肠杆菌科细菌鉴定
肠杆菌科鉴定(全)(精品)
多数菌属是肠道正常菌群，也是条件致病菌
与人类感染有关的肠杆菌科细菌有31个菌属， 其中临床标本中常见的菌属有15种
克雷伯菌属
爱德华菌属
邻单胞菌属
变形杆菌属
普罗威登斯菌属 沙门菌属
伯
臭鼻亚种
菌 ➢ 肺炎克雷伯菌（K. pneumonia鼻e）硬结亚种
属 ➢ 产酸克雷伯菌（K. oxytoca）
➢ 解鸟氨酸克雷伯菌（K. ornitThhiisnporloyptoiscaal ）is base on
➢ 植生克雷伯菌（K. planticola1s6）eSqurDeNncAinagndanrpdocBargbeonne
试验
摩根摩根菌 摩根菌(生物1群)
赖氨酸
-
+
动力
+
-
4.塔特姆菌属的鉴定
苯丙氨酸
H2S 枸橼酸盐 鸟氨酸 靛基质
+
-
-
-
-
5 .苯丙氨酸阳性组菌属鉴别索引图
苯丙氨酸+
+
H2S
－
靛基质
+
－
枸橼酸盐
+
－
普 通 变 形 杆 菌
鸟氨酸 侧金盏花醇 靛基质
+
－+
－+
－
奇 异 变 形 杆 菌
潘 氏 变 形 杆 菌
➢ 河生肠杆菌生物群1
3.肠杆菌属各种的鉴别
试 验 坂崎杆菌 阴沟杆菌 产气杆菌 格高菲杆菌
赖氨酸
－
－
+
肠杆菌科细菌的培养与鉴定
－
＋＋
－
－
普通变形杆菌 K/A ＋ ＋ ＋ F ＋ ＋ － －/+ ＋
＋
＋－
－
－
奇异变形杆菌 K/A ＋ ＋ ＋ F － ＋ +/－ +/－ ＋
＋
＋－
＋
－
志贺菌
K/A － － － F －/＋ ＋ － － ＋
－
－－
－
－
沙门菌
K/A ＋ ＋ ＋ F － ＋ － ＋ ＋
－
－＋
＋ +/－
注：A：产酸；K：产碱；+：90%以上菌株阳性；-：90%以上菌株阴性；+/-： （50-90）%菌株阳性；-/+：（50-90）%菌株阴性；沙门菌与志贺菌除鉴定到种以 外，还应进行和特异性血清凝集实验鉴定血清型。
大肠埃希菌生化鉴定反应结果
肺炎克雷伯菌(K. Peumoniae)
革兰染色为阴性杆菌，大小为(0.3-1.5) μm×(0.66)μm。单个、成双或短链状排列。可见透明环状荚膜。
革兰阴性杆菌荚膜
肺炎克雷伯菌(K. Peumoniae)
在血琼脂平板上培养18-24h，形成较大、粘、圆形、凸 起、灰白不溶血的大菌落。
沙雷菌属(Serratia)
血平板上形成光滑、湿润、圆形、中心呈颗粒状的菌落。 大多不透明，可呈现白色、粉色、红色菌落。
血平板上黏质沙雷 菌落形态
巧克力平板上黏质 沙雷菌落形态
总
结
肠杆菌科细菌生化鉴定反应选择：氧化酶、触酶、克氏双 糖铁、半固体、甲基红、V-P、枸橼酸盐、苯丙氨酸脱氨 酶、硝酸盐、尿素、赖氨酸脱羧酶(LYS)、鸟氨酸脱氨酶 (ORN)、精氨酸脱氨酶(ARG)。
肠杆菌科细菌的鉴定PPT课件
20
实验结果
表 肠杆菌科部分细菌重要生物学特征
细
糖发酵试验
吲哚 甲基 VP
菌
红
编 号
葡 萄 糖
乳 糖
麦 芽 糖
甘 露 醇
蔗 糖
B3 ⊕ ⊕ ⊕ ⊕ - + +
-
B4 ⊕ - - ⊕ - - -
-
B5 ⊕ ⊕ ⊕ ⊕ - + +
-
