专题2 微生物的培养与应用
专题2--微生物的培养与应用(用)
焰旁的桌面上，
右手拿装有培
养基的锥形瓶，
左手拨出棉塞。
4
倒平板技术
2.右手拿锥形
1
2
瓶，使瓶口迅
速通过火焰。
3
4
1 3
倒平板技术
3.用左手的拇指
和食指将培养皿
打开一条稍大于
瓶口的缝隙，右
2
手将锥形瓶中的
培养基(约10~
20mL)倒入培养
皿，左手立即盖
4
上培养皿的皿盖。
1 3
倒平板技术
4.等待平板冷
真核细胞
如草履虫、单细胞藻类等
微生物包含了除植物界和动物界以外的所有生物
课题1 微生物的实验室培养
防止杂菌入侵，获得纯净的培养物， 是研究和应用微生物的前提。一方面需要
为培养的微生物提供合适的营养和环境 条件，另一方面需要确保其他微生物无 法混入。
一、基础知识：
（一）培养基
（二）无菌技术
（一）培养基 1.概念：
答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物 污染培养基。
3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？
答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固 后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置， 既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以 防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。
4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基 溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能 用来培养微生物吗？为什么？
无菌技术还能有效避免操作者自 身被微生物感染。
2、请你判断以下材料或用具是否需
要消毒或灭菌。如果需要，请选择合 适的方法。 （1） 培养细菌用的培养基与培养皿
灭菌
高压蒸气灭菌
（2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管 灭菌 高压蒸气灭菌/干热灭菌
专题2--微生物的培养与应用
微生物的培养与应用1．培养基按照物理性质分为液体培养基(常应用于工业或生活生产)、固体培养基(常应用于微生物的分离和鉴定)和半固体培养基(常用于观察微生物的运动及菌种保藏等)。
2．按照成分培养基分为人工合成培养基和天然培养基。
(合成培养基是用成分已知的化学物质配制而成，其中成分的种类比例明确，常用于微生物的分离鉴定。
天然培养基是用化学成分不明的天然物质配制而成，常用于实际工业生产。
)3．按照培养基的用途可将培养基分为选择培养基和鉴定培养基。
（选择培养基是指在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物生长，促进所需要的微生物的生长。
鉴别培养基是根据微生物的特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品配制而成的，用以鉴别不同类别的微生物。
）4．微生物的实验室培养常用琼脂(是从红藻中提取的一种多糖)作凝固剂。
5．培养基的化学成分包括水、无机盐、碳源、氮源、生长因子等。
(碳源是能为微生物的代谢提供碳元素的物质，如CO2、NaHCO3等无机碳源；糖类、石油、花生粉饼等有机碳源。
异养微生物只能利用有机碳源。
单质碳不能作为碳源。
氮源是能为微生物的代谢提供氮元素的物质，如N2、NH3、NO3-、NH4+（无机氮源）蛋白质、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨（有机氮源）等。
只有固氮微生物才能利用N2。
培养基还要满足微生物生长对PH、特殊营养物质以及氧气的要求。
例如，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，培养霉菌时须将培养基的pH调至酸性，培养细菌是需要将pH调至中性或微碱性，培养厌氧型微生物是则需要提供无氧的条件)6．无菌技术包括消毒和灭菌。
(①对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。
②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。
③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。
④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。
⑤无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。
专题2 微生物的培养与应用共22页PPT
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27、只有把抱怨环境的心情，化为上进的力量，才是成功的保证。——罗曼·罗兰
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28、知之者不如好之者，好之者不如乐之者。——孔子
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29、勇猛、大胆和坚定的决心能够抵得上武器的精良。——达·芬奇
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30、意志是一个强壮的盲人，倚靠在明眼的跛子肩上。——叔本华
谢谢！
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专题2 微生物的培养与应用
11、不为五斗米折腰。 12、芳菊开林耀，青松冠岩列。怀此 贞秀姿 ，卓为 霜下杰 。
13、归去来兮，田蜀将芜胡不归。 14、酒能祛百虑，菊为制颓龄。 15、春蚕收长丝，秋熟得舒适、愉快，这是不可能的，因为人类必须具备一种能应付逆境的态度。——卢梭
微生物的培养和应用
专题2 微生物的培养与应用课题3 分解纤维素的微生物的分离一、基础知识回顾1、培养基概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。
2、培养基种类：液体培养基和固体培养基，二者的区别是是否添加凝固剂，其中实验室中常用的凝固剂是琼脂。
3、培养基营养成分：（1）主要营养物质：碳源、氮源、水和无机盐。
（2）其他条件：pH、特殊营养和氧气。
4、微生物的培养和分离过程中的无菌技术：(1)目的：获得纯净的培养物。
(2)关键：防止外来杂菌的入侵。
(3)常用方法：灭菌（培养皿—干热灭菌；培养基—高压蒸汽灭菌；接种环—灼烧灭菌）和消毒（操作者灭双手—化学消毒；操作室—紫外线消毒）。
5、高压蒸汽灭菌法：压力为100 kPa，温度为121℃，灭菌时间为15~30min.6、巴氏灭菌法，亦称低温消毒法，是由法国微生物学家巴斯德发明的低温杀菌法，是一种利用较低的温度既可杀死病菌又能保持物品中营养物质风味不变的消毒法，常常被广义地用于定义需要杀死各种病原菌的热处理方法。
7、干热灭菌法是指在干燥环境（如火焰或干热空气）进行灭菌的技术。
