肠杆菌科细菌的鉴定PPT课件
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肠杆菌科ppt课件
致病机理
ST、LT：肠粘膜上皮细胞大量分 泌肠液引：水 样 便 、 侵袭和破坏 继以脓血粘液便、腹痛、结肠粘膜上皮细胞 发热
水样便、继以大量出血、剧烈腹 痛，溶血性尿毒综合症，血小板 减少性紫癜
Vero 毒素，终止蛋白质合成，使 肠上皮细胞死亡脱落 聚集性粘附，产生EAST，致大量 液体分泌。
慢性细菌性痢疾：病程迁移二月以上
15
微生物学检查
新鲜脓血便/肛拭 及时送检/暂用30%甘油缓冲水保存
快速诊断
分离培养
SS平板（无色透明小菌落）
荧光菌球试验 协同凝集试验 双糖培养基（生化反应） 血清学反应（玻片凝集） 明确诊断
16
沙门菌属Salmonella
菌群菌型甚多，仅少数对人致病
其中许多为人畜共患病
细菌居住部位改变引起的肠外感染： 多为化脓性感染 2、致病菌株 肠内感染
某些带有致病基因的血清型，引起人类腹泻。
8
致病性大肠杆菌引起的腹泻
菌株 ETEC EPEC EIEC EHEC EAEC 易感人群
婴幼儿、 旅行者 婴幼儿 较大儿童 及成人
5岁以下儿童
疾病与症状
水样便、腹痛、 恶心、低热
水样便、恶心、呕吐、发热
肠杆菌科
1
寄居在人和动物肠道中 生物学性状近似的革兰阴性杆菌 少数为致病菌，是胃肠道传染病的重要病原菌
2
共同特性
1、相似的形态染色
2、简单的培养条件
3、活泼的生化反应 乳糖发酵试验
重要试验 初步鉴别肠道致病菌和肠道非致病菌
肠道致病菌
肠道非致病菌
多数不发酵乳糖
多数发酵乳糖
3
4、抗原构造复杂
鞭毛抗原（H）
21
肠杆菌科Enterobacteriaceaeppt课件
沙门菌属细菌的抗原• 菌体抗原O：由数个成分组成– 伤寒沙门菌和副甲、肖氏沙门菌有交叉的抗 原成分。如 12抗原– 刺激机体产生IgM• 鞭毛抗原H：分第1相和第2相– 第1相特异性高– 刺激机体产生IgG
抗原性弱，刺激机体产生短暂低效价抗体 伴随活菌一起存在测定Vi抗体有助于检出带菌者
伤寒、希氏沙门菌的表面抗原 与毒力有关
1 、肥达试验
肥达试验的结果判断• 考虑正常人群抗体水平• 动态观察：恢复期效价增加≥4倍• O IgM, 出现早，维持时间短，特异性差H IgG, 出现迟，维持时间长，特异性强
肠热症可能性大排除早期或有交叉反应的其它沙门菌感染预防接种或曾患过伤寒
– O高 H高– O低 H低– O高 H低– O低 H高• 其他
5、抵抗力
6、易变异
不强
第一节 埃希氏菌属Escherichia• 是人类和动物肠道中的正常菌群• 以大肠埃希氏菌(E.coli)最为重要• 出生后数小时就进入肠道，并终生伴随
引起腹泻的大肠埃希菌
肠产毒型大肠埃希菌 (enterotoxigenic E.coli, ETEC)• 婴幼儿和旅游者腹泻• 致病物质– 肠毒素enterotoxin• heat labile enterotoxin(LT)• heat stable enterotoxin(ST)– 定植因子(菌毛)
乳糖发酵试验初步鉴别肠道致病菌和肠道非致病菌肠道致病菌 不发酵乳糖肠道非致病菌 发酵乳糖
1、相似的形态染色 中等大小， G –杆菌，无芽胞，多数有 动力
2、简单的培养条件
3、活泼的生化反应
共同特性
菌体抗原(O)
4、抗原构造复应性变异
肠侵袭型大肠埃希菌(enteroinvasive E.coli, EIEC)• 似菌痢样，有脓血便，有里急后重• 致病机理– 侵袭结肠粘膜上皮并繁殖– 细菌死亡后释放内毒素，引起炎症
肠杆菌科的分类与鉴定精选ppt
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四、苯丙氨酸脱氨酶试验阳性 菌群的分类鉴定
苯丙氨酸脱氨酶试验阳性菌群共包括三 个菌属，即：变形杆菌属、摩尔根氏菌 属、普罗维登斯菌属。
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14
生化反应 H2S 鸟氨酸脱羧酶 枸橼酸盐利用 尿素酶 迁徙生长
变形杆菌属 摩尔根氏菌属 普罗维登斯菌属
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6
肠杆菌科的生物拮抗作用主要靠与病原菌争夺 营养和占据空间位置来实现。此外，大肠埃希 氏菌还产生大肠菌素和酸性物质，抑制志贺氏 菌和金葡菌的生长。
由此可见，肠杆菌科在正常寄生部位和正常寄 生数量的情况下，不仅对人体无害，并且有益， 但如果其寄生部位和寄生数量发生变化，同样 可引起机体的各类病变。因此，肠杆菌科的多 数细菌又被称为“条件致病菌”。
肠杆菌科的分类与鉴定
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1