枸 动 志贺 沙门
橼 力 菌属 菌属
酸
多价 多价
17
实验结果
❖萄发酵管——甘露醇 三支葡萄糖发酵管依次分别接种培
养了可疑大肠杆菌、可疑沙门杆菌、可 疑志贺杆菌。
✓试管均从原来蓝色变为黄色， ✓并且小试管均有小气泡， ✓所以三种可疑菌均有产气产酸。 ✓其中沙门菌颜色较浅，产酸较少。
18
实验结果
❖萄发酵管——乳糖 三支葡萄糖发酵管依次分别接种培
养了可疑大肠杆菌、可疑沙门杆菌、可 疑志贺杆菌。
料
单糖发酵管
硫酸亚铁半固体培养基
普通肉汤培养基
西蒙枸櫞酸盐培养基
4
实验方法
配置 培养基
分离菌 株
纯化培 养
血清学 鉴定
生化反 应鉴别
❖紫黑色的单个菌落，可初步定为可疑大肠埃希菌
菌不号落发。，酵编 乳❖清❖取待号糖放洁环；的在净冷光，玻载却滑可片玻后无疑上片用❖麦水色志，，环每透贺然，2支平❖以在明菌后株甘，取灭菌板的属烧可，西菌种肠单 或环分疑蔗接斜蒙个沙。杆离菌）种面菌门枸菌法落各环菌落菌櫞混分接1取苔可属支酸合离种上1初菌，盐~溶菌以蘸2步落环琼蛋液株取下定，志脂白涂：少为编培贺斜胨布量养菌面水细于基属菌一1E：多支M与支B价糖，平血，诊发硫板清葡断酵酸混培萄血管亚养糖（铁基蛋葡琼白，脂胨乳半， ❖编❖录取 观号。双察的（糖可可 用合❖观铁疑轻疑酸，察高细轻菌碱先凝层 菌摇落指在集琼在动，示血现脂双载送剂清象斜糖玻固❖养检3边。7面铁片接测℃缘体24上❖待培琼，双恒处种培-4挑养脂一，用糖温将完8养小基斜边选铁箱细3。毕基7，面摇时琼培菌菌℃后1无的动脂养研支候落恒，菌生，斜2磨，观形温4试操长一面-开普察态4箱管作现边和8，通记小、倒置接象将琼然时肉录颜置种并载于脂后。汤于色培已记玻高再试琼表不片养混管脂格稍一匀2架4微半中。致h上倾固。的后，斜体菌。送对培落3光7养保℃基存恒1温支箱。培
肠杆菌科的鉴定
肠杆菌科的鉴定1、标本要求：1.1 尽量用药前采集标本。
1.2 痰液：病人清晨咳痰于无菌、防漏小塑料盒内，切勿唾液送检。
1.3 尿液：病人留取12h尿液，送检。
1.4 粪便：病人留取粪便5 10g，送检。
1.5 脑脊液及其它无菌体液：用无菌瓶直接送检。
血标本不要冷冻。
1.6 不可接受的标本：干的拭子、蜡盒、未消毒容器、留取24h后的尿或痰、破裂的瓶子、标本泄漏、标本无标签。
2、仪器35℃孵箱、普通光学显微镜3、试剂羊血平皿、麦康凯平皿、硝酸盐培养管、葡萄糖蛋白胨水、葡萄糖酸盐培养管、苯丙氨酸脱氨培养管、氨基酸脱羧培养管、拘橼酸盐培养管、尿素培养管、糖醇发酵管、湖南长沙天地人肠杆菌鉴定板。
4、试验方法及原理：4.1 硝酸盐还原试验：方法：将待检菌接种硝酸盐培养基中，孵育过夜，加入等量A、B液1～3滴，观察结果。
结果：红色为“+”，即还原硝酸盐。
注意点：（1）．培养基不应含亚硝酸盐，以避免假阳性。
（2）．某些肠杆菌还原硝酸盐的能力很强，还原硝酸盐为亚硝酸盐后，进一步将亚硝酸盐分解为氨、氮、氧化氮，造成假阴性。
所以，观察结果时，如无红色出现，应加少量锌粉，仍无色，说明亚硝酸盐进一步分解，硝酸盐反应为阳性。
若加锌粉后出现红色，说明锌使硝酸盐还原为亚硝酸盐，而待检菌无还原硝酸盐的能力，即硝酸盐还原试验阴性。