一般有火焰灭菌法和干热空气灭菌法。
适用于干燥粉末、凡士林、油脂等。
8、倒平板：待培养基冷却至50℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。
9、菌落：由单个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体。
10、平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基的表面连续划线操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。
11、稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释，稀释度足够高时，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞。
为了使微生物在培养基上能够均匀分布，一般用涂布法将微生物接种在培养基上。
12、微生物的接种方法还包括斜面接种、穿刺接种等，其核心是防止杂菌污染，保证培养物的纯度。
13、平板划线操作中灼烧接种环的目的：第一次划线前：杀死接种环上原有的微生物，防止外来杂菌污染培养基；第二次及以后每次划线前：杀死上次划线后接种环上残留的菌种，使下次划线的菌种直接来源于上次划线的末端。
_高中生物专题2微生物的培养与应用课题1微生物的实验室培养三课件新人教版选修
（三）是否进行了及时细致的观察与记录
培养12h与24h后的大肠杆菌菌落的大小会有 明显不同，及时观察记录的同学会发现这一 点，并能观察到其他一些细微的变化。
人教版 选修一
专题二 微生物的培养与应用
课题1 微生物的实验室培养
课题背景
微生物研究和应用的前提： 防止杂菌入侵，获得纯净的培养物 如何获得纯净培养物？ ①合适的营养和环境条件 ②确保其他微生物无法混入
一 基础知识 （一）培养基
1.概念： 人们按照微生物对营养物质的不同需求， 配制出供其生长繁殖的营养基质。
4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基 溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能 用来培养微生物吗？为什么？
答：最好不要用这个平板培养微生物。 防止空气中的微生物可能在皿盖与皿底之
间的培养基上滋生。
5.怎么确定所倒平板未被杂菌污染？
无菌检查：将灭菌的培养基放入37℃的温室 中培养24～48小时，观察是否有菌落存在以 确定是否被污染或灭菌是否彻底。
2.类型：
按物理性质划分： 按化学成分划分： 按用途划分：
（1）按物理性质划分：
固体培养基
有无 凝固剂琼脂
液体培养基
分离 鉴定
工业 生产
菌落
1.定义： 单个
固体培养基上 子细胞群体
或少数菌体 大量繁殖
2.特征： 大小、形状、光泽度、颜色、透明度等。
3.意义： 鉴定菌种的重要依据
（2）按化学成分划分：
（二）纯化大肠杆菌
菌落
1.定义： 单个
固体培养基上 子细胞群体
或少数菌体 大量繁殖 （肉眼可见）
2.特征： 大小、形状、光泽度、颜色、透明度等。
（二）纯化大肠杆菌
专题二 微生物的培养与应用
专题2 微生物的培养与应用课题1 微生物的实验室培养一、培养基1.概念：人们按照对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。
2.种类（1）按物理状态来分：〃固体培养基：不加凝固剂，用于工业生产。
〃液体培养基：加凝固剂（如琼脂），用于微生物分离、鉴定，活菌数，保藏菌种等。
（琼脂是一种从红藻中提取出的多糖，在98°C 以上熔化，44°C 以下凝固，在常规培养条件下呈固态。
琼脂中的多糖不易被微生物分解，所以一般不用做碳源。
）（2）按功能来分：〃选择培养基：培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物生长，促进所需要的微生物生长。
用于培养、分离出特定的微生物。
常见选择培养基如下：加入青霉素的培养基:分离酵母菌、霉菌等真菌加入高浓度食盐的培养基:分离金黄色葡萄球菌不加氮源的无氮培养基:分离固氮菌不加含碳有机物的无碳培养基:分离自养型微生物加入青霉素等抗生素的培养基:分离导入了目的基因的受体细胞〃鉴别培养基：根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品。
用于鉴别不同种类的微生物。
（可用伊红—美蓝培养基鉴别饮用水或乳制品中是否有大肠杆菌。
若有，菌落呈深紫色并带有金属光泽。
）（3）按成分来分：〃天然培养基〃合成培养基3.培养基的营养要素不管哪种培养基，一般都含有水、碳源、和氮源、 无机盐等营养物质，另外还需要满足微生物生长对pH 、特殊营养物质,例如:生长因子(即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物,如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧气、二氧化碳、渗透压等的要求。
例如，乳酸杆菌需添加维生素，霉菌时需将pH 调至酸性，细菌pH 调至中性或微碱性，厌氧微生物需无氧条件。
（1） 碳源：构成生物细胞、生物体及细胞代谢产物，有些为异养生物提供能量。
主要来源与CO2、微生物 病毒细菌放线菌 原核生物界 病毒界NaHCO3等无机化合物和糖类、脂质、花生粉饼、石油等有机化合物。
（2）氮源：用于合成蛋白质核酸及含氮代谢产物，也可为异氧微生物提供能源。
微生物的培养与应用
2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷 却后再进行划线？
以免接种环温度太高，杀死菌种。
3.在作第二次以及其后的划线操作 时，为什么总是从上一次划线的末端开 始划线？
划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处 要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细 菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最 终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。
碳 源
凡是能为微 生物提供所 需碳元素的 营养物质
思考
自养型和异养型微生物分别能利用哪类 碳源物质？
（2）微生物的氮源 概念 来源 作用
主要用于合成 蛋白质、核酸 及含N的代谢 产物 无机氮源 凡是能够 N2、NH4+、 氮 为微生物 NO3-、NH3等 源 提供N元 有机氮源 素的营养 尿素、牛肉膏、 物质 蛋白胨、氨基酸 等
空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养 基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生 物。
（二）纯化大肠杆菌
微生物的接种技术：
接种方法有：
平板划线法和稀释涂布平板法
平板划线法:通过接种环在琼脂固体培养 基表面连续画线的操作,将聚集的菌钟逐步稀 释分散到培养基的表面. 在数次画线后,可以分离到由一个细胞繁 殖而来的肉眼可见的子细胞群体,这就是菌落.