肠杆菌科是临床上最常见的一类革兰氏 阴性杆菌，它主要存在于人或动物的肠 道以及自然界的水源、土壤中。在正常 情况下，多数肠杆菌科细菌对人是无害 的，有些菌种还是人体所必需的，这是 因为肠杆菌科在正常寄生部位和正常寄 生数量的条件下对人体具有重要的生理 作用：
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此外，肠杆菌科中还有一些细菌如沙门氏菌属、 志贺氏菌属是世界公认的肠道病原菌。
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7
第二节、 肠杆菌科的分类与鉴定
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8
肠杆菌科包括一大类生物学性状相似的 革兰氏阴性无芽胞杆菌。它们需氧或兼 性厌氧生长；营养要求不高，在普通培 养基上生长良好；多数具有周身鞭毛 （少数无鞭毛）；能分解葡萄糖产酸或 产酸产气，多数能还原硝酸盐为亚硝酸 盐；氧化酶（—），触酶阳性，O/F试验 （F型）；DNA G+C=38—60mol%。
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四、苯丙氨酸脱氨酶试验阳性 菌群的分类鉴定
苯丙氨酸脱氨酶试验阳性菌群共包括三 个菌属，即：变形杆菌属、摩尔根氏菌 属、普罗维登斯菌属。
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生化反应 H2S 鸟氨酸脱羧酶 枸橼酸盐利用 尿素酶 迁徙生长
变形杆菌属 摩尔根氏菌属 普罗维登斯菌属
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肠杆菌科的生物拮抗作用主要靠与病原菌争夺 营养和占据空间位置来实现。此外，大肠埃希 氏菌还产生大肠菌素和酸性物质，抑制志贺氏 菌和金葡菌的生长。
由此可见，肠杆菌科在正常寄生部位和正常寄 生数量的情况下，不仅对人体无害，并且有益， 但如果其寄生部位和寄生数量发生变化，同样 可引起机体的各类病变。因此，肠杆菌科的多 数细菌又被称为“条件致病菌”。
肠杆菌科的分类与鉴定
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1
肠杆菌科是临床上最常见的一类革兰氏 阴性杆菌，它主要存在于人或动物的肠 道以及自然界的水源、土壤中。在正常 情况下，多数肠杆菌科细菌对人是无害 的，有些菌种还是人体所必需的，这是 因为肠杆菌科在正常寄生部位和正常寄 生数量的条件下对人体具有重要的生理 作用：
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此外，肠杆菌科中还有一些细菌如沙门氏菌属、 志贺氏菌属是世界公认的肠道病原菌。
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第二节、 肠杆菌科的分类与鉴定
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8
肠杆菌科包括一大类生物学性状相似的 革兰氏阴性无芽胞杆菌。它们需氧或兼 性厌氧生长；营养要求不高，在普通培 养基上生长良好；多数具有周身鞭毛 （少数无鞭毛）；能分解葡萄糖产酸或 产酸产气，多数能还原硝酸盐为亚硝酸 盐；氧化酶（—），触酶阳性，O/F试验 （F型）；DNA G+C=38—60mol%。
肠杆菌科细菌介绍ppt课件
通过这种测试我们可以区分两种细胞壁结构不同 的细菌。革兰氏阳性菌在反应后的除色溶液中将 呈现龙胆紫的颜色。
革兰氏阴性菌细胞壁中肽聚糖含量低，而脂类含 量高。当用乙醇处理时，脂类物质溶解，细胞壁 通透性增强，使结晶紫极易被乙醇抽出而 脱色；再度染上复染液番红的时候，便呈现红色 了。
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引起腹泻的大肠埃希菌
菌株
作用
部位
ETEC
6、8、15、25、 27、78、148、159
小肠
EIEC 大肠
28ac、29、112ac 124、136、143。。。
EPEC 小肠
2、55、86、111、 114、119、125-128、 142、158
EHEC 大肠
157、26、111
EAggEC 小肠
穿越细胞膜 活化 腺苷环化酶
ATP cAMP
水、电解质紊乱
腹泻
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LT 检测（ CHO细胞培养）
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耐热肠毒素（ST）
鸟苷环化酶 GTP cGMP
水、电解质紊乱 腹泻
临床症状：轻度腹泻/严重的霍乱样症状 是婴幼儿和旅游者腹泻的重要病原菌
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ST检测（乳鼠灌胃试验）