4.2 甲基红试验方法：将待检菌接种于葡萄糖蛋白胨水中，孵育过夜，加甲基红试剂1～2滴，观察结果。
结果：红色为阳性，桔黄色为阴性。
4.3 尿素培养基方法：将待检菌穿刺接种于尿素培养基中，孵育过夜，观察结果。
结果：培养基变红为尿素阳性，不变色为阴性。
4.4 拘橼酸盐试验(Simmons法)方法：将待检菌接种于拘橼酸盐培养基中，孵育过夜，观察结果。
结果：有细菌生长培养基变蓝色为阳性，无颜色改变为阴性。
4.5 氨基酸脱羧试验方法：取待检菌接种于氨基酸脱羧培养基和对照管中，封石腊油，35℃培养过夜，观察结果。
结果：培养基变紫色为阳性，黄色为阴性。
肠杆菌科生化鉴定实验
肠杆菌科生化鉴定实验
肠杆菌科是一类常见的革兰氏阴性细菌，可以通过一系列
生化鉴定实验来进行鉴定。
以下是一些常用的肠杆菌科生
化鉴定实验：
1. 硫代硫酸亚铁（TSI）琼脂糖培养基实验：在TSI琼脂
糖培养基上培养菌株，观察菌落的颜色和气体产生情况。
肠杆菌科细菌在该培养基上产生酸和气体，导致培养基中
的pH下降，产生黄色酸性反应。
2. 尿素水解试验：将菌株接种到尿素水解培养基上，观察
培养基的颜色变化。
肠杆菌科细菌中的一些种类能够产生
尿素酶，将尿素水解为氨和二氧化碳，导致培养基变为粉
红色。
3. 大肠杆菌甲醛试验：将菌株接种到含有甲醛的培养基上，观察培养基的颜色变化。
肠杆菌科细菌中的大肠杆菌能够
利用甲醛作为唯一的碳源，产生酸和气体，导致培养基变
为黄色。
4. 气体产生试验：将菌株接种到气体产生管中，观察管内
气体的产生情况。
肠杆菌科细菌中的一些种类能够产生气体，如氢气和二氧化碳。
5. 青霉素酶试验：将菌株接种到含有青霉素的培养基上，
观察菌落的形成情况。
肠杆菌科细菌中的一些种类能够产
生青霉素酶，使得培养基中的青霉素失活，导致菌落形成。
需要注意的是，肠杆菌科细菌的鉴定通常需要结合多个实验结果进行综合判断，单一实验结果可能不足以确定菌株的分类。
此外，不同的肠杆菌科细菌种类可能在生化反应上有差异，因此具体的实验步骤和判断标准可能会有所不同。
肠杆菌科(Enterobacteriaceae)细菌鉴定
• 生长特性：
培养基，环境，染色，同肠杆菌科特点；
菌落形态：
BAP：圆，光，湿，灰白，某些菌株溶血；
选择培养基：通常，发酵乳糖，有色菌落，EMB 上有金属光泽。
• 实验室鉴定：
初步鉴定； KIA：A/A，产气，H2S（-）； IMVC：+ + - -
特殊病程: 标本采集：未使用抗生素前提下 第一周分离阳性 血液90% 粪便10% 第三周分离阳性 血液50% 粪便85% 尿25%
使用抗生素后：骨髓，玫瑰疹
• 生长特性(growth characteristic)
染色：G-，直杆，较细长，周鞭毛
菌落形态：
普通培养基：光滑型，粗糙型
选择培养基：略小，乳糖不发酵， 多数可产H2S（SS上菌落中央黑色）
治疗用药：碳青酶烯、抑制剂复合类或头霉 素
AmpC -内酰胺酶：
肠杆菌属，枸橼酸杆菌属，
特点：染色体、质粒编码，诱导酶，非边界 耐药（青霉素类，头孢菌素1，2，3代，头霉素） 对抑制剂不敏感。