(2)灭菌的方法：
1、灼烧灭菌 接种环、接种针、试 管口 2、干热灭菌：160170 ℃下加热1-2h。
3、高压蒸气灭菌： 100kPa、121 ℃下 维持15-30min.
旁栏思考
1.无菌技术除了用来防止实验室 的培养物被其他外来微生物污染外， 还有什么目的？
答：无菌技术还能有效避免操作 者自身被微生物感染。
• 根据用途分
–鉴别培养基——在培养基中加入某种指示剂或 化学药品,用以鉴别不同种类的微生物。 •伊红和美蓝,和大肠杆菌的代谢产物结合,使菌 落呈深紫色
2023-2024学年高中生物人教版选修1专题2 微生物的培养与应用单元测试(含答案解析)
2023-2024学年人教版高中生物单元测试学校 __________ 班级 __________ 姓名 __________ 考号 __________注意事项1．答题前填写好自己的姓名、班级、考号等信息;2．请将答案正确填写在答题卡上;一、选择题（本大题共计15小题每题3分共计45分）1.下列有关分解纤维素微生物的分离的叙述错误的是（）A. 纤维素酶的发酵方法有液体发酵和固体发酵B. 对分解纤维素的微生物进行了初步筛选后无需再进行其他实验C. 纤维素酶的测定方法一般是对所产生的葡萄糖进行定量测定D. 纤维素酶是一种复合酶【答案】B【解析】解 A.纤维素酶的发酵方法有液体发酵和固体发酵 A正确B.如果在鉴别培养基观察到产生透明圈的菌落说明可能获得了纤维素分解菌为了确定是纤维素分解菌还需要进行发酵产纤维素酶的实验 B错误C.纤维素酶的测定方法一般是采用对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的葡萄糖进行定量的测定 C正确D.纤维素酶是一种复合酶主要包括 C_1酶、 C_X酶和葡萄糖苷酶 D正确故选 B2.下列有关“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验”的叙述正确的是（）A. 分离土壤中的尿素分解菌实验中采集的土样经高温灭菌后可以用于制取土壤稀释液B. 测定土壤样品中的活菌数目常用显微镜直接计数法C. 测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量选用的稀释度范围不同D. 接种土壤微生物稀释液时平板划线法可以采取连续划线的方法使微生物均匀分布【答案】C【解析】解 A.分离土壤中的尿素分解菌实验中采集的土样经高温灭菌后其中的微生物全部死亡不能得到尿素分解菌 A错误B.测定土壤样品中的活菌数目常用菌落计数法一般不常用显微镜直接计数法 B错误C.土壤中各类微生物的数量不同为了获得不同类型的微生物就需要按不同的稀释度进行分离可见测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量选用的稀释度范围也不同 C正确D.接种土壤微生物稀释液时可借助平板划线法通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面但并不是使微生物均匀分布 D 错误故选 C3.微生物培养过程中要十分重视无菌操作现代生物学实验中的许多方面也要进行无菌操作防止杂菌污染请分析下列操作中错误的是（）①煮沸消毒可以杀死微生物的营养细胞和部分芽孢②接种操作要在酒精灯火焰附近进行③家庭制作葡萄酒时要将容器和葡萄进行灭菌④培养基要进行高压蒸汽灭菌⑤加入培养基中的指示剂和染料不需要灭菌A. ①③B. ②④C. ③⑤D. ④⑥【答案】C【解析】解家庭制作葡萄酒时是利用附着于葡萄皮表面的野生酵母菌进行酒精发酵制作葡萄酒时不需要将葡萄进行灭菌以免杀死酵母菌③错误指示剂和染料中可能混有微生物故加入培养基前需灭菌⑤错误故选 C4.鱼塘养殖池中存在的有毒物质主要是氨及亚硝酸这两种物质可被硝化细菌吸收利用在“养殖池底泥中硝化细菌的分离和计数”实验中下列说法正确的是（）A. 需要配制添加一定浓度氨盐的牛肉膏蛋白胨培养基以筛选硝化细菌B. 应对采集底泥使用的工具进行灭菌全部接种过程均需在酒精灯火焰旁进行C. 采用平板划线法进行接种时还需与未接种的空白培养基同时培养D. 若空白对照组上长出了菌落需要在实验组数据的基础上减去空白对照组的菌落数【答案】B【解析】解 A.分离硝化细菌应用以氨和亚硝酸为唯一氮源的培养基牛肉膏蛋白胨本身能提供氮源无法筛选硝化细菌 A错误B.应对采集底泥使用的工具进行灭菌全部接种过程均需在酒精灯火焰旁进行 B正确C.平板划线法可以分离菌种但不能用于计数 C错误D.若空白对照组上长出了菌落则培养基已经被杂菌污染统计结果无效实验失败需重新进行实验 D错误故选 B5.嗜热菌又称高温细菌是一类生活在火山口及其周围区域、温泉、工厂高温废水排放区等高温环境中的微生物研究者从温泉中筛选高效产生高温淀粉酶的嗜热菌其筛选过程如图1所示将得到的菌悬液转接于同时含有葡萄糖和淀粉作碳源的固体培养基上培养得到若干菌落后用碘液作显色处理结果如图2所示下列说法错误的是（）A. 