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2、肠侵袭性大肠杆菌（EIEC)
42、44、3、86
疾病与症状
致病机制
旅行者腹泻，婴幼儿腹泻，LT 和（或）ST 肠毒素，大
水样便，恶心，呕吐，腹 量分泌液体和电解质
痛，低热
水样便，少量血便，腹痛， 质粒介导侵袭和破坏结肠粘
发热
膜上皮细胞
婴儿腹泻，水样便，恶心，粘附和破坏上皮细胞
呕吐，发热
水样便，大量出血，剧烈 SLT-I 或 SLT-II，中断蛋白质
革兰氏阴性菌细胞壁中肽聚糖含量低，而脂类含 量高。当用乙醇处理时，脂类物质溶解，细胞壁 通透性增强，使结晶紫极易被乙醇抽出而 脱色；再度染上复染液番红的时候，便呈现红色 了。
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引起腹泻的大肠埃希菌
菌株
作用
部位
ETEC
6、8、15、25、 27、78、148、159
小肠
EIEC 大肠
28ac、29、112ac 124、136、143。。。
EPEC 小肠
2、55、86、111、 114、119、125-128、 142、158
EHEC 大肠
157、26、111
EAggEC 小肠
穿越细胞膜 活化 腺苷环化酶
ATP cAMP
水、电解质紊乱
腹泻
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LT 检测（ CHO细胞培养）
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耐热肠毒素（ST）
鸟苷环化酶 GTP cGMP
水、电解质紊乱 腹泻
临床症状：轻度腹泻/严重的霍乱样症状 是婴幼儿和旅游者腹泻的重要病原菌
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ST检测（乳鼠灌胃试验）
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2、肠侵袭性大肠杆菌（EIEC)
42、44、3、86
疾病与症状
致病机制
旅行者腹泻，婴幼儿腹泻，LT 和（或）ST 肠毒素，大
水样便，恶心，呕吐，腹 量分泌液体和电解质
痛，低热
水样便，少量血便，腹痛， 质粒介导侵袭和破坏结肠粘
发热
膜上皮细胞
婴儿腹泻，水样便，恶心，粘附和破坏上皮细胞
呕吐，发热
水样便，大量出血，剧烈 SLT-I 或 SLT-II，中断蛋白质
肠杆菌科 PPT课件
氧化酶阴性、可将硝酸盐还原至亚硝酸盐。
肠杆菌科的共同特性
1. 形态染色相似 革兰阴性杆菌 2. 培养特性相同 普通培养基上生长良好 3. 生化反应活泼 发酵葡萄糖，氧化酶阴性，触酶阳性，还原硝
酸盐为亚硝酸盐，O/F试验为发酵型。 4. 抗原构造复杂 5. 抵抗力弱 6. 易变异
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肠杆菌科细菌与其它革兰阴性杆菌的区别
肠杆菌科（Enterobactericaeae）
❖ 包括致病性较强、能引起人类传染病的菌属：鼠疫耶尔 森菌、伤寒沙门菌
❖ 引起人类腹泻和肠道感染的菌属（四个） ❖ 埃希菌属 ❖ 志贺菌属 ❖ 沙门菌属 ❖ 耶尔森菌属
与医院感染有关的条件致病菌
❖ 枸橼酸杆菌属 ❖ 克雷伯菌属 ❖ 肠杆菌属 ❖ 泛菌属
❖ 鼠疫耶尔森菌能引起甲类传染病：鼠疫。
（二）人类肠道感染
❖ 肠杆菌科细菌也是人和动物肠道感染的重要病原。 ❖ 虽然本科中许多细菌均与腹泻有关，但比较明确的肠道
病原菌是肠杆菌科中的埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属 和耶尔森菌属。 ❖ 主要引起各种急、慢性肠道感染、食物中毒、旅行者腹 泻及肠热症等。
概述
•沙雷菌属 •变形杆菌属 •普罗威登菌属 •摩根菌属
正常菌群与条件致病菌
❖ 有许多细菌既是肠道的正常菌群，也是条件致病菌。 ❖ 在一定的条件下，能引起机会感染或二重感染。 ❖ 1）机体抵抗力下降 ❖ 2）寄居部位的改变 ❖ 3）肠道菌群失调 ❖ 约有40种以上肠杆菌科的菌种可以在临床标本中出现。
一、分类与命名
试验 葡萄糖 氧化酶 形态 鞭毛
肠杆菌科 发酵
弧菌科 发酵
非发酵菌 氧化或不分解
巴斯德菌 科
发酵
－
＋
＋
＋
肠杆菌科的共同特性
1. 形态染色相似 革兰阴性杆菌 2. 培养特性相同 普通培养基上生长良好 3. 生化反应活泼 发酵葡萄糖，氧化酶阴性，触酶阳性，还原硝
酸盐为亚硝酸盐，O/F试验为发酵型。 4. 抗原构造复杂 5. 抵抗力弱 6. 易变异
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肠杆菌科细菌与其它革兰阴性杆菌的区别
肠杆菌科（Enterobactericaeae）
