本部食品07生物技术试卷(A)答案20100101

浙江林学院 2009 - 2010 学年第 一 学期考试卷（A 卷）标准
答案
课程名称： 食品生物技术 课程类别： 必修 考试方式： 闭卷
注意事项：1、本试卷满分100分。

2、考试时间 120分钟。

一、选择题（每题2分，共10分）
1、体外基因工程技术，首先要获得目的基因、工具酶和 （B ）
A 、自然基因
B 、载体
C 、人工合成基因
D 、连接酶
2、通过细胞悬浮培养，可获得 （B ）
A 、初级代谢物
B 、次级代谢物
C 、各种代谢物
3、固定化酶的方法有结合法和 （B ）
A 、装载法
B 、包埋法
C 、固定法
D 、联合法
4、下面对于温度对发酵过程的影响说法错误的是 （ D ）
A 、影响酶的活性
B 、影响培养液的物理性质
C 、影响代谢产物的合成方向
D 、微生物生长速度加快，死亡变慢
5、下列那一种细胞破壁法一般适宜用于霉菌的破壁 （ A ）
A 、珠磨法
B 、高压匀浆法
C 、超声波法
D 、自溶法
二、判断题（每题2分，共20分） 1、生物技术对解决当今人类社会的许多重大问题如人口、食物、能源、环境污染、人类健康等，发挥极重要的作用。

（√ ）
2、反向PCR 是对已知DNA 片段两侧的未知序列进行扩增和研究的一种简捷方法。

（√ ）
3、外植体消毒常用的消毒剂有2%~3%的次氯酸钠或9％~10％的次氯酸钙。

（√ ）
4、柯斯质粒适用于作基因簇和大基因的克隆。

（√ ）
学院： 专业班级：
姓名：
学号：
装 订 线 内 不 要 答 题
5、愈伤组织初次诱导多采用固体培养基。

（√）
6、电穿孔法（电转化）具有简便、快速、效率高等优点。

（√）
7、Northern吸印的基本原理与Southern大致相同，只是检测的对象是RNA。

（√）
8、Monod方程中Ks越小,微生物对该营养物质的亲和能力越小。

（×）
9、发酵的培养基碳源过多,会使发酵醪液pH值下降。

（√）
10、当pH等于等电点时两性电解质的溶解度为零。

（×）
三、填空题（共20分）
1、基因工程在食品产业中的应用有利用基因工程改造食品微生物、
利用基因工程改善食品原料的品质、利用基因工程改进食品生产工艺、
利用基因工程生产食品添加剂及功能性食品。

（P80-92）
2、微生物细胞的培养方法有固体培养、液体培养、连续培养、中间补料培养（又称为半连续培养、流加培养、补料分批培养）、同步培养、
混合培养。

（P103-108）
3、细胞融合的方法有生物学法、化学融合剂法、电处理融合法。

（P120）
4、微生物细胞的培养中，根据控制方式的不同，连续培养可分为恒浊培养、
恒化培养两种。

（P105）
5、植物细胞固定化培养技术中，常见的固定化细胞培养系统有平床培养系统、
立柱培养系统两大类。

（P113）
6、动物细胞培养，常用培养基有天然培养基、合成培养基、无血清培养基。

（P115-116）
1、基因工程（3分）
答案一书P25 基因工程，是用人工的方法把不同生物的遗传物质（基因）分离出来，在体外进行剪切、拼接、重组，形成基因重组体，然后再把重组体引入宿主细胞或个体中以得到高效表达，最终获得人们所需要的基因产物。

答案二
基因工程是指重组DNA技术的产业化设计与应用，包括上游技术和下游技术两大组成部分。

上游技术指的是基因重组、克隆和表达的设计与构建（即重组DNA技术）；而下游技术则涉及到基因工程菌或细胞的大规模培养以及基因产物的分离纯化过程。

2、PCR技术（3分）
答案一----书P50
PCR 即多聚酶链式反应
PCR的反应体系应具备以下条件：（1）要有与被分离的目的基因的DNA双链两端序列相互补的DNA引物（约20个碱基左右）：（2）具有热稳定性的酶如TaqDNA聚合酶；（3）dNTP；（4）作为模板的目的DNA序列。

―――――――――――――――――（1.5分）
PCR反应过程包括：（1）变性（2）退火（3）延伸――――――――（1.5分）
答案二---课件上
PCR 技术
•PCR即：polymerase chain reaction。