热泉的高温状态淘汰了绝大多数的微生物保留了嗜热菌B. 甲、乙试管为液体培养基液体培养基能分离获得水生噬热杆菌单菌落C. 丙中噬热菌数量迅速增加培养过程中需保证充足的营养和高温条件D. 图2中周围不显蓝色的菌落含有所需的嗜热菌【答案】B【解析】A、热泉的高温状态淘汰了绝大多数的微生物保留了嗜热菌B、甲、乙试管为液体培养基 B错误C、丙中噬热菌数量迅速增加 C正确D、图2中周围不显蓝色的菌落所以周围不显蓝色的菌落含有所需的嗜热菌6.下列有关“微生物的分离与培养”实验的叙述正确的是（）A. 高压蒸汽灭菌锅加盖时应按顺时针方向依次旋紧螺栓B. 选择培养基可以鉴定某种微生物的种类C. 待培养基冷却至室温时倒平板D. 统计样品中活菌数量时接种方法可采用稀释涂布平板法【答案】D【解析】A、高压蒸汽灭菌锅加盖时将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的排气槽内再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓使螺栓松紧一致勿使漏气 A错误B、鉴别培养基可以鉴定某种微生物的种类 B错误C、待培养基冷却至50℃左右时倒平板 C错误D、统计样品中活菌数量时接种方法可采用稀释涂布平板法 D正确7.下列关于培养基的叙述中正确的是（）A. 微生物在液体培养基表面生长可以形成肉眼可见的菌落B. 培养霉菌与细菌时培养基的pH基本一致C. 一般培养基都必须加入碳源、氮源、无机盐和水D. 蛋白胨只能为微生物提供碳源和维生素【答案】C【解析】A项微生物在固体培养基表面生长可以形成肉眼可见的菌落 A错误B项培养霉菌时需将培养基的pH调至酸性培养细菌时需将pH调至中性或微碱性 B错误C项培养基一般都需要水、碳源、氮源和无机盐等成分 C正确D项蛋白胨可为微生物提供氮源、碳源和维生素 D错误故选C8.下列关于纤维素分解菌分离实验的说法不正确的是（）A. 通常采用刚果红染色法筛选纤维素分解菌B. 当纤维素被纤维素分解菌释放的纤维素酶分解后培养基中会出现透明圈C. 该实验用的培养基为选择培养基D. 在用刚果红染色时只能先培养微生物再加入刚果红不能在倒平板时加入【答案】D【解析】A、刚果红能鉴别纤维素可采用刚果红染色法筛选纤维素分解菌 A正确B、刚果红只能与纤维素结合呈红色当纤维素被纤维素分解菌释放的纤维素酶分解后菌落周围的纤维素被分解所以培养基中会出现透明圈 B正确C、由于碳源是纤维素所以只有能分解纤维素的菌才能生存所以该培养基属于选择培养基 C正确D、在用刚果红染色时可以先培养微生物再加入刚果红也可以在倒平板时加入 D错误9.下列关于分解纤维素的微生物分离实验的叙述正确的是（）A. 纤维素酶是一种复合酶一般至少包括\ C_1酶、\ C_X酶、葡萄糖异构酶B. 刚果红染色可以在倒平板之前加入刚果红也可以先培养微生物再加入刚果红C. 可通过重复选择培养来增大样品中目的菌的浓度以保证筛选效果也可省略此步D. 刚果红可以与纤维素形成透明复合物可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌【答案】C【解析】解 A.纤维素酶是一种复合酶包括 C_1酶、 C_X酶和葡萄糖苷酶其中 C_1酶和C_X酶能使纤维素分解成纤维二糖葡萄糖苷酶能将纤维二糖分解成葡萄糖 A错误B.刚果红染色法一般有两种一是先培养微生物长出菌落后再加入刚果红进行颜色反应再加入一定浓度NaCl将多余的刚果红带走一种是配制好培养基灭菌后倒平板时加入灭菌处理的刚果红再接种微生物培养直至产生透明圈 B错误C.可通过重复选择培养来增大样品中目的菌的浓度以保证筛选效果也可省略此步 C正确D.刚果红可以与纤维素形成红色复合物当纤维素被分解后形成透明圈这样可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌 D错误故选 C10.关于酶活性调节正确的说法是（）A. 只要一种代谢产物积累酶活性就会下降B. 代谢产物与酶结合酶的结构产生不可逆的变化而活性下降C. 细胞膜通透性的增大可解除代谢产物对酶活性的抑制D. 控制生产条件是人们对酶活性调节的唯一手段【答案】C【解析】解 A.一种代谢产物积累酶活性不一定就会下降如黄色短杆菌利用天冬氨酸合成赖氨酸、苏氨酸和甲硫氨酸只有当苏氨酸和甲硫氨酸同时积累过量时才会抑制天冬氨酸激酶的活性 A错误B.当产物过量时与酶的结合是可逆的所以引起酶分子结构改变而发生的活性改变也是可逆的 B错误C.细胞膜通透性的增大代谢产物可以通过细胞膜进入外界环境可解除代谢产物对酶活性的抑制 C正确D.控制生产条件不是人们对酶活性调节的唯一手段 D错误故选 C11.