❖ 包括致病性较强、能引起人类传染病的菌属：鼠疫耶尔 森菌、伤寒沙门菌
❖ 引起人类腹泻和肠道感染的菌属（四个） ❖ 埃希菌属 ❖ 志贺菌属 ❖ 沙门菌属 ❖ 耶尔森菌属
与医院感染有关的条件致病菌
❖ 枸橼酸杆菌属 ❖ 克雷伯菌属 ❖ 肠杆菌属 ❖ 泛菌属
❖ 鼠疫耶尔森菌能引起甲类传染病：鼠疫。
（二）人类肠道感染
❖ 肠杆菌科细菌也是人和动物肠道感染的重要病原。 ❖ 虽然本科中许多细菌均与腹泻有关，但比较明确的肠道
病原菌是肠杆菌科中的埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属 和耶尔森菌属。 ❖ 主要引起各种急、慢性肠道感染、食物中毒、旅行者腹 泻及肠热症等。
概述
•沙雷菌属 •变形杆菌属 •普罗威登菌属 •摩根菌属
正常菌群与条件致病菌
❖ 有许多细菌既是肠道的正常菌群，也是条件致病菌。 ❖ 在一定的条件下，能引起机会感染或二重感染。 ❖ 1）机体抵抗力下降 ❖ 2）寄居部位的改变 ❖ 3）肠道菌群失调 ❖ 约有40种以上肠杆菌科的菌种可以在临床标本中出现。
一、分类与命名
试验 葡萄糖 氧化酶 形态 鞭毛
肠杆菌科 发酵
弧菌科 发酵
非发酵菌 氧化或不分解
巴斯德菌 科
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《肠杆菌科的细菌》PPT课件
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肠杆菌科PPT课件
1. 化脓性感染
病腹膜，炎 但是移位至肠道外
阑尾炎
的手术组创口织感染或器官可引起感
2. 败血症 G- 菌以大肠埃希菌最常见(占45%)
3. 新生儿脑膜炎 1岁内中枢系统感染的常见因子（外源性感染）
4. 泌尿道感染 为上行性感染，尿道炎、膀胱炎、肾盂肾炎等
• 肠道内感染：胃肠炎
肠产毒素型大肠埃希菌（enterotoxigenic E. coli， ETEC）
• 外毒素
志贺毒素I、II（Stx-1、Stx-2） 耐热肠毒素a、b（STa、STb） 不耐热肠毒素I、II（LT-I，LT-II） 溶血素A（HlyA）
内毒素、荚膜、载铁蛋白、III型分泌系统
所致疾病
肠道外感染：内 源性感染
肠道内感染：外 源性感染
•肠道外感染
E.coli 在 肠 道 内 不 致
生化反应
• 可分解多种糖类，产酸产气 • IMViC试验（靛基质、甲基红、VP、柠
檬酸盐利用试验）为＋＋－－
属于大肠埃希菌的生化反应是
____
ACD
• A.发酵葡萄糖产酸产气 • B.发酵葡萄糖产酸不产气 • C.发酵乳糖 • D.IMViC实验结果为“++--” • E.IMViC实验结果为“--++”
减少感染发生：充分烹饪食物、洗手
第二节 志贺菌属（Shigella）
生物学性状
• 形态染色
• G-杆菌，0.5～0.7 µm 2～3µm • 无鞭毛，无荚膜， 有菌毛
无动力的肠道杆菌是___A_____
• A. 志贺菌 • B.大肠埃希菌 • C.变形杆菌 • E.以上均是
生物学性状
• 培养及生化反应
加导致肠分泌增加
病腹膜，炎 但是移位至肠道外
阑尾炎
的手术组创口织感染或器官可引起感
2. 败血症 G- 菌以大肠埃希菌最常见(占45%)
3. 新生儿脑膜炎 1岁内中枢系统感染的常见因子（外源性感染）
4. 泌尿道感染 为上行性感染，尿道炎、膀胱炎、肾盂肾炎等
• 肠道内感染：胃肠炎
肠产毒素型大肠埃希菌（enterotoxigenic E. coli， ETEC）
• 外毒素
志贺毒素I、II（Stx-1、Stx-2） 耐热肠毒素a、b（STa、STb） 不耐热肠毒素I、II（LT-I，LT-II） 溶血素A（HlyA）
内毒素、荚膜、载铁蛋白、III型分泌系统
所致疾病
肠道外感染：内 源性感染
肠道内感染：外 源性感染
•肠道外感染
E.coli 在 肠 道 内 不 致
生化反应
• 可分解多种糖类，产酸产气 • IMViC试验（靛基质、甲基红、VP、柠
檬酸盐利用试验）为＋＋－－
属于大肠埃希菌的生化反应是
____
ACD
• A.发酵葡萄糖产酸产气 • B.发酵葡萄糖产酸不产气 • C.发酵乳糖 • D.IMViC实验结果为“++--” • E.IMViC实验结果为“--++”
减少感染发生：充分烹饪食物、洗手
第二节 志贺菌属（Shigella）
生物学性状
• 形态染色
• G-杆菌，0.5～0.7 µm 2～3µm • 无鞭毛，无荚膜， 有菌毛
无动力的肠道杆菌是___A_____
• A. 志贺菌 • B.大肠埃希菌 • C.变形杆菌 • E.以上均是
生物学性状
• 培养及生化反应
加导致肠分泌增加
第二十一章-肠杆菌科细菌PPT课件
某些血清型可导致腹泻
常作为水源、饮水、食 物粪便污染的指标
14
.
两大原因可以致病
1、条件致病 细菌居住部位改变引起的肠外感染： 尿路感染最常见
2、致病菌株 某些带有致病基因的血清型，引起肠道感染
15
.
