研究不同发育阶段牙根选择合适的染色方法提供参考。

1 材料与方法1.1 实验动物与材料实验所用ICR小鼠购自上海斯莱克实验动物有限公司；H-E试剂盒(KGA 224)、Masson染色试剂盒(KGMST-8003)购自江苏凯基生物技术有限公司；天青石蓝B、甘油、磷钨酸、冰醋酸、甲基绿、苏木精染液购自美国Sigma公司；硫酸铁铵购自成都麦卡希试剂公司；蒸馏水、变色酸2R购自上海阿拉丁科技股份有限公司。

Gomori染液的制备如下。

(1) 天青石蓝染液：天青石蓝B 0.5g，硫酸铁铵5g，甘油14mL，蒸馏水100mL，将硫酸铁铵溶于蒸馏水中，放置24h后加入天青石蓝，稍加温水煮沸，冷却后过滤再加甘油；(2) 变色酸染液：变色酸2R 0.8g，磷钨酸1g，冰醋酸1mL，蒸馏水100mL；(3) 甲基绿染液：甲基绿0.5g，蒸馏水100mL。

主要实验器材：组织处理仪(STP 120)购自美国Thermo Fisher公司；石蜡包埋机(LEICA EG1150H)、石蜡切片机(LEICA RM2235)、烤片机(LEICA HI 1220)购自德国Leica公司，采用日本Olympus光学显微镜采集系统采集图片。

1.2 标本制备以小鼠出生当日早晨定为0d(postnatal day 0, PN0)，分别选取PN5, PN7,PN14, PN21的小鼠各3只，乙醚麻醉后断颈处死，分离下颌骨，用PBS冲洗3次后，置于4%多聚甲醛固定液(pH=7.4)中室温固定24h，10%EDTA脱钙液中脱钙，使用梯度乙醇脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，制成5μm厚的冠状组织学切片，4℃下保存备用。

1.3 H-E染色法常规方法脱蜡至水，滴加苏木精染液染色5min，水洗，返蓝10min，滴加伊红染液20s，水洗2～3s，冲洗掉多余染液后放入梯度乙醇中脱水，置于二甲苯中，封片[6]。

1.4 Masson染色法切片脱蜡至水，滴加1滴苏木精染色液,染色10min，冲掉染液后流水冲洗5min，滴加1滴复合染色液，染色5min,冲掉染液后滴加1滴磷钼酸40s,甩干后滴加苯胺蓝染液2min，冲掉染液放入60°C烘箱烘干，封片[2]。

1.5 Gomori染色法常规方法脱蜡至水，用天青石蓝染液染色10min，水洗，再用明矾苏木精染液染核，水洗，盐酸乙醇分化，显蓝。

变色酸2R染液染色5min，2%冰醋酸水溶液冲洗3次,观察牙本质以及牙骨质等密质骨呈红色且其他部分无色后，使用亮绿染液复染1min。

使用梯度乙醇脱水，二甲苯透明，封片[6]。

2 结果2.1 PN5时小鼠下颌第一磨牙切片3种染色法效果比较小鼠下颌第一磨牙在PN5时，其牙冠不断发育，牙冠硬组织继续生成，从牙尖向牙颈延伸，开始形成上皮根鞘(Hertwig’s root sheath，HERS)[8]。