将没有吃完的西瓜盖上保鲜膜后放入冰箱是很多人日常储藏西瓜的办法有人认为盖上保鲜膜储藏的西瓜中细菌种类和数目反而比没用保鲜膜的多某生物研究小组针对上述说法进行探究他们将盖保鲜膜保存了三天的西瓜的瓜瓤制备成浸出液再将浸出液接种到培养基平板上进行观察下列说法正确的是（）A. 培养基可不加碳源是因为接种的浸出液中含糖B. 可采用稀释涂布平板法或平板划线法进行接种C. 只需要设置未接种瓜瓤浸出液的空白平板作对照D. 培养一段时间后应统计培养基上的菌落种类和数量【答案】D【解析】12.秸秆还田可增加土壤肥力缓解环境污染为分离分解纤维素的微生物菌种实现废物的资源化利用研究人员设计了“土壤取样→选择培养→梯度稀释→涂布平板→挑选菌株”的实验流程下列叙述错误的是（）A. 配制培养基时应在高压蒸汽灭菌之后调节pHB. 选择培养时应使用纤维素为唯一碳源的培养基C. 进行梯度稀释时应在酒精灯火焰旁完成各种操作D. 挑选菌株后应将使用过的培养基进行灭菌后再丢弃【答案】A【解析】A、配制培养基时这样可以避免灭菌之后调pH时再造成杂菌污染B、为分离分解纤维素的微生物菌种应用以纤维素为唯一碳源的选择培养基C、进行梯度稀释时应在酒精灯火焰旁完成各种操作D、挑选菌株后应将使用过的培养基进行灭菌后再丢弃13.用纸片扩散法测定某病原菌对各种抗生素敏感性的实验过程是在某病原菌均匀分布的平板上铺设含有不同种抗生素的纸片后进行培养培养的结果如图所示其中抑菌圈是在纸片周围出现的透明区域下列分析错误的是（）A. 在图示固体培养基上接种病原菌的方法是稀释涂布平板法B. 不同抗生素在平板上的扩散速度不同会对实验结果造成影响C. 形成的抑菌圈较大的原因可能是微生物对药物较敏感D. 未出现抑菌圈可能是病原菌与抗生素接触后发生了抗性变异【答案】D【解析】解 A.根据题干“某病原菌均匀分布的平板上”可知图示固体培养基上采用的接种方法是稀释涂布平板法 A正确B.纸片中的药物接触平板后不断向纸片周围区域扩散不同抗生素在平板上的扩散速度不同会对实验结果造成影响 B正确C.微生物对药物较敏感形成的抑菌圈较大 C正确D.未出现抑菌圈可能是病原菌对该抗生素不敏感且变异是在选择（抗生素接触）之前就已发生的 D错误故选 D14.微生物培养过程中要十分重视无菌操作现代生物学实验中的许多方面也要进行无菌操作防止杂菌污染下列无菌操作错误的是（）A. 接种时培养皿盖只打开一条缝隙B. 菌种和培养基使用前均需灭菌处理C. 接种前、后都要过火灼烧斜面菌种试管口D. 高压蒸汽灭菌既能杀死微生物的营养体也能杀死芽孢等休眠体【答案】B【解析】解 A.接种时用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于锥形瓶瓶口的缝隙即可 A正确B.培养基在使用前需灭菌处理但是菌种不能灭菌处理否则菌种也会死亡 B错误C.接种前后均要将斜面菌种试管口通过火焰防止杂菌污染 C正确D.高压蒸汽灭菌法不仅能杀死微生物的营养体也能杀死芽孢等休眠体 D正确故选 B15.下列关于分离纤维素分解菌的实验的叙述错误的是（）A. 选择培养的目的是增加纤维素分解菌的浓度B. 经选择培养后将样品直接涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上C. 可先在固体培养基上培养微生物再用刚果红溶液染色D. 纤维素分解后的产物不能和刚果红形成红色复合物【答案】B【解析】解 A、选择培养是在以纤维素为唯一碳源的培养基上进行目的是增加纤维素分解菌的浓度 A正确B、经选择培养后再经梯度稀释才能将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上 B错误C、经鉴别培养后纤维素分解菌可以用刚果红染色进行鉴别 C正确D、鉴别纤维素分解菌的原理是纤维素分解后的产物不能和染料形成红色复合物 D正确二、多选题（本大题共计5小题每题3分共计15分）16.大肠杆菌可以直接利用葡萄糖也可以通过合成β﹣半乳糖苷酶将乳糖分解为葡萄糖和半乳糖加以利用将大肠杆菌培养在同时含葡萄糖和乳糖的培养基中测定其细胞总数及细胞内β﹣半乳糖苷酶的活性变化（如图）据图分析下列叙述不合理的是（）A. 0～50 min 细胞内无β﹣半乳糖苷酶基因B. 50～100 min 细胞内无分解葡萄糖的酶C. 葡萄糖缺乏时β﹣半乳糖苷酶基因开始表达D. 只要有乳糖存在β﹣半乳糖苷酶基因就能表达【答案】A, B, D【解析】17.将没有吃完的西瓜盖上保鲜膜后放入冰箱是很多人日常储藏西瓜的方法有这样一种说法盖上保鲜膜储藏的西瓜中细菌种类和数目反而比没用保鲜膜的多某生物研究小组针对上述说法进行探究他们用保鲜膜保存了三天的西瓜表面的瓜瓤制备浸出液研究细菌的种类和数量下列说法正确的是（）A. 瓜瓤浸出液是液体因此培养时平板不用倒置B. 