一、生物学性状
形态染色：G-杆菌 有周身鞭毛 致病株有菌毛
培养：营养要求不高
生化反应：I M Vi C 乳糖 ＋ ＋－－ ＋
Ｈ抗原：分两相
Ｖi 抗原：与Ｋ抗原类同， 与 毒力有关。诊断伤寒
.
27
致病性
（一）致病物质
侵袭力： inv基因编码侵袭素穿上皮细胞层 进皮下组织，吞噬细胞内生长繁殖
Ｖi/O 抗原：抗吞噬（胞内感染）
内毒素：引起机体发热，白细胞减少，中毒性休克
肠毒素：如鼠伤寒沙门菌可产生肠毒素
28
.
（二）所致疾病
新生儿脑膜炎
肠内感染：ETEC——霍乱样腹泻
EIEC——菌痢样腹泻
EPEC——婴幼儿腹泻
EHEC——溶血性尿毒综合征
EAEC——婴幼儿持续性腹泻
20
.
致病性大肠杆菌引起的腹泻
菌株 作用部位所致疾病 致病机理 ETEC 小肠 旅行者腹泻婴 ST、LT
幼儿腹泻 EPEC 小肠 婴儿腹泻 粘附和破坏上皮细胞 EIEC 大肠 较大儿童成人 侵袭和破坏结肠粘膜上皮细胞
中枢神经系统（埃希菌属）
下呼吸道（克雷伯菌属、肠杆菌属、埃希 菌属 ）
血液（埃希菌属 、克雷伯菌属、肠杆菌属 ）
胃肠道（埃希菌属 、沙门菌属、志贺菌属、耶 尔森菌属）
泌尿道（埃希菌属 、变形杆菌属、克雷伯菌属 、摩根菌属）
13
.
第二节 埃希菌属 Escherichia
常作为水源、饮水、食 物粪便污染的指标
14
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两大原因可以致病
1、条件致病 细菌居住部位改变引起的肠外感染： 尿路感染最常见
2、致病菌株 某些带有致病基因的血清型，引起肠道感染
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.
一、生物学性状
形态染色：G-杆菌 有周身鞭毛 致病株有菌毛
培养：营养要求不高
生化反应：I M Vi C 乳糖 ＋ ＋－－ ＋
Ｈ抗原：分两相
Ｖi 抗原：与Ｋ抗原类同， 与 毒力有关。诊断伤寒
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致病性
（一）致病物质
侵袭力： inv基因编码侵袭素穿上皮细胞层 进皮下组织，吞噬细胞内生长繁殖
Ｖi/O 抗原：抗吞噬（胞内感染）
内毒素：引起机体发热，白细胞减少，中毒性休克
肠毒素：如鼠伤寒沙门菌可产生肠毒素
28
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（二）所致疾病
新生儿脑膜炎
肠内感染：ETEC——霍乱样腹泻
EIEC——菌痢样腹泻
EPEC——婴幼儿腹泻
EHEC——溶血性尿毒综合征
EAEC——婴幼儿持续性腹泻
20
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致病性大肠杆菌引起的腹泻
菌株 作用部位所致疾病 致病机理 ETEC 小肠 旅行者腹泻婴 ST、LT
幼儿腹泻 EPEC 小肠 婴儿腹泻 粘附和破坏上皮细胞 EIEC 大肠 较大儿童成人 侵袭和破坏结肠粘膜上皮细胞
中枢神经系统（埃希菌属）
下呼吸道（克雷伯菌属、肠杆菌属、埃希 菌属 ）
血液（埃希菌属 、克雷伯菌属、肠杆菌属 ）
胃肠道（埃希菌属 、沙门菌属、志贺菌属、耶 尔森菌属）
泌尿道（埃希菌属 、变形杆菌属、克雷伯菌属 、摩根菌属）
13
.