3种染色法均可观察到牙釉质、牙本质、前期牙本质、成釉细胞、成牙本质细胞以及HERS等结构，见图1。

H-E染色结果显示：各类细胞以及HERS的形态清晰，细胞核呈鲜明的蓝紫色，牙釉质、牙本质、前期牙本质三者分界明显。

Masson法结果显示：图片色彩鲜艳，牙釉质被染成鲜红色，牙本质呈蓝色，提示其富含胶原。

HERS明显，牙槽骨清晰可见，包绕整个牙胚，较其他两者更为清晰，但成釉细胞与成牙本质细胞形态不太清晰。

Gomori染色法结果显示：牙釉质与牙本质层次分明，牙釉质被染成暗红色，牙本质呈蓝灰色，但各类细胞的形态不够清晰，细胞核呈单一的蓝黑色。

图1 小鼠PN5时下颌第一磨牙3种方法染色结果Fig.1 The result of the mandibular first molar root in postnatal day 5 mice by three differentstaining methodsP：牙髓，A：成釉细胞，O：成牙本质细胞，E：牙釉质，D：牙本质，HERS：上皮根鞘；放大200倍选取的范围为放大100倍中的方框处2.2 PN7时小鼠下颌第一磨牙发育形态学比较小鼠的下颌第一磨牙在PN7时，牙冠发育已经完成，颈环游离端的内外釉上皮细胞增生成双层细胞的HERS。

根鞘内层细胞诱导牙乳头细胞分化，使得HERS不断生长，实现牙根的形成[9]。

在该时期，H-E染色、Masson法、Gomori染色结果与PN5时期基本相同。

Mason法总体染色效果较其他两种方法好，牙釉质、牙本质以及前期牙本质层次分明，色彩鲜艳，特别是包绕牙胚的牙槽骨轮廓清晰可见，但成牙本质细胞与成釉细胞形态在H-E染色中最为清晰，见图2。

图2 小鼠PN7时下颌第一磨牙3种方法染色结果Fig.2 The result of the mandibular first molar root in postnatal day 7 mice by three different staining methodsP：牙髓，A：成釉细胞，O：成牙本质细胞，E：牙釉质，D：牙本质，HERS：上皮根鞘；放大200倍选取的范围为放大100倍中的方框处2.3 PN14时3种染色法效果比较小鼠下颌第一磨牙在PN14时，随着HERS不断生长，牙根继续发育，逐渐形成牙髓腔的形态，同时，在牙本质增厚的过程中，根鞘变性中断，根鞘细胞进入牙囊中，牙囊细胞再移向根部牙本质，与牙本质接触后，分化为成牙骨质细胞，分泌牙骨质基质，矿化形成牙骨质[10]。

这一阶段是牙周组织形成的关键时期，组织学着重观察其HERS以及牙骨质、牙周膜韧带和支持性牙槽骨等。

在3种染色方法结果中，牙釉质因为脱钙，不能观察到。

H-E染色结果显示：HERS细胞形态清晰，牙周膜成纤维细胞及牙槽骨清晰可见，但胶原纤维形态不够分明。

Masson染色结果显示：HERS比较直观；牙周胶原纤维排列整齐、规则；牙槽骨形态也比较清晰，与周边玫瑰红的肌肉组织界限分明，与H-E染色相比效果更好，但牙周膜成纤维细胞染色效果较差。

Gomori染色效果是三者中最差的，细胞形态与组织结构层次均不清晰，见图3。

图3 小鼠PN14时下颌第一磨牙3种方法染色结果Fig.3 The result of the mandibular first molar root in postnatal day 14 mice by three different staining methodsHERS：上皮根鞘，AB：牙槽骨，PDL：牙周纤维，P：牙髓，D：牙本质；放大200倍选取的范围为放大100倍中的方框处2.4 PN21时3种染色法效果比较小鼠的下颌第一磨牙在PN21时，牙根发育基本完成，牙齿已经萌出[11]。

在3种染色方法结果中，牙釉质因经脱钙处理，无法被观察到；该时期牙骨质和牙本质分界不清；但牙槽骨、牙周纤维及牙骨质三者界限分明。

H-E染色结果显示：牙本质与牙骨质呈淡粉红色，牙周组织中，牙周膜纤维细胞呈梭形排列，牙周纤维形态清晰但对比度不强。

Masson染色结果结果显示：牙本质呈靛蓝色，牙周组织中胶原纤维排列规则整齐，但牙周膜成纤维细胞形态不清。

Gomori染色结果中，牙本质、牙骨质以及牙槽骨染色呈灰色；牙周组织中，成纤维细胞核形态清晰，但胶原纤维排列不够清晰，见图4。

3 讨论牙齿的生长发育是一个十分复杂的过程。

研究[12-13]表明，哺乳类动物的牙齿发育是牙源性上皮与牙源性间充质相互作用的结果。