除空白对照还需设置在同样条件下保存的不盖保鲜膜的瓜瓤浸出液接种的平板做对照C. 应该采用稀释除布平板法进行接种待菌落数目稳定时进行记录D. 可通过平板上菌落的特征（如形态、大小、颜色等）初步判断细菌的种类【答案】B, C, D【解析】解 A.接种时需要将菌液接种在固体培养基上培养时平板需要倒置这样可以防止培养皿盖上凝结的水珠落入培养皿造成污染还可防止培养基表面的水分挥发 A错误B.该实验是比较两种不同处理方式下西瓜上菌体的种类和数量所以除需要设置盛有培养基的空白平板作对照还需要设置不盖保鲜膜同样条件保存三天的西瓜表面的瓜瓤制备浸出液后接种的平板做对照 B正确C.稀释涂布平板法可以进行计数应该采用稀释涂布平板法进行接种待菌落数目稳定时进行记录 C正确D.不同菌体的菌落特征不同所以可通过平板上菌落的特征初步判断细菌的种类 D正确故选 BCD18.抗生素可由微生物产生具有抑菌作用能在琼脂培养基中扩散在筛选产生抗生素的菌种时先在琼脂培养基平板上划线接种从土壤中获得的甲菌在27℃下培养3天形成菌落然后接种乙、丙、丁三种致病菌（图a）继续在同样条件下培养3天结果如图b 分析结果得出的结论是（）A. 甲菌产生了抗生素B. 丙菌的生长被乙菌产生的抗生素抑制C. 乙菌的生长被甲菌产生的抗生素抑制D. 丁菌产生的抗生素抑制了丙菌的生长【答案】A, C【解析】解分析培养结果（图b）可知乙、丙、丁三种致病菌不会产生抗生素否则靠近乙、丙、丁的甲菌落不能生长进一步由b图可知乙菌的生长被抑制最可能的原因是甲菌产生了抗生素此种抗生素只能抑制乙菌的生长而对丙、丁两种菌没有影响因此A、C正确故选 AC19.微生物为了研究防治微生物传染病的有效方法生物课外课题研究小组的同学要研究板蓝根（一种药用植物）的汁液是否具有抑制大肠杆菌的作用指导老师为他们提供材料、仪器和试剂有大肠杆菌菌种接种环无菌滴管无菌玻璃刮铲无菌圆纸片镊子记号笔直尺酒精灯牛肉膏蛋白胨琼脂板蓝根汁等实验步骤（1）他们应当配制的培养基是（）A. 通用液体培养基B. 通用固体培养基C. 选择液体培养基D. 选择固体培养基（2）制备培养基的操作步骤是bedca（用下列字母排序）a．倒置培养基b．计算和称量c．灭菌d．调pHe．溶解和熔化（3）如果他们要观察单个的大肠菌菌落应该用划线法接种在如图圆内（表示培养皿）画出接种环的运行路线（带箭头）（4）通常培养基采用121℃灭菌原因是杀灭培养基中的细菌芽孢接种后必须将培养皿倒置倒置的原因是防止冷凝水滴落影响细菌生长（5）如果要探究板蓝根汁液是否具有抑菌作用可以有以下的实验方案第一步接种用无菌滴管吸取菌液滴在培养基表面第二步实验过程若干圆纸片浸泡板蓝根汁放入与无菌水圆纸片做对照（各放入几张）第三步现象观察看圆纸片周围是否出现抑菌圈测试并记录第四步结果预测及分析若浸入板蓝根汁的圆纸片周围有抑菌圈浸有无菌水的圆纸片无清晰区说明板蓝根汁液有抑制大肠杆菌的作用 2.如浸有板蓝根汁液圆纸片和无菌水一样无清晰区说明板蓝根汁液没有抑制大肠杆菌的作用【答案】（1）B（2）bedca（3）划线（4）杀灭培养基中的细菌芽孢防止冷凝水滴落（5）用无菌滴管吸取菌液滴在培养基表面若干圆纸片浸泡板蓝根汁放入与无菌水圆纸片做对照看圆纸片周围是否出现抑菌圈测试并记录若浸入板蓝根汁的圆纸片周围有抑菌圈浸有无菌水的圆纸片无清晰区2.如浸有板蓝根汁液圆纸片和无菌水一样无清晰区【解析】20.硝化细菌可将氨或铵盐氧化为易被植物吸收的硝酸盐释放的能量可用于将二氧化碳和水转化成有机物下图为从土壤中分离硝化细菌菌株的过程示意图有关说法正确的是（）A. Ⅰ号培养基在功能上属于选择培养基B. 制作该固体培养基时应先灭菌再调pHC. 要筛选硝化细菌Ⅰ号培养基的成分应不含C源、N源D. 接种后的Ⅱ号培养基在恒温箱中通常需要倒置培养【答案】A, D【解析】解 A.Ⅰ号培养基在功能上属于选择培养基可通过选择培养基增加硝化细菌的浓度 A正确B.为了防止杂菌污染配置培养基时应该先调节pH 然后灭菌 B错误C.硝化细菌可将氨或铵盐氧化为易被植物吸收的硝酸盐所以要筛选硝化细菌Ⅰ号培养基中应含N源使硝化细菌利用氧化N盐获得化学能合成有机物 C错误D.接种后的Ⅱ号培养基在恒温箱中通常需要倒置培养平板倒置的目的是防止皿盖上的水珠落入培养基对其造成污染而且可以使培养基表面的水分更好的挥发 D正确故选 AD三、解答题（本大题共计5小题每题10分共计50分）21.（1）A酶是________ 上述培养基中的KH_2PO_4和Na_2HPO_4的作用是________ 21.（2）根据培养基的成分分析能分离出土壤中尿素分解菌的是________ 理由是________21.（3）要统计每克土壤样品中活菌数日最好采用________法接种某同学取稀释倍数为10^8倍的菌液0.2mL接种后测得平板上菌落数为156、178和191 则每毫升样品中的菌落数为________ 对尿素分解菌进行鉴定时需要在选择培养基中加入________ 21.