治疗用药：碳青酶烯，头孢4代
埃希氏菌属（Escherichia）
• 分类
肠杆菌科，埃希氏菌属，5个种，大肠埃希氏 （E.coli）最为常见，以下主要叙述。
• 重要性：
肠外感染：泌尿系统最常见的病原菌，以及其他各类 感染包括菌血症、肺部感染、腹膜炎、腹部手术继 发感染等。
肠内感染：
肠毒素性大肠杆菌（ETEC）：质粒介导，LT、ST
肠致病性大肠杆菌（EPEC）：O55、O111等血清 型
肠侵袭性大肠杆菌（EIEC）：
肠出血性大肠杆菌（EHEC）：溶原噬菌体编码 Vero毒素（VT-1，VT-2），常致溶血尿毒综合症 （HUS）。代表菌O157：H7。
肠杆菌科鉴定(全)
－
-
甘露醇
+ +
ONPG + －
枸橼酸盐
+
－
动力
+
－
侧金盏花醇
+
－
异 鸟氨酸
型 枸
+
－
橼丙 费
酸二 劳
杆酸 地
菌盐 枸
阴橼
性酸
枸杆
橼菌
酸
杆
赖氨酸
沙
志
+
－
门 菌
贺 菌
葡萄糖产气 耶 属
属
+
－
尔 森
大大 菌
肠肠 属
埃埃
希希
菌菌
（
不
活
泼
株.
－ －
H2S
+
－
迟 甲基红
缓 爱
+
－
德保 鲶
华科 鱼
菌爱 爱
德德
华华
斯 图 普 鲁 维 登 斯 菌
摩 根 菌
塔 特 姆 菌
斯斯
菌菌
.
七.葡萄糖酸盐阳性组各属鉴别
.
克 分类
雷 原克雷伯菌属（klebsiella）有5个种，2个亚种
伯 菌
➢肺炎克雷伯菌 臭鼻亚种
鼻硬结亚种
属 ➢产酸克雷伯菌
➢解鸟氨酸克雷伯菌
.
克
雷 伯
培养特征
菌 ➢ 血琼脂上菌落较大，呈 属 黏液状，以接种环挑取
靛基质 +
-
-
-
鸟基酸 -
+
-
-
木糖 +
+
+
-
.
2.普鲁维登菌属各种的鉴别
肠杆菌科鉴定全
V + + +
V + + V V
+ + + -
+ + V V
+ + + -
+ V + + +
+ V V + +
+ + V V V + -
+ + + + + +
+ + + -
2.爱德华菌属各种的鉴别
试 验 迟缓爱 德华菌 保科爱 德华菌 鲶鱼爱 德华菌
H2S
+
－
－
甲基红
+
+
－
3.埃希菌属种的鉴别
试 验 大肠埃希菌 大肠埃希菌（不 活泼株）
蔗糖
精氨酸脱 氢酶 鸟氨酸脱 羧酶 核糖醇 鼠李糖 α-甲基D-葡萄糖 苷 黄色素
+
+ +
+
+ -
+
+ +
V
V
+
V +
+ + +
+
+ + +
+
V + +
+
+ + V +
+
+
V
V +
+
+ + +
+
V + -
V + +
+
+ + +
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血清学试验
在纸片周围抑菌浓度范围内的细菌的生长被抑制，形成
透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的
敏感程度，并与该药对测试菌的最低抑菌浓度 （MIC）呈
负相关，即抑菌圈愈大，MIC愈小。
实验方法 （一）接种肉汤培养基
（二）菌液均匀涂抹平板培养基
（三）分别夹取青霉素、链霉素、庆大 霉素和头孢拉定四种抗生素纸片贴在平