第二节 埃希菌属 Escherichia
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- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
#43;
20
实验结果
表 肠杆菌科部分细菌重要生物学特征
细
糖发酵试验
吲哚 甲基 VP
菌
红
编 号
葡 萄 糖
乳 糖
麦 芽 糖
甘 露 醇
蔗 糖
B3 ⊕ ⊕ ⊕ ⊕ - + +
-
B4 ⊕ - - ⊕ - - -
-
B5 ⊕ ⊕ ⊕ ⊕ - + +
-
枸 动 志贺 沙门
橼 力 菌属 菌属
酸
多价 多价
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实验结果
❖萄发酵管——甘露醇 三支葡萄糖发酵管依次分别接种培
养了可疑大肠杆菌、可疑沙门杆菌、可 疑志贺杆菌。
✓试管均从原来蓝色变为黄色， ✓并且小试管均有小气泡， ✓所以三种可疑菌均有产气产酸。 ✓其中沙门菌颜色较浅，产酸较少。
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实验结果
❖萄发酵管——乳糖 三支葡萄糖发酵管依次分别接种培
养了可疑大肠杆菌、可疑沙门杆菌、可 疑志贺杆菌。
料
单糖发酵管
硫酸亚铁半固体培养基
普通肉汤培养基
西蒙枸櫞酸盐培养基
4
实验方法
配置 培养基
分离菌 株
纯化培 养
血清学 鉴定
生化反 应鉴别
❖紫黑色的单个菌落，可初步定为可疑大肠埃希菌
菌不号落发。，酵编 乳❖清❖取待号糖放洁环；的在净冷光，玻载却滑可片玻后无疑上片用❖麦水色志，，环每透贺然，2支平❖以在明菌后株甘，取灭菌板的属烧可，西菌种肠单 或环分疑蔗接斜蒙个沙。杆离菌）种面菌门枸菌法落各环菌落菌櫞混分接1取苔可属支酸合离种上1初菌，盐~溶菌以蘸2步落环琼蛋液株取下定，志脂白涂：少为编培贺斜胨布量养菌面水细于基属菌一1E：多支M与支B价糖，平血，诊发硫板清葡断酵酸混培萄血管亚养糖（铁基蛋葡琼白，脂胨乳半， ❖编❖录取 观号。双察的（糖可可 用合❖观铁疑轻疑酸，察高细轻菌碱先凝层 菌摇落指在集琼在动，示血现脂双载送剂清象斜糖玻固❖养检3边。7面铁片接测℃缘体24上❖待培琼，双恒处种培-4挑养脂一，用糖温将完8养小基斜边选铁箱细3。毕基7，面摇时琼培菌菌℃后1无的动脂养研支候落恒，菌生，斜2磨，观形温4试操长一面-开普察态4箱管作现边和8，通记小、倒置接象将琼然时肉录颜置种并载于脂后。汤于色培已记玻高再试琼表不片养混管脂格稍一匀2架4微半中。致h上倾固。的后，斜体菌。送对培落3光7养保℃基存恒1温支箱。培
✓只有可疑志贺菌试管变为黄色， ✓并且只有可疑志贺菌试管的小试管无 小气泡， ✓所以可疑大肠杆菌、沙门菌均产气产 酸菌，志贺菌的乳糖发酵为阴性。
19
实验结果
可疑菌落 B3 B4 B5 B6
肠杆菌科细菌初步鉴定结果记录 表
EMB
双糖铁生长现象
略
K/A,H2S -/+
略
K/A,H2S-
略
A/A,H2S-
肠杆菌科细菌的鉴定
主讲人：
小组成员：
1
目录
实验目的及背景 实验方法 实验结果 实验结论
2
实验目的及意义
实验背景
肠杆科细菌是一大群生 物学性状非常相似的革兰氏 阴性杆菌，它们的酶十分活 跃，能分解多种糖和醇类。 因此肠杆菌科细菌鉴定主要 依靠生化反应和血清学反应。
而本实验中已得知所给 的混合菌种中含有大肠杆菌、 志贺菌和沙门菌三种。可依 靠生化反应鉴定大肠杆菌， 血清学鉴定区分志贺菌和沙 门菌。
实验目的
通过对三种肠杆菌科细 菌的鉴定实验，全面的 熟悉细菌常规鉴定程序 和方法，初步掌握细菌 鉴定实验操作技能，学 会正确观察记录实验结 果以及分析归纳实验资 料，得出正确的鉴定结 论并撰写合格的细菌鉴 定实验报告。
3
实验方法
肠杆菌混合液（老师提供）
实
伊红亚甲蓝琼脂平板培养基
验 材
双糖含铁培养基
可疑大肠杆菌（-）、可疑沙门菌（-）、可疑志贺菌（-）
14
❖萄发酵管——葡萄糖
实验结果
三支葡萄糖发酵管依次分别接种培 养了可疑大肠杆菌、可疑志贺杆菌、沙 门杆菌。
✓试管均从原来蓝色变为黄色， ✓并且小试管均有小气泡， ✓所以三种可疑菌均有产气产酸。
15
实验结果
❖萄发酵管——蔗糖 三支葡萄糖发酵管依次分别接种培