（4）该小组中有人设想由活性A酶和尿素混合制成“加酶尿素” 尿素肥效肯定更高为了提高“加酶尿素”中脲酶的利用率应当采用________技术【答案】脲酶, 提供无机盐和维持培养基的pH稳定【解析】尿素分解菌能分泌脲酶将尿素分解为二氧化碳和氨培养基中的KH_2PO_4和Na_2HPO_4的作用是提供无机盐和维持培养液的pH稳定【答案】乙, 分解尿素分解菌的选择培养基应以尿素为唯一氮源甲培养基的氮源除了尿素外还有蛋白胨而乙培养基是以尿素为唯一氮源【解析】筛选尿素分解菌的培养基应以尿素为唯一氮原甲培养基除了尿素外还有蛋白胨能够作为氮源因此乙能分离出土壤中尿素分解菌而甲不能【答案】稀释涂布平板, 8.75×10^8, 酚红指示剂【解析】接种微生物常用平板划线法和稀释涂布平板法其中稀释涂布平板法可进行微生物的计数统计平板上的菌落数目可以推测出样品中的活菌数因此要统计每克土壤样品中活菌数目最好采用稀释涂布平板法接种其中稀释涂布平板法可进行微生物的计数统计平板上的菌落数目可以推测出样品中的活菌数每毫升样品中的菌落数为（156+178+191）÷3÷0.2×10^6＝8.75×10^8个对尿素分解菌进行鉴定时分解尿素的细菌合成的脲酶将尿素分解成氨氨会使培养基的碱性增强 pH升高指示剂变红故故需要在选择培养基中加入酚红指示剂【答案】固定化酶【解析】利用固定化酶技术可以使脲酶反复使用提高了酶的利用率22.（1）配制培养基时按照培养基配方准确称量各组分将其溶解、定容后调节培养基的________ 及时对培养基进行分装并进行________灭菌22.（2）取步骤②中不同梯度的稀释液加入标记好的无菌培养皿中在步骤③中将温度约________（在25℃、50℃或80℃中选择）的培养基倒入培养皿混匀冷凝后倒置培养22.（3）挑取分离平板中长出的单菌落按步骤④所示进行划线下列叙述合理的有________a.为保证无菌操作接种针、接种环使用前都必须灭菌b.划线时应避免划破培养基表面以免不能形成正常菌落22.（4）步骤⑤中为使酵母数量迅速增加培养过程中需保证充足的营养和________供应【答案】（1）pH, 高压蒸汽【解析】解（1）配制培养基的操作步骤为称量→溶化→定容→调pH→分装→包扎→灭菌→倒平板因此微生物的培养基配制好后应先调pH 再分装常见的灭菌方法有高压蒸汽灭菌、干热灭菌、灼烧灭菌培养基适宜用高压蒸汽灭菌法灭菌【答案】（2）50℃【解析】（2）取步骤②中不同梯度的稀释液加入标记好的无菌培养皿中在步骤③中将培养基温度冷却到50℃倒入培养皿混匀冷凝后倒置培养【答案】（3）a、b【解析】（3）平板划线时接种针、接种环使用前和每次划线后都需要进行灼烧灭菌以。
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专题2 微生物的培养与应用
课题1微生物的实验室培养
【学习目标】
1.了解有关培养基的基础知识，
2.能进行无菌技术的操作和微生物的培养。
【学习过程】
一、培养基
1．概念：人们按照微生物对的不同需求，配制出供其的营养基质叫培养基。
可分为液体培养基和培养基。
2．营养构成：各种培养基一般都含有水、、和无机盐，此外还要满足微生物生长对、特殊营养物质以及氧气的要求。
二、无菌技术
(一)获得纯净培养物的关键是防止外来的人侵，具体操作如下：
1．对实验操作的、操作者的和进行清洁和消毒。
2．将用于微生物培养的、接种用具和培养基等器具进行。
3．为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在附近进行。
4．实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与相接触。
(二)消毒和灭菌
1．消毒是指使用较为的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部对人体有害的微生物(不包括芽孢和孢子)。
常用的方法有消毒法和消毒法。
2．灭菌是指使用的理化因素杀死物体内外的微生物。
常用的方法有：灭菌、灭菌、灭菌。
三、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
步骤：计算→称量→溶化→→倒平板。
四、纯化大肠杆菌
微生物接种最常用的是划线法和涂布平板法。
1．平板划线法通过接种环在琼脂固体培养基表面连续的操作，将聚集的菌种逐步分散到培养基的表面。
2．稀释涂布平板法则是将菌液进行一系列的梯度，然后将不同稀释度的菌液分别
到琼脂固体培养基的表面，进行培养。
【典例精析】
【例1】下列关于微生物营养的说法，正确的是……………………………………( )