初步确定为大肠杆菌
初步确定为伤寒杆菌
革兰染色镜检
挑取纯培养后的可疑菌落进行革兰染色，确定为革兰阴性 菌后进行细菌的生化培养基接种。
短杆状，分散排列
生化试验鉴定
将需全面鉴定的可疑细菌从双糖铁琼脂斜面挑菌分别接 种于各种生化反应培养基。每株可疑菌需接种的培养基计 有糖发酵管（葡.乳.麦.甘.蔗）各1支，蛋白胨水1支 （I），葡萄糖蛋白胨水2支（M.Vp），枸橼酸盐琼脂斜面 1支（C）。接种完毕后，试管置于试管架上，送37℃温箱 培养24~48小时后观察记录结果。
板上进行培养
实验结果
●
实验结果
青霉素(mm） 链霉素（mm） 头孢拉定（mm）庆大霉素（mm）
18>15(敏感） 16>15(敏感） 22>15(敏感） 24>15(敏感） 19>15(敏感） 25>15(敏感） -
大肠杆菌 沙门菌 志贺菌
三种菌对链霉素和庆大霉素敏感，但对青霉素和头孢拉定耐药。
乳 糖
+ 蔗 糖
+ 吲 哚
+ +
甲基 红
-
+
+
+ +
⊕ ⊕
麦芽 糖 甘露 醇
肠杆菌科细菌生化反应鉴定数据参考表
VP 枸橼 H2S 酸盐 动力
细菌 葡萄 编号 糖 大肠 杆菌
⊕ ⊕ ⊕ ⊕ /+
+ -
+ +
-
-
-
+ +
伤寒 杆菌
+
-
+
+
-
/+
药物敏感试验
实验原理：含有定量抗菌药物的纸片贴在己接种测试菌的 琼脂平板上，纸片中所含的药物吸取琼脂中的水分溶解 后便不断地向纸片周围区域扩散，形成递减的梯度浓度。
VP试验
枸橼酸盐利用试验(C)
红色为VP阳性。
斜面上有菌苔，且变成深蓝 色，为阳性；斜面上 无菌苔，仍是绿色为阴性。
表1
细菌 葡萄 乳 编号 糖 糖
肠杆菌科细菌生化反应鉴定结果记录表
麦芽 甘露 糖 醇 蔗 糖 吲 哚 甲基 红 VP 枸橼 H2S 酸盐 动力
大肠 杆菌
伤寒 杆菌
⊕ ⊕ ⊕ ⊕ ⊕ 表2
二.纯培养
（一）确定可疑菌落。 1.观察EMB表面的菌 落特征： （1）.凡紫黑色的单 个菌落可初步定为 可疑大肠杆菌菌落， 标号为。 （2）.凡光滑无色透 明的单个小菌落可 初步定为痢疾杆菌 属菌落或伤寒杆菌 属菌落，标号为。
（二）.可疑菌落纯化培养 无菌操作用接种针挑取已编号可疑菌落，分别接种在双 糖铁高层琼脂斜面和半固体培养基上，送37℃温箱培 养24~48小时。 （三）.双糖铁琼脂斜面培养特征观察与动力观察
肠杆菌科细菌鉴定
组员：李木生，颜大钧，郑伟坛，科细菌一般性鉴定程序
未 知 肠 杆 菌
分 离 培 养
挑 取 可 疑 菌 落
纯 培 养
革 兰 染 色 镜 检
生 化 实 验 鉴 定
药 敏 试 验
血 清 学 试 验
一.分离培养
• 无菌操作用接种环提取可疑肠道杆菌，在EMB上分区划线 接种。送37℃培养24小时。
糖发酵试验
1.不变黄，小管无气泡：糖发 酵为阴性（—）。 2.黄色，小管有气泡（产酸， 产气）：糖发酵为阳性（+）。 黄色，小管无气泡（产酸， 不产气）：糖发酵为阳性（+）。
吲哚试验(I)
甲基红试验(MR)试验
红色为甲基红试验阳性（+），桔黄 色为阴性（-） 结果：红色为吲哚试验阳性 （+），无变化为阴性（-）