层的颜色变化）
5
实验结果
❖EMB培养基肠杆菌分离培养
可疑的志贺菌和沙门菌 (光滑无色透明）
可疑大肠杆菌 （紫黑色且在亮光下可有绿色金属光泽）
6
❖双糖铁琼脂斜面培养
实验结果
疑沙 疑志 疑大 疑沙 门菌1 贺菌 肠菌 门菌2
7
实验结果
❖对疑志贺菌（B4）的血清鉴定结果
无凝集现象
有白色凝集
8
实验结果
❖对疑沙门菌（B3）的血清鉴定结果
无凝集现象
有白色凝集
9
实验结果
❖动力测试（普通肉汤半固体培养）
大肠杆菌和可疑沙 门菌均有运动趋势， 琼脂显浑浊。
可疑志贺菌则紧沿 穿刺路线生长。
大 可可 肠 疑疑 杆 沙志 菌 门贺
菌菌
10
实验结果
❖生化反应鉴定——蛋白胨水（I—吲哚）
从左至右依次为：可疑大肠杆菌（+）、可疑沙门（+）、可疑志贺（-）
养了可疑大肠杆菌、可疑志贺杆菌、可 疑沙门杆菌。
✓试管均呈原来的蓝色， ✓并且小试管均有无小气泡， ✓所以三种可疑菌的蔗糖发酵为阴性。
16
实验结果
❖萄发酵管——麦芽糖 三支葡萄糖发酵管依次分别接种培
养了可疑大肠杆菌、可疑沙门杆菌、可 疑志贺杆菌。
从左至右： 大肠杆菌、沙门菌均产气产酸，志贺菌 为阴性
11
实验结果
❖生化反应鉴定——葡萄糖蛋白胨水（M—甲基红）
依次为：可疑大肠杆菌（+）、可疑沙门菌（+）、可疑志贺菌（-）
12
实验结果
❖生化反应鉴定——葡萄糖蛋白胨水（Vp）
从左至右依次为： 可疑大肠杆菌（-）、可疑沙 门菌（-）、可疑志贺菌（-）
13
实验结果
❖生化反应鉴定——西蒙枸橼酸盐琼脂斜面（C）
盐
判断 判断
利
血清 血清
用
- +-
+
- -+
-
- +-
-
（⊕产酸产气，+产酸不产气，-不产酸也不产气）
21
实验结论
➢根据B3和B4、B6的EMB菌落特点可初步判断这三个菌落为致病菌落。
➢经过双糖铁纯化培养后，B3和B6为H2S阳性，可初步诊断B3和B6为沙门菌属。
➢B4的双糖铁纯化后为K/A及H2S阴性，可初步诊断为志贺菌属。
➢分别对B3和B4进行血清学鉴定，结果与初步诊断的预测一致，即B3在沙门菌 属血清中发生凝集反应，B4在志贺菌属血清中发生凝集反应，由此可以肯定B3 为沙门菌属。
➢根据实验结果记录，B5号菌的EMB菌落特点和双糖铁生长现象符合大肠杆菌 的特征，初步确定为可疑的大肠杆菌。
➢经过生化反应鉴定，B5的IMViC反应为++--，五种糖发酵结果均为阳性，可以 断定B5确实为大肠杆菌。
20
实验结果
表 肠杆菌科部分细菌重要生物学特征
细
糖发酵试验
吲哚 甲基 VP
菌
红
编 号
葡 萄 糖
乳 糖
麦 芽 糖
甘 露 醇
蔗 糖
B3 ⊕ ⊕ ⊕ ⊕ - + +
-
B4 ⊕ - - ⊕ - - -
-
B5 ⊕ ⊕ ⊕ ⊕ - + +
-
枸 动 志贺 沙门
橼 力 菌属 菌属
酸
多价 多价
17
实验结果
❖萄发酵管——甘露醇 三支葡萄糖发酵管依次分别接种培
养了可疑大肠杆菌、可疑沙门杆菌、可 疑志贺杆菌。
✓试管均从原来蓝色变为黄色， ✓并且小试管均有小气泡， ✓所以三种可疑菌均有产气产酸。 ✓其中沙门菌颜色较浅，产酸较少。
18
实验结果
❖萄发酵管——乳糖 三支葡萄糖发酵管依次分别接种培
养了可疑大肠杆菌、可疑沙门杆菌、可 疑志贺杆菌。
料
单糖发酵管
硫酸亚铁半固体培养基
普通肉汤培养基
西蒙枸櫞酸盐培养基
4
实验方法
配置 培养基
分离菌 株
纯化培 养
血清学 鉴定
生化反 应鉴别
❖紫黑色的单个菌落，可初步定为可疑大肠埃希菌
菌不号落发。，酵编 乳❖清❖取待号糖放洁环；的在净冷光，玻载却滑可片玻后无疑上片用❖麦水色志，，环每透贺然，2支平❖以在明菌后株甘，取灭菌板的属烧可，西菌种肠单 或环分疑蔗接斜蒙个沙。杆离菌）种面菌门枸菌法落各环菌落菌櫞混分接1取苔可属支酸合离种上1初菌，盐~溶菌以蘸2步落环琼蛋液株取下定，志脂白涂：少为编培贺斜胨布量养菌面水细于基属菌一1E：多支M与支B价糖，平血，诊发硫板清葡断酵酸混培萄血管亚养糖（铁基蛋葡琼白，脂胨乳半， ❖编❖录取 观号。双察的（糖可可 用合❖观铁疑轻疑酸，察高细轻菌碱先凝层 菌摇落指在集琼在动，示血现脂双载送剂清象斜糖玻固❖养检3边。7面铁片接测℃缘体24上❖待培琼，双恒处种培-4挑养脂一，用糖温将完8养小基斜边选铁箱细3。毕基7，面摇时琼培菌菌℃后1无的动脂养研支候落恒，菌生，斜2磨，观形温4试操长一面-开普察态4箱管作现边和8，通记小、倒置接象将琼然时肉录颜置种并载于脂后。汤于色培已记玻高再试琼表不片养混管脂格稍一匀2架4微半中。致h上倾固。的后，斜体菌。送对培落3光7养保℃基存恒1温支箱。培