A．同一种物质不可能既作碳源又作氮源 B．凡是碳源都能提供能量
c．除水以外的无机物仅提供无机盐 D．无机氮源也能提供能量
【例2】细菌培养过程中分别采用了高压蒸气、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理，这些方法依次用于杀灭哪些部位的杂菌………( )
A．接种针、手、培养基 B．高压锅、手、接种针
C．培养基、手、接种针 D．接种针、手、高压锅
【例3】以下关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述错误的是………………………( )
A．操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌
B．将称好的牛肉膏连同称量纸一同放人烧杯
C．待培养基冷却至50℃左右时进行倒平板
D．待平板冷却凝固约5～10 min后将平板倒过来放置
【巩固练习】
1．下列有关培养基的叙述正确的是……( )
A．培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质
B．培养基只有两类：液体培养基和固体培养基
C．固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基
D．微生物在固体培养基上生长时，可以形成肉眼可见的单个细菌
2.不同培养基的具体配方不同，但一般都含( )
A．碳源、磷酸盐和维生素 B．氮源和维生素
C．水、碳源、氮源和无机盐 D．碳元素、氧元素、氢元素、氮元素3．获得纯净培养物的关键是……………( )
A．将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌
B．接种纯种细菌
C．适宜环境条件下培养
D．防止外来杂菌的入侵
4．下列常用的无菌操作中错误的是……( )
A．用酒精擦拭双手
B．用氯气消毒水源
C．实验操作应在酒精灯火焰附近进行
D．玻璃器皿(吸管、培养皿)可用酒精擦拭
5．制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是( )
A．计算、称量、倒平板、溶化、灭菌 B．计算、称量、溶化、倒平板、灭菌
C．计算、称量、溶化、灭菌、倒平板 D．计算、称量、灭菌、溶化、倒平板6．有关倒平板的操作错误的是…………( )
A．将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上
B．使打开的锥形瓶瓶口迅速通过火焰
C．将培养皿打开，培养皿盖倒放在桌子上
D．等待平板冷却凝固后需要倒过来放置
7．有关平板划线操作正确的是…………( )
A．使用已灭菌的接种环、培养皿，操作过程中不再灭菌
B．打开含菌种的试管需通过火焰灭菌，取出菌种后需马上塞上棉塞
C．将沾有菌种的接种环迅速伸人平板内，划三至五条平行线即可
D．最后将平板倒置，放人培养箱中培养
8．有关稀释涂布平板法，叙述错误的是…( )
A．首先将菌液进行一系列的梯度稀释
B．然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面
C．再放在适宜条件下培养 D．结果都可在培养基表面形成单个的菌落
9．涂布平板操作需要用到………………( )
A．接种环、滴管、酒精灯 B．接种环、移液管、酒精灯
C．涂布器、移液管、酒精灯 D．涂布器、接种环、酒精灯
10．将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入37℃恒温箱的目的是……………( )
A．对比观察培养基有没有被微生物利用 B．对比分析培养基是否被杂菌污染 C．没必要放人未接种的培养基 D．为了下次接种时再使用
11．鉴定培养基的制作是否合格的方法是：将制备好的培养基放在中保温1-2天看有无，如果没有说明制作合格，反之则不合格。
12．请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。
如果需要，请选择合适的方法。
(1)培养细菌用的培养基与培养皿
(2)玻棒、试管、烧瓶和吸管
(3)实验操作者的双手
(1) 、 (2) 、 (3)
13．19世纪中期，关系到法国经济命脉的酿造业曾一度遭受毁灭性的打击。
在生产过程中，出现了葡萄酒变酸、变味的怪事。
(1)根据你所掌握的知识分析导致生产失败的根源是什么?
(2)由此得出研究和应用微生物的前提是防止
14．在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗?为什么?
15．在做第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线?。