•反应体系：①样品DNA；②引物（primer），约15-20个核苷酸；③4种dNTP；④Taq DNA聚合酶，来自于嗜热水
生菌Thermus aquaticus，最适作用温度75~80℃，短时间
在95℃下不失活。

⑤缓冲体系和Mg2+。

•反应过程：①变性：约90-95℃；②复性：约60℃左右；
③延伸：70-75℃；④重复“变性——复性——延伸”过程
20-30次循环。

3、驯化培养（3分）
驯化培养：将在外源激素作用下快速生长的细胞群落转变成在不加或少加外源激素的情况下，仍能快速生长的培养过程。

4、Monod方程（3分）
μ=μmax * S/(K S+S)
μ:比生长速率
μmax：最大比生长速率
Ks：饱和常数
S：限制性营养物质浓度
5、盐析（3分）
盐析是指向溶液中加入大量中性盐，中性盐的离子中和生物大分子的表面电荷，破化水分子外围的水化层，从而使生物大分子聚集沉淀。

1、获得目的基因时，普通PCR之外的较为常用的改进的PCR方法有哪些？（3分）
P51（1）逆转录PCR：
（2）锚定PCR：
（3）反向PCR：。

2、DNA重组中，限制性内切酶的主要用途（4分）
P32 （1）在特异位点上切割DNA，产生特异的限制性内切酶切割的DNA片段
（2）建立DNA分子的限制性内切酶物理图谱
（3）构建基因文库
（4）用限制性内切酶切出相同的黏性末端，以便重组DNA。

3、微生物细胞的培养中，培养基根据用途划分为哪些？（5分）P102-103
（1）基础培养基
（2）加富培养基
（3）鉴别培养基
（4）选择培养基
（5）其他
4、细胞工程的基本操作（3分）
P98 （1）无菌操作技术
（2）细胞培养技术
（3）细胞融合技术
5、发酵工程的主要产品（4分）
1）菌体
2）微生物产的酶
3）微生物的代谢产物
4）生物转化产品
6、双水相（4分）
两种亲水性高聚物溶液混合后静止形成的两个水相
六、论述题（共12分）
1、何谓中间补料培养？有哪些优点？（12分）
（1）中间补料培养是根据菌株生长和初始培养基的特点，在分批培养的某些阶段适当补加培养基，使菌体或其代谢产物的生产时间延长。

又成为半连续培养、流加培养、补料分批培养等。

——————————————————————————————————————2分
（2）优点：
①可以消除底物抑制
某些微生物的生长受到高浓度底物的抑制，如果采用间歇培养，将限制初始初始底物浓度，这样，也就限制了菌体密度和产物浓度的提高。

采用补料分批培养可以从较低的底物浓度开始培养，就不存在底物抑制的问题，随后通过不断的流加限制性底物，使菌体能够不断生长，代谢产物也能不断的积累。

对于存在葡萄糖效应的体系，通过补料操作，可以避免葡萄糖效应对微生物生长和产物积累的影响。

————————————————————————2分
②可以达到高密度细胞培养
由于补料分批培养能不断的向发酵罐补偿限制性底物，微生物始终能获得充分的营养，菌体密度就可以不断增加，通过选择适当的补料策略并配合氧传递条件的改进，细胞密度可以达到150g干细胞/L，对于以细胞本身或胞内产物作为目标产物的发酵过程，高密度培养显然可以大大提高生产效率。

——————————————————————————————2分
③延长次级代谢产物的生产时间
次级代谢产物的合成往往与细胞生长速率无关，常常在生长到达稳定期才开始合成，因此与稳定期的细胞密度和延续时间直接相关。

在一般的间歇培养中稳定期比较短。

因为营养物质已经大量消耗而只能维持很短的时间就进入细胞死亡阶段。

这使次级代谢产物的生产时间很短，从而影响了产量。

通过补料就可以给微生物生长继续提供所需要的营养，延长稳定期的时间，因此能达到较高的次级代谢产物的生产水平。

————————————————————2分④稀释有毒代谢产物
微生物在代谢过程中，都会分泌出一些有毒的代谢产物，对微生物本身的生长产生影响。

通过
补料就能够稀释有毒的代谢产物，减轻毒害作用，补料操作也能起到稀释产物，降低目标产物
抑制作用的效果。

——————————————————————————————2分⑤降低染菌和避免遗传不稳定性：
补料分批培养的操作时间有限，因此在染菌控制方面不必像连续培养那样严格。

菌种的遗传不稳定性问题的影响也与分批培养类似，操作和控制都比较简单。

——————————2分。