✓只有可疑志贺菌试管变为黄色， ✓并且只有可疑志贺菌试管的小试管无 小气泡， ✓所以可疑大肠杆菌、沙门菌均产气产 酸菌，志贺菌的乳糖发酵为阴性。
19
实验结果
可疑菌落 B3 B4 B5 B6
肠杆菌科细菌初步鉴定结果记录 表
EMB
双糖铁生长现象
略
K/A,H2S -/+
略
K/A,H2S-
略
A/A,H2S-
肠杆菌科细菌的鉴定
主讲人：
小组成员：
1
目录
实验目的及背景 实验方法 实验结果 实验结论
2
实验目的及意义
实验背景
肠杆科细菌是一大群生 物学性状非常相似的革兰氏 阴性杆菌，它们的酶十分活 跃，能分解多种糖和醇类。 因此肠杆菌科细菌鉴定主要 依靠生化反应和血清学反应。
而本实验中已得知所给 的混合菌种中含有大肠杆菌、 志贺菌和沙门菌三种。可依 靠生化反应鉴定大肠杆菌， 血清学鉴定区分志贺菌和沙 门菌。
实验目的
通过对三种肠杆菌科细 菌的鉴定实验，全面的 熟悉细菌常规鉴定程序 和方法，初步掌握细菌 鉴定实验操作技能，学 会正确观察记录实验结 果以及分析归纳实验资 料，得出正确的鉴定结 论并撰写合格的细菌鉴 定实验报告。
3
实验方法
肠杆菌混合液（老师提供）
实
伊红亚甲蓝琼脂平板培养基
验 材
双糖含铁培养基
可疑大肠杆菌（-）、可疑沙门菌（-）、可疑志贺菌（-）
14
❖萄发酵管——葡萄糖
实验结果
三支葡萄糖发酵管依次分别接种培 养了可疑大肠杆菌、可疑志贺杆菌、沙 门杆菌。
✓试管均从原来蓝色变为黄色， ✓并且小试管均有小气泡， ✓所以三种可疑菌均有产气产酸。
15
实验结果
❖萄发酵管——蔗糖 三支葡萄糖发酵管依次分别接种培
层的颜色变化）
5
实验结果
❖EMB培养基肠杆菌分离培养
可疑的志贺菌和沙门菌 (光滑无色透明）
可疑大肠杆菌 （紫黑色且在亮光下可有绿色金属光泽）
6
❖双糖铁琼脂斜面培养
实验结果
疑沙 疑志 疑大 疑沙 门菌1 贺菌 肠菌 门菌2
7
实验结果
❖对疑志贺菌（B4）的血清鉴定结果
无凝集现象
有白色凝集
8
实验结果
❖对疑沙门菌（B3）的血清鉴定结果
无凝集现象
有白色凝集
9
实验结果
❖动力测试（普通肉汤半固体培养）
大肠杆菌和可疑沙 门菌均有运动趋势， 琼脂显浑浊。
可疑志贺菌则紧沿 穿刺路线生长。
大 可可 肠 疑疑 杆 沙志 菌 门贺
菌菌
10
实验结果
❖生化反应鉴定——蛋白胨水（I—吲哚）
从左至右依次为：可疑大肠杆菌（+）、可疑沙门（+）、可疑志贺（-）
养了可疑大肠杆菌、可疑志贺杆菌、可 疑沙门杆菌。
✓试管均呈原来的蓝色， ✓并且小试管均有无小气泡， ✓所以三种可疑菌的蔗糖发酵为阴性。
16
实验结果
❖萄发酵管——麦芽糖 三支葡萄糖发酵管依次分别接种培
养了可疑大肠杆菌、可疑沙门杆菌、可 疑志贺杆菌。
从左至右： 大肠杆菌、沙门菌均产气产酸，志贺菌 为阴性
11
实验结果
❖生化反应鉴定——葡萄糖蛋白胨水（M—甲基红）
依次为：可疑大肠杆菌（+）、可疑沙门菌（+）、可疑志贺菌（-）
12
实验结果
❖生化反应鉴定——葡萄糖蛋白胨水（Vp）
从左至右依次为： 可疑大肠杆菌（-）、可疑沙 门菌（-）、可疑志贺菌（-）
13
实验结果
❖生化反应鉴定——西蒙枸橼酸盐琼脂斜面（C）
盐
判断 判断
利
血清 血清
用
- +-
+
- -+
-
- +-
-
（⊕产酸产气，+产酸不产气，-不产酸也不产气）
21
实验结论
➢根据B3和B4、B6的EMB菌落特点可初步判断这三个菌落为致病菌落。
➢经过双糖铁纯化培养后，B3和B6为H2S阳性，可初步诊断B3和B6为沙门菌属。
➢B4的双糖铁纯化后为K/A及H2S阴性，可初步诊断为志贺菌属。
➢分别对B3和B4进行血清学鉴定，结果与初步诊断的预测一致，即B3在沙门菌 属血清中发生凝集反应，B4在志贺菌属血清中发生凝集反应，由此可以肯定B3 为沙门菌属。
➢根据实验结果记录，B5号菌的EMB菌落特点和双糖铁生长现象符合大肠杆菌 的特征，初步确定为可疑的大肠杆菌。
➢经过生化反应鉴定，B5的IMViC反应为++--，五种糖发酵结果均为阳性，可以 断定B5确实为大肠杆菌。